Спосіб одержання факторів 1,2,3,4,5 тейхоміціна а та їх солей 2

Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения антибиотиков - факторов 1,2,3,4, 5 тейхомицина А 2 . Цель изобретения разработка способа разделения тейхомицина А 2 на факторы 1,2,3,4,5 и получение их солей, сущность способа сводится к тому, что тейхомицин А 2 , полученный при культивировании Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121, растворяют, подвергают обратнофазной хроматографии на колонке, заполненной спланированным силикагелем. Элюцию проводят с помощью линейного градиента от 10 до 20% ацетонитрила в 0,2%-ом растворе аммонийформиата. Соединяют фракции сходного профиля, концентрируют с помощью бутанола и осаждают смесью ацетона и диэтилового эфира (1:1). Получают 410 мг фактора 1 и 770 мг фактора 2 в чистом виде. Далее смесь факторов 3 и 2 и факторов 4 и 5 пропускают через колонку, заполненную октадецилсиланом, элюируют смесью водного 0,2%-го раствора формиата аммония и ацетонитрила в соотношении 76:24. Фракции отбирают, обессоливают и осаждают аналогично получению фактора 1 и 2, В результате получают дополнительно 510 мг фактора 2, а также 520 мг фактора 3, 350 мг фактора 4 и 300 мг фактора 5. Полученные антибиотики обладают активностью в отношении грамположительных микроорганизмов , 4 табл. С 00 ч ! 'I. 2 1 13 18170 Фракции со сходным профилем БТХ Изобретение относится к биотехнособирают и органический растворитель логии, в частности к производству упаривают под пониженным давлением. ( антибиотиков. Оставшиеся водные растворы пропускаЦелью изобретения является созда5 ют через колонку, содержащую 10 г ние способа получения новых антибиоспланированного силикагеля 60 фирмы тиков - факторов 1,2,3,4,5 тейхомициМерк. Колонку затем промывают дисна А| и их солей» тиллированной водой в целях удале- * П р и м е р 1. 10 г тейхомицина ния формиата аммония и элюируют А', полученного путем культивироваtO 50%-ным водным ацетонитрилом. Элюат ния штамма Acti.noplan.es teichomyceконцентрируют до небольшого объема ti,cus nov. sp. ATCC 31121, растворяют путем добавления бутанола для облегв 1 л 0,2%-ной смеси формиата аммочения упаривания воды и осаждают ния и ацетонитрила (9:1). Значение его смесью ацетона и диэтилового эфирН.полученного раствора с помощью 15 ра (1:1). Получают 410 мг фактора 1 н. раствора гидроокиси натрия до1 и 770 мг фактора 2 тейхомицина А 2 водят до 7,5. Раствор пропускают чев чистом виде. рез колонку, содержащую 500 г сплаСмесь факторов 3 и 2 тейхомицина нированного силикагеля 60 фирмы Мерк. А (1:1) подвергают дальнейшей очиЗатем колонку элюируют с помощью линейного градиента- 10-20% ацетонит- 20 стке с помощью ВТХ на полупрепаративной колонке при следующих условирила в 0,2%-ном растворе формиата ях: колонка: Whatman Partisil®ODS аммония при общем объеме 10 л. М 9 10/50 (содержащая октадецилсиФракции (около 20 мл) собирают лан); подвижная фаза: 0,2%-ный фори исследуют с помощью ВТХ (тонкослой25 миат аммония в смеси Н 2 0 и ацетонитная хроматография под высоким давлерила (76:24); скорость потока: нием): колонка: 5 мк Lorbax® ODS 4,5 мл/мин; детектор: УФ-фотометр (фирмы Дюпон (Du Pont) ; подвижная при 254 нм; загрузка: 20 мг. фаза: линейный градиент 0-50%-ный Очистку проверяют исследованием раствор Б в А в течение 40 мин раЗо каждой фракции с помощью ВТХ. створ А: 25 мМ NaH 2 P0 4 /ацетонитрила Фракции, содержащие чистый фактор (9:1), забуферованный до рН 6,0 по2 и 3 тейхомицина А,, собирают, обессредством 0,1 н, NaOH; раствор Б; соливают и осаждают, как описано. 25 мМ NaIl.P04/ацетонитрила (3:7), Выход: 5 Ю мг фактора 2 и 520 мг забуферованный до рН 6,0 посредстфактора 3. вом 0,1 н. NaOH); скорость потока Фракции, содержащие факторы 4 и 2 мл/мин; детектор: УФ-фотометр при 5 в соотношении 1:1 (около 500 мг), 254 нм. полученные из первой колонки, объедиВ табл. 1 указаны времена удерняют с другой смесью фракций, содерживания t R для факторов 1, 2, 3, 4 жащей факторы 4 и 5 (около 490 мг) и 5 тейхомицина кг в показательном про- 40 и полученной в результате проведения цессе разделения с помощью ВТХ с второго параллельного процесса разуказанием в ней условий проведения деления путем полупрепаративной ВТХ, хроматографии. разделяют при условиях, описанных | Т а б~л и ц а 1 для очистки фактора 3 тейхомицина 45 А , с получением 350 мг фактора 4 и Фактор тейхомициВремя удержиг на А„ 300 мг фактора 5„ вания , мин 1 21,2 2' 22,6 3 23,3 4 25,8 26,4 3,5-Диокситолуол (внутренний эталон) 8,84 Фактор 1 тейхомицина А_ представляет собой белый аморфный порошок, $0 который при температуре около 220 С начинает темнеть и при 255 С полностью разлагается. Химико-физическая характеристика его следующая: а) легко растворим в воде при зна22 чении рН выше 7,0 или ниже 2, -а также в ДМФ, ДМСО и пропиленгликоле, малорастворим в метилцеллозольве и глицерине, слаборастворим в метаноле и этаноле и почти нерастворим в хло З Ї318 70 4 роформе, бензоле, п-гексане, ацетоа) легко растворим в воде при знанитриле, ДИЭТИПОЕОМ эфире, ацетоне, чении рН выше 7,0 или ниже 2, а также этилацетате, тетрахлормєтане; в ДМФ, ДМСО и пропиленгликоле, малоб) имеет спектр УФ-гтоглощения со растворим в метилцеллозольве и глицег следующими максимумами поглощения: % рине, слабо растворим в метаноле и в 0,1 н. хлористоводородной кислоте этаноле и почти нерастворим в хлоро* 278 нм (bJ^-49,5), в ЛосЛатном форме, бензоле, п-гексане, ацетонитриле, диэтиловом эфире, ацетоне, буЛере при значений рН 7,4 ?і^д этилацетате, тетрахлормєтане. 278 нм (Ь,7;=50,0), в 0,1 н. д-идроб) имеет спектр УФ-поглощения со 297 нм =72 ,1); 10 окиси натрия следующими максимумами поглощения: в) имеет спектр ИК-поглощения в в 0.1 н. хлористоводородной кислонуйоле со следующими максимумами поте %ип,Р 278 нм (Е, * =48) , глощения: 3700-3100, 2960-2840 (нув фосйатном буфере при значении йоль), 1645, 1590, 1510, 1460 (нуйоль), 1375 (нуйоль) 1305, 1230, П80, J5 рН 7,4, 1000 ^1500 рующие вещества, средства, способствующие разложению препарата и сма>500