Засіб для лікування гепатиту в, фармацевтична композиція та спосіб лікування

1 Применение соединения формулы (I) а именно, цис-1 -(2-(гидроксиметил)-1,3оксатиолан-5-ил)-5-фторцитозина или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира для получения медицинского средства для лечения или профилактики инфекции вирусом гепатита В 2 Применение по п 1 , отличающееся тем, что соединение формулы (I) находится в форме Dэнантиомера 3 Применение по п 1 , отличающееся тем, что соединение формулы (I) находится в форме Lэнантиомера 4 Применение соединения по п 1, отличающееся тем, что соединение находится в форме фармацевтически приемлемой соли 5 Применение соединения по п 1, отличающееся тем, что соединение находится в форме фармацевтически приемлемого сложного эфира 6 Применение по любому из предшествующих пунктов 1-5, отличающееся тем, что указанное лекарственное средство находится в форме единичной дозы 7 Применение по п 6, отличающееся тем, что единичная доза содержит от 10 до 1500 мг соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира 8 Применение соединения по п 7, отличающееся тем, что соединение находится в форме фармацевтически приемлемой соли 9 Применение соединения по п 7, отличающееся тем, что соединение находится в форме фармацевтически приемлемого сложного эфира 10 Применение по пп 6-9, отличающееся тем, что указанная единичная доза имеет форму таблетки или капсулы 11 Способ лечения человека, инфицированного вирусом гепатита В, включающий применение эффективного для лечения гепатита В количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира 12 Способ по п 11, отличающийся тем, что указанное соединение формулы (I) находится в форме D-энантиомера 13 Способ по п 1 1 , отличающийся тем, что соединение формулы (I) находится в форме Lэнантиомера 14 Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики пациента, инфицированного вирусом гепатита В, включающая эффективное количество соединения по п 1 или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем 15 Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики пациента, инфицированного вирусом гепатита В, включающая эффективное количество L-энантиомера цис-1 -(2(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил)-5фторцитозина или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем 16 Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики пациента, инфицированного вирусом гепатита В, включающая эффективное количество D-энантиомера цис-1-(2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил)-5-фторцитозина или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем 17 Фармацевтическая композиция для лечения О (О го ю 54364 или профилактики пациента, инфицированного вирусом гепатита В, включающая эффективное количество соединения по п 1 или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира в комбинации с одним или несколькими другими эффективными антивирусными агентами 18 Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики пациента, инфицированного вирусом гепатита В, включающая эффективное количество L-энантиомера цис-1-(2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил)-5-фторцитозина или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира в комбинации с одним или несколькими другими эффективными антивирусными агентами 19 Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики пациента, инфицированного вирусом гепатита В, включающая эффективное количество D-энантиомера цис-1-(2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил)-5-фторцитозина или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира в комбинации с одним или несколькими другими эффективными антивирусными агентами 20 Применение L-энантиомера цис-1-(2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил)-5-фторцитозина или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира в изолированной форме для лечения или профилактики инфекции вирусом гепатита В Настоящее изобретение относится к использованию производного 1-/2-/гидроксиметил/-1,3оксагиолан-5-ил/-цитозина и его физиологически функциональных производных для лечения вирусных инфекций гепатита В Вирус гепатита В/ВГВ/является вирусным патогеном, играющим в мире важную роль ВГВ наиболее распространен в странах Азии и преобладает в африканских странах юга Сахары Этот вирус этиологически связан с первичной печеночно-клеточной карциномой и, как представляется, служит причиной 80% случаев заболевания раком печени в мире В Соединенных Штатах Америки более десяти тысяч человек каждый год госпитализируется по причине ВГВ-заболевания, прячем констатируется в среднем 250 смертельных исходов в результате скоротечности заболевания В Соединенных Штатах в настояли момент имеется примерно 500 000 - 1 миллион инфицированных носителей Хронический активный гепатит развивается у более чем 25% носителей и часто переходит в цирроз Приблизительно 5000 больных погибает от цирроза, связанного с ВГВ, каждый год в США и вероятно 1 000 больных погибает от рака печени, связанного с ВГВ Даже в тех случаях, когда имеется универсальная ВГВвакцина, продолжает ощущаться необходимость в эффективных анти-ВГВ-соединениях Большие количества устойчиво инфицированных носителей, примерно 220 миллионов во всем мире, не могут извлечь пользы от вакцинации и поэтому будут непрерывно подвергаться высокому риску заболевания печени, вызванного ВГВ Эти группы носителей могут также быть источником инфекции для восприимчивого организма, который всегда сохраняется, в частности, в эндемических областях или среди групп высокого риска, например, при неправильном введении лекарственных препаратов и среди гомосексуалов Таким образом, ощущается острая необходимость в эффективных противовирусных агентах, как для контроля за хроническими инфекциями, так и для снижения развития печеночно-клеточной карциномы пликация этого вируса в общем случае контролируется иммунной реакцией с периодом восстановления от нескольких недель до нескольких месяцев у человека, но инфекция может быть более сильной, что приводят к устойчивым хроническим заболеваниям печени, о которых речь шла выше В книге «Viral Infections of Humans» /второе издание, изд Plenum Publishing Corporation ,-1982 New York Ред Evans, AS/, Глава 12, описана этиология инфекций вирусного гепатита В Европейском Патентном Описании № 0382526 предложены некоторые аналоги 1,3-оксатиолан нуклеозида, которые эффективны при ингибировании репликации вируса иммунодефицита человека /ВИЧ/ Клинические эффекты ВГВ-инфекции включают головную боль, жар, недомогание, тошноту, рвоту, анорексию и боли в брюшной области Ре Заявитель неожиданным образом установил, что производное 1-/2-/гидроксиметил/-1,3оксатиолан-5-ил/-цитозина формулы I (I) а именно, 1-/2-/гидроксиметил/-1,3оксатиолан-5-ил/-5-фторцитозин и его физиологически функциональное производное обладают сильной активностью против ВГВ Необходимо заметить, что соединение Формулы /I/ содержит два хиральных центра и поэтому оно существует в форме двух пар оптических изомеров л" е энантиомеров/ и их смесей, включая рацемические смеси Таким образом, соединение Формулы /I/ может быть либо цис, либо транс-изомером, либо их смесями Каждый цис- и транс-изомер может существовать в виде одного из двух энантиомеров или их смесей, включая рацемические смеси Все такие изомеры и их смеси, включая рацемические смеси, и таутомерные формы соединения формулы /I/ находятся в области, охватываемой настоящим изобретением Цис-изомеры соединения формулы /I/ предпочти 54364 алкокси, нитро или гидроксилом/ тельны Примеры приемлемых с фармацевтической В соответствии с одним из отличительных точки зрения солей в соответствии с настоящим свойств настоящею изобретения, предлагается изобретением включают основные соли например, соединение формулы /I/ или его физиологически полученные из соответствующего основания, тафункциональное производное для использования кого, как щелочной металл /например, натрий/, при лечении или профилактике инфекции, вируса соли мелочно-земельных металлов /например, гепатита В В соответствии с еще одним отличи+ магния/, аммоний и NX4 /в которой X является Сі тельным свойством настоящею изобретения, 4 алкилом/ Приемлемые с фармацевтической точпредлагается способ использования соединения, ки зрения присоединенные соли кислот включают формулы /I/ иди его физиологически функциосоли органических карбонових кислот таких, как нального производного при изготовлении медиуксусная, молочная, винная, малеиновая, изетиоцинского препарата для лечения или профилактиновая, лактобионовая и янтарная кислоты, оргаки инфекции вируса гепатита В нических моносульфокислот таких, как меВ соответствии с еще одним аспектом ната н/м он о/сульфо кислота, этан/моно/ стоящего изобретения предлагается, способ лесульфокислота, бе н зол-/м он о/сульфо кислота и чения или профилактики инфекции вируса гепатип а ра-толуол/м он о/сульфо кислота, и неорганичета В у хозяина, например, млекопитающего такого, ских кислот таких, как хлористо-водородная, серкак человек, который содержит обработку хозяина ная, фосфорная и сульфаминовая кислоты терапевтически эффективным количеством соединения формулы /I/ или его физиологически Количество соединения формулы /I/ /в дальфункциональною производного нейшем именуемого также, как "активный ингредиент"/, или его физиологически функционального Под термином "физиологически функциональпроизводного, которое необходимо для изготовное производное" подразумевается приемлемая с ления медицинского препарата, чтобы гарантирофармацевтической точки зрения соль, амид, вать целевой эффект, будет зависеть от нескольсложный эфир или соль сложного эфира соединеких факторов, в частности, от специфических ния формулы /I/ или любое другое соединение, условий применения, природы конкретного искоторое после применения к пациенту способно пользуемого соединения, способа применения и дать /непосредственно или косвенно/ вышеупомясостояния патента В общем случае, соответстнутое соединение формулы /I/, или его активный вующая, доза будет изменяться в области от 3,0 метаболит или остаток до 120мг на килограмм массы тела патента в Предпочтительные сложные эфиры в соотдень, в предпочтительном варианте в области от ветствии с настоящим изобретением включают 6 до 90мг на килограмм массы тела в день, а в сложные эфиры кар боковых кислот, в которых наиболее предпочтительном варианте в области некарбониловую составляющую части карбоновои от 15 до 60мг на килограмм массы тела в день кислоты сложною эфира выбирают из алкила с Необходимая доза в предпочтительном варианте линейной или разветвленной цепью, например, нможет быть представлена в виде двух, трех, чепропила, третичн -бутила, н-бутила, алкоксиалкитырех, пяти, шести и более поддоз, которые прила /например, метоксиметила/, арилалкила меняют в соответствующие моменты времени в /например, бензила/, арилоксиалкила /например, течение дня Эти поддозы могут быть применены феноксиметила/ и арила /например, фенила/, в форме единичных доз, например, содержащих, сложные эфиры сульфонатов такие, как алкилот 10 до 1500мг, в предпочтительном, варианте от или арилалкилсульфонил /например, метансуль20 до 1000мг, а в самом предпочтительном варифонил/, сложные эфиры аминокислот /например, анте от 50 до 700мг активного ингредиента на L -валил или L -изолеупил/, сложные эфиры диформу единичной дозы карбоновых кислот/например, полусукцинат/, и 5'моно-, ди- или три-фосфатные сложные эфиры В идеальном случае активный ингредиент неФосфатные сложные эфиры могут быть затем обходимо применять таким образом, чтобы доэтерифицированы, например, при помощи Сі 2 0 биться пиковой концентрации в плазме активного спирта или его химически активного производного, ингредиента в области от примерно 1 до примерили при помощи 2,3-ди/Сб24/ ацил глицерина Люно 75 |іМ в предпочтительном варианте от прибая алкиловая составляющая, содержащаяся в мерно 2 до 50цМ, в самом предпочтительном ватаких сложных эфирах, в предпочтительном варирианте от примерно 3 до примерно ЗОцМ Этого анте содержит от 1 до 18 атомов углерода, в частможно добиться, например, при помощи внутриности, от 1 до 4 атомов углерода Любая ариливая венной инъекции 0,1-5% раствора активного инсоставляющая, содержащаяся в таких сложных гредиента, необязательно в соляном растворе, эфирах, в предпочтительном варианте содержит или орального применения в виде шариков, софенильную группу, необязательно замещенную, держащего от примерю 1 до примерно 100мг/кг например, галогеном, Сі 4 алкилом, Сі 4 кокси или активного ингредиента Необходимые концентранитро ции в крови могут поддерживаться при помощи Вышеупомянутые, приемлемые с фармацевтической точки зрения, амиды соединения формулы /I/ включают такие производные, в которых группа амино цитозина находится в форме амида, например, -NHCOR, в которой R является Сі є алкилом или арилом /например, фенилом, необязательно замещенным галогеном, Сі 4 алкилом, Сі 4 непрерывного вливания, чтобы обеспечить введение от примерно 0,01 до примерно 5,0мг/кг/час или при помощи периодических вливаний, содержащих от примерно 0,4 до примерно 15мг/кг активного ингредиента При получении медицинского препарата, являющегося предметом настоящего изобретения, в 54364 дальнейшем именуемого как композиция , соединение формулы /1/ или его физиологически функциональное производное, именуемое в дальнейшем, как "активный ингредиент", в общем случае смешивают с /среди прочего/ одним или несколькими, приемлемыми с фармацевтической точки зрения, носителями или наполнителями и необязательно другими терапевтическими агентами Эти формы включают те формы, которые пригодны для стоматического, прямокишечного, носового, местного /включая, трансдермальный, трансбуккальный и подъязычный/, влагалищного или парентерального /включая, подкожный, внутримышечный, внутривенный и внутрикожный/ применения Эти композиции могут быть в общем случае сформированы в форму единичной дозы и могут быть изготовлены с использованием любой процедуры, которые известны в области фармацевтической промышленности Такие процедуры включают стадию соединения вместе активного ингредиента с носителем, который состоит из одного или нескольких дополнительных ингредиентов В общем случае, эти композиции получают при помощи однородного и тщательного соединения активного ингредиента с жидкими носителями или тонко измельченными твердыми носителями, или тем и другим, а затем, если это необходимо, продукту придают необходимую форму Композиты настоящего изобретения, предназначенные для стоматического применения, могут иметь форму дискретных доз таких, как капсулы, крахмальные капсулы или таблетки, каждая из которых содержит заранее определенное количество активного ингредиента, порошка или гранул, раствора или суспензий в водной или неводной жидкости, или жидкой эмульсии масло в воде или жидкой эмульсии вода в масле Активный ингредиент может также иметь форму шариков, лекарственной кашки или пасты Таблетка может быть получена щи помощи прессовки или формования, необязательно с одним или несколькими дополнительными ингредиентами Прессованные таблетки могут быть получены при помощи прессовки в специальное средстве активного ингредиента в свободнотекущей форме такой, как порошок или гранулы, необязательно в смеси со связывающим агентом /например, повидоном, желатином, оксипропилметил целлюлозой/, смазочным агентом, инертным разбавителем, консервирующим агентом, разрыхляющим агентом /например, натрий гликоллатом крахмала, сшитым повидоном, сшитой натрий карбоксиметил целлюлозой/, поверхностноактивным агентом или диспергирующим агентом Формованные таблетки могут быть изготовлены при помощи формования в соответствующем средстве смеси порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем Эти таблетки могут быть покрыты или снабжены рифлением, или из них могут быть получены формы, которые позволяют обеспечить медленное или регулируемое высвобождение активного ингредиента, в которых, используя, например, оксипропилметил целлюлозу в различных пропорциях, можно обеспечить целевой профиль высвобождения Эти таблетки могут быть также снабже 8 ны дополнительным покрытием, чтобы гарантировать высвобождение в кишечнике, а не в желудке Композиции, предназначенные для стоматического использования, которые были описаны выше, могут также включать буферирующие агенты, предназначенные для нейтрализации кислотности желудка Такой буфер может быть выбран из самых различных органических или неорганических агентов таких, как слабые кислоты яли основания, смешанные с сопряженными с ними солями Композиции, предназначенные для местного применения во рту, включают лепешки, содержащие активный ингредиент во вкусной основе, в общем случае в сахарозе и акации или трагаканте, пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой, как желатин и глицерин, или сахароза и акация, и жидкости для полоскания, содержащие активный ингредиент в соответствующем жидком носителе Композиции для прямокишечного применения могут быть изготовлены в виде суппозиториев на соответствующей основе, содержащей, например, кокосовое масло или салицилат Композиции, предназначенные для влагалищного применения, могут иметь форму пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пены или распыляемых композиций, содержащих, кроме того, /наряду с активным ингредиентом/ такие носители, которые известны каждому специалисту в этой области техники Композиции, предназначенные для парентерального применения, включают водные и неводные изотопные стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданти, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, которые придают композиции изотонность относительно крови пациента, и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загущающие агенты, липосомы или другие системы в форме микрочастиц, которые предназначены для того, чтобы доставить соединения к компонентам крови или одному или нескольким органам Эти композиции могут иметь форму закрытых контейнеров, содержащих одну или несколько доз, например, ампулы и пузырьки, и их можно хранить при условиях сушки вымораживанием /лиофилизации/, при которых необходимо только добавить стерильный жидкий носитель, например, воду для инъекций, непосредственно, перед применением, "Неподготовленные" растворы и суспензия для инъекций могут быть получены из стерильных порошков, гранул и таблеток того типа, что были описаны выше Предпочтительные композиции в форме единичных доз являются такими композициями, которые содержат ежедневную дозу или ежедневную поддозу, как это было описано выше, или соответствующие ее доли активного ингредиента Необходимо иметь в виду, что в дополнение к ингредиентам, перечисленным выше, композиции, являющиеся предметом настоящего изобретения, могут включать другие агенты, известные в этой области техники, в зависимости от типа компози 54364 ции, например, композиции, предназначенные для стоматического применения, могут включать такие дополнительные агенты, как вкусовые агенты, загущающие агенты и ароматизирующие агенты Соединение формулы I может быть получено, например, в результате а/ взаимодействия необязательно защищенного соединения 5-Р-цитозина с 1,3-окоатиоланом формулы ПА 10 Реакция яз процедуры а/ может быть осуществлена в органическом растворителе /например, 1,2-дихлорэтане или ацетонитриле/ в присутствия кислоты Льюиса такой, как хлорид пятивалентного олова или триметилсилил трифлат /tnflate/ Соединения Формулы IIA могут быть получены из соответствующим образом защищенного 2оксяацетальдегяда формулы III R1OCH2CHO (НА) в которой Ri является водородом или оксизащищающей группой, a L являєгея замещаемой группой, или в/ взаимодействия соединения формулы ИВ (ІІВ) в которой Ri уже был определен выше, a Ri a является амино-защищающей группой/ с фторирующим агентом, который позволяет ввести атом фтора в 5 позицию кольца цитозина, или с/ взаимодействия соединения Формулы ПС (НС) в которой Ri уже был определен выше/ с агентом, который служит для превращения оксогруппы в 4-позяции урацилового кольца в амино группу, любые оставшиеся защищающие группы удаляют, например, при помощи кислотного или щелочного гидролиза, чтобы получить целевой продукт Что касается процедуры а/, то гидроксизащищающая группа включает такие защищающие группы, как ацил /например, ацетил/, арилацил /например, бензоил или замещенный бензоил/, тритил или монометокситритил, бензил или замещенный бензил, триалкилсилил /например, диметил-третичн -бутилсилил/ или дифенилметилсилил Соединение S-R-цитозина может быть защищено силилом, например, триметил силиловыми группами Такие группы могут быть удалены при помощи стандартных приемов Замещаемая группа L является замещаемой группой, одной из тех, которые хорошо известны в химии нуклеозидов, например, галоген такой, как хлор или бром, алкокси такой, как метокси или этокси, или ацил такой, как ацетил или бензоил (III) в которой Ri был определен выше, как это описано в работе Can Y Research т 8,1933 - 129с и Европейском Патентном описании №0382 526 Реакция соединений формулы III с меркапгоацеталем HSCH2CH/OP/2, в которой R является Сі 4 алкокси таким, как HSCH2CH /OC2H5/2, известная в этой области техники /Спет Вег, т 85 -1952 С 924-932 /, дает соединение формулы НА, в которой L является OR/алкокси/, например, метокси или этокси В качестве альтернативы, соединения формулы ПА, в которой L является алкокси, может быть превращено в соединения формулы ПА, в которой L является галогеном или ацилом при помощи приемов, известных в области химии углеводов Соединения формулы III могут быть получены из 1,2-0-изо-пропилиден глицерина при помощи введения Ri /например, трехзамещенного силила, бензила или тритила/ и удаления группы изопропилидена с использованием слабой кислоты /например, водного раствора муравьиной или уксусной кислоты/ или бромида цинка в ацетонитриле, далее, осуществляют окисление группы спирта водным периодатом Что касается процедуры в/, то 5-фтор заместитель может быть введен при помощи приемов, известных в этой области техники /М J/Robms и др , в книге"І\ІисІеіс Acid Chemistry, Part 2, ред L В Townsend и RS Tipson, изд Y Wiley and Sons, New York, -1978, С 43-46 и ссылки, приведенные там/ Фторирующим агентом может быть, например, триметилгипофторит в фтортрихлорметане Что касается процедуры с/, то соединение формулы IIC в предпочтительном варианте обрабатывают 1,2,4-триазолом, в предпочтительном варианте вместе с 4-хлорфенил дихлорфосфатом, чтобы получить соответствующее 4-/1,2,4триазолиловое/ соединение, которое затем превращают в гелевое соединение 4-амино/цитидина/ в результате взаимодействия, например, с метанолом Исходные материалы формулы ИВ и IIC могут быть получены, например, в результате взаимодействия соответствующего /необязательно защищенного/ основания с соединением формулы НА при помощи той же процедуры, что описана в процедуре а/ 5-фторурацил и 5-фторцитозин можно получить от фирмы Aldnch Chemical Co, Milwaukee, Wl 53233, USA Разделение /±/-цис и /±/-транс изомеров, например, в защищенной форме может быть осуществлено при помощи хроматографии на силикагеле со смесями органических растворителей, таких как этил ацетат/метанол, этил ацетат/гексан или 12 11 54364 ди-хлорметан/метанол Любая защищающая групсоответствии с процедурой из Robins и др , Nucleic па может быть затем удалена, используя соответAcid Chemistry, Port 2,-1978,-C 895-900 N4ствующий реагент для каждой группы ацетиловые и 2-бензоиловые группы удаляли диметиламином в этаноле, а продукт, /±/-цис-1 -12Соединение формулы /I/ может быть превра/оксиметил/-1,3-оксатиолан-5-ил/-5-фторгитозин, щено в приемлемые с фармацевтической точки выделяли зрения сложные эфиры и амиды в результате взаимодействия с соответствующим ацилируюМетод В /±/-цис и /±/-транс-2-бензоилоксищим агентом, например, галидом или ангидридом метил-5-/урацил-1-ил/-1,3-оксатиолан получали, кислоты, который служит для ацилирования 5' -ОН как это описано в ЕР №0 382 526 После депрои 4-NH2 групп Ациловая группа затем может быть текции 2-гидроксильной группы насыщенным меудалена селективно из одной или другой группы 5' таноловым раствором аммиака изомеры разделя-ОН и 4-NH2 Например, в результате обработки ли на силика геле, используя Et OAc/MeOH в диацилированного соединения при кислотных ускачестве элюента/ЕР №0 382 526/ /±/-цис изомер ловиях, например, с кислотой Льюиса такой, как взаимодействовал с уксусным ангидридом в пибромид цинка в метаноле, удаляют 4І\І-ациловую ридине при комнатной температуре, чтобы полугруппу и получают соответствующий 5' -ОН сложчить 2-ацетат Растворитель удаляли под вакууный эфир, а в результате обработки диацилиромом при температуре < 30°С Затем 2-апетат ванного соединения при щелочных условиях, нарастворяли в СНСІз и промывали водным раствопример, с мегилатом натрия удаляют 5' -ОН ром, бикарбоната натрия Отделившийся органиациловую группу и получают соответствующий 4Nческий слой сушили, а СНСІз выпаривали под ваамид Ациловая группа может быть также удалена куумом /±/-цис-2-ацетилоксиметил-5-/урацил-1селективно в результате обработки производиил/-1,3-оксатиолан подвергали фторированию, как мыми промышленностью ферментами эстеразы это описано выше /Метод А/, с использованием или липазы, например, эстеразои печени свиньи процедуры Робинса и др Превращение 5-Fили липазой поджелудочной железы свиньи, или в урацилового основания в 5-Р-цитозиновое оснорезультате обработки в соответствии с процедувание осуществляли при помощи получения прорами, описанными в Латентном описании США изводного 4-/1,2,4-триазол-1-ила/ в соответствии с №5 071 983 Соединение формулы /1/ может быть процедурами из С В Reese, Y Chem Soc , Perkins превращено в его приемлемую с фармацевтиче1 -1984 - 1171c и WLSung, Nucleic Acids Res, ской точки зрения соль при помощи известных T 9 , - 1981, -6139c используя 1,2,4-триазол и 2 экприемов, например, в результате обработки соотвивалента 4-хлорфенилдихлорфосфата в сухом ветствующим основанием Сложный эфир или пиридине при окружающей температуре После соль соединения формулы /I/ может быть превраэтого превращения осуществляли реакцию с мещена в "базовое" соединение, например, при потанолом, предварительно насыщенным амиаком, мощи гидролиза при температуре 0°С, а 2-апетат- гидролизовали, чтобы получить /±/-цис-1-/2-/гидроксиметил/-1,3С целью лучшего понимания настоящего изооксатиолан-5-ил/-5-фторцитозин бретения, ниже в качестве иллюстрации приведены Примеры Фармацевтические композиции Пример 1 гис-1-/2-/гидрооксиметил/-1,3В приводимых ниже примерах композиций оксатиолан-5-ил/-5-фторцитозин "АКТИВНЫМ ИнгреДИеНТОМ" ЯВЛЯеТСЯ ЦИС-1-/2Метод А /±/-цис и /±/-транс 2/гидроксиметил/-1,3-оксатиолан-5-ил/-5бензоилоксиметил-5-/^- апетил-питозин-1 -ил/-1,3фторцитозин оксатиолан получали и разделяли на /±/-цис и /+/Пример 2 транс изомеры, как это описано в Европейском Композиции таблеток Патентном /ЕР/ Описании №0 382 526 /±/-цис Следующие композиции А, В и С получали при изомер подвергали фторированию при помощи помощи влажной грануляции ингредиентов с растрифторметил гипофторита в фтортрихлорметане твором повидона с последующим добавлением /CCI3F/ и хлороформе при температуре -78°С в стеарата магния и прессовкой Таблица 1 Композиция А /а/Активный ингредиент /в/ Лактоза /Фармакопея Великобритании/ /с/ Повидон /Фармакопея Великобритании/ /d/ Натрий гликоллат крахмала /е/ Стеарат магния мг/таблетку 250 210 15 20 5 500 мг/таблетку 250 16 9 12 3 300 13 54364 14 Таблица 2 Композиция В /а/ Активный ингредиент /в/ Лактоза /с/Авицел РН 101 /d/ Повидон /Фармакопея Великобритании/ /е/ Натрий гликоллат крахмала /f / Стеарат магния мг^аблетку 250 150 60 15 20 5 500 мг^аблетку 250 — 26 9 12 3 300 Таблица 3 Композиция С Активный ингредиент Лактоза Крахмал Повидон Стеарат магния Таблица 6 Композиция F мг/таблетку 100 200 50 5 4 359 Приводимые ниже композиции Д и Е получали при помощи прямого прессования смешанных ингредиентов Лактоза в композиции Е предназначена для прямой прессовки /фирма Dairy Crest"Zepazox'V Таблица 4 Композиция Д Активный ингредиент Предварительно желатинизированный крахмал NF 15 мг^аблетку 250 150 400 Таблица 5 мг^аблетку /а/Активный ингредиент 500 /в/ Оксипропил метил целлюлоза 112 /Methocel K4M Premium/ продолжение табл 6 /с/ Лактоза /Фармакопея Великобритании/ /d/ Повидон /Фармакопея Великобритании/ /е/ Стеарат магния 28 7 700 Высвобождение препарата имеет место в течение примерно 6-8 часов и завершается спустя 12 часов Пример 3 Композиции для капсул Композиция А Композицию для капсул получали при помощи смешения ингредиентов из Композиции Д в примере 2 выше и заполнения ею жесткой желатиновой капсулы, состоящей из двух частей Композицию В /см ниже/ получали аналогичным образом Композиция В Таблица 7 Композиция Е Активный ингредиент Лактоза Авицел 53 мг^аблетку 250 150 100 500 Композиция F /Композиция для регулируемого высвобождения/ Эту композицию получали при помощи влажной грануляции ингредиентов /перечисленных ниже/ с раствором повидона с последующим добавлением стеарата магния и прессовкой Композиция В /а/Активный ингредиент /в/ Лактоза /Фармакопея Великобритании/ /с/ Натрий гликоллат крахмала /d/ Стеарат магния мг^аблетку 250 143 25 2 420 Таблица 8 Композиция С /а/Активный ингредиент /в/ Макрогол 4000 /Фармакопея Великобритании/ мг^аблетку 250 350 600 54364 15 Таблица 9 Композиция Д мг/габлетку 250 Лецитин 100 Арахисовое масло 100 450 Капсулы с композицией Д получали при помощи диспергирования активного ингредиента в лецитине и арахисовом масле, и заполнения дисперсией мягких, эластичных желатиновых капсул, композиция Е /Капсула для регулируемого высвобождения/ Следующую композицию для капсулы с регулируемым высвобождением получали при помощи экструзии ингредиентов а, в и с, используя экструдер, грануляции экструдированного продукта и сушки Высуженные гранулы затем покрывали мембраной /d/ для регулируемого высвобождения, а затем ими заполняли жесткие желатиновые капсулы, состоящие из двух частей АІСГИВНЬІЙ ингредиент Таблица 10 Композиция Е /а/Активный ингредиент /в/ Микрокристаллическая целлюлоза /с/ Лактоза /Фармакопея Великобритании/ /d/ Этил целлюлоза мг^аблетку 250 125 125 13 513 Пример 4 Композиции для инъекций Таблица 11 Композиция А Активный ингредиент Раствор хлористоводородной кислоты, 0,1 М или раствор гидрата окиси натрия, 0,1 М, сколько нужно, чтобы обеспечить рН Стерильная вода, сколько нужно до 0,200 г от 4,0 до 7,0 10мл Активный ингредиент растворяли в большей части воды /35-40°С/ и рН обеспечивали на уровне от 4,0 до 7,0 при помощи хлористоводородной кислоты или гидрата окиси натрия, в зависимости от цели Затем эту порцию доводили до необходимого объема при помощи воды и фильтровали через стерильный микропористый фильтр в стерильный 10мл желтый стеклянный пузырек /типа 1/ и герметически закрывали в стерильных условиях Пример 5 Внутримышечная инъекция Активный ингредиент 0,20г Бензиловый спирт 0,Юг 16 Гликофурол 75 1,45г Бензиловый спирт, сколько нужно до 3,00мл Активный ингредиент растворяли в гликофуроле Затем добавляли бензиловий спирт и получали раствор, затем добавляли воду до Змл Затем смесь фильтровали через стерильный микропористый фильтр и заполняли ею стерильные Змл желтые стеклянные пузырьки /типа 1/ Пример 6 Сироп Активный ингредиент 0,25г Раствор сорбита 1,50г Глицерин 2,00г Бензоат натрия 0,005г Вкусовой агент, Peach 17 42 316 9 0,0125мл Очищенная вода, сколько нужно до 5,00мл Активный ингредиент растворяли в смеси глицерина и большей части очищенной воды Водный раствор бензоата натрия затем добавляли в раствор, затем добавляли раствор сорбита и, наконец, вкусовой агент Объем доводили до необходимого очищенной перемешивали Пример 7 Суппозиторий водой Активный ингредиент Твердый жир /Фармакопея Великобритании /Witepsol Н15 - фирма Dynamit Nobel/ тщательно мг/суппозиторий 250 1770 2020 Одну пятую жира Witepsol H15 плавили в чашке, снабженной паровой рубашкой, при максимальной температуре 45°С Активный ингредиент просеивали через сито 200 цМ и добавляли в расплавленную основу при перемешивании, используя средство Силверсон /Silverson/, снабженное срезающей головкой до тех пор, пока не будет получена равномерная дисперсия Поддерживая смесь при температуре 45°С, в суспензию добавляли оставшийся Witepsol H15 и перемешивали, чтобы получить однородную смесь Всю суспензию пропускали через сито из нержавеющей стали 250цМ и при непрерывном перемешивании смеси давали возможность остыть до 40°С При температуре от 38 до 40°С 2,02г смеси заполняли соответствующие 2мл, пластиковые формы Суппозиториям давали возможность остыть до комнатной температуры Пример 8 Пессарии м г/пессарий 250 380 363 7 1000 Перечисленные выше ингредиенты непосредственно перемешивали, а пессарии получали при помощи прямого прессования полученной в результате смеси Пример 9 Противовирусная активность против Вируса Гепатита В /ВГВ/ Соединение цис-1-/2-/гидроксиметил/-1,3оксатиолан-5-ил/-5-фтор-цитозин испытывали в Активный ингредиент Безводная декстроза Картофельный крахмал Стеарат магния 18 17 54364 соответствии с описанием, приведенным ниже процедуру Schleicher и Schuell/ S&S, 10 Optical Ave, Keen NH 03431, Publication №700, 1987/ и Линия клеток продуцента человеческого ВГВ обрабатывали, как это описано в работе Southern, HepG2 2,2 15 описанная и охарактеризованная в Y Мої Biol, т 98,1975 -503с Клетки собирали, а работах Sells и др , PNAS т 84,-1987-1005с и Y внутриклеточную ДНК получали после лизиса клеVirol т 62, -1988, -2836с, как было установлено, ток с использованием изотиоцианата гуанидина С обладает многими характеристиками хронически внутриклеточной ДНК работали точно так же, как ВГВ-инфицированного гепатоцита Он инфекциовнеклеточной ДНК После осаждения ацетатом нен, что подтверждали тем фактом, что он вызыаммония и пропалом осадок внутриклеточной ДНК вал заболевание у шимпанзе Эту линию клеток растворяли, расщепляли эндонуклеазой рестрикиспользовали in vitro, чтобы идентифицировать ции Hind III, наносили на агарозовый гель а затем соединения с анти-ВГВ-активностью обрабатывали, как это описано у Саутерна, чтобы Для того, чтобы испытать соединения на проопределить количество репликационных промежутивовирусную активность, монослойные культуры точных, форм Противовирусное действие соедиобрабатывали соединением, 50-200цМ в течение нения определяли при помощи измерения, по десяти дней Верхний слой среды, содержащий крайней мере, 100-кратного, снижения количества внеклеточную ДНК вириона /частицы Дэйна/, сочастиц Дэйна, попавших в культурную среду, и бирали на третий, шестой и десятый день, обратакого же уменьшения во внутриклеточных реплибатывали протеиназой К /1мг/кг/ и додецил сулькационных промежуточных материалах фатом натрия / 1 % / и инкубировали при температуре 50°С в течение одного часа ДНК Полученные результаты приведены ниже экстрагировали равными объемами фенола, заЭффект цис-1 -/2-/гидроксиметил/-1,3тем хлороформом, а затем осаждали при помощи оксатиолан-5-ил/-5-фторцитозина на продуцироацетата аммония и пропанола Осадок ДН раствование ВГВ в культурах клеток 2 2 15 ряли и собирали на нитроцеллюлозе, используя Таблица 12 Внутриклеточная ДНК ВГВ* Обработанное соеди- Интегрированное нение /цМ/ А необработанные клетки 100 В необработанные клетки 100 1,1 0,9 1,9 1,5 1,5 1,0 1,6 1,0 Мономер Репликационный промежуточный материал 2,0 2,3 0,8 1,9 1,9 2,3 0,8 0,7 81 77 2 1 110 67 1 1 *Анализ на внутриклеточную ДНК ВГВ /частицы Дэйна/ выполняли 24 часа после 10-го дня обработки ДНК ВГВ в культурной среде /пг/мл/++ День День День День 0 58 89 64 34 65 90 90 74 3 67 110 11 19 44 120 16 10 6 93 100 3 2 86 80 0 0 10 77 88 0 0 71 82 0 0 +"Нуль" указывает на необнаруживаемый уровень концентрации ДНК ВГВ, предел чувствительности составлял 0,1 пг/мл Підписано до друку 03 04 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24