Спосіб отримання препарату з незаплідненої ікри жаби

Винахід належить до кріобіології і може бути використаний у фармакологічній промисловості. Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб отримання препарату з залози тимусу [1]. Згідно зі способом тканину подрібнюють, гомогенізують і екстрагують розбавленою оцтовою кислотою в присутності хлориду цинку протягом 48-72 годин. Одержаний екстракт центрифугують, видаляють осад і додатково обробляють ацетоном. Недоліками способу є низький вміст пептидів в екстракті та довготривалість процесу екстрагування. В основу винаходу поставлено задачу створити такий спосіб отримання екстракту незаплідненої ікри жаби, який би забезпечував підвищення вмісту пептидів в препараті при одночасному скороченні тривалості процесу екстракції. Ця задача вирішується тим, що в способі, який включає гомогенізацію тканини, екстракцію в сольовому розчині, центрифугування екстракту і видалення осаду, згідно з винаходом, перед процесом гомогенізації ікру заморожують у рідкому азоті в присутності кріопротектору, після цього відігрівають і видаляють кріопротектор, екстракцію проводять в фізіологічному розчині, а одержаний екстракт відстоюють на холоду. Заморожування ікри перед екстрагуванням сприяє більш інтенсивному виходу пептидів в розчин, а також скорочує процес екстрагування до 1 години. Відстоювання екстракту на холоду при 4°С протягом 30-40хв. забезпечує більш повне осадження білків. Використання фізіологічного розчину в процесі екстрагування сприяє утворенню умов більш наближених до фізіологічних. Приклад здійснення способу. Незапліднену ікру жаби Rana ridibunda заморожували в присутності кріопротектору 10% ПЕО-1500 шляхом занурення у рідкий азот протягом 1 години, відігрівали на водяній бані при температурі 37-40°С. Відмивали від ПЕО-1500 фізіологічним розчином з додаванням сахарози. До відмитої ікри додавали фізіологічний розчин (рН7,4) у співвідношенні 1:10 і проводили екстракцію протягом 1 години. Гомогенізацію тканини проводили на холоду у фізіологічному розчині протягом 15хв. Далі збовтували на шекері протягом 15хв. при температурі +37°С, відстоювали екстракт протягом 30-40хв. на холоду при 4°С. Отриманий екстракт центрифугували при 1500g протягом 15хв., осад видаляли. Загальну концентрацію пептидів визначали модифікованим методом Лоурі за допомогою реактива Фоліна-Чикольте [2]. Вона становила 81,3±6,5мкг/мл (n=7). Для порівняння екстракт незаплідненої ікри жаби одержували способом за прототипом. Концентрація пептидів в екстракті за прототипом становила 49,1±4,3мкг/мл (n=5). Таким чином, заявлений спосіб отримання препарату з незаплідненої ікри жаби дозволяє майже в 2 рази підвищити вміст пептидів в екстракті при одночасному скороченні терміну екстракції. Джерела інформації: 1. А.с. №934589 (СССР), А61К 37/24, 1985. 2. Практическая химия белка: Пер. с англ. А. Дарбре.- М.: Мир,1989.-С.293-295.