Композиція та спосіб лікування або попередження доброякісної простатичної гіперплазії та симптомів з боку нижчих сечових шляхів

1. Композиція для лікування або попередження доброякісної простатичної гіперплазії і симптомів з боку нижчих сечових шляхів, що включає сполуку піразолопіримідинону, представлену хімічною формулою (І), і антагоніст α-адренергічного рецептора в ефективній кількості, де антагоніст αадренергічного рецептора являє собою (R)-5-(2-(2(2-етоксифенокси)етиламіно)пропіл)-2-метокси бензолсульфонамід або 1-(3-гідроксипропіл)-5{2R-2-[2-(2,2,2трифторетокси)феноксі]етиламіно]пропіл}-7індолінкарбоксамід: C2 1 3 Даний винахід відноситься до комбінованої терапії доброякісної простатичної гіперплазії (ВРН) і симптомів з боку нижчих сечових шляхів (LUTS). Більш конкретно, даний винахід відноситься до композиції і способу лікування або попередження доброякісної простатичної гіперплазії і симптомів з боку нижчих сечових шляхів без проявлення побічного ефекту релаксацією гладкого м'яза у простаті і сечовому міхурі. Доброякісна гіперплазія простати (ВРН) є захворюванням з симптомом збільшення простати, що викликане ненормальним зростанням простатичної клітини. ВРН часто виникає у п'ятдесятирічних чоловіків або старших. Коефіцієнт розповсюдження ВРН зростає різко зі збільшенням віку, тим самим сильно впливаючи на якість життя. Взагалі, ВРН супроводжувалась симптомами збоку нижчих сечових шляхів, причинами яких є анатомічне утруднення простатою і функціональне утруднення α1-рецептором для скорочення гладкого м'язу у простаті (The Korean Journal of Urology, vol. 483,2007). Основні симптоми, що викликані утрудненнями, включають вузький потік, слабкий потік сечі, ускладнений початок сечовиділення, перебої, виділення після спорожнювання або відчуття залишкової сечі. Спосіб обробки розділили на простатектомію і лікарську терапію. У випадку, коли симптоми не достатньо серйозні для простатектомії або пацієнт сприяє консервативному лікуванню, або що хірургічне лікування не властиве пацієнту, широко застосовують лікарську терапію. В залежності від цільового сайту лікарського засобу, лікарські засоби розділили на лікарський засіб для зниження механічної перешкоди безпосереднім зменшенням розміру простати, і лікарський засіб для покращення динамічної перешкоди релаксацією гладкого м'язу у простаті і шийці сечового міхура. Перша група включає лікарський засіб серії інгібіторів 5а-редуктази, і типовими лікарськими засобами є фінастерид і дутастприд. Остання група включає лікарський засіб антагоніст α-адренергічного рецептора, і типовими лікарськими засобами є тамсулозин, альфузозин, доксазозин, празозин, індорамін, теразозин, силодозин і подібне. Інгібітор 5α-редуктази за три (3) місяці або більше зменшує розмір простати дією лікарського засобу, і його потрібно приймати приблизно один рік для проявлення максимального ефекту. До того ж, він може спричинити статеву дисфункцію, а саме еректильну дисфункцію. Антагоніст α-адренергічного рецептора швидко покращує симптоми дією на а-рецептор і включенням релаксації гладкого м'язу. Однак, він діє не специфічно на відміну від передміхурового гладкого м'язу, тим самим викликаючи побічні ефекти, а саме запаморочення, відчуття втоми і сонливість. Більш того, повідомили, що антагоніст αадренергічного рецептора може викликати статеву 95028 4 дисфункцію, включаючи дегенеративне сім'явивергання. Частота захворювання на ВРН, симптоми з боку нижчих сечових шляхів і еректильна дисфункція вище при збільшенні віку. Більш того, новіши клінічні дослідження повідомляють, що інгібітор фосфодіестерази типу 5 проявляє ефективність лікування як ВРН, так і симптомів з боку нижчих сечових шляхів, він привертає увагу як медикамент для захворювань (Urol Clin N Am 2005 32:511-525; BJU Int 2002 90:836-839; Expert Opin Drag Metab Toxicol 2006 2:609-617). Зокрема, в аспекті зниження побічного ефекту і підвищення лікувального ефекту існуючих лікарських засобів, інгібітор фосфодіестерази типу 5 відмітили як медикамент для ВРН і симптомів з боку нижчих сечових шляхів підвищеної ймовірності. З одного боку, за даним винаходом синтезували нову сполуку піразолопіримідинону, представлену хімічною формулою (І), і розкрили застосування сполуки як інгібітору фосфодіестерази типу 5 (PDE 5 інгібітор) у міжнародній заявці WO 00/027848. O N NH N O N O O S NH N (1). До того ж, в той час як за даним винаходом безперервно вивчали сполуку, застосовувану як PDE 5 інгібітор, з'ясували, що сполука піразолопіримідинону, представлена хімічною формулою (І), проявляла чудовий ефект для лікування або попередження ВРН і симптомів з боку нижчих сечових шляхів, і подали РСТ заявку і заявку на патент Кореї (WO 07/114534 і KR10-0792126B1). При цьому, у комбінації антагоніста αадренергічного рецептора, деякі сполуки піразолопіримідинону, які застосовують як PDE 5 інгібітори, викликали запаморочення швидким падінням системного кров'яного тиску, і, таким чином, потрібно бути дуже обережними при застосуванні з антагоністом а-адренергічного рецептора. Наприклад, коли варденафіл, один з існуючих PDE 5 інгібіторів, застосовували у комбінації антагоніста α-адренергічного рецептора, деякі пацієнти проявляли низький кров'яний тиск, і варденафіл не можна водити через 6 годин після введення антагоніста α-адренергічного рецептора. Згідно з результатом нещодавнього клінічного дослідження лікарської взаємодії, коли варденафіл вводять після введення 10 мг теразозину і 0,4 мг тамсулозину, він проявляє середнє максимальне зниження діапазону між максимальним систолі 5 95028 чним тиском 5-8 мм рт. ст. і максимальним діастолічним тиском 4-6 мм рт. ст. Повідомили, що коли теразозин або тамсулозин вводять в комбінації PDE 5 інгібіторів, він проявляє побічний ефект ортостатичної гіпотензії. Один варіант здійснення даного винаходу забезпечує комбіновану терапію для ВРН і LUTS. Інший варіант здійснення даного винаходу забезпечує композицію і спосіб лікування або попередження ВРН і LUTS, що мають більш чудовий ефект релаксацією гладкого м'язу у простаті і сечовому міхурі без проявлення побічного ефекту. У даному винаході з'ясували, що комбінаційне введення конкретної сполуки піразолопіримідинону як PDE 5 інгібітора і антагоніста αадренергічного рецептора проявляло кращий ефект лікування або попередження ВРН і LUTS, і надавало більшу безпеку при побічних ефектах, а саме падіння кров'яного тиску, і здійснили даний винахід. Згідно з варіантом здійснення даного винаходу забезпечили композицію для лікування або попередження доброякісної простатичної гіперплазії і симптомів з боку нижчих сечових шляхів, яка включає сполуку піразолопіримідинону, представлену хімічною формулою (І), і антагоніст αадренергічного рецептора в ефективній кількості: O N NH N O N O O S NH N (1). Згідно з іншим варіантом здійснення даного винаходу, забезпечили спосіб лікування або попередження доброякісної простатичної гіперплазії і симптомів з боку нижчих сечових шляхів, який включає етап, на якому пацієнту у разі потреби вводять ефективну кількість сполуки піразолопіримідинону, представленою формулою (І), і антагоніст α-адренергічного рецептора. Перед розкриттям і описом даного винаходу, потрібно розуміти, що даний винахід не обмежується окремими конфігураціями, етапами способу і матеріалами, розкритими в даному документі, і такі конфігурації, етапи способу і матеріали можуть змінюватись. Також потрібно розуміти, що вживану в даному документі термінологію застосовують тільки з метою опису окремих варіантів здійснення і не припускає обмеження об'єму даного винаходу, який буде обмежуватись тільки прикладеною формулою винаходу і її еквівалентами. Якщо точно не описано зворотне, вираз "включають" і варіації, а саме "включає" або "що включає", "заключає" і "і що заключає" буде розумітись як включення будь-якого складового елементу (або складового компоненту) без обмеження, але не виключення іншого складового 6 елементу (або складового компоненту), викладеного не точно. Як застосовують в даному документі, вираз "комбінаційне введення" і варіації, а саме "комбінована терапія" і "введення в комбінації з" означає, наприклад, введення одночасно сполуки піразолопіримідинону і антагоніста а-адренергічного рецептора в однаковій композиції, включаючи сполуку піразолопіримідинону, представлену хімічною формулою (І), і антагоніст а-адренергічного рецептора, або в окремих композиціях, включаючи сполуку піразолопіримідинону і антагоніст αадренергічного рецептора відповідно, і означає, наприклад, введення послідовно сполуки піразолопіримідинону і антагоніста α-адренергічного рецептора в інтервалі, що два активних засоби залишаються разом в організмі. Згідно з варіантами здійснення даного винаходу, забезпечили композицію і спосіб лікування або попередження доброякісної простатичної гіперплазії і симптомів з боку нижчих сечових шляхів. Композиція включає (5-[2-пропілокси-5-(1метил-2-піролідинілетиламідосульфоніл)феніл]-1метил-пропіл-1,6-дигідро-7Н-піразоло (4,3а)піримідин-7-он), представлений хімічною формулою (І), і антагоніст а-адренергічного рецептора в ефективній кількості. Спосіб лікування або попередження являє собою комбінаційне введення сполуки піразолопіримідинону, представленою хімічною формулою (І), і антагоніста а-адренергічного рецептора в ефективній кількості: Повністю підтримуючись наступними прикладами варіантів здійснення, у даному винаході показали, що комбінаційне введення сполуки піразолопіримідинону хімічної формули (І) як інгібітора PDE 5 і антагоніста а-адренергічного рецептора, представили кращий ефект лікування або попередження ВРН і LUTS синергічним ефектом, і надали вищу безпеку при побічних ефектах, таких як падіння кров'яного тиску. Лікарські засоби, наприклад, синергічно знижують уретральний тиск релаксацією гладкого м'язу у передміхуровому і сечовому гладкому м'язі, і, таким чином, пр оявляють чудовий ефект ліку вання або попередження ВРН і LUTS. Відповідно, композицію і спосіб можна належним чином застосовувати для лікування або попередження ВРН і LUTS. Сполука піразолопіримідинону, представлена хімічною формулою (І), сильно інгібує PDE 5 з високою селективністю як один з PDE 5 інгібіторів, і показує поліпшену розчинність, швидку абсорбцію, високу біодоступність і високий об'єм розподілу в організмі. Зокрема, сполука піразолопіримідинону характеризується в три рази довшим періодом напіврозпаду в організмі у порівнянні з 1-{[3-(6,7-дигідро-1метил-7-оксо-3-пропіл-1Н-піразоло-[4,3d]піримідин-5-ілi)-4етоксифеніл]сульфоніл}цитратом або 1-{[3-(1,4дигідро-5-метил-4-оксо-7-пропілімідазо[5,1f][1,2,4]триазин-2-ілі)-4-етоксифеніл]сульфоніл-4піперазин моногідрохлоридом з однаковим механізмом лікарського засобу. 7 Сполука піразолопіримідинону має 158-161°С точку плавлення, і приблизно 6,5 рKа1 і приблизно 12,5 рKа2, низьку розчинність у воді, але високу розчинність у оцтовій кислоті, метанолі або хлороформі, і т. д. і знаходиться у формі білого або жовтувато-білого порошку, але не гідрату або сольвату. Сполуку піразолопіримідинону, представлену хімічною формулою (І), можна отримати трьома етапами синтезу, як розкрито у міжнародній заявці WO 00/027848 і патенті Кореї № 0353014. Ілюстративний спосіб отримання сполуки піразолопіримідинону описано у деталях. По-перше, 4-[2-пропілокси-5(хлорсульфоніл)бензамідо]-1-метил-3-пропіл-5карбамоїлпіразол отримали, наприклад, додаванням кількості 4-[2-пропілоксилбензамідо]-1-метил3-пропіл-5-карбамоїлпіразолу до кількості хлорсульфонової кислоти, охолодженої до 0°С, струшуванням реакційної суміші, фільтруванням, промиванням і сушкою. Потім 4-[2-пропілокси-5-(1-метил-2піролідинілетиламідосульфоніл)бензамідо]-1метил-3-пропіл-5-карбамоїлпіразол синтезували з продукту реакції. Наприклад, при 0°С, кількість 4[2-пропілокси-5-(хлорсульфоніл)бензамідо]-1метил-3-пропіл-5-карбамоїлпіразолу, розчиненого у дихлорметані, струшували з додаванням 2-(2аміноетил)-1-метилпіролідину. Після закінчення реакції, отриманий розчин розбавили дихлорметаном, і взяли шар органічного розчинника, промили, висушили, концентрували і відфільтрували для отримання 4-[2-пропіокси-5-(1-метил-2піролідинілетиламіндосульфоніл)бензаміндо]-1метил-3-протл-5-карбамоїлпіразолу. Сполуку піразолопіримідинону хімічної формули (І) отримали розчиненням 4-[2-протокси-5-(1метил-2піролідинілетиламіндосульфоніл)бензаміндо]-1метил-3-пропіл-5-карбамоїлпіразолу у t-бутанолі, і струшуванням з додаванням калію t-бутоксиду. Після закінчення реакції, отриманий розчин виконали охолодженням, розбавленням, промиванням, сушкою, перегонкою у вакуумі, видаленням розчинника і колонковою хроматографією на силікагелі для отримання сполуки хімічної формули (І). У композиції і способі за даними варіантами здійснення даного винаходу, наприклад, сполука хімічної формули (І) включена в композицію разом з антагоністом α-адренергічного рецептора, або є введеною у комбінації з антагоністом αадренергічного рецептора для лікування або попередження ВРН і LUTS, як описано детально. У випадку, коли сполука піразолопіримідинону хімічної формули (І) включена у композицію разом з антагоністом α-адренергічного рецептора, або введена у комбінації з антагоністом αадренергічного рецептора, вона значно знижує побічний ефект (наприклад, падіння кров'яного тиску або статева дисфункція, включаючи дегенеративне сім'явивергання, і т. д.), викликаний взаємодією лікарських засобів, і різко покращує релаксацію гладкого м'язу у простаті і сечовому міхурі за допомогою NO cGMP і антагоністом αадренергічного рецептора, у порівнянні з введен 95028 8 ням кожного лікарського засобу поодинці. Відповідно, комбінаційне введення сполуки піразолопіримідинону хімічної формули (І) і антагоніста αадренергічного рецептора показує чудовий ефект лікування або попередження ВРН і LUTS. У порівнянні зі звичайною фармацевтичною композицією або способом лікування або попередження, композицію і спосіб за даним винаходом ефективно застосовують для лікування або попередження ВРН і LUTS. Сполука піразолопіримідинону хімічної формули (І) може бути включена у композицію разом з антагоністом α-адренергічного рецептора, або бути введеною у комбінації з антагоністом αадренергічного рецептора, де антагоніст αадренергічного рецептора є будь-яким добре відомим спеціалісту даної області. Прикладами антагоніста α-адренергічного рецептора можуть бути будь які, що застосовують для лікування або попередження гіпертрофії статевої залози, такі як (R)-5-(2-(2-(2етоксифенокси)етиламіно)пропіл)-2метоксибензолсульфонамід(тамсулозин) або 1-(3гідроксипропіл)-5-{2R-2-[2-(2,2,2трифторетокси)фенокси]етиламіно]пропіл}-7індолінкарбоксамід (силодозин) і їх суміші, але не обмежуються ними. Композиція утворена у різних складах, які вводять перорально, ентерально, парентерально і т. д. і склади отримані відповідно добре відомому способу і складовим, які добре відомі спеціалісту даної області. Переважно, композиція утворена у вигляді перорального складу, такому як капсула або таблетка. До того ж, композиція додатково включає розріджувачі або наповнювачі, а саме широко розповсюджені наповнювачі, сухі розріджувачі, зв'язуюче, зволожуючий агент, дезінтегрант і поверхневоактивну речовину в залежності від складів. Кількість активного засобу і введення, і дозування, застосоване для композиції і способу варіантів здійснення, можна вибрати відповідно спеціалістом даної області залежно від ваги тіла, віку, статі, стану здоров'я, харчування, періоду введення, способу ведення, швидкості виділення і важкості захворювання. Наприклад, композиція може включати від 25 до 200 мг, переважно від 25 до 100 мг, більш переважно від 50 до 100 мг сполуки піразолопіримідинону хімічної формули (І) і від 0,1 до 50 мг, переважно від 0,1 до 25 мг, більш переважно від 0,1 до 10 мг антагоніста α-адренергічного рецептора. Також, згідно зі способом варіанту здійснення для дорослої людини з вагою тіла 70 кг, введена за день доза може складати від 25 до 200 мг/день, переважно від 25 до 100 мг/день, більш переважно від 50 до 100 мг/день сполуки піразолопіримідинону і від 0,1 до 50 мг/день, переважно від 0,1 до 25 мг/день, більш переважно від 0,1 до 10 мг/день антагоніста α-адренергічного рецептора в комбінації. Дозу можна вводити один або кілька разів за день. Крім того, стандартна лікарська форма композиції може включати від 25 до 200 мг/день, переважно від 25 до 100 мг/день, більш переважно від 9 95028 50 до 100 мг/день сполуки піразолопіримідинону і від 0,1 до 50 мг/день, переважно від 0,1 до 25 мг/день, більш переважно від 0,1 до 10 мг/день антагоніста а-адренергічного рецептора. До того ж, спеціалісту даної області добре відомо з вищезгаданого опису, що композиції, включаючи активні засоби в різних кількостях і їх стандартну лікарську форму, можна сформувати згідно з введеною кількістю за одиничний інтервал часу, що застосовують композицією (наприклад, 6 годин, 12 годин, 1 день або 2 дні). Як згадано вище, коли композиція і спосіб варіантів здійснення включають належну кількість або дозування активних засобів у комбінації, вони можуть проявляти кращий ефект лікування або попередження ВРН і LUTS з меншою кількістю або дозуванням активних засобів, і надавати вищу безпеку при побічних ефектах, а саме падіння кров'яного тиску або статеву дисфункцію, включаючи дегенеративне сім'явивергання. Даний винахід додатково пояснюється більш детально з посиланням на наступні приклади. Однак, ці приклади не повинні сприйматись як обмежуючі об'єм даного винаходу будь-яким чином. ПРИКЛАД 1 Оцінка ефекту сполуки піразолопіримідинону, представленою хімічною формулою (І), і антагоніста α-адренергічного рецептора на релаксацію гладкого м'язу простати щура Коли сполуку піразолопіримідинону, представлену хімічною формулою (І), і (R)-5-(2-(2-(2 10 етоксифенокси)етиламіно)пропіл)-2метоксибензолсульфонамід (тамсулозин) як антагоніст α-адренергічного рецептора застосовували по одному або в комбінації, їх відповідний ефект на релаксацію гладкого м'яза гладкий простати щура оцінювали і порівнювали відповідно з наступними експериментами. Самця щура Sprague-Dawley з вагою тіла 300400 г обезглавили, і простату видалили і перенесли до буферу Кребса-Хензеляйта, що залишався холодним. Дорсолатеральні частини передміхурової тканини поперечно розрізали для відділення залози передміхурової тканини розміром 2×10 мм (4 тканини на щура). Відділені тканини перенесли до інкубатору органів, де виділялось 95% О2 і 5% СО2, і містився буфер Кребса-Хензеляйта (37°С), обидва кінці тканини залози прикріпили до дна інкубатору і датчик сили приєднали до поліграфу (Grass Instruments) відповідно. Кожну тканину стабілізували при 0,2 стандартній напрузі протягом 1 години і потім обробили 1 мкМ фенілефрином для індукування скорочення передміхурової тканини. Після того, як скорочення стало стабільним, піразолопіримідинон формули (І) обробили окремо або в комбінації з тамсулозином, а потім виконали вимірювання ступеню скорочення (Таблиця 1) і оцінку ступеню релаксації (зворотна пропорція ступеню скорочення). Таблиця 1 Оцінка ефекту на релаксацію передміхурової тканини щура дослідження 1 дослідження 2 дослідження 3 дослідження 4 дослідження 5 дослідження 6 дослідження 7 дослідження 8 дослідження 9 дослідження 10 дослідження 11 дослідження 12 дослідження 13 дослідження 14 дослідження 15 дослідження 16 Сполука формули (І) концентрація лікування 0 мкМ ні 3 мкМ так 10 мкМ так 30 мкМ так 0 мкМ ні 3 мкМ так 10 мкМ так 30 мкМ так 0 мкМ ні 3 мкМ так 10 мкМ так 30 мкМ так 0 мкМ ні 3 мкМ так 10 мкМ так 30 мкМ так В таблиці 1 дані, отримані з застосуванням чотирьох (4) залоз тканин, застосовували для кожної концентрації лікарського засобу, і цифрове значення означало середнє ± стандартна похибка процентного складу ступеню скорочення (зворотно пропорційно процентному складу ступеню релаксації). Як показано у таблиці 1, у порівнянні з введенням або сполуки піразолопіримідинону форму Тамсулозин концентрація лікування 0 нМ ні 0 нМ ні 0 нМ ні 0 нМ ні 0,25 нМ так 0,25 нМ так 0,25 нМ так 0,25 нМ так 1 нМ так 1 нМ так 1 нМ так 1 нМ так 4 нМ так 4 нМ так 4 нМ так 4 нМ так Ступінь скорочення (%) 100 92,6±2,2 77,1±2,5 62,2±3,1 90,8±1,4 71,5±9,4 47,7±14,7 39,6±9,4 78,8±2,0 41,8±5,7 32,0±14,9 28,1±4,8 43,6±4,2 23,4±4,4 12,3±17,4 6,1±4,0 ли (І) або тільки тамсулозину, їх комбінаційне введення представляє синергічний ефект на релаксацію гладкого м'язу у простаті. Відповідно, коли застосовували комбінацію, включаючи сполуку піразолопіримідинону формули (І) і тамсулозин, і спосіб комбінаційного введення, виникав синергічний ефект на релаксацію гладкого м'язу у простаті. 11 95028 Результатом підтвердили, що комбінаційне введення дає чудовий ефект лікування або попередження для ВРН і LUTS. ПРИКЛАД 2 Оцінка ефекту сполуки піразолопіримідинону, представленою хімічною формулою (І), і антагоніста α-адренергічного рецептора на релаксацію гладкого м'яза сечового міхура щура У випадку введення піразолопіримідинону формули (І) одного, попередньої обробки N-нітро-Lаргінін метилового складного ефіру (L-NAME) як інгібітора оксиду азоту, і комбінаційне введення піразолопіримідинону формули (І) і тамсулозину як антагоністу α-адренергічного рецептора, оцінювали ефект лікувань на релаксацію гладкого м'язу сечового міхура щура і порівнювали з наступними експериментами. Самця щура Sprague-Dawley з вагою тіла 200250 г обезглавили і простату видалили і перенесли 12 до буферу Кребса-Хензеляйта, що залишався холодним. У сечовому міхурі зробили вертикальний відріз розміром 2 мм і перенесли до інкубатору органів, де виділялось 95% О2 і 5% СО2 і містився буфер Кребса-Хензеляйта (37°С), обидва кінці залози тканини закріпили до дна інкубатору і датчик сили приєднали до поліграфу (Grass Instruments) відповідно. Кожну тканину стабілізу-5 вали протягом 1 години і потім обробили 10 Μ карбахолом для індукування скорочення передміхурової тканини. Після того, як скорочення стало стабільним, тканину обробили введенням піразо-8 -4 лопіримідинону (10 Μ -10 М) формули (І) окре-4 мо, попередньою обробкою L-NAME (10 М) як інгібітором оксиду азоту, і комбінаційним введенням піразолопіримідинону формули (І) і тамсуло-4 зину (10 М) як антагоністом α-адренергічного рецептора, а потім виконали вимірювання і оцінку ступеню релаксації (Таблиця 2). Таблиця 2 Оцінка ефекту на релаксацію тканини сечового міхура щура Обробка Сполука формули (І) -4 L-NAME(10 M) і сполука формули (І) -4 Тамсулозин (10 M) і сполука формули (І) -8 10 Μ 0,0±0,0 0,0±0,0 13,0±1,1 У таблиці 2 дані, отримані з застосуванням чотирьох (4) залоз тканин, застосовували для кожної концентрації лікарського засобу, і цифрове значення означало середнє ± стандартна похибка процентного складу ступеню релаксації. Як показано у таблиці 2, коли ввели тільки піразолопіримідинон формули (І), ефект релаксації -6 почав виражатись при концентрації 10 Μ, і дорівнював приблизно 17,4% ступеню релаксації при -4 концентрації 10 М. З іншого боку, коли піразолопіримідинон формули (І) обробили після обробки тамсулозином як характерним антагоністом α-адренергічного рецептора, релаксація гладкого м'язусечового міхура щура значно підвищилась при кожній концентрації піразолопіримідинону. Крім того, попередньою обробкою L-NAME як інгібітором оксиду азоту видалили ефект релаксації піразолопіримідинону на гладкий м'яз сечового міхура. Відповідно, коли застосовували комбінацію, яка включає піразолопіримідинон хімічної формули (І) і тамсулозин, і спосіб комбінаційного введення, виникав синергічний ефект на релаксацію гладкого м'яза сечового міхура. Результатом підтвердили, що комбінаційне введення викликає чудовий ефект на лікування або попередження ВРН і LUTS. ПРИКЛАД 3 Оцінка ефекту сполуки піразолопіримідинону, представленою хімічною формулою (І), і антагоніста α-адренергічного рецептора на релаксацію гладкого м'яза простати щура Коли сполуку піразолопіримідинону, представлену хімічною формулою (І), і 1-(3-гідроксипропіл)5-{2R-2-[2-(2,2,2 Концентрація сполуки формули (І) -7 -6 -5 10 Μ 10 Μ 10 Μ 0,0±0,0 2,0±1,1 7,2±1,6 0,0±0,0 0,0±0,0 0,0±0,0 13,0±0,9 15,0±1,3 20,1±3,6 -4 10 Μ 17,4±3,7 0,0±0,0 32,3±3,2 трифторетокси)фенокси]етиламіно]пропіл}-7індолінкарбоксамід (силодозин) як антагоніст αадренергічного рецептора застосовували по одному або в комбінації, їх відповідний ефект на релаксацію гладкого м'язу простати щура оцінювали і порівнювали відповідно наступним експериментам. Самця щура Sprague-Dawley з вагою тіла 300400 г обезглавили і простату видалили і перенесли до буферу Кребса-Хензеляйта, що залишався холодним. Дорсолатеральні частини передміхурової тканини поперечно розрізали для відділення залози передміхурової тканини розміром 2×10 мм (4 тканини на щура). Відділені тканини перенесли до інкубатору органів, де виділялось 95% О2 і 5% СO2 і містився буфер Кребса-Хензеляйта (37°С), обидва кінці залози тканини закріпили до дна інкубатору і датчик сили приєднали до поліграфу (Grass Instruments) відповідно. Кожну тканину стабілізували протягом 1 годи-5 ни і потім обробили 10 Μ карбахолом для індукування скорочення передміхурової тканини. Після того, як стиснення було стабільним, тільки піразолопіримідинон хімічної формули (І) обробили при -6 -5 5 концентрації 3×10 Μ, 10 Μ і 3×10" М, або в комбінації з силодозином (0,1 нМ, 1 нМ і 10 нМ) як антагоніст α-адренергічного рецептора, а потім виконали вимірювання ступеню скорочення (Таблиця 3) і оцінку ступеню релаксації (зворотно пропорційно ступеню скорочення). Як показано у таблиці 3, коли піразолопіримідинон хімічної формули (І) вводили в комбінації з силодозином як характерним антагоністом αадренергічного рецептора при різних концентраці 13 95028 ях підтвердили синергічний ефект на релаксацію 14 гладкого м'яза простати. Таблиця 3 Оцінка ефекту на релаксацію тканини простати щура дослідження 1 дослідження 2 дослідження 3 дослідження 4 дослідження 5 дослідження 6 дослідження 7 дослідження 8 дослідження 9 дослідження 10 дослідження 11 дослідження 12 дослідження 13 дослідження 14 дослідження 15 дослідження 16 Сполука формули (І) Концентрація Лікування 0 мкМ ні 3 мкМ так 10 мкМ так 30 мкМ так 0 мкМ ні 3 мкМ так 10 мкМ так 30 мкМ так 0 мкМ ні 3 мкМ так 10 мкМ так 30 мкМ так 0 мкМ ні 3 мкМ так 10 мкМ так 30 мкМ так В таблиці 3, дані, отримані з застосуванням чотирьох (4) залоз тканин, застосовували для кожної концентрації лікарського засобу, і цифрове значення означало середнє ± стандартна похибка процентного складу ступеню скорочення (зворотно пропорційно процентному складу ступеню релаксації). ПРИКЛАД 4: Дослідження на безпеку 1 28 здорових чоловіків віком від 19 до 50 років розділили на чотири групи відповідно випадкового переліку, і вводили а) плацебо і плацебо (Група А), b) плацебо і піразолопіримідинон хімічної формули (І) (Група В), с) тамсулозин і плацебо (Група С) і d) Силодозин Концентрація Лікування 0 нм ні 0 нм ні 0 нм ні 0 нм ні 0,1 нм так 0,1 нм так 0,1 нм так 0,1 нм так 1 нм так 1 нм так 1 нм так 1 нм так 10 нм так 10 нм так 10 нм так 10 нм так Ступінь скорочення (%) 100 92,6±2,2 77,1±2,5 62,2±3,1 90,8±1,4 71,5±9,4 47,7±14,7 39,6±9,4 82,0±1,7 56,6±4,2 44,7±4,1 38,8±4,7 46,9±1,6 19,8±6,6 13,2±4,1 3,2±1,4 тамсулозин і піразолопіримідинон хімічної формули (І) (Група D) для оцінки ефекту комбінаційного введення піразолопіримідинону хімічної формули (І) і тамсулозину на безпеку. Оцінку безпеки виконали спостереженням основних показників стану організму (діастолічний кров'яний тиск, швидкість пульсу, температура тіла), клінічним лабораторним дослідженням, електрокардіограмою, побічними реакціями, а саме суб'єктивний симптом і об'єктивний симптом. До того ж, спостерігали ефект взаємодії лікарського засобу на фармакокінетику піразолопіримідинону. Результати представлені в таблицях 4 і 5. Таблиця 4 Результати дослідження основних показників стану організму у лежачому положенні Діастолічний кров'яний тиск Систолічний кров'яний тиск Швидкість пульсу середнє CV(%) середнє CV(%) середнє CV(%) Група А 116,0 9,6 64,5 11,1 58,9 12,9 Група В 112,4 8,9 61,6 10,9 60,2 13,4 Група С 112,3 8,6 63,0 10,7 57,7 12,7 Група D 112,1 8,2 61,4 9,8 64,9 14,1 Група А: плацебо + плацебо. Група В: плацебо + піразолопіримідинон формули (І). Група С: плацебо + тамсулозин. Група D: тамсулозин + піразолопіримідинон формули (І). CV : коефіцієнт варіації. Результат клінічного дослідження основних показників стану організму у лежачому положенні підтвердив, що комбінаційне введення піразолопіримідинону хімічної формули (І) і тамсулозину, зниження середнього систолічного і діастолічного кров'яних тисків не спостерігали у клінічному значенні у порівнянні з введенням тільки тамсулозину. У результаті порівняння з Смакс, AUCinf, Тмакс і Т1/2 Групи С і Групи D, дві групи не проявляли статистично значної різниці. Таблиця 5 Фармакокінетичні параметри Тмакс (година) 1,5 1,1 Група В Група D Cмакс 617,0±169,1 623,7±199,6 AUCinf 4726,9± 1263,1 4911,3±1260,3 Т1/2 (година) 9,7±1,7 9,9±2,3 Тмакс: Час досягнення максимальної концентрації в плазмі після введення. Смакс: Максимальна концентрація в плазмі після введення. AUCinf: Область під кривою концентрація в плазмі проти часу, яку розраховують екстраполяцією необмеженого часу наступним чином: AUCinf= AUClast + Сlast/z. AUClast: Область під кривою концентрація в плазмі - час, яку розраховують у вимірній кінцевій точці часу відповідно до методу трапецій. Зокрема, площу розраховують відповідно до лінійного методу трапецій в області підвищеної концентрації в плазмі, і відповідно до лінійно-логарифмічного методу трапецій в області зниження концентрації в плазмі, за виключенням значення концентрації менше ніж LLOQ (нижча межа кількісного визначення). Clast: концентрація в плазмі у вимірній кінцевій точці часу. z, t1/2: константа швидкості елімінації (z) і час напіврозпаду (t1/2). Час напіврозпаду розраховують з 1n(2)/z і константу швидкості елімінації отримують з лінійно-регресивного аналізу кінцевої лінійно-логарифмічної області кривої концентрація в плазмі - час. Результати безпеки і фармакокінетики підтвердили, що у порівнянні з введенням тільки піразолопіримідинону (Група В), комбінаційне введення тамсулозину і піразолопіримідинону (Група D) не викликає значної різниці при зміні безпеки і результаті фармакокінетики. ПРИКЛАД 5: Дослідження на безпеку 2 9 здорових чоловіків віком від 19 до 50 років розділили на три групи відповідно випадкового переліку, і вводили а) плацебо і піразолопіримідинон хімічної формули (І) (Група А), b) плацебо і силодозин (Група В) і с) силодозин і піразолопіримідинон формули (І) (Група С) для оцінки ефекту комбінаційного введення піразолопіримідинону формули (І) і силодозину на безпеку. Оцінку безпеки виконали спостереженням основних показників стану організму (діастолічний кров'яний тиск, швидкість пульсу, температура тіла), клінічним лабораторним дослідженням, електрокардіограмою, побічними реакціями, а саме суб'єктивний симптом і об'єктивний симптом. До того ж, спостерігали ефект взаємодії лікарський засіб - лікарський засіб на фармакокінетику піразолопіримідинону. Результати представлені в таблицях 6 і 7. Таблиця 6 Результати дослідження основних показників стану організму у лежачому положенні Діастолічний кров'яний тиск Систолічний кров'яний тиск Швидкість пульсу середнє CV(%) середнє CV(%) середнє CV(%) Група А 112,8 8,5 62,2 9,5 61,4 12,4 Група А: плацебо + піразолопіримідинон формули (І). Група В: плацебо + силодозин. Група С: силодозин + піразолопіримідинон формули (І). CV (коефіцієнт варіації). Група В 112,4 8,8 62,3 10,5 64,2 12,7 Група С 112,2 8,4 61,7 10,1 61,5 13,1 17 95028 Результат клінічного дослідження основних показників стану організму у лежачому положенні підтвердив, що комбінаційне введення піразолопіримідинону і силодозину, зниження середнього 18 систолічного і діастолічного кров'яних тисків не спостерігали у клінічному значенні у порівнянні з введенням тільки силодозину. Таблиця 7 Фармакокінетичні параметри Група А Група В Група С Тмакс (година) Ud Силодозин 1,5 1,4 1,3 1,7 Смакс Ud Силодозин 627,2±158,5 31,1±7,2 659,5±195,7 35,2±7,8 AUCinf Ud Силодозин 4822,9±1323,2 110,2±17,6 4942,2±1258,5 132,5±25,2 * Ud: сполука піразолопіримідинону хімічної формули (І). Тмакс: Час досягнення максимальної концентрації в плазмі після введення. Смакс: Максимальна концентрація в плазмі після введення. AUCjnf: Область під кривою концентрація в плазмі проти часу, яку розраховують екстраполяцією необмеженого часу наступним чином: AUCjnf=AUClast + Clast/z. AUClast: Область під кривою концентрація в плазмі - час, яку розраховують у вимірній кінцевій точці часу відповідно до методу трапецій. Зокрема, площу розраховують відповідно до лінійного методу трапецій в області підвищеної концентрації в плазмі, і відповідно до лінійно-логарифмічного методу трапецій в області зниження концентрації в плазмі, за виключенням значення концентрації менше ніж LLOQ. Clast: концентрація в плазмі у вимірній кінцевій точці часу. Комп’ютерна верстка Т. Чепелева У результаті фармакокінетичних результатів, Смакс, AUCinf, Тмакс і Τ1/2, не проявили статистично значної різниці. Результати безпеки і фармакокінетики підтвердили, що у порівнянні з введенням силодозину або піразолопіримідинону тільки, комбінаційне введення силодозину і піразолопіримідинону не викликає значної різниці при зміні безпеки і результаті фармакокінетики. Підписне Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601