Застосування аклідинію для лікування респіраторних захворювань

Реферат: Винахід стосується застосування аклідинію для одержання лікарського засобу, призначеного для лікування і профілактики респіраторного захворювання або стану у пацієнта інгаляцією, де пацієнт страждає від стану або чутливий до нього, який може загострюватися при наявності системної антимускаринової активності. UA 98136 C2 (12) UA 98136 C2 UA 98136 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У дійсному винаході пропонуються нові способи антихолінергічного лікування, перш за все лікування респіраторних захворювань, таких як астма і хронічне обструктивне захворювання легенів (ХОЗЛ), що не викликають побічних дій, властивих класу антимускаринових сполук. Аклідіній (3(R)-(2-гідрокси-2,2-дитієн-2-ілацетокси)-1-(3-феноксипропіл)-1азонійбіцикло[2.2.2]октан) є ефективним антагоністом мускаринових рецепторів і описаний, наприклад, в заявках WO 01/04118, WO 05/115467, WO 05/115466, WO 05/115462, вміст яких включений в даний опис у вигляді посилань. Аклідіній є бронхолітичним засобом пролонгованої дії, призначеним для інгаляційного введення при лікуванні респіраторних захворювань, перш за все астми і ХОЗЛ, вказаний лікарський засіб в даний час знаходиться на стадії клінічних випробувань. Антагоністи мускаринових рецепторів, які випускаються у вигляді комерційних препаратів, включають тіотропій ((1,2,4,7)-7-[(2-гідрокси-2,2-дитієнілацетокси]-9,9-диметил-3-окса-92,4 азонійтрицикло[3,3,1,0 ]нонан), іпратропій ([8-метил-8-(1-метилетил)-8-азонійбіцикло[3,2,1]окт3-іл]-3-гідрокси-2-фенілпропаноат) і глікопіролят ((1,1-диметил-2,3,4,5-тетрагідропірол-3-іл)-2циклопентил-2-гідрокси-2-фенілацетат). Ацетилхолін є нейромедіатором, пов'язаним з парасимпатичною іннервацією в організмі, а також з передачею імпульсів в головному мозку. Ацетилхолін бере участь в контролі функціонування серця, кровоносних судин, дихальних шляхів, органів сечового і травного трактів. Він також бере участь в процесах пам'яті, навчанні і концентрації уваги. Антимускаринові сполуки інгібують дію ацетилхоліну на мускаринові рецептори, які, як відомо, є найбільш поширеним типом холінергічних рецепторів в організмі. Сполуки, які інгібують активність ацетилхоліну в мускаринових рецепторах М3 дихальних шляхів, можна використовувати для лікування респіраторних захворювань, оскільки вони інгібують опосередковане мускарином скорочення гладкої мускулатури дихальних шляхів, що призводить до бронходилатації, а також знижує секрецію слизу в легенях. Проте одна з проблем застосування антимускаринових сполук при лікуванні респіраторних захворювань полягає в ризику побічних ефектів, пов'язаних з системною супресією холінергічної активності. Вказані побічні ефекти можуть включати, наприклад, сухість в роті, подразнення в горлі, порушене потовиділення, збільшений розмір зіниці, погіршення гостроти зору, підвищений очний тиск, підвищена частота серцевих скорочень, біль в грудній клітці, понижена перистальтика шлунку, закреп, утруднений початок і продовження сечовипускання, втрата контролю сечового міхура унаслідок нетримання при переповнюванні. Антихолінергічна активність може також впливати на центральну нервову систему, як, наприклад, порушення концентрації уваги, сплутаність свідомості, збуджений стан, тривога, делірій, порушення уваги, порушення пам'яті, запаморочення, сонливість, пригнічення дихання. Було встановлено, що інгібітори холіноестерази, які пригнічують розпад ацетилхоліну, надають сприятливу дію при лікуванні хвороби Альцгеймера і деменції, і лікар, що таким чином лікує, по можливості вважає за краще не використовувати антихолінергічні засоби при лікуванні таких пацієнтів. Ацетилхолін грає складну роль в розвитку хвороби Паркінсона у пацієнтів. Передбачається, що ацетилхолін грає роль в прискоренні вивільнення дофаміна при дії на мускаринові рецептори М4 і М5 в мозковій тканині, і у зв'язку з цим інгібітори холіноестерази інколи виписували пацієнтам з діагнозом хвороби Паркінсона, перш за все, ще перед появою леводопи антихолінергічні засоби використовували для лікування симптомів хвороби Паркінсона, які діють, мабуть, за рахунок пригнічення дофамінової інгібуючої активності мускаринових рецепторів М1. Пацієнти старшого віку більшою мірою відчувають небажані антихолінергічні дії, оскільки в їх організмі спостерігається понижене продукування ацетилхоліну. Клітки в багатьох відділах організму (таких як травний тракт) у пацієнтів старшого віку можуть містити понижену кількість ацетилхолінових рецепторів. Таким чином, дія продукованого ацетилхоліну знижується, а дія антихолінергічних засобів відповідно підвищується. Більш того, у пацієнтів старшого віку знижується функція нирок і/або печінки і також спостерігається схильність до збільшення концентрації багатьох антихолінергічних засобів в сироватці. Як вказано нижче, ряд стандартних лікарських засобів володіє антихолінергічною дією, і таким чином пацієнти, яким вводять різні лікарські засоби, що проявляють антихолінергічні побічні дії, піддаються підвищеному ризику. Люди старшого віку більшою мірою піддаються побічним діям, оскільки труднощі сечовипускання, пов'язані з антихолінергічною активністю, можуть викликати загострення у зв'язку із збільшеною передміхуровою залозою або її непрохідністю. В цілому, антихолінергічні побічні дії відносяться до більшості звичайних пов'язаних з лікарськими препаратами негативних дій, які терплять люди старшого віку. Сучасні комерційні антимускаринові засоби можна вважати непридатними для введення пацієнтам, чутливим до станів, які можуть загострюватися при системній антихолінергічній дії. 1 UA 98136 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Рівні системної антихолінергічної активності, які легко переносять молоді здорові люди, є неприйнятними для таких пацієнтів. Стани, які можуть загострюватися при системній антихолінергічній дії, включають шизофренію, глаукому, сухість очей, збільшену передміхурову залозу або її непрохідність, звуження або непрохідність тонкої кишки, збільшення ободової кишки, хронічний закреп, розширення нижнього відділу стравоходу, захворювання серця (перш за все станів, які ускладнюються тахікардією, наприклад, рестеноз або бляшки в коронарних артеріях, схильність до аритмії, пошкодження в результаті попередніх серцевих нападів і застійна серцева недостатність), хвороба Паркінсона, хвороба Альцгеймера, деменція і важка псевдопаралітична міастенія. Антимускаринові агенти також представляють ризик, якщо їх вводять спільно з лікарськими препаратами, які проявляють антихолінергічну дію, наприклад, атипові нейролептики або трициклічні антидепресанти. Антигістаміни, перш за все першого покоління, заспокійливі антигістаміни, такі як дифенілгідрамін, можуть зв'язуватися з мускариновими рецепторами і додатково з рецепторами гістаміну типу I, і таким чином можуть проявляти антихолінергічну дію. У екстремальних випадках антихолінергічні засоби можуть індукувати антихолінергічний делірій, тобто стан, що представляє небезпеку для життя, і яке характеризується наступними симптомами: жар, суха шкіра, сухі слизові оболонки, розширені зіниці, відсутність кишкових шумів і тахікардія. Нарешті, системні активні антимускаринові агенти можуть впливати на дію інших лікарських засобів, призначених для посилення дії ацетилхоліну, наприклад, інгібітори холіноестерази і холінергічні агоністи. Відповідно, існує необхідність в розробці способів антимускаринового лікування, перш за все респіраторних захворювань, перш за все астми і хронічного обструктивного захворювання легенів (ХОЗЛ), і при вказаному лікуванні пацієнти не повинні піддаватися негативній дії, властивій класу системних активних антимускаринових сполук. Несподівано було встановлено, що аклідіній можна застосовувати при лікуванні респіраторних захворювань, не піддаючи пацієнтів ризику розвитку негативної дії, властивої системним активним антимускариновим сполукам. Не дивлячись на те, що аклідіній містить складноефірний залишок, аналогічний, наприклад, тіотропію (2-гідрокси-2,2-дитієн-2ілацетокси), несподівано було встановлено, що аклідіній при введенні інгаляцією піддається деградації в плазмі більшою мірою з утворенням його неактивних кислотних або спиртних метаболітів. Отже, сполука практично не надає системну дію. У зв'язку з швидким метаболізмом аклідінію значно знижується вірогідність розвитку небажаних системних антихолінергічних дій. Аклідіній проте характеризується значною тривалістю дії на рецептор і може забезпечувати тривалий сприятливий ефект при антимускариновом лікуванні легенів і дихальних шляхів. Відповідно, в першому варіанті здійснення дійсного винаходу пропонується застосування аклідінію для одержання лікарського засобу, призначеного для лікування або профілактики респіраторних захворювань і станів у пацієнтів інгаляцією, при цьому у вказаного пацієнта не спостерігається системна антимускаринова дія. Звичайно респіраторне захворювання означає захворювання, яке піддається лікуванню, знижується інтенсивність його симптомів, або таке захворювання пригнічується при дії антагоніста мускаринових рецепторів. Переважніше, що респіраторне захворювання або стан вибирають з гострого або хронічного бронхіту, емфіземи, перш за все астми і ХОЗЛ, найпереважніше астми і ХОЗЛ. У типовому випадку пацієнт страждає від станів (або чутливий до них), які можуть загострюватися при дії системної антимускаринової активності. Переважніше пацієнт страждає від одного або більше станів (або чутливий до них), вибраних з наступних станів: а. шизофренія, порушення концентрації уваги, сплутаність свідомості, тривога, делірій, порушення уваги, порушення пам'яті, пригнічення дихання, b. глаукома, сухість в очах, збільшений розмір зіниці, погіршення гостроти зору, підвищений очний тиск, с. збільшена передміхурова залоза або її непрохідність, утруднене сечовипускання, нетримання сечового міхура при переповнюванні, d. звуження або непрохідність тонкої кишки, збільшена ободова кишка, хронічний закреп, розширення нижнього відділу стравоходу, понижена перистальтика шлунку, закреп, e. сухість в роті, подразнення в горлі, порушене потовиділення, f. серцево-судинні захворювання (включаючи будь-який рестеноз, артеріосклероз, передуючі інсульт або серцевий напад, застійну серцеву недостатність), аритмія, тахікардія, g. хвороба Паркінсона, хвороба Альцгеймера, деменція і/або h. важка псевдопаралітична міастенія. Зазвичай пацієнтами є чоловіки. Крім того, вік пацієнтів зазвичай складає більше шістдесяти років. 2 UA 98136 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 У іншому варіанті лікарський засіб призначений для введення пацієнтам, які водять машину або працюють з устаткуванням протягом курсу лікування. У ще одному варіанті пацієнтам вводять другий лікарський засіб, який є системним активним антихолінергічним агентом, або агентом, який може викликати або загострювати стани, перераховані вище. Звичайний другий лікарський засіб вибирають з нейролептиків, трициклічних антидепресантів і антигістаміну. У іншому варіанті пацієнтам вводять лікарський засіб, який призначений для посилення ацетилхолінової функції, наприклад, інгібітор холіноестерази або холінергічний агоніст, наприклад, агенти, перераховані нижче. Зазвичай, аклідіній представлений у формі солі аніона Х, де Х означає фармацевтично прийнятний аніон одно- або поліосновної кислоти. Переважніше, Х означає аніон неорганічної кислоти, такої як хлористоводнева кислота, бромистоводнева кислота, сірчана кислота і фосфорна кислота, або органічної кислоти, такої як метансульфонова кислота, оцтова кислота, фумарова кислота, янтарна кислота, молочна кислота, лимонна кислота і малеїнова кислота. Переважно аклідіній представлений у формі броміду аклідінію. Зазвичай аклідіній є сухим порошком, придатним для інгаляції. Звичайний лікарський засіб містить фармацевтично прийнятний носій, вибраний з моно-, диабо полісахаридів і альдитів. Переважним носієм є лактоза. Звичайна системна антимускаринова дія, яку слід виключити, вибирають з сухості в роті, подразнення в горлі, порушення потовиділення, збільшеного розміру зіниці, погіршення гостроти зору, підвищеного очного тиску, підвищеної частоти серцевих скорочень, болю в грудній клітці, утрудненого сечовипускання, збільшеної передміхурової залози або її непрохідності, пониженої перистальтики шлунку, закрепу, порушення концентрації уваги, сплутаної свідомості, збудженого стану, делірію, недостатності уваги, порушення пам'яті і пригнічення дихання. Зазвичай пацієнтові для лікування респіраторного захворювання або стану вводять один або більш додаткових лікарських засобів. Переважніший додатковий лікарський засіб для лікування респіраторного захворювання або стану вибирають з бета-адренергічних агоністів, кортикостероїдів або глюкокортикостероїдів, інгібіторів ФДЕ IV, антигістаміну, антитіл анти-IgE, інгібіторів лейкотрієну D4, інгібіторів кінази EGFR, інгібіторів кінази р38 і/або антагоністів рецепторів NK1, наприклад, вибраних із сполук, перерахованих нижче. Переважно додаткові лікарські засоби вибирають з кортикостероїдів і/або бета-адренергічних агоністів. Крім того, у винаході далі пропонується аклідіній, як описано вище, або лікарський засіб, як описано вище, для інгаляції при лікуванні або профілактиці респіраторних захворювань або станів, як вказано вище, у пацієнтів, як вказано вище, при цьому у вказаних пацієнтів не розвивається системна антимускаринова дія, як описано вище. У винаході, крім того, пропонується спосіб лікування або профілактики інгаляцією респіраторних захворювань або станів, як вказано вище, у пацієнта, що потребує такого лікування, як описано вище, при цьому у вказаного пацієнта не розвивається системна антимускаринова дія, як вказано вище, і вказаний спосіб полягає у введенні вказаному пацієнтові ефективної кількості аклідінію, як вказано вище. Лікарські засоби, які можуть проявляти антихолінергічну дію або підвищувати чутливість пацієнтів до антихолінергічної дії, включають, наприклад: а. лікарські засоби від нудоти або запаморочення, перш за все антихолінергічні агенти, наприклад, прометазин (фенерган), прохлорперазин (компазин), триметобензамід (тиган), меклизин (антиверт), циклізин (марезин), скопаламін, b. лікарські засоби для лікування хвороби Паркінсона, перш за все антихолінергічні агенти, наприклад, бензтропин, біпериден, проциклідин, тригексифенідил, етопропразин, с. антидепресанти, перш за все трициклічні сполуки, наприклад, амитриптилін (елавіл), доксепин (синекван), іміпрамін (тофраніл), триміпрамін (сурмонтил), нортриптилін (памелор), протриптилін (вивактил), амоксапін (асендин), мапротилін (лудиоміл), кломипрамін (анафраніл), десипрамін (норпрамін), d. антигистамінні агенти, перш за все седативні антигістаміни першого покоління, наприклад, дифенгідрамін (бенадрил), хлорфенірамін (хлор-триметон), гідроксизин (атаракс/вістарил), ципрогептадин (періактин), e. м'язові релаксанти, наприклад, метаксалон (скелаксин), циклобензаприн (флексерил), орфенадрин (норфлекс), f. деякі протимігреневі лікарські засоби, наприклад, алкалоїди беладонни, g. деякі антидіарейні лікарські засоби, наприклад, дифеноксилат/атропін (ломотил), 3 UA 98136 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 h. спазмолітики для сечового тракту і шлунково-кишкового тракту, наприклад, оксибутинін (дитропан), флавоксат (уриспас), дицикломін (бентил), гіосциамін, алкалоїди беладонни, толтеродин (детрол), троспій, клиндиній, пропантелін, пірензепін, телензепін, i. антиаритмічні лікарські засоби, наприклад, дизопірамід (норпак), прокаїнамід (пронестил), квінідин, атропін, j. нейролептики, наприклад, хлорпромазин (торазин), тіоридазин (мелларил), клозапін (клозарил), флуфеназин (стелазин), тіотиксен (наван). Лікарські засоби, які підсилюють холінергічну активність, включають а. оборотні інгібітори холіноестерази, наприклад, едрофоній, такрин, донепизил, фазостигмін, піридостигмін, ривастигмін, галантамін, неостигмін, b. холінергічні агоністи, наприклад, метахолін, бетанахол, пілокарпін. Бета-адренергічні агоністи, які можна комбінувати з аклідінієм за дійсним винаходом, переважно включають 2-адренергічні агоністи, придатні для лікування респіраторних захворювань або станів, наприклад, вибрані з групи, включаючою арформотерол, бамбутерол, бітолтерол, броксатерол, карбутерол, кленбутерол, допексамін, фенотерол, формотерол, гексопреналін, ібутерол, ізопреналін, мабутерол, мелуадрин, ноломірол, орципреналін, пірбутерол, прокатерол, репротерол, ритодрин, римотерол, салбутамол, салметерол, сибенадет, сульфонтерол, тербуталін, тулобутерол, GSK-597901,GSK-159797, KUL-1248,TA2005 і QAB-1491 у вільній формі або у формі фармацевтично прийнятної солі. Переважним 2адренергічним агоністом є 2-адренергічний агоніст пролонгованої дії, наприклад, вибраний з групи, що включає формотерол, салметерол і QAB-149 у вільній формі або формі фармацевтично прийнятній солі. Кортикостероїди, які можна комбінувати з аклідінієм за дійсним винаходом, переважно включають агенти, придатні для введення інгаляцією, призначені для лікування респіраторних захворювань і станів, наприклад, преднізолон, метилпреднізолон, дексаметазон, нафлокорт, дефлазакорт, ацетат галопредона, будезонід, дипропіонат беклометазона, гідрокортизон, ацетонід триамцинолона, ацетонід флуоцинолона, флуоцинонід, півалат клокортолона, ацепонат метилпреднізолону, пальмітоат дексаметазону, типредан, ацепонат гідрокортизону, преднікарбат, дипропіонат алкометазону, галометазон, сулептанат метилпреднізолону, фуроат мометазону, римексолон, фарензилат преднізолону, циклезонід, пропіонат депродона, пропіонат флутиказона, пропіонат галобетазола, етабонат лотепреднола, пропіонат-бутират бетаметазону, флунізолід, преднізон, натрію фосфат дексаметазону, триамцинолон, 17валерат бетаметазону, бетаметазон, дипропіонат бетаметазону, ацетат гідрокортизону, натрійсукцинат гідрокортизону, натрий-фосфат преднізолону і пробутат гідрокортизону. Перш за все, переважні будезонід і мометазон. Інгібітори ФДЕ4, які можна комбінувати з аклідінієм за дійсним винаходом, включають денбуфілін, роліпрам, сипамфілін, арофілін, філамінаст, пікламіласт, мезопрам, гідрохлорид дротаверина, ліриміласт, рофлуміласт, циломіласт, 6-[2-(3,4-діетоксифеніл)-тіазолу-4іл]піридину-2-карбонову кислоту, (R)-(+)-4-[2-(3-циклопентилокси-4-метоксифеніл)-2фенілетил]піридин, N-(3,5-дихлор-4-піридиніл)-2-[1-(4-фторбензил)-5-гідрокси-1H-індол-3-іл]-2оксоацетамід, 9-(2-фторбензил)-N-6-метил-2-(трифторметил)аденін, N-(3,5-дихлор-4-піридиніл)8-метоксихінолін-5-карбоксамід, N-[9-метил-4-оксо-1-феніл-3,4,6,7-тетрагідропірол[3,2,1іл][1,4]бензодіазипін-3(R)-іл]піридин-4-карбоксамід, гідрохлорид 3-[3-(циклопентилокси)-4метоксибензил]-6-(етиламіно)-8-ізопропіл-3H-пурину, 4-[6,7-діетокси-2,3біс(гідроксиметил)нафталін-1-іл]-1-(2-метоксіетил)-піридин-2(1H)-он, 2-карбометокси-4-ціано-4(3-циклопропілметокси-4-дифторметоксифеніл)циклогексан-1-он, цис-[4-ціано-4-(3-циклопропілметокси-4-дифторметоксифеніл)циклогексан-1-ол, ONO-6126 (Eur Respir J, 22(Suppl. 45): Abst 2557 (2003)) і сполуки, описані в заявках РСТ WO03/097613 і PCT/EP03/14722 і в іспанській патентній заявці P200302613. Антагоністи LTD4, які можна комбінувати з аклідінієм за дійсним винаходом, включають томелукаст, ібудиласт, побілукаст, гідрат пранлукаста, зафірлукаст, ритолукаст, верлукаст, сулукаст, циналукаст, іралукаст натрію, монтелукаст натрію, 4-[4-[3-(4-ацетил-3-гідрокси-2пропілфенокси)пропілсульфоніл]феніл]-4-оксомасляну кислоту, [[5-[[3-(4-ацетил-3-гідрокси-2пропілфенокси)пропіл]тіо]-1,3,4-тіадіазол-2-іл]тіо]оцтову кислоту, 9-[(4-ацетил-3-гідрокси-2-нпропілфенокси)метил]-3-(1H-тетразол-5-іл)-4H-піридо[1,2-а]піримідин-4-он, натрієву сіль 5-[3-[2(7-хлорхінолін-2-іл)вініл]феніл]-8-(N, N-диметилкарбамоїл)-4,6-дитіаоктанової кислоти, натрієву сіль 3-[1-[3-[2-(7-хлорхінолін-2-іл)вініл]феніл]-1-[3-(диметиламіно)-3оксопропілсульфоніл]метилсульфаніл]пропіонової кислоти, 6-(2циклогексилетил)[1,3,4]тіадіазоло[3,2-а]-1,2,3-триазол[4,5-d]піримідин-9(1H)-он, 4-[6-ацетил-3-[3(4-ацетил-3-гідрокси-2-пропілфенілтіо)пропокси]-2-пропілфенокси]масляну кислоту, (R)-3 4 UA 98136 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 метокси-4-[1-метил-5-[N-(2-метил-4,4,4-трифторбутил)карбамоїл]індол-3-ілметил]-N-(2метилфенілсульфоніл)-бензамід, (R)-3-[2-метокси-4-[N-(2метилфенілсульфоніл)карбамоїл]бензил]-1-метил-N-(4,4,4-трифтор-2-метилбутил)індол-5карбоксамід, (+)-4(S)-(4-карбоксифенілтіо)-7-[4-(4-феноксибутокси)феніл]-5(Z)-гептенову кислоту і сполуки, описані в заявці PCT/EP03/12581. Термін "лікування" означає лікування і/або зниження інтенсивності симптомів захворювання або стану, а також усунення причини захворювання або стану. Термін "профілактика" захворювання означає запобігання і/або пригнічення захворювання. Аклідіній, призначений для застосування за способом винаходу, можна вводити будь-яким придатним способом для забезпечення місцевої антимускаринової дії. Переважний спосіб включає інгаляцію, наприклад, у вигляді порошку, спрея або аерозоля, переважно у вигляді сухого порошку. Фармацевтичні композиції, що містять аклідіній, отримують з використанням стандартного розчинника або ексципієнту за відомими методиками. Наприклад, склад сухого порошку може містити порошкоподібну суміш для інгаляції, включаючу аклідіній і придатну порошкоподібну основу (носій), таку як лактоза і крохмаль. Застосування лактози переважне. Придатні пристрої для інгаляції відомі в даній галузі техніки. Дози залежать, наприклад, від індивідуума, способу і частоти введення, природи і тяжкості стану, що підлягає лікуванню. Добова доза для дорослої людини масою 40 кг зазвичай змінюється, наприклад, в діапазоні приблизно від 100 до 1000 мкг активного агента у формі сухого порошку для інгаляції. Приклад 1 Стабільність аклінідінію in vitro в порівнянні з тіотропієм і іпратропієм і глікопіролятом в плазмі людини Експерименти in vitro проводили при 36 °C і концентраціях 5 мкг/мл (6 мкг розчину кожної сполуки в диметилсульфоксиді (з концентрацією 1 мг/мл) додавали до кінцевого об'єму 1,2 мл). Після попередньої інкубації протягом 3 хв реакцію ініціювали при додаванні досліджуваних сполук. Через 0, 5, 15, 30 і 60 хв відбирали зразки плазми по 100 мкл, і реакцію зупиняли додаванням 1 мл 20 мМ натрій-ацетатного буферного розчину, рН 4,0. У контрольних зразках замість досліджуваних сполук додавали буферний розчин. Плазму людини отримували від добровольців, які підписали інформовану згоду з випробуваннями. Кров відбирали в пробірки, що містять літієву сіль гепарину як антиокагулянт, негайно центрифугували при 4 °C і зберігали отриману плазму при -20 °C до її використання. Вміст аклідінію, тіотропію, іпратропію і глікопіроляту в плазмі людини (100 мкл) визначали методом високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ) із застосуванням Уф-детектора при довжині хвилі 238 нм для аклідінію і тіотропію і 203 нм для іпратропію, зразки плазми наносили на колонку після обробки в автоматичній системі для твердофазної екстракції з використанням автодозатора. Придатна хроматографічна система включає насос високого тиску, систему Prospekt (Spark Holland), обладнану інжектором для відбору зразків 233XL (Gilson Medical Electronics), регульований детектор по довжині хвилі (модель 2487, Waters Ass.) і комп'ютер Digital Alpha Server 1000 4/266 з програмним забезпеченням Acces*Chrom (Perkin Elmer Nelson Systems, Inc.). Вміст аклідінію і тіотропію визначали на колонці Spherisorb ODS2, 5 мкм, 150×4,6 мм (Waters Ass.), сполученою з передколонкою Guardapack µBondapak CN (Waters Ass.), рухлива фаза ацетонітрил (50:50 об. % для аклідінію і 22:78 об. % для тіотропію): 20 мM, Naфосфатний буферний розчин, pH 3,0, що містить 0,2 % триетиламіну, швидкість потоку 1 мл/хв. Приблизний час утримування аклідінію і тіотропію складає 9,8 і 9,5 хв, відповідно. Вміст іпратропію визначали на колонці Symmetry C18, 5 мкм, 150×4,6 мм (Waters Ass.), рухлива фаза ацетонітрил (12:88 об. %): 20 мM Na-фосфатний буферний розчин, pH 3,0, що містить 0,2 % триетиламіну, швидкість потоку 1 мл/хв. Приблизний час утримування тіотропію складає 9,5 хв. Аклідіній, тіотропій і іпратропій екстрагували з плазми на картріджах С2 (Baker), які активували 1,5 мл ацетонітрилу і промивали 1,5 мл води. Зразки плазми, попередньо розбавлені 1 мл 20 мМ Na-фосфатного буферного розчину, рН 4,0, наносили на картріджи С2. Після промивання картріджів 1 мл води і 1 мл суміші ацетонітрил/вода (40:60 об. %) для аклідінію або 3 мл води для тіотропію, або 1 мл води і 1 мл суміші ацетонітрил/вода (90:10 об. %) для іпратропію, останні компоненти елюювали рухливою фазою протягом 1 хв. На хроматограмах не спостерігалися ендогенні піки з часом утримування, відповідними досліджуваним сполукам, тобто в аналізованих зразках були відсутні домішки, які впливають на точність кількісного визначення. Вихід аклідінію з плазми людини складав приблизно 95 %. Вихід тіотропію і іпратропію з плазми складав від 80 до 100 %. Стабільність глікопіролята в плазмі людини визначали, як описано вище для трьох останніх лікарських засобів. Нижня межа чутливості аналізу склала 5 нг/мл для всіх досліджуваних сполук. 5 UA 98136 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Аклідіній швидко гідролізується в плазмі людини з утворенням його спиртового і кислотного метаболітів. Для обох метаболітів аклідінію визначали зв'язування з мускариновими рецепторами людини М1, М2, М3 і М4, отримані результати свідчать про відсутність значної спорідненості до цих рецепторів. Період напіврозпаду аклідінію в плазмі людини складає менше 5 хв. Більш того, аклідіній стабільний в кислотному водному розчині (рН≤4), а гідроліз складноефірного зв'язку відбувається при нейтральному або лужному значеннях рН. Навпаки, останні три антимускаринових складних ефіра досить стійкі до деградації під дією естераз в плазмі. Деградація в плазмі тіотропію (16 %), іпратропію (0 %) і глікопіроляту (9 %) не має особливого значення з біологічної точки зору протягом часу дослідження (60 хв). Приклад 2 Клінічні дослідження, фаза I Бромід аклідінію випробовували подвійним сліпим, частково перехресним, контрольованим для плацебо методом. При випробуваннях визначали активність, фармакокінетичні параметри і переносимість аклідінію. Методи 12 здорових чоловіків рандомізували в групи різних курсів лікування (4 курси), що включають однократні дози аклідінію (50, 300 і 600 мкг) або плацебо, які вводили у вигляді сухого порошку інгаляцією. Час відмивання між введеннями складав, принаймні, 6 діб. Кінцеві параметри ефективності включали питому бронхіальну провідність (sGaw), опір дихальних шляхів (Raw) і бронхіальну гіперчутливість (sGAW, метахолін PC35). Результати Аклідіній значно збільшує величину sGaw у всі періоди часу (1-24 год., р