Спосіб низькотемпературного консервування сперми донорів

Винахід належить до галузі кріобіології і може бути використаний в клініках, які займаються проблемами репродукції людини, та в експериментальних лабораторіях. Відомий спосіб низькотемпературного консервування сперми людини, який включає розбавлення сперми глюкозо- жовтково-цитратним консервантом, що містить 1,2-2,5% гліцерину, розфасовку в контейнери із харчової фольги і заморожування шляхом занурення на 5-10с в порошок окису алюмінію, охолоджений до температури рідкого азоту, з наступним поміщенням контейнерів у рідкий азот [1]. Однак цей спосіб не завжди доступний, тому що вимагає наявності порошку окису алюмінію. Крім того, при зануренні контейнерів в порошок можлива їх розгерметизація. Найбільш близьким до заявленого є спосіб низькотемпературного консервування сперми, який передбачає змішування сперми з глюкозо- жовтково-цитратним консервантом, що містить 4,6-6% гліцерину, і заморожування за допомогою програмного заморожувача по двохетапній програмі: на першому етапі зі швидкістю 0,5-1°С/хв до 2-5°С, на другому - зі швидкістю 90-100°С/хв до-180÷190°С, після чого переносять в рідкий азот для зберігання [2]. Недоліком способу є те, що для його виконання необхідний спеціальний програмний заморожувач, що робить його недоступним для широкого використання в клініках та лабораторіях, які займаються проблемами репродукції. В основу винаходу поставлено задачу створити такий спосіб низькотемпературного консервування сперми донорів, який би було можливо здійснювати в умовах клініки без застосування спеціального обладнання, і тим самим зробити його більш доступним для широкого використання. Ця задача вирішується тим, що в способі низькотемпературного консервування сперми донорів шляхом двохетапного заморожування в глюкозо- жовтково-цитратному консерванті, що містить кріопротектор гліцерин, і зберігання в рідкому азоті, відповідно до винаходу, на першому етапі сперму охолоджують у холодильнику до 9÷10°С, на другому етапі - витримують на поверхні рідкого азоту протягом 40 - 50 с і заморожують до -70-75°С, після чого переносять в рідкий азот. Можливість реалізації способу без спеціального програмного заморожувача дозволяє ширше використовувати його в різних кліника та лабораторіях . При цьому спосіб забезпечує рівень зберігання якісних показників сперми не нижче, ніж в прототипі (дивись таблицю). Таблиця Дані спермограми до і після консервування Показники Загальна кількість сперміїв (млн/мл) Активно рухливі (%) Рухливі (%) Морфологічно нормальні (%) Прототип Заявлений спосіб до після до після консервування консервування консервування консервування 136 62 112±8,1 65±4,9 62 43 34±3,0 32±2,9 32 30 36±2,2 34±2,5 80 72 70±2,3 61±1,4 Спосіб здійснюють таким чином: сперму донора після розріднення змішують з глюкозо- жовтково-цитратним консервантом, який містить 3,5-4% гліцерину, розфасовують в стерильні полімерні трубочки і інкубують протягом 5-10хв. при кімнатній температурі. Трубочки переносять в ультратермостат або ексикатор з контролем температури охолодження і помішують в холодильник на 60-70 хв., де охолоджують до 9-10°С. Далі трубочки зі спермою вміщують у металевий контейнер, який опускають на поверхню рідкого азоту на 40-50 с, після чого переносять у рідкий азот для зберігання. Приклад 1 Для досліду брали сперму донорів зі слідуючими показниками: рН - 7,2-7,4, загальна кількість сперміїв -100120млн/мл, з них активно рухливих - 30-35% і рухливих - 30-40%, морфологічно нормальних форм - 70-72%. Через 40хв після розріднення до сперми додавали (1:1) глюкозо- жовтково-цитратне середовище, яке містить: глюкоза або лактоза - 4%, жовток курячого яйця - 26%, натрій лімонокислий - 1,2%, гліцерин - 3,5% решта бідистильована вода. Через 5-6 хвилин розведену консервантом сперму розфасовували по 0,5-0,7мл в полімерні трубочки довжиною 70-80мм з зовнішнім діаметром 3,8мм, товщиною стінок 120мкм, герметизували термічним зварюванням і маркірували. Розфасовану сперму переносили в ексикатор з контролем температури охолодження і поміщали у холодильник на 60-70хв. до досягнення температури 9-10°С. Потім трубочки зі спермою переносили в металевий контейнер, який опускали на поверхню рідкого азоту на 40-50с і заморожували до - 70-75°С, після чого трубочки переносили в рідкий азот. Для зручного зберігання і послідуючого використання трубочки по 4-5шт. розміщували в пластикові центрифужні пробірки для кожного донора і маркірували. Розморожування здійснювали в водяній бані при 37°С протягом 10с. Дані спермограми після розморожування: рН - 7,2-7,4, загальна кількість сперміїв - 65-70млн/мл, активно рухливих - 30-35%, рухливих 32-35%, морфологично нормальні форми - 60-62%. Джерела інформації: 1. А.с.№1660651, А01N1/00, 1991. 2. Патент України №13698, A01N1/00,1997.