Комбінація похідного рапаміцину і алкілувального протипухлинного агента та спосіб лікування саркоми м’яких тканин і раку ободової кишки

1. Спосіб лікування новоутворення у ссавця, що потребує цього, який включає введення вказаному ссавцеві ефективної кількості комбінації, що включає похідне рапаміцину, вибране з ССІ-779 і 42-О-(2-гідроксі)етилрапаміцину, і протипухлинний алкілувальний агент, причому новоутворенням є саркома м’яких тканин або рак ободової кишки. 2 (19) 1 3 78706 4 13. Застосування за п. 11, яке відрізняється тим, рмустину і циклофосфаміду, у вигляді комбіноващо новоутворення являє собою рак ободової кишного препарату для одночасного, роздільного або ки. послідовного використання для лікування ново14. Застосування за будь-яким з пп. 11-13, яке утворення у ссавця, причому новоутворенням є відрізняє ться тим, що протипухлинний алкілувасаркома м’яких тканин або рак ободової кишки. льний агент вибраний з групи, що складається з 19. Продукт за п. 18, який відрізняється тим, що меклоретаміну, циклофосфаміду, іфосфаміду, похідним рапаміцину є 42-О-(2мелфалану, хлорамбуцилу, тіотефу, мітоміцину, гідроксі)етилрапаміцин. бусульфану, ломустину, кармустину, прокарбази20. Продукт за п. 18, який відрізняється тим, що ну, темозоломіду, цисплатину і карбоплатину. похідним рапаміцину є CCI-779. 15. Застосування за будь-яким з пп. 11-14, яке 21. Фармацевтична композиція, що включає похідвідрізняє ться тим, що похідне рапаміцину або не рапаміцину, вибране з ССІ-779 і 42-О-(2алкілувальний агент, або обидві сполуки вводять у гідроксі)етилрапаміцину, і протипухлинний алкілусубтерапевтично ефективних кількостях. вальний агент, вибраний з кармустину і циклофо16. Застосування за будь-яким з пп. 11-15, яке сфаміду, і фармацевтично прийнятний носій. відрізняє ться тим, що похідним рапаміцину є 4222. Фармацевтична композиція за п. 21, яка відріО-(2-гідроксі)етилрапаміцин. зняється тим, що похідним рапаміцину є 42-О-(217. Застосування за будь-яким з пп. 11-15, яке гідроксі)етилрапаміцин. відрізняє ться тим, що похідним рапаміцину є 23. Фармацевтична композиція за п. 21, яка відріCCI-779. зняється тим, що похідним рапаміцину є CCI-779. 18. Продукт, що включає похідне рапаміцину і протипухлинний алкілувальний агент, вибраний з ка Винахід відноситься до застосування комбінацій інгібітора mTOR (наприклад, складного рапаміцинового 42-ефіру з 3-гідрокси-2-(гідроксиметил)2-метилпропіоновою кислотою (ССІ-779)) і протипухлинного алкілуючого агента для лікування новоутворень; до застосування інгібітора mTOR і протипухлинного алкілуючого агента для одержання лікарського засобу для лікування новоутворень; до продукту, що включає інгібітор mTOR і протипухлинний алкілуючий агент як комбінований засіб для одночасного, роздільного або послідовного застосування при лікуванні новоутворення; а також до фармацевтичної композиції, що включає інгібітор mTOR, протипухлинний алкілуючий агент і фармацевтично прийнятний носій. Рапаміцин являє собою макроциклічний триєновий антибіотик, продукований Streptomyces hygroscopicus, який, як встановлено, володіє протигрибковою активністю, зокрема, проти Candida albicans, як in vitro, так і in vivo [С. Vezina et al., J. Antibiot. 28, 721 (1975); S.N. Sehgal et al., J. Antibiot. 28, 727 (1975); H.A. Baker et al., J. Antibiot. 31, 539 (1978); патент США 3929992 і патент США 3993749]. Крім того, рапаміцин, що застосовується окремо [патент США 4885171] або в комбінації з піцибанілом (picibanil) [патент США 4401653], виявляє протипухлинну активність. Імуносупресорна дія рапаміцину описана у FASEB 3, 3411 (1989). Циклоспорин А і FK-506, інші макроциклічні молекули, також виявились ефективними як імуносупресорні агенти, які можуть бути використані для запобігання відторгненню трансплантату [FASEB 3, 3411 (1989); FASEB 3, 5256 (1989); R.Y. Calne et al. Lancet 1183 (1978); і патент США 5100899].. R. Martel et al. [Can. J. Physiol. Pharmacol. 55, 48 [1977)] описують ефективність рапаміцину на експериментальній моделі алергічного енцефаломієліту, моделі розсіяного склерозу; моделі ад'ювантного артриту, моделі ревматоїдного артриту; а також його ефективність з інгібування утворення IgE-подібних антитіл. Рапаміцин може бути також використаний для профілактики або лікування системного червоного вовчака [патент США 5078999], запалення легень [патент США 5080899], інсулінзалежного цукрового діабету [патент США 5321009], уражень шкіри, таких як псоріаз [патент США 5286730], уражень кишечнику [патент США 5286731], проліферації клітин гладкої мускулатури і потовщення інтими внаслідок пошкодження судин [патенти США 5288711 і 5516781], лейкемії/лімфоми Т-клітин у дорослих [заявка на європейський патент 525960 А1], очних запалень [патент США 5387589], злоякісних карцином [патент США 5206018], панкардиту [патент США 5496832] і анемії [патент США 5561138]. Складний рапаміциновий 42-ефір з 3-гідрокси2-(гідроксиметил)-2-метилпропіоновою кислотою (ССІ-779) являє собою складні ефіри рапаміцину, що виявляє істотну інгібуючу дію на зростання пухлин на моделях як in vitro, так і in vivo. Одержання і застосування ефіру гідроксикислоти рапаміцину, включаючи ССІ-779, описані в патенті США 5362718. ССІ-779 володіє цитостатичними властивостями, в протилежність цитотоксичним властивостям, і може відстрочити час розвитку або рецидиву нухлин. Вважається, що ССІ-779 має механізм дії, подібний механізму дії сиролімусу (sirolimus). ССІ779 зв'язується з цитоплазматичним білком FKBP і утворює з ним комплекс, інгібуючий фермент, mTOR (мішень рапаміцину у ссавців, також відома як РКВР12-рапаміцин асоційований білок [FRAP]). Інгібування активності кінази mTOR інгібує різні шляхи трансдукції сигналу, включаючи цитокінстимульовану проліферацію клітин, трансляцію мРНК для декількох ключових білків, регулюючих фазу G1 клітинного циклу, і IL-2-індуковану транс 5 78706 6 крипцію, що веде до інгібування розвитку клітинноmTOR, протипухлинний алкілуючий агент і фармаго циклу від G1 до S. Ме ханізм дії ССІ-779, що цевтично прийнятний носій. приводить до блока фази Gl S, є новим для протиВідповідно до даного винаходу термін «лікуракового лікарського засобу. вання» означає лікування ссавця, що має пухлинБуло встановлено, що in vitro ССІ-779 інгібує не захворювання, шляхом введення вказаному зростання ряду гістологічно різних нухлинних кліссавцеві ефективної кількості комбінації інгібітора тин. Найбільш чутливими до ССІ-779 захворюванmTOR і протипухлинного алкілуючого агента з менями є рак центральної нервової системи (ЦНС), тою інгібування зростання нухлини у такого ссавлейкоз (Т-клітин), рак молочної залози, рак передця, ліквідації пухлини або досягнення паліативного міхурової залози і лінії меланоми. Сполука зупиняє ефекту у ссавця. розвиток клітин у фазі G1 клітинного циклу. Відповідно до даного винаходу термін «ввеДослідження голих мишей in vivo показали, що дення» відносно введення комбінації означає або ССІ-779 виявляє активність проти пухлинних ксевведення безпосередньої комбінації, або введення нотрансплантатів людини різних гістологічних випропрепарату, похідного або аналога одного або дів. Особливо чутливими до ССІ-779 виявились обох компонентів комбінації, яке забезпечує наявгліоми, оскільки сполука виявила активність на ність ефективної кількості комбінації в організмі. ортотопічній моделі гліоми у голих мишей. ССІ-779 mTOR означає мішень рапаміцину у ссавців, помітно придушує (що індук ується тромбоцитами) також відому як FKBP12-рапаміцин асоційований стимуляцію фактора росту клітинної лінії гліобласбілок [FRAP]. Інгібування активності кінази mTOR томи людини in vitro. CCI-779 також інгібує зросінгібує різні шляхи трансдукції сигналу, включаючи тання деяких пухлин підшлункової залози людини цитокінстимульовану проліферацію клітин, трансу голи х мишей, так само як і однієї з двох ліній ляцію мРНК для декількох ключових білків, регураку молочної залози, досліджених in vi vo. люючих фазу G1 клітинного циклу, і IL-2Даний винахід передбачає застосування коміндуковану транскрипцію, яка веде до інгібування бінацій інгібітора mTOR і протипухлинного алкілурозвитку клітинного циклу від G1 до S. ючого агента у протипухлинній комбінаторній хіmTOR регулює активність щонайменше двох міотерапії. Зокрема, такі комбінації можуть бути білків, що беруть участь у трансляції специфічних використані для лікування раку нирок, раку м'я ких білків, регулюючих клітинний цикл [Burnett P.E., тканин, раку молочної залози, нейроендокринної PNAS 95: 1432 (1998) і Isotani, S., J. Biol. Chem. нухлини легені, раку шийки матки, раку матки, раку 274: 33493 (1999)]. Один з вказаних білків кінази голови і шиї, гліоми, раку великих клітин легень, p70s6 фосфорилюється mTOR на серпні 389, а раку передміхурової залози, раку підшлункової також на треоніні 412. Таке фосфорилювання спозалози, лімфоми, меланоми, раку малих клітин стерігається у клітин, оброблених фактором росту, легень, раку яєчників, раку ободової кишки, раку внаслідок вестерн-блотингу екстрактів цілих клітин стравоходу, раку шлунку, лейкозу, колоректальноданих клітин з антитілом, специфічним для залишго раку і первинного раку невідомого походження. ку фосфосерину 389. Даний винахід також охоплює комбінації інгібітора Відповідно до даного винаходу термін "інгібіmTOR і протипухлинного алкілуючого агента для тор mTOR" означає сполуку або ліганд, який інгівикористання у протипухлинній комбінаторній хібує реплікацію клітин, блокуючи розвиток клітинміотерапії, при цьому кількість інгібітора mTOR або ного циклу від G1 до S в результаті інгібування протипухлинного алкілуючого агента, або обох фосфорилювання серину 389 кінази p70s6 mTOR. препаратів, що використовується, дорівнює субтеЩоб визначити, чи є сполука інгібітором рапевтично ефективним дозам. mTOR, може бути використана стандартна фарВідповідно до іншого аспекту даний винахід макологічна методика тесту, що описується, яка передбачає застосування комбінацій інгібітора йде нижче. Як показує вестерн-блот, обробка стиmTOR і протипухлинного алкілуючого агента для мульованих фактором росту клітин інгібітором одержання лікарського засобу для лікування новоmTOR, таким як рапаміцин, повністю блокує фосутворень. Відповідно до подальшого аспекту дафорилювання серину 389 і, будучи тим самим хоний винахід охоплює продукт, що включає інгібітор рошим тестом інгібування mTOR. Таким чином, mTOR і протипухлинний алкілуючий агент у вигляцілі клітинні лизати клітин, стимульованих фактоді комбінованого препарату для одночасного, розром росту (наприклад, IGF1) в культурі у присутдільного або послідовного застосування для лікуності інгібітора mTOR, не повинні показувати смуги вання новоутворення у ссавця. Відповідно до на акриламідному гелі, який може бути помічений наступного аспекту даний винахід охоплює фарантитілом, специфічним для серину 389 p70s6K. мацевтичну композицію, що включає інгібітор Матеріали: Буфер для зразка NuPAGE LDS Відновлювальний агент для зразка NuPAGE 4-12% Гель Bis-Tris NuPAGE Проточний буфер NuPAGE MOPS SDS Нітроцелюлоза Гібридизаційний буфер NuPAGE Гіперплівка ECL Реагент для виявлення вестерн-блотингу ECL (Novex Cat # NP0007) (Novex Cat # NP0004) (Novex Cat #NP0321) (NovexCat#NP0001) (NovexCat#LC2001) (Novex Cat # NP0006) (Amersham Cat # RPN3114H) (Amersham Cat # RPN2134) 7 78706 Первинне Phospho-p70 S6 кіназа (Thr389) (клітинна передача сигналу антитіло: Cat #9205) Вторинне козячий антикролячий кон'югат (Santa Cruz Cat #sc-2004) антитіло: IgG-HRP Способи: A. Одержання клітинних лізатів Клітинні лінії вирощують в оптимальному базальному середовищі, доповненому 10% фетальною бичачою сироваткою і пеніциліном/трептоміцином. З метою дослідження фосфорилювання клітини пересівають в 6-ямкові планшети. Після повного прикріплення клітин їх вирощують на мінімальній кількості сироватки. Обробка інгібіторами mTOR продовжується від 2 до 16 годин. Після обробки лікарським засобом клітини промивають один раз, PBS (забуферений фосфа том фізіологічний розчин (ЗФР) без Mg++ і Са++), а потім лізують в 150-200мкл буфера для зразка LDS на ямку. Лізати піддають короткому впливу ультразвуку, а потім центрифугуванню протягом 15 хвилин при 14000 об./хв. До використання лізати зберігають при температурі -80°С. Процедура тесту також може включати інкубування клітин в середовищі для вирощування протягом ночі після їх повного прикріплення. Результати, що одержуються при обох наборах умов, повинні бути однаковими для інгібітора mTOR. B. Вестерн-блот аналіз 1) Одержують зразки, що складаються з одного білка, вміщуючи 22,5мкл лізату в одн у пробірку, а потім додаючи 2,5мкл відновлювального агента для зразка NuPAGE. Нагрівають зразки до 70°С протягом 10 хвилин. Здійснюють електрофорез з використанням гелю NuPAGE і буфера NuPAGE SDS. 2) Переносять гель на нітроцелюлозну мембрану з гібридизаційним буфером NuPAGE. Мембрану блокують протягом години блокуючим буфером (забуферений Tris фізіологічний розчин з 0,1% Tween і 0,5% знежиреного молока). Промивають мембрани 2х буфером для промивання (забуферений Tris фізіологічний розчин з 0,1% Tween). 3) Блот/мембрану інкубують з первинним антитілом Р-р70 S6K (Т389) (1:1000) в блокуючому буфері протягом ночі при температурі 4°С на платформі, що обертається. 4) Кожний блот промивають 3х протягом 10 хвилин в буфері для промивання та інкубують з вторинним антитілом (1:2000) у блокуючому буфері протягом години при кімнатній температурі. 5) Після зв'язування вторинного антитіла кожний блот промивають 3х протягом 10 хвилин буфером для промивання і 2х протягом 1 хвилини забуференим Tris фізіологічним розчином з подальшим хемілюмінесцентним (ECL) аналізом і виявленням на плівках для хемілюмінесценції. Відповідно до даного винаходу термін «рапаміцин» означає клас імуносупресорних сполук, що містять основне ядро рапаміцину (показано нижче). Рапаміцини відповідно до даного винаходу включають сполуки, які можуть бути хімічно або біологічно модифіковані як похідні ядра рапаміцину, зберігаючи при цьому імуносупресорні властивості. Відповідно, термін «рапаміцин» включає 8 складні ефіри, прості ефіри, оксими, гідразони і гідроксиламіни рапаміцину, а також рапаміцини, в яких функціональні групи ядра рапаміцину були піддані модифікації, наприклад, внаслідок відновлення або окислення. Термін «рапаміцин» також включає фармацевтично прийнятні солі рапаміцинів, здатні утворювати такі солі завдяки наявності кислотного або основного залишку. Переважно, щоб складні і прості ефіри рапаміцину включали гідроксильні групи в положенні 42 і/або 31 ядра рапаміцину, складні і прості ефіри гідроксильну гр уну в положенні 27 (після хімічного відновлення кетону 27), а оксими, гідразони і гідроксиламіни - кетон в положенні 42 (після окислення гідроксильної групи 42) і кетон 27 ядра рапаміцину. Переважні прості і складні ефіри 42 і 31 описані в наступних патентах, що наводяться тут як посилання: складні алкілові ефіри [патент США 4316885]; складні аміноалкілові ефіри [патент США 4650803]; складні фторовані ефіри [патент США 5100883]; складні амідні ефіри [патент США 5118677]; складні ефіри карбамату [патент США 5118678]; складні силіові ефіри [патент США 5120842]; складні аміноефіри [патент США 5130307]; ацеталі [патент США 551413]; складні амінодіефіри [патент США 5162333]; складні ефіри сульфонату і сульфату [патент США 5177203]; складні ефіри [патент США 5221670]; складні алкоксіефіри [патент США 5233036]; складні ефіри О-арилу, -алкілу, -алкенілу і алкінілу [патент США 5258389]; складні ефіри карбонату [патент США 5260300]; карбамати арилкарбонілу і алкоксикарбонілу [патент США 5262423]; карбамати [патент США 5302584]; складні гідроксіефіри [патент США 5362718]; блоковані складні ефіри [патент США 5385908]; складні гетероциклічні ефіри [патент США 5385909]; гемдизаміщені складні ефіри [патент США 5385910]; складні ефіри аміноалканової кислоти [патент США 5389639]; складні ефіри фосфорилкарбамату [патент США 53-91730]; складні ефіри карбамату [патент США 5411967]; складні ефіри карбамату [патент США 5434260]; складні ефіри амідинокарбамату [патент США 5463048]; складні ефіри карбамату [патент США 5480988]; складні ефіри карбамату [патент США 5480989]; складні ефіри карбамату [патент США 5489680]; блоковані складні ефіри N-оксиду [патент США 5491231]; складні ефіри біотину [патент США 9 78706 10 5504091]; складні ефіри О-алкілу [патент США клітинах з утворенням ковалентних зв'язків. Най5665772] і складні ефіри ПЕГ рапаміцину [патент більш важливими реакціями відносно їх протипухСША 5780462]. Одержання даних складних і прослинної активності є реакції з основами ДНК. Деякі тих ефірів описане у вищезгаданих патентах. алкілуючі агенти є монофункціональними і взаєПереважні складні і прості 27-ефіри рапаміцимодіють тільки з одним ланцюгом ДНК. Інші є біну описані в [патенті США 5256790], наведеному функціональними і взаємодіють з атомом на кожтут як посилання. Одержання даних складних і ному з двох ланцюгів ДНК, утворюючи простих ефірів описане у вищезгаданих патентах. «перехресний зв'язок», що ковалентно з'єднує два Переважні оксими, гідразони і гідроксиламіни ланцюги подвійної спіралі ДНК. Без репарації таке рапаміцину описані в [патентах США 5373014, пошкодження перешкоджає ефективній реплікації 5378836, 5023264 і 5563145], що наводяться тут як клітини. Летальність монофункціональних алкілупосилання. Одержання даних оксимів, гідразонів і ючих агентів відбувається внаслідок розпізнавання гідроксиламінів описане у вищезгаданих патентах. пошкодження ДНК клітиною і відповіді клітини на Одержання 42-оксорапаміцину описане в патенті дане пошкодження. [Colvin ОМ. Antitumor Alkylating 5023263, що наводиться тут як посилання. Agents. In Cancer Principles & Practice of Oncology, Особливо переважні рапаміцини включають 6th Edition, ed. DeVita VT, Hellman S, Rosenberg рапаміцин [патент США 3929992], ССІ-779 [складSA. Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia 2001, ний 42-ефір рапаміцину з 3-гідрокси-2p.363]. (гідроксиметил)-2-метилпропіоновою кислотою; Протинухлинні алкілуючі агенти приблизно патент США 5362718] і 42-О-(2розділені, відповідно до їх стр уктури або реакційгідроксі)етилрапаміцин [патент США 5665772]. ноздатного залишку, на декілька категорій, що За необхідності фармацевтично прийнятні солі включають азотистий іприт, такий як мустарген, рапаміцину можуть бути одержані з органічних і циклофосфамід, іфосфамід, мелфалан і хлорамнеорганічних кислот, наприклад, оцтова, пропіонобуцил; азидини та епоксиди, такі як тіотеф, мітоміва, молочна, лимонна, винна, янтарна, фумарова, цин С, діангідрогалактитол і дибромдульцитол; малеїнова, малонова, мигдалева, яблучна, фтаалкілсульфонати, такі як бусульфан; нітрозочесолева, соляна, бромистоводнева, фосфорна, азовини, такі як бісхлоретилнітрозосечовини (BCNU), тна, сірчана, метансульфонова, нафталінсульфоциклогексилхлоретилнітрозосечовина (CCND) і нова, бензолсульфонова, толуолсульфонова, метилциклогексилхлоретилнітрозосечовина камфорсульфонова кислота і подібні відомі прийн(MeCCNU); похідні гідразину і триазину, такі як ятні кислоти у випадку, коли рапаміцин містить прокарбазин, дакарбазин і темозоломід; а також відповідний основний залишок. Солі можуть бути сполуки платини. Сполуки платини являють собою також одержані з органічних і неорганічних основ, агенти, що містять платину, які взаємодіють перетаких як солі лужних металів (наприклад, натрію, важно в положенні N7 залишків гуаніну і аденіну, літію або калію), солі лужноземельних металів, утворюючи різні монофункціональні і біфункціонасолі амонію, солі алкіламонію, що містять 1-6 атольні адукти. [Johnson SW, Stevenson JP, O'Dwyer мів вуглецю, або солі діалкіламонію, що містять 1PJ. Cisplatin and Its Analogues. In Cancer Principles 6 атомів вуглецю в кожній алкілгрупі, а також солі & Practice of Oncology, 6th Edition, ed. De Vita VT, триалкіламонію, що містять 1-6 атомів вуглецю в Hellman S, Rosenberg SA. Lippincott Williams & кожній алкілгрупі у випадку, якщо рапаміцин місWilkins. Philadelphia 2001, p. 378]. Дані сполуки тить відповідний кислотний залишок. включають цисплатин, карбоплатин, сполуки плаІнгібітор mTOR, який може бути використаний тини IV і багатоядерні платинові комплекси. у протипухлинних комбінаціях відповідно до даноНижче наведені характерні приклади протинуго винаходу, переважно являє собою рапаміцин, хлинних алкілуючих агентів відповідно до даного більш переважно, інгібітор mTOR являє собою винаходу. рапаміцин, ССІ-779 або 42-О-(2Меклоретамін доступний комерційно у вигляді гідроксі)етилрапаміцин. ін'єкцій (MUSTARGEN). Згідно з наведеним описом ССІ-779 піддавали Циклофосфамід доступний комерційно у вивипробуванням як характерний інгібітор mTOR в гляді ін'єкцій (циклофосфамід, ліофілізований інгібіторі mTOR плюс антиметаболічні комбінації CYTOXAN або NEOSAR), а також у вигляді таблевідповідно до даного винаходу. ток для перорального прийому (циклофосфамід Одержання ССІ-779 описане в патенті США або CYTOXAN). 5362718, що наводиться тут як посилання. При Іфосфамід доступний комерційно у вигляді використанні ССІ-779 як протипухлинного засобу ін'єкцій (IFEX). передбачається, що первинна доза для внутрішМелфалан доступний комерційно у вигляді ньовенної ін'єкції становить приблизно 0,1ін'єкцій (ALKERAN), а також у вигляді таблеток для 100мг/м 2 при щоденній схемі введення (щодня перорального прийому (ALKERAN). протягом 5 днів, кожні 2-3 тижні), і приблизно 0,1Хлорамбуцил доступний комерційно у вигляді 1000мг/м 2 при введенні один раз на тиждень. Петаблеток для перорального прийому (LEUKERAN). реважними способами введення є пероральний Тіотеф доступний комерційно у вигляді ін'єкцій або внутрішньовенний, при цьому більш переваж(тіотеф або THIOPLEX). ним є внутрішньовенний шлях. Мітоміцин доступний комерційно у вигляді ін'єВідповідно до даного винаходу термін «протикцій (мітоміцин або MUTAMYCIN). пухлинний алкілуючий агент» означає речовину, Бусульфан доступний комерційно у вигляді яка вступає у взаємодію (або реакцію алкілування) ін'єкцій (BUSULFEX), а також у вигляді таблеток з багатьма збагаченими електронами атомами в для перорального прийому (MYLERAN). 11 78706 12 Ломустин (CCNU) доступний комерційно у викапсул для перорального прийому (TEMOD AR). гляді капсул для перорального прийому (CEENU). Цисплатин доступний комерційно у вигляді Кармустин доступний комерційно у вигляді ін'єкцій (цисплатин, PLATINOL або PLATINOL-AQ). внутрішньочерепного імплантату (GLIADEL), а Карбоплатин доступний комерційно у вигляді також у вигляді ін'єкцій (BICNU). ін'єкцій (PARAPL ATIN). Прокарбазин доступний комерційно у вигляді Наступна таблиця коротко підсумовує деякі з капсул для перорального прийому (MATULANE). рекомендованих дозувань вищеперелічених проТемозоломід доступний комерційно у вигляді типухлинних алкілуючих агентів. Переважні комбінації відповідно до даного винаходу mTOR інгібітора плюс протинухлинний алкілуючий агент включають ССІ-779 плюс цисплатин; ССІ-779 плюс циклофосфамід; ССІ-779 плюс карбоплатин; і ССІ-779 плюс DCNU. Протипухлинну активність комбінацій mTOR інгібітора плюс протипухлинний алкілуючий агент підтверджують, застосовуючи ССІ-799 як характе 13 78706 14 рний інгібітор mTOR у стандартних фармакологічтинної лінії Rh1, а є адитивною проти пухлинної них методиках тестів in vitro і in vivo, застосовуючи клітинної лінії SJ-G2. Комбінація ССІ-779 плюс комбінації ССІ-779 плюс цисплатин; ССІ-779 плюс BCNU є синергічною проти пухлинної клітинної циклофосфамід; і ССІ-779 плюс DCNU як характелінії SJ-G2 і більш ніж адитивною, але не досягає рні комбінації відповідно до даного винаходу. Нижрівня математичного синергізму проти клітинної че коротко описані методика, що застосовується, і лінії. Rh30 і адитивності проти клітинної лінії Rh1. одержані результати. Комбінація ССІ-779 плюс мелфанан є адитивною Для комбінаторних досліджень in vitro з ССІпроти кожної з клітинних ліній. 779 і алкілуючими агентами використовують лінії Самиць мишей CBA/CaJ [Jackson Laboratories, рабдоміосаркоми людини Rh30 і Rh1, а також ліBar Harbor, ME] у віці 4 тижнів позбавляють імунінію гліобластоми людини SJ-GBM2. Для дослітету в результаті тимоектомії, а через 3 тижні їх джень in vi vo використовують лінію нейробластоми тіла повністю піддають опроміненню (1200 cGy), людини (NB1643) і лінію ободової кишки людини застосовуючи джерело 137Cs. Протягом 6-8 годин GC3. опромінення мишам вводять 3 x 106 ядровмісних Для кожного лікарського засобу, який предстаклітин кісткового мозку. вляє інтерес, визначають криві відповіді на дози. Частини пухлин розміром приблизно 3мм 3 імКлітинні лінії Rh30, Rh1 і SJ-G2 вміщують в шестиплантують в ділянку дорсального бічного простору ямкові аглютинаційні планшети у кількості 6х103, мишей, ініціюючи зростання пухлин. Перед почат5х103 і 2,5 х104 клітин/ямка, відповідно. ком лікування мишей з пухлинами випадковим Після 24-годинного інкубування лікарські засочином ділять на групи по сім екземплярів. Коли би додають в 10%FBS+RPMI 1640 для Rh30 і Rhl нухлини досягають приблизно 0,20-1см в діаметрі, або 15%FBS+DME для SJ-G2. Після семиденного кожна миша одержує лікарський засіб. Розміри перебування в середовищі, яке містить лікарський нухлин визначають кожні 7 днів за допомогою цизасіб, ядра вивільняють, обробляючи клітини спофрового циркуля Vernier, з'єднаного з комп'ютечатку гіпотонічним розчином, а потім детергентом. ром. Об'єми пухлин підраховують, передбачаючи, Після цього ядра підраховують за допомогою ліщо вони мають сферичну форму, за формулою чильника Coulter. Результати експериментів зо[(p/6 x d 3], де d означає середній діаметр. ССІ-779 бражають у вигляді графіка і для кожного лікарсьвводять за схемою протягом 5 днів підряд протякого засобу екстраполяцією визначають ІС 50 гом 2 тижнів, повторюючи даний цикл кожні 21 (концентрація лікарського засобу, яка забезпечує день 3 рази. Таким чином, ССІ-779 вводять у дні 150% інгібування зростання). Через те, що значення 5, 8-12 (цикл 1); 21-25, 28-32 (цикл 2); і 42-46, 49-53 ІС50 від експерименту до експерименту злегка ва(цикл 3). Схема введення іншого хіміотерапевтичріюються, при дослідженні взаємодії використовуного лікарського засобу в кожному дослідженні ють дві величини, що беруть в дужки ІС50 кожного наступна: лікарського засобу. Точка максимальної взаємодії циклофосфамід у 1-й і 8-й день кожні 21 день між двома лікарськими засобами досягається при протягом 3 циклів. їх наявності у співвідношенні 1:1 в тому випадку, Комбінація ССІ-779 і циклофосфаміду оцінюякщо ізобола має стандартну форму. Тому кожну з ють на прикладі рабдосаркоми людини (Rh18), трьох приблизних концентрацій ІС 50 CCI-779 змізастосовуючи вищеописану методику тесту ксеношують у співвідношенні 1:1 з кожним з трьох притрансплантату миші. При використанні даної меблизних ІС50 цисплатину, BCNU і мелфанану. Татодики тесту активність ССІ-779 з циклофосфаміким чином, в кожному експерименті одержують по дом (44мг/кг) є адитивною. Комбінування дев'ять 1:1 комбінацій лікарських засобів плюс три субоптимальних доз ССІ-779 плюс циклофосфамід концентрації для ССІ-779 та іншого лікарського надає таку ж дію, як і оптимальна доза циклофосзасобу. Даний протокол звичайно забезпечує щофаміду. найменше одну комбінацію для кожного лікарськоВиходячи з результатів проведення вищеопиго засобу, що має величину ІС 50. Потім використосаних фармакологічних випробувань, комбінації вують 1:1 комбінацію концентрацій ІС 50 для ССІінгібітора mTOR плюс протипухлинний алкілуючий 779 і кожного лікарського засобу для хіміотерапії з агент можуть бути використані у протипухлинній метою визначення адитивності, синергізму або терапії. Зокрема, такі комбінації можуть бути викоантагонізму, застосовуючи формулу Berenbaum: ристані для лікування карциноми нирок, саркоми x/X50+y/Y50, =1,1. У тому випадку, якщо три м'яких тканин, раку молочної залози, нейроендоконцентрації ССІ-779, що випробовується окремо, кринної нухлини легені, раку шийки матки, раку не дають lС, відповідний до будь-якого з трьох lС матки, раку голови і шиї, гліоми, раку великих клііншої сполуки, що випробовується окремо, то петин легень, раку передміхурової залози, раку підревірці піддають всі 1:1 комбінації, щоб пересвідшлункової залози, лімфоми, меланоми, раку мачитись в тому, чи попадають їх значення lС між лих клітин легень, раку яєчників, раку ободової потрібними значеннями lС випробовуваних окремо кишки, раку стравоходу, раку шлунку, лейкозу, лікарських засобів. У позитивному випадку ефект колоректального раку і первинного раку невідомовважають адитивним. го походження. Оскільки вказані комбінації містять Результати проведення стандартної фармакощонайменше два активних протипухлинних агенлогічної процедури in vitro при випробуванні проти ти, застосування таких комбінацій також забезпенухлинної лінії Rh30 показують, що комбінація чує застосування комбінацій кожного з агентів, в ССІ-779 плюс цисплатин є синергічною; дана комяких один або обидва агенти застосовують у суббінація є більш ніж адитивною, але не досягає рівтерапевтично ефективних дозах, тим самим зниня математичного синергізму проти пухлинної кліжуючи токсичність кожного окремого хіміотерапев 15 78706 16 тичного засобу. на доза становить приблизно 2,5-70мг/м 2. ПереваПри здійсненні хіміотерапії як складові частини жним також є внутрішньовенне введення інгібітора хіміотерапевтичного «коктейлю» звичайно викориmTOR, звичайно протягом 30 хвилин і приблизно стовують різноманітні агенти, що надають різні один раз на тиждень. Первинні дози такого комповиди дії. Передбачається, що комбінації відповідно нента, як алкілуючий агент, залежать від компонедо даного винаходу будуть використовуватись як нта, що застосовується, і спочатку основані на частина коктейлю для хіміотерапії, який може місдосвіді роботи лікаря з вибраними агентами. Четити один або більше додаткових протипухлинних рез один або більше циклів лікування дози можуть агентів в залежності від природи неоплазії, що бути підвищені або знижені в залежності від репіддається лікуванню. Наприклад, даний винахід зультатів, що одержуються, і побічних ефектів, що також охоплює застосування комбінації інгібітор спостерігаються. mTOR/алкілуючий агент разом з іншими хіміотераКомерційно доступні алкілуючі агенти можуть певтичними агентами, такими як антиметаболіти мати відомі лікарські форми, при цьому дози мо(тобто 5-фтороурацил, флоксурадин, тіогуанін, жуть бути розділені в залежності від необхідності. цитарабін, флударабін, 6-меркаптопурин, метотАльтернативно, такі агенти або алкілуючі агенти, рексат, гемцитабін, капецитабін, пентостатин, недоступні комерційно, можуть бути одержані відтриметрексат або кладрибін); гормональні агенти повідно до звичайної фармацевтичної практики. (тобто естрамустин, тамоксифен, тореміфен, анаСклади для перорального введення, що містять строзол або летрозол); антибіотики (тобто плікаміактивні сполуки відповідно до даного винаходу, цин, блеоміцин, мітоксантон, ідарубіцин, дактиноможуть включати будь-які пероральні форми, що міцин, мітоміцин або даунорубіцин); звичайно використовуються, включаючи таблетки, імуномодулятори (тобто інтерферони, IL-2 або капсули, трансбукальні форми, пастилки, коржики і BCG); антимітотичні агенти (тобто вінбластин, вінрідини, суспензії або розчини для перорального кристин, теніпозид або вінорелбін); інгібітори топовикористання. Капсули можуть містити суміші акізомерази (тобто топотекан, іринотекан, етопозид тивної сполуки (активних сполук) з інертними наабо доксорубіцин); а також інші агенти (тобто гідповнювачами і/або розріджувачами, такими як роксисечовина, трастуз умаб, алтретамін, ретуксифармацевтично прийнятний крохмаль (наприклад, маб, паклітаксел, доцетаксел, L-аспарагіназа або кукурудзяний, картопляний крохмаль або крохозогаміцин гемтузумабу). маль тапіока), нукор, штучні підсолоджувачі, поВідповідно до даного винаходу комбінація модрібнені в порошок целюлози, такі як кристалічна і же бути введена одночасно або частинами, при мікрокристалічна целюлози, різні види борошна, цьому під час курсу хіміотерапії інгібітор mTOR желатин, смоли і т.д. Застосовні склади таблеток вводять в інший час, ніж алкілуючий агент. Такий можуть бути одержані шляхом звичайного пресупроміжок між введенням двох агентів може становання, мокрого або сухого гранулювання і включавити декілька хвилин, годин, днів, тижнів або біти фармацевтично прийнятні розріджувачі, зв'язульше. Тому термін «комбінація» не обов'язково вальні агенти, змащувальні агенти, означає одночасне введення або введення в розщеплювальні агенти, модифікатори поверхні складі єдиної дози, а означає введення кожного (включаючи поверхнево-активні речовини), сукомпонента протягом бажаного періоду лікування. спендуючі або стабілізуючі агенти, включаючи, але Агенти також можуть бути введені різними спосоне обмежуючись ними, стеарат магнію, стеаринову бами. Наприклад, що стосується комбінації «інгібікислоту, тальк, лаурилсульфат натрію, мікрокристор mTOR плюс алкілуючий агент», передбачаєтьталічну целюлозу, кальцій карбоксиметилцелюлося, що інгібітор mTOR вводять пероральним або зи, полівінілпіролідон, желатин, альгінову кислоту, парентеральним способом, при цьому переважним смолу акації, ксантанову смолу, цитрат натрію, є парентеральне введення, в той час, як алкілуюскладні силікати, карбонат кальцію, гліцин, декчий агент може бути введений парентеральним, стрин, сахарозу, сорбіт, ди фосфат кальцію, сульпероральним або іншими прийнятними способами. фат кальцію, лактозу, каолін, маніт, хлорид натрію, Такі комбінації можуть бути введені щодня, щотитальк, сухий крохмаль і порошковий цукор. Пережня або щомісяця. Як характерно для хіміотерапеважні модифікатори поверхні включають неіонні і втичних схем, курс хіміотерапії може бути повтоаніонні модифікуючі поверхню агенти. Характерні рюваний через декілька тижнів і може йти за такою приклади модифікаторів поверхні включають, але ж часовою схемою введення двох агентів або моне обмежуються ними, полоксамер 188, хлоридом же бути модифікований в залежності від реакції бензалконію, стеарат кальцію, цетостериловий пацієнта. спирт, цетомакрогол-емульгуючий віск, складні Як це звичайно відбувається при хіміотерапії, ефіри сорбіту, колоїдний діоксид кремнію, фосфасхеми введення лікарських засобів ретельно контти, додецилсульфат натрію, силікат магнію алюміролюються лікуючим лікарем з урахуванням баганію і триетаноламін. Склади для перорального тьох факторів, включаючи тяжкість захворювання, введення можуть включати відомі пролонговані реакцію на захворювання, загальну токсичність, або вивільняючі через певний час склади з метою пов'язану з лікуванням, вік, здоров'я пацієнта та зміни абсорбції активної сполуки (активних споінші супутні порушення або курси лікування. лук). Склади для перорального використання таВиходячи з результатів, що забезпечуються кож можуть бути призначені для введення активзастосуванням комбінацій ССІ-779 плюс алкілуюного інгредієнта у воді або фруктовому соку, що чий агент, передбачається, що початкова доза для містить відповідні необхідні солюбілізатори або внутрішньовенної ін'єкції інгібітора mTOR станоемульгатори. вить приблизно 0,1-100мг/м 2, при цьому переважУ деяких випадках може виникнути необхід 17 78706 18 ність введення сполук безпосередньо в дихальні Таке введення може бути здійснене із застосуваншляхи у вигляді аерозолю. ням даних сполук або їх фармацевтично прийнятСполуки також можуть бути введені парентених солей у вигляді лосьйонів, кремів, піни, накларальним або інтраперитонеальним способом. Роздок, суспензій, розчинів і супозиторіїв (ректальних і чини або суспензії таких активних сполук у вигляді вагінальних). вільної основи або фармакологічно прийнятної Трансдермальне введення може, бути здійссолі можуть бути одержані у воді, відповідним чинено шляхом застосування трансдермальної наном змішаної з поверхнево-активною речовиною, кладки, що містить активну сполуку і носій, який такою як гідроксипропілцелюлоза. Дисперсії також інертний до активної сполуки, нетоксичний для можуть бути одержані в гліцерині, рідких поліетишкіри і забезпечує доставку агента для системного ленгліколях і їх сумішах в маслах. При звичайних всмоктування в потік крові через шкіру. Носій може умовах зберігання і використання, дані препарати мати різні форми, такі як креми і мазі, пасти, гелі і містять консервант, що запобігає зростанню мікоклюзійні пристрої. Креми і мазі можуть являти роорганізмів. собою в'язкі, рідкі або напівтверді емульсії типу Фармацевтичні форми, відповідні для ін'єкцій, «олія-у-воді» або «вода-в-олії». Також підходять включають стерильні водні розчини або дисперсії і пасти з абсорбуючих порошків, диспергованих у стерильні порошки для незапланованого одервазеліні або гідрофільному вазеліні, що містить жання стерильних розчинів або дисперсій для ін'єактивний інгредієнт. Для вивільнення активного кцій. У будь-якому випадку форма повинна бути інгредієнта в потік крові можуть бути використані стерильною і рідкою до такої міри, щоб забезпечирізні оклюзійні пристрої, такі як напівпроникна ти її легке набирання в шприц. Вона повинна бути мембрана, закриваюча ємність, яка містить активстійкою в умовах виробництва і зберігання і повиний інгредієнт з носієм або без нього, або матринна бути огороджена від забруднюючої дії мікроорця, що містить активний інгредієнт. Інші оклюзійні ганізмів, таких як бактерії і грибки. Носієм може пристрої описані в літературі. служити розчинник або дисперсійне середовище, Складидля супозиторіїв можуть бути виго товщо містить, наприклад, воду, етанол, поліол (налені з традиційних матеріалів, включаючи масло приклад, гліцерин, пропіленгліколь і рідкий полікакао, з додаванням різних видів воску або без них етиленгліколь), їх відповідні суміші і олії. з метою зміни температури плавлення супозитоУ даному описі під трансдермальним введенрію, а також гліцерин. Можуть бути також викорисням маються на увазі всі види введення через потані водорозчинні основи для супозиторіїв, такі як верхню організму і внутрішні вистилання проходів поліетиленгліколі з різною молекулярною вагою. тіла, включаючи епітеліальні і слизові тканини. Комп’ютерна в ерстка Л. Купенко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601