Lna-антагоністи андрогенного рецептора

Реферат: Винахід належить до олігомерних сполук (олігомерів), які вибірково зв'язуються з мРНК андрогенного рецептора в клітині, що призводить до зниженої експресії андрогенного рецептора і є корисним для лікування, наприклад, гіперпроліферативного розладу, такого як рак. UA 100253 C2 (12) UA 100253 C2 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Галузь винаходу Даний винахід належить до сполук, композицій і способів модулювання експресії андрогенного рецептора. Зокрема, даний винахід належить до олігомерних сполук (олігомерів), які вибірково зв'язуються з мРНК андрогенного рецептора в клітині, що призводить до зниження експресії андрогенного рецептора. Зниження експресії андрогенного рецептора корисне при ряді медичних розладів, таких як рак, особливо рак передстатевої залози або рак молочної залози. Пов`язані заявки За даною заявкою запитується пріоритет згідно з 35 U.S.C. § 119(е) за попередньою заявкою на патент США № 60/990125, яка подана 26 листопада 2007 року і опис якої включений в даний документ у вигляді посилання в повному обсязі. Передумови винаходу Андрогенний рецептор (АР) належить до типу ядерних рецепторів, які активуються за допомогою зв'язування з будь-яким з таких андрогенних гормонів, як тестостерон або дигідротестостерон. Відносно своєї основної функції андрогенний рецептор являє собою фактор транскрипції, що зв'язується з ДНК, який регулює експресію генів. Однак андрогенний рецептор також виконує додаткові функції, що не належать до зв'язування з ДНК. Найближчим гомологом андрогенного рецептора є рецептор прогестерону, і прогестини у високому дозуванні можуть блокувати андрогенний рецептор. У той час як у людини існує єдина копія гена АР, яка знайдена на X хромосомі в положенні Xq 11-12, рецептор як такий існує в двох ізоформах (А і В). АРА являє собою білок масою 87 кДа, у якого відсутні перші 187 амінокислот (усічений з N-кінця). Ізоформа АР-В являє собою повнорозмірну форму масою 110 кДа. Зв'язування андрогену з андрогенним рецептором викликає конформаційні зміни рецептора, які призводять до дисоціації білків теплового шоку, димеризації і транспортування з цитозолю в ядро клітини, де димери андрогенного рецептора зв'язуються з певними послідовностями ДНК, що позначаються як елементи гормональної відповіді. Залежно від взаємодії з іншими ядерними білками, АР контролює експресію генів, посилюючи або послаблюючи транскрипцію певних генів, таких як інсуліноподібний фактор росту 1 (IGF-1). Андрогенні рецептори також можуть мати цитоплазматичну активність, яка, однак, опосередкована білками-переносниками сигналу в цитоплазмі. Зв'язування андрогену з цитоплазматичними андрогенними рецепторами може викликати швидкі зміни в роботі клітини, незалежно від транскрипції генів, наприклад, в іонному транспорті, а також непрямо впливати на транскрипцію генів, наприклад, за допомогою інших шляхів передачі сигналу, і таким чином впливати на активність інших факторів транскрипції. При деяких захворюваннях була виявлена надмірна експресія андрогенного рецептора або експресія мутувавших генів андрогенного рецептора, наприклад, при раку, включаючи рак передстатевої залози і раку молочної залози, а також при інших розладах, таких як поліглутамінові захворювання (Monks et al., PNAS November 2 2007, публікація в інтернеті), алопеція, доброякісна гіперплазія передстатевої залози, спінальна і м'язова атрофія і хвороба Кеннеді. У WO 97/11170 повідомляється про спосіб лікування пацієнтів з діагностованою доброякісною гіперплазією передстатевої залози або раком передстатевої залози, який включає введення антисмислового олігонуклеотиду, який вибірково гібридизується з мРНК андрогенного рецептора. Розкриті три антисмислові олігонуклеотидні послідовності довжиною 27-29 нуклеотидів. У US 6733776 і EP 0692972 повідомляється про спосіб лікування андрогенної алопеції за допомогою ліпосом, що містять антисмислову нуклеїнову кислоту, яка гібридизується з геном андрогенного рецептора. Антисмислові молекули з конкретними послідовностями, націленими на андрогенний рецептор, не надані. У US 2005/0164970 повідомляється про спосіб лікування раку передстатевої залози з використанням комплексів міРНК, які вибірково зв'язуються з мРНК андрогенного рецептора. У WO 2005/027833 повідомляється про спосіб лікування раку передстатевої залози, який включає введення пацієнту морфоліно-олігонуклеотиду довжиною 12-40 морфоліно-ланок. У WO 2001/083740 повідомляється про антисмислову сполуку, яка має незаряджений морфоліно-кістяк довжиною від 18 до 20 суміжних ланок, які націленіна андрогенний рецептор людини. Антисмислові морфоліно-сполуки діють за допомогою зв'язування з цільовою нуклеїновою кислотою для того, щоб блокувати доступ інших молекул до мРНК, наприклад, молекул, які беруть участь в сплайсингу мРНК або ініціації трансляції. 1 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 У US 7067256 повідомляється про рибозим, який, очевидно, опосередковує інактивацію андрогенного рецептора. Надана антисмислова молекула РНК з 19 нуклеотидів для відповідної області мРНК андрогенного рецептора. Однак, незважаючи на застосування міРНК, антисмислових морфоліно-сполук і рибозимів, жоден з вищевказаних інгібіторів андрогенного рецептора не дозволяє успішно інгібувати андрогенний рецептор in vivo і в фармакологічно прийнятному дозуванні. Наприклад, даний винахід належить до нового класу антагоністів андрогенного рецептора, які були відібрані на основі присутності LNA в їх хімічному складі і/або за допомогою відбору особливо ефективних сайтів-мішеней в мРНК андрогенного рецептора. Суть винаходу Винахід належить до олігомеру довжиною 10-50, наприклад, довжиною 10-30 нуклеотидів, який містить безперервну нуклеотидну послідовність загальною довжиною 10-50, наприклад, 10-30 нуклеотидів, де вказана безперервна нуклеотидна послідовність щонайменше на 80 % (наприклад, на 85 %, 90 %, 95 %, 98 % або 99 %) гомологічна області, яка відповідає зворотній комплементарній послідовності нуклеїнової кислоти, яка кодує андрогенний рецептор ссавця, наприклад, гена андрогенного рецептора ссавця або мРНК, наприклад, SEQ ID № 1, або його варіантів, що зустрічаються в природі. Таким чином, наприклад, олігомер гібридизується з одноланцюжковою молекулою нуклеїнової кислоти, яка має послідовність (відповідної) частини SEQ ID № 1. Винахід належить до кон'югату, який містить олігомер за винаходом і щонайменше один ненуклеотидний або неполінуклеотидний фрагмент, ковалентно зв'язаний з вказаним олігомером. Винахід належить до фармацевтичної композиції, яка містить олігомер або кон'югат за винаходом і фармацевтично прийнятний розріджувач, носій, сіль або ад'ювант. Винахід належить до олігомеру або кон'югату за винаходом для застосування як лікарського засобу, наприклад, для лікування захворювання або медичного розладу, який описаний в цьому документі, наприклад, гіперпроліферативного розладу, такого як рак. Винахід належить до застосування олігомеру або кон'югату за винаходом у виробництві лікарського засобу для лікування захворювання або медичного розладу, який описаний в цьому документі, наприклад, гіперпроліферативного розладу, такого як рак. Винахід належить до способу лікування захворювання або медичного розладу, який описаний в цьому документі, наприклад, гіперпроліферативного розладу, такого як рак, вказаний спосіб включає введення олігомеру, кон'югату або фармацевтичної композиції за винаходом пацієнту, страждаючому або схильного до ризику вказаного захворювання або медичного розладу. Винахід належить до способу інгібування андрогенного рецептора в клітині, яка експресує андрогенний рецептор, вказаний спосіб включає введення олігомеру або кон'югату за винаходом у вказану клітину для того, щоб викликати інгібування андрогенного рецептора у вказаній клітині. Винахід належить до олігомеру довжиною 10-50 нуклеїнових основ, який містить безперервну послідовність нуклеїнових основ загальною довжиною 10-50 нуклеїнових основ, де вказана безперервна послідовність нуклеїнових основ щонайменше на 80 % гомологічна відповідній області нуклеїнової кислоти, яка кодує андрогенний рецептор ссавця. Винахід належить до олігомеру довжиною 10-50 нуклеїнових основ, який містить безперервну послідовність нуклеїнових основ загальною довжиною 10-50 нуклеїнових основ, де вказана безперервна послідовність нуклеїнових основ щонайменше на 80 % ідентична зворотній комплементарній послідовності цільової області нуклеїнової кислоти, яка кодує андрогенний рецептор ссавця. Винахід додатково належить до кон'югату, який містить олігомер за винаходом, наприклад, до кон'югату, який містить, в доповнення до послідовності нуклеїнових основ олігомеру, щонайменше один ненуклеотидний або неполінуклеотидний фрагмент ("кон'югований фрагмент"), який ковалентно зв'язаний з олігомером за винаходом. Винахід належить до фармацевтичних композицій, які містять олігомер або кон'югат за винаходом і фармацевтично прийнятним розріджувач, носій, сіль або ад'ювант. Винахід додатково належить до олігомеру за винаходом для застосування в медицині. Винахід додатково належить до застосування олігомеру за винаходом у виробництві лікарського засобу для лікування одного або декількох захворювань, згаданих в цьому документі, наприклад, захворювань, вибраних з групи, що складається з раку, наприклад, раку молочної залози або раку передстатевої залози, алопеції, доброякісної гіперплазії 2 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 передстатевої залози, спінальної і м'язової атрофії, хвороби Кеннеді і поліглутамінових захворювань. Винахід додатково належить до олігомеру за винаходом для застосування в лікуванні одного або декількох захворювань, згаданого в цьому документі, наприклад, захворювань, вибраних з групи, що складається з раку, такого як рак молочної залози або рак передстатевої залози, алопеції, доброякісної гіперплазії передстатевої залози, спінальної і м'язової атрофії, хвороби Кеннеді і поліглутамінових захворювань. Також надані фармацевтичні і інші композиції, що містять олігомер за винаходом. Також надані способи пригнічення експресії АР в клітинах або тканинах, які включають приведення вказаних клітин або тканин, in vitro або in vivo, в контакт з одним або декількома олігомерами, кон'югатами або композиціями за винаходом. Також розкриті способи лікування тварини, що не є людиною, або людини з підозрою на наявність або схильність (сприйнятливість) до захворювання або стану, пов'язаного з експресією або надмірною експресією АР, за допомогою введення вказаній тварині або людині терапевтично або профілактично ефективної кількості одного або декількох олігомерів, кон'югатів або фармацевтичних композицій за винаходом. Також надані способи використання олігомерів для інгібування експресії АР і для лікування захворювань, пов'язаних з активністю АР. Винахід належить до способу лікування захворювання, вибраного з групи, що складається з раку, такого як рак молочної залози або рак передстатевої залози, алопеції, доброякісної гіперплазії передстатевої залози, спінальної і м'язової атрофії, хвороби Кеннеді і поліглутамінових захворювань, спосіб включає введення (ефективної кількості) одного або декількох олігомерів за винаходом, їх кон'югатів або фармацевтичних композицій за винаходом пацієнту, потребуючому цього. Винахід належить до способу інгібування або зниження експресії андрогенного рецептора в клітині або тканині, наприклад, за допомогою понижувальної регуляції, який включає стадію приведення вказаної клітини або тканини в контакт з ефективною кількістю одного або декількох олігомерів за винаходом, їх кон'югатів або фармацевтичних композицій для того, щоб інгібувати або знизити експресію андрогенного рецептора. У деяких варіантах здійснення винахід належить до олігомеру, що складається з 10-30 суміжних мономерів, де суміжні мономери ковалентно зв'язані за допомогою фосфатної групи або фосфоротіоатної групи, де вказаний олігомер містить першу область щонайменше з 10 суміжних мономерів, де щонайменше один мономер з вказаної першої області є аналогом нуклеозиду, де послідовність вказаної першої області щонайменше на 80 % ідентична найкращим чином вирівняній зворотній комплементарній послідовності цільової області гена андрогенного рецептора ссавця або мРНК андрогенного рецептора ссавця. В одному з аспектів олігомер за винаходом вибраний з групи, що складається з Me Me Me 5'-As Cs CsasasgstststscststscsAsGs С-3' (SEQ ID № 58) і Me Me Me 5'- Cs Cs CsasasgsgscsascstsgscsAsGsA-3' (SEQ ID № 77), де заголовні букви означають мономери бета-D-окси-LNA і малі букви означають мономери ДНК, нижній індекс "s" означає Me фосфоротіоатний зв'язок і C означає мономер бета-D-окси-LNA, що містить основу 5метилцитозин. Короткий опис малюнків Фіг. 1. Олігонуклеотиди, представлені в таблиці 3, оцінювали за їх здатністю до нокдауну мРНК андрогенного рецептора в концентраціях 1, 4 і 16 нМ в клітинах MCF7 через 24 години після трансфекції з використанням ПЛР в реальному часі. Всі результати нормалізовані до GAPDH і інгібування мРНК АР показано у вигляді процентної частки від необробленого контролю. Наведені результати являють собою середнє значення результатів трьох незалежних експериментів. Фіг. 2. Олігонуклеотиди, представлені в таблиці 3, оцінювали за їх здатністю до нокдауну мРНК андрогенного рецептора в концентраціях 1, 4 і 16 нМ в клітинах A549 через 24 години після трансфекції з використанням ПЛР в реальному часі. Всі результати нормалізовані до GAPDH і інгібування мРНК АР показано у вигляді процентної частки від необробленого контролю. Наведені результати являють собою середнє значення результатів трьох незалежних експериментів. Фіг. 3. Вирівнювання послідовності мРНК андрогенного рецептора людини (інвентарний номер Genbank NM_000044) і послідовності мРНК андрогенного рецептора миші (інвентарний номер Genbank NM_0134769). Фіг. 4. Розташування переважних цільових областей в мРНК АР (кДНК) людини, з якими вибірково зв'язуються олігомери за винаходом. Незважаючи на те, що показані 16-членні 3 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 цільові сайти, в деяких варіантах здійснення ці цільові області можуть містити додаткові 4 основи з 5'- або 3'-кінця показаних областей, тобто являти собою цільові області довжиною до 24 суміжних нуклеотидів. Фіг. 5. SEQ ID № 1: андрогенний рецептор Homo sapiens (дигідротестостероновий рецептор; тестикулярна фемінізація; спінальна і бульбарна м'язова атрофія; хвороба Кеннеді) (АР), транскрипційний варіант 1, мРНК. (інвентарний номер Genbank NM_000044). Фіг. 6. SEQ ID № 81: послідовність мРНК андрогенного рецептора миші. Фіг. 7. SEQ ID № 82: послідовність мРНК андрогенного рецептора макака резус. Фіг. 8. SEQ ID № 83: амінокислотна послідовність білка андрогенного рецептора Homo sapiens. Фіг. 9. SEQ ID № 84: амінокислотна послідовність білка андрогенного рецептора миші. Фіг. 10. SEQ ID № 85: амінокислотна послідовність білка андрогенного рецептора макака резусу. Фіг. 11. мРНК АР в LNCaP через 24 години після трансфекції. Фіг. 12. мРНК АР в A549 через 24 години після трансфекції. Фіг. 13. Тест на клітинну проліферацію - A549, залежність від часу після трансфекції. Фіг. 14: Тест на клітинну проліферацію - залежність від часу після трансфекції. Фіг. 15: Активність каспази 3/7 в клітинах LNCaP через 24, 48 або 72 години після трансфекції. Фіг. 16: Активність каспази 3/7 в клітинах A549 через 24, 48 або 72 години після трансфекції. Фіг. 17: Середнє PSA в плазмі після лікування олігомером in vivo. Фіг. 18: Інгібування росту пухлини in vivo. Докладний опис винаходу Олігомери У даному винаході застосовуються олігомерні сполуки (що іменуються в цьому документі олігомерами) для модулювання функції молекули нуклеїнової кислоти, яка кодує андрогенний рецептор ссавця, наприклад, нуклеїнової кислоти андрогенного рецептора, наведеної в SEQ ID № 1, і варіантів таких молекул нуклеїнової кислоти, що зустрічаються в природі, яка кодує андрогенний рецептор ссавця. Термін "олігомер" в контексті даного винаходу належить до молекули, утвореної за допомогою ковалентного зв'язку між двома або більше нуклеотидами (тобто до олігонуклеотиду). У цьому документі кожний окремий нуклеотид, наприклад, нуклеотиди, присутні в олігомері за винаходом, також можуть позначатися як "мономер" або "ланка". У деяких варіантах здійснення олігомер містить безперервну нуклеотидну послідовність довжиною 10-30 нуклеотидів або складається з неї (тобто містить 10-30 ковалентно зв'язаних мономерів або складається з них). У різних варіантах здійснення сполуки за винаходом не містять РНК (ланки). У різних варіантах здійснення сполуки за винаходом являють собою лінійні молекули або синтезовані в формі лінійної молекули. У таких варіантах здійснення олігомер являє собою одноланцюжкову молекулу і в основному не містить короткі області, наприклад, щонайменше з 3, 4 або 5 суміжних нуклеотидів, які комплементарні іншій області в цьому ж олігомері (тобто дуплекси) - в цьому відношенні, в деяких варіантах здійснення олігомер (по суті) не є дволанцюжковим. У деяких варіантах здійснення олігомер є по суті не дволанцюжковим, наприклад, не являє собою міРНК. У різних варіантах здійснення олігомер за винаходом може повністю складатися з безперервної нуклеотидної області. Таким чином, олігомер по суті не є самокомплементарним. міРНК складається з 2 комплементарних коротких послідовностей РНК (або еквівалентних нуклеотидних ланок), наприклад, довжиною від 21 до 23 нуклеотидів, в основному з 2 нуклеотидами на 3'-кінці, виступаючими з обох кінців. Для того щоб збільшити захоплення in vivo, міРНК може бути кон'югована, наприклад, зі стерином, наприклад, з холестериновою групою (в основному 3'- або 5'-кінцем одного або обох ланцюгів). Винахід додатково належить до цільової послідовності в мРНК або гену АР або її алкільного варіанту, зокрема, до послідовностей, відповідних SEQ ID №№ 2-22, де антисмислові олігонуклеотиди, відповідні вказаним цільовим послідовностям, здатні здійснювати понижувальну регуляцію АР. Наприклад, цільові послідовності, які відповідають антисмисловим олігонуклеотидним послідовностям SEQ ID №№ 2-22, відповідно, наведені на фіг. 4 (виділені жирним зображенням з підкресленням, над якими вказані відповідні SEQ ID №№). Послідовності варіантів, наприклад, але не обмежуючись, алельні варіанти (наприклад, гена (АР), представленого в генному локусі Xq 11-12) таких цільових послідовностей також включені в обсяг винаходу. Послідовність варіанту може бути щонайменше на 60 %, більш переважно щонайменше на 70 %, більш переважно щонайменше на 80 %, більш переважно щонайменше на 85 %, більш переважно щонайменше на 90 %, більш переважно щонайменше на 91 %, 4 UA 100253 C2 5 10 щонайменше на 92 %, щонайменше на 93 %, щонайменше на 94 %, щонайменше на 95 % гомологічна цільовій послідовності в АР. В основному, олігомер за винаходом, відповідний вказаній послідовності варіанту, зберігає здатність до понижувальної регуляції АР. Також розкриті конкретні конструкції LNA-олігонуклеотидів, наприклад, наведені в SEQ ID №№ 44-80. Олігомери за винаходом розглядаються як можливі інгібітори мРНК андрогенного рецептора і експресії білка. Мішені Андрогенний рецептор ссавця переважно вибраний з групи, що складається з андрогенних рецепторів людини або миші. Переважно андрогенний рецептор ссавця являє собою андрогенний рецептор людини, наприклад, андрогенний рецептор, який кодується нуклеїновою кислотою, яка показана в SEQ ID № 1. Додаткові гени андрогенних рецепторів ссавців (мішені) і їх відповідні білки наведені в наступній таблиці: Людина Миша Макак резус 15 20 25 30 35 40 45 50 Інвентарний номер Genbank нуклеїнова кислота (послідовність мРНК/кДНК) NM_000044 NM_013476 NM_001032911 Інвентарний номер Genbank поліпептид (передбачена послідовність) NP_000035 NP_038504 NP_001028083 Потрібно визнати, що у людини ген андрогенного рецептора виявляє деяку міру мінливості алеля і що у деяких разах поліморфізму вищевказані інвентарні номери Genbank для нуклеїнових кислот належать до послідовностей кДНК, а не до послідовностей мРНК як таких. Послідовність зрілої мРНК можна одержати безпосередньо з відповідної послідовності кДНК при заміні основи тимін (Т) на урацил (U). Потрібно визнати, що у людини ген андрогенного рецептора виявляє деяку міру мінливості алеля і в деяких випадках поліморфізм пов'язаний з патологічними фенотипами (Mooney et al, NAR 15; 31(8) 2003). Наприклад, експансія CAG повторів пов'язана із захворюваннями, відмінними поліглутаміновою експансією, а інші ідентифіковані описані алельні варіанти включають тринуклеотидний повтор (GGC)n і однонуклеотидні заміни R726L, T887A і L710H, і було показано, що останні два корелюють із зменшенням вибірковості АРА-рецептора у відношенні інших стероїдних лігандів. В одному з варіантів здійснення n може знаходитися в діапазоні від 5 до 31. Повтори CAG менше 22 разів пов'язані із збільшенням ризику раку передстатевої залози у афроамериканцев чоловічої статі, і тому можуть являти собою переважний алельний варіант. У деяких варіантах здійснення цільова нуклеїнова кислота являє собою алельний варіант АР, який містить одну або декілька однонуклеотидних замін, включаючи R726L, T887A і L710H. Отже, в деяких варіантах здійснення мішенню є алельний варіант АР, який містить тринуклеотидний повтор (CAG)n або тринуклеотидний повтор (CAG)n. У переважному варіанті здійснення нуклеїнова кислота, що кодує андрогенний рецептор ссавця, являє собою послідовність кДНК андрогенного рецептора людини, наведену в SEQ ID № 1, і/або послідовність кДНК андрогенного рецептора миші, наведену в SEQ ID № 81, або їх алельні варіанти. Олігомер за винаходом являє собою антисмисловий олігонуклеотид. Отже, "мішень" олігомеру за винаходом являє собою мРНК андрогенного рецептора. Введення олігомеру в клітину, яка експресує ген андрогенного рецептора, призводить до зниження рівня мРНК андрогенного рецептора, що призводить до зниження рівня експресії андрогенного рецептора в клітині. Відомо, що андрогенний рецептор регулює експресію декількох генів, наприклад, генів, вибраних з групи, що складається з протеїнкінази С дельта (PRKCD), глутатіон S-трансферази тета 2 (GSTT2), 3 члена V підродини потенційних катіонних каналів тимчасових рецепторів (TRPV3), піролін-5-карбоксилатредуктази 1 (PYCR1) або орнітинамінотрансферази (OAT), - такі гени в цьому документі позначають як мішені андрогенного рецептора, і, по суті, в деяких варіантах здійснення олігомери за винаходом можна використовувати для модулювання експресії однієї або декількох мішеней андрогенного рецептора в клітині, яка експресує або здатна експресувати (тобто у випадку послаблення репресії (за допомогою АР) мішені андрогенного рецептора в клітині) вказану мішень андрогенного рецептора. Олігомери, що вибірково зв'язуються з мРНК андрогенного рецептора, можуть гібридизуватися з будь-яким сайтом вздовж всієї нуклеїнової кислоти мРНК-мішені, наприклад, з 5'-кінцевою лідерною нетрансльованою послідовністю, екзонами, інтронами і 3'-кінцевим 5 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 нетрансльованим хвостом. Однак, переважно, щоб олігомери, націлені на мРНК андрогенного рецептора, гібридизувалися зі зрілою мРНК-формою цільової нуклеїнової кислоти. Придатний олігомер за винаходом має здатність до понижувальної регуляції експресії гена андрогенного рецептора. У цьому відношенні олігомер за винаходом може викликати інгібування андрогенного рецептора, в основному у ссавця, наприклад, в клітинах людини. У деяких варіантах здійснення олігомери за винаходом зв'язуються з цільовою нуклеїновою кислотою і викликають інгібування експресії щонайменше на 10 % або 20 % в порівнянні з нормальним рівнем експресії, більш переважне інгібування щонайменше на 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % або 95 % в порівнянні з нормальним рівнем експресії (наприклад, безпосередньо перед введенням дози олігомеру). У деяких варіантах здійснення таке модулювання можна спостерігати при використанні сполуки за винаходом в концентрації від 0,04 до 25 нМ, наприклад, від 0,8 до 20 нМ. У тому ж або іншому варіанті здійснення інгібування експресії складає менше 100 %, наприклад, інгібування складає менше 98 %, інгібування складає менше 95 %, інгібування складає менше 90 %, інгібування складає менше 80 %, наприклад, інгібування складає менше 70 %. Модулювання рівня експресії можна визначити при вимірюванні концентрації білка, наприклад, таким способами як SDS-PAGE з подальшим вестерн-блоттингом з використанням відповідних антитіл, індукованих проти цільового білка. Альтернативно, модулювання рівнів експресії можна визначити при вимірюванні рівнів мРНК, наприклад, за допомогою "нозерн"-блоттинга або кількісною ЗТ-ПЛР. При вимірюванні модулювання за допомогою вимірювання рівнів мРНК, міра понижувальної регуляції при використанні відповідного дозування, наприклад, в концентрації від 0,04 до 25 нМ, такій як від 0,8 до 20 нМ, в деяких варіантах здійснення в основному відповідає рівню 10-20 % від нормальних рівнів за відсутності сполуки за винаходом. Отже, винахід належить до способу знижувального регулювання або інгібування експресії білка андрогенного рецептора і/або мРНК в клітині, яка експресує білок андрогенного рецептора і/або мРНК, вказаний спосіб включає введення або приведення олігомеру або кон'югату за винаходом (відповідно, в ефективній кількості) в контакт з вказаною клітиною для понижувального регулювання або інгібування експресії білка андрогенного рецептора і/або мРНК у вказаній клітині. Відповідно, клітина являє собою клітину ссавця, наприклад, клітину людини. У деяких варіантах здійснення введення або приведення в контакт може відбуватися in vitro. У деяких варіантах здійснення введення або приведення в контакт може відбуватися in vivo. Термін "цільова нуклеїнова кислота", як застосовують в цьому документі, належить до ДНК або РНК, яка кодує поліпептид андрогенного рецептора ссавця, наприклад, андрогенного рецептора людини, наприклад, до SEQ ID № 1. Андрогенний рецептор кодується нуклеїновими кислотами або їх варіантами, що зустрічаються в природі і рибонуклеїновими кислотами, одержаними з них, переважно мРНК, наприклад, пре-мРНК, хоча переважно - зрілої мРНК. У деяких варіантах здійснення, наприклад, при використанні в дослідженнях або в діагностиці, "цільова нуклеїнова кислота" може являти собою кДНК або синтетичний олігонуклеотид, одержаний з вищевказаних цільових дезоксирибонуклеїнових або рибонуклеїнових кислот. Олігомер за винаходом переважно здатний гібридизуватися з цільовою нуклеїновою кислотою. Потрібно визнати, що SEQ ID № 1 являє собою кДНК послідовність, і по суті відповідає послідовності зрілої цільової мРНК, незважаючи на те, що в послідовності кДНК урацил заміщений на тимідин. Термін "варіант", що зустрічається в природі, належить до варіантів нуклеотидної послідовності поліпептиду андрогенного рецептора, який існує в природі в межах певної таксономічної групи, такої як ссавці, наприклад, миша, мавпа і переважно людина. В основному при використанні "варіантів, що зустрічаються в природі" полінуклеотиду термін також може включати будь-які алельні варіанти андрогенного рецептора, що кодуються геномною ДНК, яка знайдена в X хромосомі: 66,68-66,87 Мо (мільйонів основ) за допомогою хромосомної перебудови або дуплікації, і РНК, такої як мРНК, одержаної з неї. "Варіанти, що зустрічаються в природі", також можуть включати в себе варіанти, одержані внаслідок альтернативного сплайсингу мРНК андрогенного рецептора. При згадці про конкретну поліпептидну послідовність термін також включає, наприклад, форми білка, що зустрічаються в природі, які, таким чином, можуть зазнавати процессингу, наприклад, за допомогою ко- або посттрансляційних модифікацій, таких як відщеплення сигнального пептиду, протеолітичне розщеплення, глікозилування і т.д. Послідовності олігомерів Олігомери складаються з безперервної нуклеотидної послідовності, яка відповідає зворотній комплементарній послідовності нуклеотидної послідовності, представленій в SEQ ID № 1, або 6 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 містять її. Таким чином, олігомер може містити послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID №№ 2-22 і 86-106, або складатися з неї, де вказаний олігомер (або його безперервна нуклеотидна частина) необов'язково може містити одну, дві або три невідповідності відносно вказаної вибраної послідовності. Олігомер може містити безперервну нуклеотидну послідовність, яка повністю комплементарна (абсолютно комплементарна) відповідній області нуклеїнової кислоти, яка кодує андрогенний рецептор ссавця (наприклад, SEQ ID № 1), або складатися з неї. Таким чином, олігомер може містити антисмислову нуклеотидну послідовність або складатися з неї. Однак в деяких варіантах здійснення олігомер, в якому може бути допущено 1, 2, 3 або 4 (або більше) невідповідності, гібридизується з цільовою послідовністю і зберігає силу зв'язування з мішенню, достатню для вияву понижувального ефекту, тобто понижувальної регуляції мішені. Невідповідності можна компенсувати, наприклад, збільшенням довжини нуклеотидної послідовності олігомеру і/або збільшенням кількості аналогів нуклеотидів, таких як LNA, представлених в нуклеотидів послідовності. У деяких варіантах здійснення безперервна нуклеотидна послідовність містить не більше ніж 3, наприклад, не більше ніж 2 невідповідності, при гібридизації з цільовою послідовністю, наприклад, з відповідною областю нуклеїнової кислоти, яка кодує андрогенний рецептор ссавця. У деяких варіантах здійснення безперервна нуклеотидна послідовність містить не більше ніж одну невідповідність при гібридизації з цільовою послідовністю, наприклад, з відповідною областю нуклеїнової кислоти, яка кодує андрогенний рецептор ссавця. Нуклеотидні послідовності олігомерів за винаходом або безперервна нуклеотидна послідовність переважно щонайменше на 80 % гомологічні відповідній послідовності, вибраній з групи, що складається з SEQ ID №№ 2-22 і 86-106, наприклад, гомологічні щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 91 %, щонайменше на 92 %, щонайменше на 93 %, щонайменше на 94 %, щонайменше на 95 %, щонайменше на 96 %, наприклад, гомологічні на 100 % (ідентичні). Нуклеотидні послідовності олігомерів за винаходом або безперервна нуклеотидна послідовність переважно щонайменше на 80 % гомологічні зворотній комплементарній послідовності відповідної послідовності, представленій в SEQ ID № 1, наприклад, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 91 %, щонайменше на 92 %, щонайменше на 93 %, щонайменше на 94 %, щонайменше на 95 %, гомологічні щонайменше на 96 %, гомологічні щонайменше на 97 %, гомологічні щонайменше на 98 %, гомологічні щонайменше на 99 %, наприклад, гомологічні на 100 % (ідентичні). Нуклеотидні послідовності олігомерів за винаходом або безперервна нуклеотидна послідовність переважно щонайменше на 80 % комплементарні підпослідовності, представленій в SEQ ID № 1, наприклад, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 91 %, щонайменше на 92 %, щонайменше на 93 %, щонайменше на 94 %, щонайменше на 95 %, комплементарні щонайменше на 96 %, комплементарні щонайменше на 97 %, комплементарні щонайменше на 98 %, комплементарні щонайменше на 99 %, наприклад, комплементарні на 100 % (абсолютно комплементарні). У деяких варіантах здійснення олігомер (або його безперервна нуклеотидна частина) вибраний з послідовностей, вибраних з групи, що складається з SEQ ID №№ 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 і 22, або їх безперервної підпослідовності щонайменше з 10 нуклеотидів, або містить одну з них, де вказаний олігомер (або його безперервна нуклеотидна частина) може необов'язково містити одну, дві або три невідповідності відносно даної послідовності. У деяких варіантах здійснення олігомер (або його безперервна нуклеотидна частина) вибраний з послідовностей, вибраних з групи, що складається з SEQ ID №№ 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105 і 106, або їх безперервної підпослідовності щонайменше з 10 нуклеотидів, або містить одну з них, де вказаний олігомер (або його безперервна нуклеотидна частина) може необов'язково містити одну, дві або три невідповідності в порівнянні з даною послідовністю. Інші переважні олігомери містять (безперервну) нуклеотидну послідовність, наприклад, безперервну послідовність довжиною 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, яка містить нуклеотидну послідовність, вибрану з групи послідовностей, що складається з SEQ ID № 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 і 22, де вказаний олігомер (або його безперервна нуклеотидна частина) може необов'язково містити одну, дві або три невідповідності в порівнянні з вказаною вибраною послідовністю. 7 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 У деяких варіантах здійснення підпослідовність може складатися з 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 або 29 послідовних нуклеотидів, наприклад, 12-22 нуклеотидів, наприклад, 12-18 нуклеотидів. Відповідно, в деяких варіантах здійснення підпослідовність має ту ж довжину, що і безперервна нуклеотидна послідовність олігомеру за винаходом. Однак потрібно визнати, що в деяких варіантах здійснення нуклеотидна послідовність олігомеру може містити додаткові нуклеотиди на 5'- або 3'-кінці, наприклад, незалежно, 1, 2, 3, 4 або 5 додаткових нуклеотидів на 5'- і/або 3'-кінці, яких не комплементарні цільовій послідовності. У цьому відношенні в деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом може містити безперервну нуклеотидну послідовність, яка фланкована додатковими 5'- і/або 3'кінцевими нуклеотидами. У деяких варіантах здійснення додаткові 5'- або 3'-кінцеві нуклеотиди являють собою нуклеотиди, що зустрічаються в природі, такі як дезоксирибонуклеотиди або рибонуклеотиди. У деяких варіантах здійснення додаткові 5'- або 3'-кінцевих нуклеотиди можуть являти собою D-область, яка згадується в цьому документі відносно олігомерів з пропусками. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 2, наприклад, SEQ ID № 44, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 3, наприклад, SEQ ID № 45, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 4, наприклад, SEQ ID № 46, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 5, наприклад, SEQ ID № 47, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 6, наприклад, SEQ ID № 48, 49 або 50, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 7, наприклад, SEQ ID № 51, 52, або 53, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 8, наприклад, SEQ ID № 54, 55 або 56, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 9, наприклад, SEQ ID № 57, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 10, наприклад, SEQ ID № 58, 59, або 60, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 11, наприклад, SEQ ID № 61, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 12, наприклад, SEQ ID № 62, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 13, наприклад, SEQ ID № 63, 64 або 65 або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 14, наприклад, SEQ ID № 66, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. 8 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 15, наприклад, SEQ ID № 67, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 16, наприклад, SEQ ID № 68, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 17, наприклад, SEQ ID № 69, 70 або 71, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 18, наприклад, SEQ ID № 72, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 19, наприклад, SEQ ID № 73, 74 або 75, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 20, наприклад, SEQ ID № 76, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 21, наприклад, SEQ ID № 77, 78 або 79, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить нуклеотидну послідовність згідно з SEQ ID № 22, наприклад, SEQ ID № 80, або безперервну підпослідовність щонайменше з її 10 нуклеотидів, наприклад, з її 11, 12, 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів, або складається з неї. При визначенні "гомології" між олігомерами за винаходом (або безперервною нуклеотидною послідовністю) і нуклеїновою кислотою, яка кодує андрогенний рецептор ссавця, або її зворотною комплементарною послідовністю, наприклад, що описується в цьому документі, визначення гомології можна здійснити за допомогою простого вирівнювання відповідної нуклеотидної послідовності сполуки за винаходом з відповідною областю нуклеїнової кислоти, яка кодує андрогенний рецептор ссавця (або цільовою нуклеїновою кислотою), або її зворотною комплементарною послідовністю, і гомологію визначають при підрахунку кількості вирівняних основ, діленої на загальну кількість суміжних нуклеотидів в сполуці за винаходом і помноженої на 100. При такому порівнянні, якщо пропуски існують, переважно, щоб такі пропуски являли собою тільки невідповідності, а не області, в яких декілька нуклеотидів в області пропуску розрізняються в нуклеотидній послідовності за винаходом і цільовій нуклеїновій кислоті. Терміни "відповідний" і "відповідає" належать до порівняння нуклеотидної послідовності олігомеру або безперервної нуклеотидної послідовності (першої послідовності) і відповідної безперервної нуклеотидної послідовності з додаткової послідовності, вибраної з будь-якого пункту: i) підпослідовність зворотної послідовності, комплементарної цільовій нуклеїновій кислоті, такій як мРНК, яка кодує білок андрогенного рецептора, наприклад, SEQ ID № 1, і/або ii) послідовність нуклеотидів, надана в цьому документі, наприклад, в групі, що складається з SEQ ID №№ 2-22 і 86-106 або їх підпослідовностей. Нуклеотидні аналоги порівнюють безпосередньо з еквівалентними або відповідними їм нуклеотидами. Перша послідовність, яка відповідає додатковій послідовності за п. i) або ii), в основному ідентична цій послідовності, що перевищує за довжиною першу послідовність (наприклад, безперервну нуклеотидну послідовність), або, як описано в цьому документі, в деяких варіантах здійснення може бути щонайменше на 80 % гомологічна відповідній послідовності, наприклад, щонайменше на 85 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 91 %, щонайменше на 92 %, щонайменше на 93 %, щонайменше на 94 %, щонайменше на 95 %, гомологічна щонайменше на 96 %, гомологічна щонайменше на 97 %, гомологічна щонайменше на 98 %, гомологічна щонайменше на 99 %, наприклад, гомологічна на 100 % (ідентична). Терміни "відповідний нуклеотидний аналог" і "відповідний нуклеотид" призначені для позначення того, що нуклеотид в нуклеотидному аналозі і нуклеотид, що зустрічається в природі, ідентичні. Наприклад, коли в нуклеотиді 2-дезоксирибоза з'єднана з аденіном, "відповідний нуклеотидний аналог" містить пентозу (відрізняється від 2-дезоксирибози), з'єднану з аденіном. Довжина 9 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 Олігомери містять безперервну нуклеотидну послідовність загальною довжиною 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30 суміжних нуклеотидів, або складаються з неї. У деяких варіантах здійснення олігомери містять безперервну нуклеотидну послідовність загальною довжиною 10-22, наприклад, 12-18, наприклад, 13-17 або 12-16, наприклад, 13, 14, 15, 16 суміжних нуклеотидів, або складаються з неї. У деяких варіантах здійснення олігомери містять безперервну нуклеотидну послідовність загальною довжиною 10, 11, 12, 13 або 14 суміжних нуклеотидів, або складаються з неї. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом складається не більше ніж з 22 нуклеотидів, наприклад, не більше ніж з 20 нуклеотидів, наприклад, не більше ніж з 18 нуклеотидів, наприклад, з 15, 16 або 17 нуклеотидів. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить менше ніж 20 нуклеотидів. Нуклеотидні аналоги Термін "нуклеотид", як застосовують в цьому документі, належить до глікозиду, що містить залишок цукру, залишок основи і ковалентно зв'язану фосфатну групу, і включає як нуклеотиди, що зустрічаються в природі, такі як дезоксирибонуклеотиди або рибонуклеотиди, переважно дезоксирибонуклеотиди, так і нуклеотиди, які не зустрічаються в природі, що містять залишки модифікованого цукру і/або основ, які в цьому документі також позначаються як "нуклеотидні аналоги". Нуклеотиди, що не зустрічаються в природі, включають нуклеотиди, які містять залишки модифікованого цукру, наприклад, бициклічні нуклеотиди або 2'-модифіковані нуклеотиди, наприклад, 2'-заміщені нуклеотиди. "Нуклеотидні аналоги" являють собою варіанти природних нуклеотидів, таких як дезоксирибонуклеотиди або рибонуклеотиди, одержані за допомогою модифікації залишків цукру і/або основи. В принципі, аналоги можуть бути просто "мовчазними" або "еквівалентними" по відношенню до природних нуклеотидів у відношенні олігонуклеотиду, тобто не мати функціональний вплив на дію олігонуклеотиду і на інгібування експресії гена-мішені. Проте, такі "еквівалентні" аналоги можна використовувати, наприклад, якщо вони простіше або дешевше у виробництві, або більш стабільні в умовах зберігання або виробництва, або є тегом або міткою. Однак переважно аналоги мають функціональний вплив на дію олігомеру і на інгібування експресії, наприклад, забезпечуючи збільшену афінність зв'язування з мішенню і/або збільшену стійкість до внутрішньоклітинних нуклеаз і/або спрощену доставку в клітину. Конкретні приклади аналогів нуклеозидів описані, наприклад, авторами Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443 і Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213, і на схемі 1: 10 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 Схема 1 Таким чином, олігомер може містити просту послідовність нуклеотидів, що зустрічаються в природі, переважно 2'-дезоксинуклеотидів (як правило, згадуються в цьому документі як "ДНК"), але також, можливо, рибонуклеотидів (як правило, згадуються в цьому документі як "РНК"), або поєднання нуклеотидів, що зустрічаються в природі, і одних або декількох нуклеотидів, що не зустрічаються в природі, тобто нуклеотидних аналогів, або складатися з цієї послідовності. Відповідно, такі нуклеотидні аналоги можуть збільшувати афінність олігомеру до цільової послідовності. Приклади відповідних і переважних нуклеотидних аналогів надані в PCT/DK2006/000512 або згадуються в цьому документі. Вбудовування в олігомер таких збільшуючих афінність нуклеотидних аналогів, як LNA або 2'заміщений цукор, може зробити можливим зменшення розміру олігомеру, що вибірково зв'язується, а також може зменшити верхню межу розміру олігомеру, нижче за яку виникає невибіркове або неправильне зв'язування. У деяких варіантах здійснення олігомер містить щонайменше 2 нуклеотидних аналога. У деяких варіантах здійснення олігомер містить 3-8 нуклеотидних аналогів, наприклад, 6 або 7 нуклеотидних аналогів. У багато більш переважних варіантах здійснення щонайменше один з вказаних нуклеотидних аналогів являє собою замкнену нуклеїнову кислоту (LNA); наприклад, щонайменше 3, або щонайменше 4, або щонайменше 5, або щонайменше 6, або щонайменше 7, або 8 нуклеотидних аналогів можуть являти собою LNA. У деяких варіантах здійснення всі нуклеотидні аналоги можуть являти собою LNA. Потрібно визнати, що при згадці про переважний мотив нуклеотидної послідовності або нуклеотидної послідовності, яка складається тільки з нуклеотидів, олігомери за винаходом, які визначаються цією послідовністю, можуть містити відповідний нуклеотидний аналог замість одного або декількох нуклеотидів, представлених у вказаній послідовності, наприклад, ланки LNA або інші нуклеотидні аналоги, які підвищують стабільність дуплекса/Tm олігомеру/цільового дуплекса (тобто нуклеотидні аналоги, що збільшують афінність). У деяких варіантах здійснення будь-яка невідповідність між нуклеотидною послідовністю олігомеру і цільовою послідовністю переважно знаходиться в областях олігонуклеотиду, які розташовані за межами нуклеотидних аналогів, що збільшують афінність, наприклад, в Вобласті, згаданій в цьому документі, і/або в D-області, згаданій в цьому документі, і/або в 11 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 областях немодифікованих нуклеотидів, таких як ДНК, і/або в областях, які розташовані з 5'- або 3'-кінця безперервної нуклеотидної послідовності. Приклади такої модифікації нуклеотиду включають модифікацію залишку цукру для того, щоб надати 2'-заміщувальну групу або одержати місточкову (замкнена нуклеїнова кислота) структуру, яка збільшує афінність, а також може забезпечувати підвищену стійкість до нуклеаз. Переважним нуклеотидним аналогом є LNA, наприклад, окси-LNA (наприклад, бета-D-оксиLNA і альфа-L-окси-LNA), і/або аміно-LNA (наприклад, бета-D-аміно-LNA і альфа-L-аміно-LNA), і/або тіо-LNA (наприклад, бета-D-тіо-LNA і альфа-L-тіо-LNA), і/або ENA (наприклад, бета-D-ENA і альфа-L-ENA). Найбільш переважним є бета-D-окси-LNA. У деяких варіантах здійснення нуклеотидні аналоги, присутні в олігомері за винаходом (наприклад, в А- і С-областях, згаданих в цьому документі), незалежно вибрані, наприклад, із ланок 2'-O-алкіл-РНК, ланок 2'-аміно-ДНК, ланок 2'-фтор-ДНК, ланок LNA, ланок арабінонуклеїнової кислоти (ANA), ланок 2'-фтор-ANA, ланок HNA, ланок INA (інтеркалювальна нуклеїнова кислота, див. статтю Christensen, 2002. Nucl. Acids. Res. 2002 30: 4918-4925, яка, таким чином, включена як посилання) і ланок 2'-MOE. У деяких варіантах здійснення в олігомері за винаходом або його безперервній нуклеотидній послідовності присутній тільки один з вищевказаних типів нуклеотидних аналогів. У деяких варіантах здійснення нуклеотидні аналоги являють собою 2'-O-метоксіетил-РНК (2'MOE), мономери 2'-фтор-ДНК або нуклеотидні аналоги LNA, і по суті олігонуклеотид за винаходом може містити нуклеотидні аналоги, які незалежно вибрані з цих трьох типів аналогів, або він може містити тільки один тип аналога, вибраний з цих трьох типів. У деяких варіантах здійснення щонайменше один з вказаних нуклеотидних аналогів являє собою 2'-MOE-РНК, наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 нуклеотидних ланок являють собою 2'-MOE-РНК. У деяких варіантах здійснення щонайменше один з вказаних нуклеотидних аналогів являє собою 2'-фтор ДНК, наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 нуклеотидних ланок являють собою 2'-фтор-ДНК. У деяких варіантах здійснення олігомер за винаходом містить щонайменше одну ланку замкненої нуклеїнової кислоти (LNA), наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 або 8 ланок LNA, наприклад, 3-7 або від 4 до 8 ланок LNA або 3, 4, 5, 6 або 7 ланок LNA. У деяких варіантах здійснення всі нуклеотидні аналоги являють собою LNA. У деяких варіантах здійснення олігомер може містити як бета-D-окси-LNA, так і одну або декілька наступних ланок LNA: тіо-LNA, аміно-LNA, окси-LNA і/або ENA, в бета-D- або альфа-L-конфігурації, або їх поєднання. У деяких варіантах здійснення всі ланки цитозинової LNA являють собою 5'-метил-цитозин. У деяких варіантах здійснення винаходу олігомер може містити як ланки LNA, так і ланки ДНК. Переважно олігомер складається усього із 10-25 ланок LNA і ДНК, переважно з 10-20, навіть більш переважно з 1216. У деяких варіантах здійснення винаходу нуклеотидна послідовність олігомеру, наприклад, безперервна нуклеотидна послідовність, містить щонайменше одну ланку LNA, а як інших нуклеотидів вона містить ланки ДНК. У деяких варіантах здійснення олігомер містить тільки нуклеотидні аналоги у вигляді LNA і нуклеотиди, що зустрічаються в природі (такі як рибонуклеотиди або дезоксирибонуклеотиди, найбільш переважно дезоксирибонуклеотиди), необов'язково з модифікованими межнуклеотидними зв'язками, наприклад, з фосфоротіоатом. Термін "нуклеїнова основа" належить до залишку основи нуклеотиду і включає як такі, що зустрічаються в природі, так і варіанти, що не зустрічаються в природі. Таким чином, "нуклеїнова основа" включає не тільки відомі пуринові і піримідинові гетероцикли, але також їх гетероциклічні аналоги і таутомери. Приклади нуклеїнових основ включають, як необмежувальні приклади, аденін, гуанін, цитозин, тимідин, урацил, ксантин, гіпоксантин, 5-метилцитозин, ізоцитозин, псевдоізоцитозин, 5-бромурацил, 5-пропінілурацил, 6-амінопурин, 2-амінопурин, інозин, діамінопурин і 2-хлор-6амінопурин. У деяких варіантах здійснення щонайменше одна з нуклеїнових основ, присутніх в олігомері, є модифікованою нуклеїновою основою, яка вибрана з групи, що складається з 5метилцитозину, ізоцитозину, псевдоізоцитозину, 5-бромурацилу, 5-пропінілурацилу, 6амінопурину, 2-амінопурину, інозину, діамінопурину і 2-хлор-6-амінопурину. LNA Термін "LNA" належить до біциклічного нуклеотидного аналога, відомого як "замкнена нуклеїнова кислота". Він може належати до мономеру LNA або, при використанні у відношенні "LNA-олігонуклеотиду", до олігонуклеотиду, що містить один або декілька таких біциклічних нуклеотидних аналогів. LNA, що використовуються в сполуках олігонуклеотидів за винаходом, переважно мають структуру згідно із загальною формулою I 12 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 , N 6 6* де X вибраний з -O-, -S-, -N(R ), -C(R R )-; У вибраний з водню, необов'язково заміщеного C1-4-алкокси, необов'язково заміщеного C1-4алкілу, необов'язково заміщеного C1-4-ацилокси, нуклеїнових основ, ДНК-інтеркаляторів, фотохімічно активних груп, термохімічно активних груп, хелатуючих груп, репортерних груп і лігандів; Р означає положення радикала для міжнуклеозидного зв'язку з наступним мономером або 5'-кінцеву групу, такий межнуклеозидний зв'язок або 5'-кінцева група необов'язково містить 5 5*; замісник R або еквівалентно застосовний замісник R Р* означає міжнуклеозидний зв'язок з попереднім мономером або 3'-кінцеву групу; 4* 2* a b R і R разом означають бірадикал, що складається з 1-4 груп/атомів, вибраних з -C(R R )-, a b a a a -C(R )=С(R )-, -C(R )=N-, -O-, -Si(R )2-, -S-, -SO2-, -N(R )- і >С=Z, a a b де Z вибраний з -O-, -S - і -N(R )-, і R і R , кожний незалежно, вибраний з водню, необов'язково заміщеного C1-12-алкілу, необов'язково заміщеного C2-12-алкенілу, необов'язково заміщеного C2-12-алкінілу, гідрокси, C1-12-алкокси, C2-12-алкоксіалкілу, C2-12-алкенілокси, карбокси, C1-12-алкоксикарбонілу, C1-12-алкілкарбонілу, формілу, арилу, арилоксикарбонілу, арилокси, арилкарбонілу, гетероарилу, гетероарилоксикарбонілу, гетероарилокси, гетероарилкарбонілу, аміно, моно- і ді(C1-6-алкіл)аміно, карбамоїлу, моно- і ді(C1-6-алкіл)амінокарбонілу, аміно-C1-6алкіламінокарбонілу, моноі ді(C1-6-алкіл)аміно-C1-6-алкіламінокарбонілу, C1-6алкілкарбоніламіно, карбамідо, C1-6-алканоїлокси, сульфоно, C1-6-алкілсульфонілокси, нітро, азидо, сульфанілу, C1-6-алкілтіо, галогену, ДНК-інтеркаляторів, фотохімічно активних груп, термохімічно активних груп, хелатуючих груп, репортерних груп і лігандів, де арил і гетероарил a b можуть бути необов'язково заміщеними і де два гемінальні замісники R і R разом можуть 1* 2 3 означати необов'язково заміщений метилен (=CH2), і кожний з присутніх замісників R , R , R , 5 5* 6 6* R , R , R і R незалежно вибраний з водню, необов'язково заміщеного C1-12-алкілу, необов'язково заміщеного C2-12-алкенілу, необов'язково заміщеного C2-12-алкінілу, гідрокси, C1-12алкокси, C2-12-алкоксіалкілу, C2-12-алкенілокси, карбокси, C1-12-алкоксикарбонілу, C1-12алкілкарбонілу, формілу, арилу, арилоксикарбонілу, арилокси, арилкарбонілу, гетероарилу, гетероарилоксикарбонілу, гетероарилокси, гетероарилкарбонілу, аміно, моно- і ді(C1-6алкіл)аміно, карбамоїлу, моно- і ді(C1-6-алкіл)амінокарбонілу, аміно-C1-6-алкіламінокарбонілу, моно- і ді(C1-6-алкіл)аміно-C1-6-алкіламінокарбонілу, C1-6-алкілкарбоніламіно, карбамідо, C1-6алканоїлокси, сульфоно, C1-6-алкілсульфонілокси, нітро, азидо, сульфанілу, C1-6-алкілтіо, галогену, ДНК-інтеркаляторів, фотохімічно активних груп, термохімічно активних груп, хелатуючих груп, репортерних груп і лігандів, де арил і гетероарил можуть бути необов'язково заміщені і де два гемінальні замісники разом можуть означати оксо, тіоксо, іміно, або необов'язково заміщений метилен, або разом можуть утворювати спіро-бірадикал, що складається з ланцюга алкілену з 1-5 атомів вуглецю, який необов'язково уривається і/або N закінчується одним або декількома гетероатомами/групами, вибраними з -O-, -S - і -(NR )-, де N R вибраний з водню і C1-4-алкілу і де два сусідні (негемінальні) замісники можуть означати N* додатковий зв'язок, утворюють подвійний зв'язок; і R , коли він присутній в молекулі і не є частиною бірадикалу, вибраний з водню і C1-4-алкілу; і їх основних солей і кислотно-адитивних солей; 5* У деяких варіантах здійснення R вибраний з Н, -CH3, -CH2-CH3,- CH2-O-CH3, і -CH=CH2. 4* 2* a b У деяких варіантах здійснення R і R разом означають бірадикал, вибраний з -C(R R )-O-, a b c d a b c d e f a b c d a b c d C(R R )-С(R R )-O-, -C(R R )-С(R R )-С(R R )-O-, -C(R R )-O-C(R R )-, -C(R R )-O-C(R R )-O-, a b c d a b c d e f a b c d a b a b C(R R )-С(R R )-, -C(R R )-С(R R )-С(R R )-, -C(R )=С(R )-С(R R )-, -C(R R )-N(Rc)-, -C(R R )c d e a b c a b a b c d a b c d e С(R R )-N(R )-, -C(R R )-N(R )-O-, і -C(R R )-S-, -C(R R )-С(R R )-S-, де кожний з R , R , R , R , R f і R незалежно вибраний з водню, необов'язково заміщеного C1-12-алкілу, необов'язково заміщеного C2-12-алкенілу, необов'язково заміщеного C2-12-алкінілу, гідрокси, C1-12-алкокси, C2-12алкоксіалкілу, C2-12-алкенілокси, карбокси, C1-12-алкоксикарбонілу, C1-12-алкілкарбонілу, формілу, арилу, арилоксикарбонілу, арилокси, арилкарбонілу, гетероарилу, гетероарилоксикарбонілу, гетероарилокси, гетероарилкарбонілу, аміно, моно- і ди(C1-6-алкіл)аміно, карбамоїлу, моно- і 13 UA 100253 C2 5 10 15 ді(C1-6-алкіл)амінокарбонілу, аміно-C1-6-алкіламінокарбонілу, моно- і ді(C1-6-алкіл)аміно-C1-6алкіламінокарбонілу, C1-6-алкілкарбоніламіно, карбамідо, C1-6-алканоїлокси, сульфоно, C1-6алкілсульфонілокси, нітро, азидо, сульфанілу, C1-6-алкілтіо, галогену, ДНК-інтеркаляторів, фотохімічно активних груп, термохімічно активних груп, хелатуючих груп, репортерних груп і лігандів, де арил і гетероарил можуть бути необов'язково заміщені і де два гемінальні замісники a b R і R разом можуть означати необов'язково заміщений метилен (=CH2). 4* 2* У додатковому варіанті здійснення R і R разом означають бірадикал (двовалентну групу), вибрану з -CH2-O-, -CH2-S-, -CH2-NH-, -CH2-N(CH3)-, -CH2-CH2-O-, -CH2-CH(CH3)-, -CH2-CH2-S-, CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-, -CH2-CH2-CH(CH3)-, -CH=CH-CH2-, -CH2-O-CH2O-, -CH2-NH-O-, -CH2-N(CH3)-O-, -CH2-O-CH2-, -CH(CH3)-O-, -CH(CH2-O-CH3)-О-. Для всіх хіральних центрів асиметричні групи можуть знаходитися або в R-, або в Sорієнтації. Переважно, LNA, використана в олігомері за винаходом, містить щонайменше одну ланку LNA згідно з будь-якою з формул , H де Y являє собою -O-, -O-CH2-, -S-, -NH - або N(R ); Z і Z* незалежно вибрані з міжнуклеотидного зв'язку, кінцевої групи або захисної групи; В означає залишок природної або H неприродної нуклеотидної основи, і R вибраний з водню і C1-4-алкілу. Особливо переважні ланки LNA наведені на схемі 2: 20 25 Схема 2 Термін "тіо-LNA" включає замкнений нуклеотид, в якому Y у вищенаведеній загальній формулі вибраний з S або -CH2-S-. Тіо-LNA може знаходитися в бета-D- або альфа-Lконфігурації. Термін "аміно-LNA" належить до замкненого нуклеотиду, в якому Y у вищенаведеній загальній формулі вибраний з -N(Н)-, N(R)-, CH2-N(Н)-, і -CH2-N(R)-, де R вибраний з водню і C14-алкілу. Аміно-LNA може знаходитися в бета-D- або в альфа-L-конфігурації. 14 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Термін "окси-LNA" належить до замкненого нуклеотиду, в якому Y у вищенаведеній загальній формулі означає -O- або -CH2-O-. Окси-LNA може знаходитися в бета-D- або альфа-Lконфігурації. Термін "ENA" належить до замкненого нуклеотиду, в якому Y у вищенаведеній загальній формулі являє собою -CH2-O- (де атом кисню в групі -CH2-O- приєднаний до 2'-положення відносно основи В). У переважному варіанті здійснення LNA вибрана з бета-D-окси-LNA, альфа-L-окси-LNA, бета-D-аміно-LNA і бета-D-тіо-LNA, зокрема, являє собою бета-D-окси-LNA. Залучення РНКази Потрібно визнати, що олігомерна сполука може функціонувати за допомогою не опосередкованої РНКазами деградації цільової мРНК, а, наприклад, за допомогою стеричної перешкоди транслюванню або іншими способами, однак переважні олігомери за винаходом здатні залучати ендорибонуклеази (РНКази), такі як РНКаза Н. Переважно, щоб в олігомері або безперервної нуклеотидної послідовності містилася область щонайменше з 6, наприклад, щонайменше 7 послідовних нуклеотидних ланок, наприклад, щонайменше з 8 або щонайменше з 9 послідовних нуклеотидних ланок (залишків), включаючи 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 послідовних нуклеотидів, які при утворенні дуплекса з комплементарною цільовою РНК здатні залучати РНКази. Безперервною послідовністю, яка має здатність залучати РНКази, може бути В-область, яка згадується відносно олігомеру з пропусками, як описано в цьому документі. У деяких варіантах здійснення розмір безперервної послідовності, яка має здатність залучати РНКази, наприклад, В-область, може бути довшим, наприклад, складатися з 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 нуклеотидних ланок. У EP 1 222 309 надані способи визначення активності РНКази Н in vitro, які можна використовувати для визначення здатності залучати РНКазу Н. Олігомер вважають здатним залучати РНКазу Н, якщо в присутності комплементарної цільової РНК, РНКаза Н має початкову швидкість, виміряну в пмоль/л/хв, рівну щонайменше 1 %, наприклад, щонайменше 5 %, наприклад, щонайменше 10 % або менше ніж 20 % від початкової швидкості, встановленої з використанням еквівалентного олігонуклеотиду, що складається тільки з дезоксирибонуклеотидів, без 2'-замісників, з фосфоротіоатними зв'язуючими групами між всіма нуклеотидами в олігонуклеотиді, з використанням способу, наданого в прикладах 91-95 з EP 1 222 309. У деяких варіантах здійснення олігомер вважають по суті нездатним залучати РНКазу Н, якщо в присутності комплементарної цільової РНК і РНКази Н, початкова швидкість РНКази Н, виміряна в пмоль/л/хв, складає менше ніж 1 %, наприклад, менше ніж 5 %, наприклад, менше ніж 10 % або менше ніж 20 % від початкової швидкості, встановленої з використанням еквівалентного олігонуклеотиду, що складається тільки з дезоксирибонуклеотидів, без 2'замісників, з фосфоротіоатними зв'язуючими групами між всіма нуклеотидами в олігонуклеотиді, з використанням способу, наданого в прикладах 91-95 з EP 1 222 309. В інших варіантах здійснення олігомер вважають здатним залучати РНКазу Н, якщо в присутності комплементарної цільової РНК і РНКази Н, початкова швидкість РНКази Н, виміряна в пмоль/л/хв, складає щонайменше 20 %, наприклад, щонайменше 40 %, наприклад, щонайменше 60 %, наприклад, щонайменше 80 % від початкової швидкості, встановленої з використанням еквівалентного олігонуклеотиду, що складається тільки з дезоксирибонуклеотидів, без 2'-замісників, з фосфоротіоатними зв'язуючими групами між всіма нуклеотидами в олігонуклеотиді, з використанням способу, наданого в прикладах 91-95 з EP 1 222 309. В основному, при утворенні дуплекса з комплементарною цільовою РНК і олігомеру, здатного залучати РНКазу, визначена область олігомеру утворена послідовними нуклеотидними ланкими, які утворюють ДНК/РНК-подібний дуплекс з цільовою РНК і включають як дезоксирибонуклеотидні ланки, так і ланки LNA, які знаходяться в альфа-L-конфігурації, особливо переважно у вигляді альфа-L-окси LNA. Олігомер за винаходом може містити нуклеотидну послідовність, яка містить як нуклеотиди, так і нуклеотидні аналоги, і можуть бути в формі олігомеру з пропусками, олігомеру з головною конфігурацією або змішаним олігомеру. Олігомер з головною конфігурацією визначається безперервним фрагментом секвенування не залучаючих РНКазу нуклеотидних аналогів на 5'-кінці, за яким іде безперервний фрагмент секвенування з дезоксирибонуклеотидів або модифікованих нуклеотидних ланок, розпізнаваних і РНКазамі, що розщеплюються у напрямку до 3'-кінця (наприклад, щонайменше 7 таких нуклеотидів), і олігомер з хвостовою конфігурацією визначається безперервним фрагментом 15 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 секвенування з дезоксирибонуклеотидів або модифікованих нуклеотидів, розпізнаваних і РНКазою, що розщеплюються на 5'-кінці (наприклад, щонайменше з 7 таких нуклеотидів), за яким іде безперервний фрагмент секвенування не залучаючих РНКазу нуклеотидних аналогів у напрямку до 3'-кінця. Інші химери за винаходом, звані змішані олігомерами, складаються з послідовності дезоксирибонуклеотидів, що чергуються, або модифікованих нуклеотидів, розпізнаваних і розщеплюваних РНКазою, і не залучаючих РНКазу нуклеотидних аналогів. Деякі нуклеотидні аналоги також можуть мати здатність опосередковувати зв'язування і розщеплення РНКазою Н. Оскільки α-L-LNA певною мірою залучає активність РНКази Н, можуть бути потрібні менші пропуски дезоксирибонуклеотидів або модифікованих нуклеотидів, розпізнавані і РНКазою Н, що розщеплюються в конструкції олігомеру з пропусками, а в конструкцію змішаного олігомеру може бути введена велика гнучкість. Конструкція олігомеру з пропусками Переважно, олігомер за винаходом являє собою олігомер з пропусками (gapmer). Олігомер з пропусками являє собою олігомер, в якому міститься безперервний фрагмент секвенування з нуклеотидів, здатних залучати РНКазу (наприклад, РНКазу Н), наприклад, фрагмент щонайменше з 6 або 7 дезоксирибонуклеотидів, згаданий в цьому документі як В-область, де Вобласть фланкована з 5'- і 3'-кінця областями збільшуючих афінність нуклеотидних аналогів, наприклад, з 1-6 нуклеотидних аналогів, розташованих на 5'- і 3'-кінці безперервного фрагмента секвенування з нуклеотидів, які мають здатність залучати РНКазу, і ці області означають як А- і С-область, відповідно. Переважно олігомер з пропусками містить (полі)нуклеотидну послідовність формули (від 5'кінця до 3'-кінця) A-B-C або необов'язково A-B-C-D або D-A-B-C, де А-область (5'-область) містить (або складається з) щонайменше один нуклеотидний аналог, наприклад щонайменше одну ланку LNA, наприклад, 1-6 нуклеотидних аналогів, таких як ланки LNA, і В-область містить (або складається з) щонайменше п'ять суміжних нуклеотидів, які мають здатність залучати РНКазу (при утворенні дуплекса з комплементарною молекулою РНК, наприклад, з цільовою мРНК), таких як дезоксирибонуклеотиди, і С-область (3'-область) містить (або складається з) щонайменше один нуклеотидний аналог, наприклад, щонайменше одну ланку LNA, наприклад, 1-6 нуклеотидних аналогів, таких як ланки LNA, і D-область, якщо вона присутня, складається з або містить 1, 2 або 3 нуклеотидні ланки, такі як дезоксирибонуклеотиди. У деяких варіантах здійснення А-область складається з 1, 2, 3, 4, 5 або 6 нуклеотидних аналогів, таких як ланки LNA, наприклад, з 2-5 нуклеотидних аналогів, наприклад, із 2-5 ланок LNA, наприклад, з 3 або 4 нуклеотидних аналогів, наприклад, з 3 або 4 ланок LNA; і/або Собласть складається з 1, 2, 3, 4, 5 або 6 нуклеотидних аналогів, таких як ланки LNA, наприклад, з 2-5 нуклеотидних аналогів, наприклад, із 2-5 ланок LNA, наприклад, з 3 або 4 нуклеотидних аналогів, наприклад, з 3 або 4 ланок LNA. У деяких варіантах здійснення В-область містить (або складається з) 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 або 12 суміжних нуклеотидів, які мають здатність залучати РНКазу, або з 6-10, або з 7-9, наприклад, з 8 суміжних нуклеотидів, які мають здатність залучати РНКазу. У деяких варіантах здійснення В-область містить (або складається з) щонайменше одну дезоксирибонуклеотидну ланку, наприклад, 1-12 дезоксирибонуклеотидних ланок, переважно 4-12 дезоксирибонуклеотидних ланок, більш переважно 6-10 дезоксирибонуклеотидних ланок, наприклад, 7-10 дезоксирибонуклеотидних ланок, найбільш переважно 8, 9 або 10 дезоксирибонуклеотидних ланок. У деяких варіантах здійснення А-область складається з 3 або 4 нуклеотидних аналогів, таких як LNA, В-область складається з 7, 8, 9 або 10 дезоксирибонуклеотидних ланок і Собласть складається з 3 або 4 нуклеотидних аналогів, таких як LNA. Така конструкція включає (A-B-C) 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 3-9-3, 3-9-4, 4-9-3, 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 3-7-3, 3-7-4, 4-7-3 і може додатково містити D-область, в якій може міститися 1 або 2 нуклеотидні ланки, наприклад, дезоксирибонуклеотидні ланки. Додаткові конструкції олігомерів з пропусками розкриті в WO2004/046160 і, таким чином, включені як посилання. Попередня заявка США 60/977409, включена таким чином як посилання, належить до "коротких" олігомерів з пропусками, які в деяких варіантах здійснення можуть являти собою олігомери з пропусками за даним винаходом. У деяких варіантах здійснення олігомер складається з безперервної нуклеотидної послідовності загальною довжиною 10, 11, 12, 13 або 14 нуклеотидних ланок, де безперервна нуклеотидна послідовність описується формулою (в напрямку 5'-3') A-B-C або необов'язково AB-C-D або D-A-B-C, де А складається з 1, 2 або 3 ланок нуклеотидних аналогів, таких як ланки LNA; В складається з 7, 8 або 9 суміжних нуклеотидних ланок, які мають здатність залучати 16 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 РНКазу при утворенні дуплекса з комплементарною молекулою РНК (наприклад, з цільовою мРНК), і С складається з 1, 2 або 3 ланок нуклеотидних аналогів, таких як ланки LNA. У випадку наявності, D складається з однієї дезоксирибонуклеотидної ланки. У деяких варіантах здійснення А складається з 1 ланки LNA. У деяких варіантах здійснення А складається із 2 ланок LNA. У деяких варіантах здійснення А складається із 3 ланок LNA. У деяких варіантах здійснення С складається з 1 ланки LNA. У деяких варіантах здійснення С складається із 2 ланок LNA. У деяких варіантах здійснення С складається із 3 ланок LNA. У деяких варіантах здійснення В складається з 7 нуклеотидних ланок. У деяких варіантах здійснення В складається з 8 нуклеотидних ланок. У деяких варіантах здійснення В складається з 9 нуклеотидних ланок. У деяких варіантах здійснення В складається з 1-9 дезоксирибонуклеотидних ланок, наприклад, з 2, 3, 4, 5, 6, 7 або 8 дезоксирибонуклеотидних ланок. У деяких варіантах здійснення В складається з дезоксирибонуклеотидних ланок. У деяких варіантах здійснення В містить щонайменше одну ланку LNA, яка знаходиться в альфаL-конфігурації, наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або 9 ланок LNA в альфа-L-конфігурації. У деяких варіантах здійснення В містить щонайменше одну ланку альфа-L-окси LNA або в них всі ланки LNA, що знаходяться в альфа-L-конфігурації, являють собою ланки альфа-L-окси LNA. У деяких варіантах здійснення кількість нуклеотидів, представлених в A-B-C вибрана з групи, що складається із (ланки нуклеотидних аналогів - В-область - ланки нуклеотидних аналогів): 1-8-1, 1-8-2, 2-8-1, 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-1, 4-8-2, 1-8-4, 2-8-4 або 1-9-1, 1-9-2, 2-9-1, 2-9-2, 2-9-3, 3-9-2, 1-9-3, 3-9-1, 4-9-1, 1-9-4 або 1-10-1, 1-10-2, 2-10-1, 2-10-2, 1-10-3, 3-10-1. У деяких варіантах здійснення кількість нуклеотидів в A-B-C вибрана з групи, що складається з 2-7-1, 1-72, 2-7-2, 3-7-3, 2-7-3, 3-7-2, 3-7-4 і 4-7-3. У деяких варіантах здійснення кожна з А і С складається з двох ланок LNA, і В складається з 8 або 9 нуклеотидних ланок, переважно дезоксирибонуклеотидних ланок. Межнуклеотидні зв'язки Терміни "зв'язуюча група" або "міжнуклеотидний зв'язок" призначені для позначення групи, яка здатна ковалентно зв'язувати разом два нуклеотиди, два нуклеотидні аналоги і нуклеотид і нуклеотидний аналог і т.д. Конкретні і переважні приклади включають фосфатні групи і фосфоротіоатні групи. Нуклеотиди олігомеру за винаходом або їх безперервні нуклеотидні послідовності з'єднані разом за допомогою зв'язуючих груп. Відповідно, кожний нуклеотид з'єднаний з 3'-суміжним нуклеотидом через зв'язуючу групу. Придатні межнуклеотидні зв'язки включають ті, що перераховані в PCT/DK2006/000512, наприклад, межнуклеотидні зв'язки, перераховані в першому параграфі сторінки 34 в PCT/DK2006/000512 (який включений таким чином як посилання). У деяких варіантах здійснення переважно перетворити звичайний фосфодіефір міжнуклеотидного зв'язку на форму, більш стійку до дії нуклеаз, наприклад, на фосфоротіоат або боранофосфат; ці два типи зв'язку розщеплюються РНКазою Н, а також роблять можливим зниження експресії цільового гена за допомогою інгібування антисмисловими олігонуклеотидами. Можуть бути переважні надані в цьому документі відповідні межнуклеотидні зв'язки, що містять сірку (S). Фосфоротіоатні межнуклеотидні зв'язки також переважні, особливо для області пропуску (В) в олігомерах з пропусками. Фосфоротіоатні зв'язки також можуть бути використані для фланкуючих областей (А і С, і для з'єднання А або С з D, і в D-області, у разі необхідності). Однак області А, В і С можуть містити межнуклеотидні зв'язки, відмінні від фосфоротіоатних, наприклад, фосфодіефірні зв'язки, особливо, наприклад, при захисті міжнуклеотидних зв'язків в областях А і С від розщеплення ендонуклеазами за допомогою нуклеотидних аналогів, наприклад, коли області А і С містять LNA нуклеотиди. Межнуклеотидні зв'язки в олігомері можуть бути фосфодіефірними, фосфоротіоатними або боранофосфатними для того, щоб зробити можливим розщеплення цільової РНК РНКазою Н. Фосфоротіоатний зв'язок переважний внаслідок поліпшеної стійкості до нуклеаз і інших причин, таких як простота виробництва. В одному з аспектів олігомеру за винаходом, нуклеотиди і/або нуклеотидні аналоги з'єднані один з одним за допомогою фосфоротіоатних груп. Визнано, що включення фосфодіефірних зв'язків, наприклад, одного або двох таких зв'язків, в олігомер, що містить тільки фосфоротіоатні зв'язки, особливо між або поряд зі ланками нуклеотидних аналогів (в основному в А- і/або С-області) може змінити біодоступність і/або біорозподілення олігомеру - див. WO 2008/053314, який включений таким чином як посилання. 17 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У деяких варіантах здійснення, наприклад, у вказаних вище варіантах здійснення, всі відповідні і конкретно не вказані зв'язуючі групи, що залишилися являють собою фосфодіефірні або фосфоротіоатні групи або їх суміш. У деяких варіантах здійснення всі межнуклеотидні зв'язуючі групи являють собою фосфоротіоатні групи. Відносно конкретних олігонуклеотидних послідовностей олігомерів з пропусками, наприклад, представлених в цьому документі, потрібно розуміти, що в різних варіантах здійснення, коли зв'язки являють собою фосфоротіоатні зв'язки, можна використовувати альтернативні зв'язки, наприклад, зв'язки, що описуються в цьому документі, такі як фосфатні (фосфодіефірні) зв'язки, особливо для з'єднання ланок нуклеотидних аналогів, таких як LNA. Подібним чином, відносно конкретних олігонуклеотидних послідовностей олігомерів з пропусками, наприклад, наданих в цьому документі, коли залишки С помічені як 5'метильований цитозин, в різних варіантах здійснення один або декілька Cs присутніх в олігомері, можуть бути не модифікованими залишками С. Олігомерні сполуки Олігомери за винаходом можуть бути вибрані, наприклад, з групи, що складається з SEQ ID №№ 22-43 і 44-80. Кон'югати У контексті даного розкриття термін "кон'югат" означає гетерогенну молекулу, утворену за допомогою ковалентного приєднання ("кон'югування") олігомеру, який описаний в цьому документі, з однією або декількома ненуклеотидними або неполінуклеотидними молекулами. Приклади ненуклеотидних або неполінуклеотидних молекул включають макромолекулярні речовини, такі як білки, ланцюги жирних кислот, залишки цукру, глікопротеїни, полімери або їх поєднання. В основному, білки можуть являти собою антитіла проти цільового білка. До типових полімерів належить поліетиленгліколь. Отже, в різних варіантах здійснення олігомер за винаходом може містити як полінуклеотидну область, яка в основному складається з безперервної послідовності нуклеотидів, так і додаткову ненуклеотидну область. Відносно олігомеру за винаходом, що складається з безперервної нуклеотидної послідовності, сполука може містити ненуклеотидні компоненти, наприклад, кон'югований компонент. У різних варіантах здійснення винаходу олігомерна сполука з'єднана з лігандами/кон'югатами, які можна використовувати, наприклад, для збільшення захоплення олігомерних сполук клітинами. У WO2007/031091 надані відповідні ліганди і кон'югати, які включені, таким чином, як посилання. Винахід також належить до кон'югату, що містить сполуки за винаходом, який описаний в цьому документі, і щонайменше один ненуклеотидний або неполінуклеотидний фрагмент, ковалентно зв'язаний з вказаною сполукою. Отже, в різних варіантах здійснення, в яких сполука за винаходом складається з конкретної нуклеїнової кислоти або нуклеотидної послідовності, які розкриті в цьому документі, сполука також може містити щонайменше один ненуклеотидний або неполінуклеотидний фрагмент (наприклад, що не містить один або декілька нуклеотидів або нуклеотидних аналогів), ковалентно зв'язаний з вказаною сполукою. Кон'югування (з кон'югованою молекулою) може збільшити активність, розподіл в клітині або захоплення олігомеру за винаходом клітиною. Такі молекули включають, як необмежувальні приклади, антитіла, поліпептиди, молекули ліпідів, наприклад, молекули холестерину, холеву кислоту, тіоефіри, наприклад, гексил-s-тритилтіол, тіохолестерин, аліфатичні ланцюгі, наприклад, додекандіолові або ундецилові залишки, фосфоліпіди, наприклад, ди-гексадецилрац-гліцерин або триетиламоній 1,2-ди-o-гексадецил-рац-гліцеро-3-h-фосфонат, поліамінний або поліетиленгліколевий ланцюг, адамантан-оцтову кислоту, пальмітилову молекулу, октадециламінову або гексиламінокарбоніл-оксихолестеринову молекулу. Олігомери за винаходом також можуть бути кон'юговані, щоб активувати лікарську речовину, наприклад, аспірин, ібупрофен, сульфамідний лікарський засіб, протидіабетичний засіб, антибактеріальний засіб або антибіотик. У певних варіантах здійснення кон'югований фрагмент являє собою стерин, наприклад, холестерин. У різних варіантах здійснення кон'югований фрагмент містить (або складається з) позитивно зарядженого полімеру, наприклад, позитивно зарядженого пептиду довжиною, наприклад, 1-50, наприклад, 2-20, наприклад, 3-10 амінокислотних залишків і/або поліалкіленоксид, такий як поліетиленгліколь (PEG) або поліпропиленгліколь - див. WO 2008/034123, включений, таким чином, як посилання. Відповідно, позитивно заряджений полімер, такий як поліалкіленоксид, можна приєднати до олігомеру за винаходом через лінкер, такий як лінкер, що вивільняється, описаний WO 2008/034123. 18 UA 100253 C2 Як приклад, наступні кон'юговані молекули можна використовувати в кон'югатах за винаходом: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Активовані олігомери Термін "активований олігомер", як застосовують в цьому документі, належить до олігомеру за винаходом, який ковалентно зв'язаний (тобто функціоналізований) щонайменше з одним функціональним фрагментом, який дозволяє ковалентно зв'язати олігомер з одним або декількома кон'югованими фрагментами, тобто з молекулами, які самі по собі не є нуклеїновими кислотами або мономерами, для одержання кон'югатів, описаних в цьому документі. У основному функціональний фрагмент буде містити хімічну групу, яка здатна ковалентно зв'язуватися з олігомером, наприклад, через 3'-гідроксильну групу або позациклічну NH2-групу аденінової основи, спейсер, який переважно є гідрофільним, і кінцеву групу, яка здатна зв'язуватися з кон'югованим фрагментом (наприклад, аміно-, сульфгідрильною або гідроксильною групою). У деяких варіантах здійснення ця кінцева група не захищена, наприклад, являє собою NH2-групу. В інших варіантах здійснення кінцева група захищена, наприклад, за допомогою будь-якої придатної захисної групи, наприклад, описаної в "Protective Groups in Organic Synthesis" авторами Theodora W Greene і Peter GM Wuts, 3-е видання (John Wiley & Sons, 1999). Приклади придатних гідроксильних захисних груп включають ефір, такий як ацетатний ефір, аралкільні групи, такий як бензил, дифенілметил або трифенілметил і тертрагідропіраніл. Приклади придатних амінних захисних груп включають бензил, альфаметилбензил, дифенілметил, трифенілметил, бензилоксикарбоніл, трет-бутоксикарбоніл і ацильні групи, такі як трихлорацетил або трифторацетил. У деяких варіантах здійснення функціональний фрагмент є самовідщеплюваним. В інших варіантах здійснення функціональний фрагмент є біоруйнованим. Див. наприклад, патент США № 7087229, який в повному обсязі включений в цей документ як посилання. У деяких варіантах здійснення олігомери за винаходом функціоналізовані за 5'-кінцем для того, щоб зробити можливим ковалентне приєднання кон'югованого фрагмента до 5'-кінця олігомеру. В інших варіантах здійснення олігомери за винаходом можуть бути функціоналізовані за 3'-кінцем. В інших варіантах здійснення олігомери за винаходом можуть бути функціоналізовані протягом кістяка або за гетероциклічним залишком основи. В інших варіантах здійснення олігомери за винаходом можуть бути функціоналізовані більше ніж за одним положенням, які незалежно вибрані з 5'-кінця, 3'-кінця, кістяка і основи. У деяких варіантах здійснення активовані олігомери за винаходом синтезовані за допомогою вбудовування в процесі синтезу одного або декількох мономерів, які ковалентно з'єднані з функціональним фрагментом. В інших варіантах здійснення активовані олігомери за винаходом синтезовані з нефункціоналізованих мономерів, і олігомер функціоналізують після завершення синтезу. У деяких варіантах здійснення олігомери функціоналізовані просторовоускладненим складним ефіром, що містить аміноалкільний лінкер, де алкільна частина має формулу (CH2)W , де w являє собою ціле число в діапазоні від 1 до 10, переважно приблизно 6, де алкільна частина алкіламінної групи може являти собою розгалужений або нерозгалужений ланцюг, і де функціональна група приєднана до олігомеру через складноефірну групу (-O-C(O)(CH2)wSH). В інших варіантах здійснення олігомери функціоналізовані просторово-ускладненим складним ефіром, що містить (CH2)w-сульфгідрильний (SH) лінкер, де w являє собою ціле число в діапазоні від 1 до 10, переважно приблизно 6, де алкільна частина алкіламінної групи може являти собою розгалужений або нерозгалужений ланцюг, і де функціональна група приєднана до олігомеру через ефірну групу (-O-C(O)-(CH2)wSH). У деяких варіантах здійснення активовані сульфгідрильною групою олігонуклеотиди кон'юговані з полімерними фрагментами, такими як поліетиленгліколь або пептиди (за допомогою утворення дисульфідного зв'язку). Активовані олігомери, що містять просторово-ускладнений складний ефір, як описано вище, можна синтезувати будь-яким відомим в даній області способом і, зокрема, способами, 19 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 розкритими в публікації PCT WO 2008/034122 і в її прикладах, і ця публікація включена в цей документ як посилання в повному обсязі. В інших варіантах здійснення олігомери за винаходом функціоналізовані за допомогою введення сульфгідрильних, амінних або гідроксильних груп в олігомер за допомогою функціоналізуючого реактиву по суті, як описано в патентах США №№ 4962029 і 4914210, тобто за допомогою по суті лінійного реактиву, що містить фосфорамідитну групу на одному кінці, з'єднану через гідрофільний спейсерний ланцюг з протилежним кінцем, який містить захищену або незахищену сульфгідрильну, амінну або гідроксильну групу. Такі реактиви спочатку реагують з гідроксильними групами в олігомері. У деяких варіантах здійснення такі активовані олігомери містять функціоналізуючий реактив, з'єднаний з 5'-гідроксильною групою олігомеру. В інших варіантах здійснення активовані олігомери містять функціоналізуючий реактив, з'єднаний з 3'-гідроксильною групою. В інших варіантах здійснення активовані олігомери за винаходом містять функціоналізуючий реактив, з'єднаний з гідроксильною групою на кістяку олігомеру. У додаткових варіантах здійснення олігомер за винаходом функціоналізований більше ніж одним функціоналізуючим реактивом, як описано в патентах США №№ 4962029 і 4914210, які включені в цей документ як посилання в повному обсязі. Способи синтезу таких функціоналізуючих реактивів і вбудовування їх в мономери або олігомери розкриті в патентах США №№ 4962029 і 4914210. У деяких варіантах здійснення 5'-кінець зв'язаного з твердою фазою олігомеру функціоналізований дієнільним фосфорамідитним похідним, з подальшим кон'югуванням олігомеру зі знятим захистом, наприклад, з амінокислотою або пептидом за допомогою реакції циклоприєднання Дільса-Альдера. У різних варіантах здійснення вбудовування в олігомер мономерів, що містять 2'модифіковані цукри, наприклад, 2'-заміщені карбаматом цукри або цукор 2'-(O-пентил-Nфталімідо)дезоксирибозу, полегшує ковалентне приєднання кон'югованих фрагментів до цукру олігомеру. В інших варіантах здійснення олігомер з аміновмісним лінкером в 2'-положенні одного або декількох мономерів, одержують з використанням такого реактиву, наприклад, як 5'диметокситритил-2'-O-(е-фталімідиламінопентил)-2'-дезоксіаденозин-3'-N, N-діізопропілціаноетоксифосфорамідит. Див., наприклад, Manoharan, et al., Tetrahedron Letters, 1991, 34, 7171. У додаткових варіантах здійснення олігомери за винаходом можуть містити аміновмісні функціональні фрагменти на нуклеїновій основі, в тому числі на N6 пуринових аміногрупах, на позациклічних N2 гуаніну або на N в 4 або 5 положенні в цитозині. У різних варіантах здійснення така функціоналізація може досягатися при використанні комерційного реактиву, який вже функціоналізований в синтезі олігомеру. Комерційно доступні деякі функціональні фрагменти, наприклад, гетеробіфункціональні і гомобіфункціональні зв'язуючі фрагменти доступні в Pierce Co. (Rockford, III.). Інші комерційно доступні зв'язуючі групи являють собою 5'-аміномодифікатори C6 і 3'-аміномодифікуючі реактиви, які доступні в Glen Research Corporation (Sterling, Va.). 5'-аміномодифікатор C6 також доступний в ABI (Applied Biosystems Inc., Foster City, Calif.) під назвою Aminolink-2, а 3'аміномодифікатор також доступний в Clontech Laboratories Inc. (Palo Alto, Calif.). Композиції Олігомер за винаходом можна використовувати в фармацевтичних складах і композиціях. Відповідно, такі композиції містять фармацевтично прийнятні розріджувач, носій, сіль або ад'ювант. У PCT/DK2006/000512 надані відповідні і переважні фармацевтично прийнятні розріджувач, носій і ад'юванти, які включені, таким чином, у вигляді посилання. Відповідне дозування, склади, шляхи введення, композиції, лікарські форми, комбінації з іншими терапевтичними засобами, склади з пролікарськими засобами також надані в PCT/DK2006/000512, які також включені, таким чином, у вигляді посилання. Застосування Олігомери за винаходом можна використовувати як реактиви для досліджень, наприклад, для діагностики, терапії і профілактик. У дослідженнях такі олігомери можна використовувати для того, щоб вибірково інгібувати синтез білка андрогенного рецептора (в основному, за допомогою руйнування або інгібування мРНК, запобігаючи, таким чином, утворенню білка) в клітинах і у експериментальних тварин, таким чином, полегшуючи функціональний аналіз мішені або оцінку її придатності як мішені для терапевтичного впливу. У діагностиці олігомери можна використовувати для виявлення і кількісного визначення експресії андрогенного рецептора в клітинах і тканинах за допомогою "нозерн»-блоттинга, гібридизації in situ або схожих способів. 20 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 При терапії тварини або людини з підозрою на захворювання або розлад, який можна лікувати модулюванням експресії андрогенного рецептора, лікують введенням антисмислових сполук відповідно до даного винаходу у відповідній ефективній кількості. Додатково надані способи лікування ссавця, наприклад, лікування людини з підозрою або зі схильністю до захворювання або стану, пов'язаного з експресією андрогенного рецептора, за допомогою введення терапевтично або профілактично ефективної кількості одного або декількох олігомерів або композицій за винаходом. Фармацевтичну композицію за винаходом можна використовувати для лікування станів, пов'язаних з аномальними рівнями андрогенного рецептора, наприклад, раку, такого як рак передстатевої залози або молочної залози. Фармацевтичну композицію за винаходом можна використовувати для лікування алопеції, доброякісної гіперплазії передстатевої залози, спінальної і м'язової атрофії і хвороби Кеннеді або поліглутамінового захворювання. Потрібно визнати, що згадане в цьому документі лікування може бути профілактичним. Відповідне дозування, склади, шляхи введення, композиції, лікарські форми, комбінації з іншим терапевтичними засобами, склади з пролікарськими засобами також надані в PCT/DK2006/000512 і включені, таким чином, у вигляді посилання, хоча потрібно визнати, що ті аспекти з PCT/DK2006/000512, які вибірково застосовні тільки до лікування раку, можуть не відповідати терапевтичним/фармацевтичним композиціям і способам за даним винаходом. Винахід також належить до фармацевтичної композиції, що містить сполуку або кон'югат, описану в цьому документі, або кон'югат і фармацевтично прийнятний розріджувач, носій або ад'ювант. У PCT/DK2006/000512 надані відповідні і переважні фармацевтично прийнятні розріджувач, носій і ад'юванти, які включені, таким чином, у вигляді посилання. Олігомер, кон'югат або фармацевтичну композицію за винаходом в основному вводять в ефективній кількості. Винахід також належить до використання описаної сполуки або кон'югату за винаходом для виробництва лікарського засобу для лікування розладу, згаданого в цьому документі, або в способі лікування розладу, згаданого в цьому документі. Винахід також належить до способу лікування розладу, згаданого в цьому документі, вказаний спосіб включає введення сполуки за винаходом, описаної в цьому документі, і/або кон'югату за винаходом, і/або фармацевтичній композиції за винаходом потребуючому цього пацієнту. Фармацевтичні композиції, що містять більше ніж один активний інгредієнт Фармацевтична композиція за винаходом може додатково містити інші активні інгредієнти, включаючи ті, для яких вказано, що їх можна використовувати для лікування раку, наприклад, раку передстатевої залози або раку молочної залози, особливо засоби, що використовуються в традиційній антиандрогенній терапії. Одним з таких класів сполук є нестероїдні антиандрогени (НСАА), які блокують зв'язування андрогенів з активним центром рецептора. Аналоги релізинг-гормону лютеїнізувального гормону (АРГЛГ) пригнічують утворення андрогенів в тестикулах до рівнів кастратів. НСАА, такі як Касодекс, при використанні з АРГЛГ у вигляді частини комбінованої андрогенблокуючої терапії, допомагають інгібувати ріст злоякісних клітин в простаті. В одному з варіантів здійснення даний винахід належить до комбінованої андроген-блокуючої терапії, яка відрізняється тим, що ця терапія включає введення фармацевтичної композиції за винаходом і засобу з класу НСАА і/або АРГЛГ, який можна вводити до, під час або після введення фармацевтичної композиції за винаходом. Винахід також належить до набору з декількох частин, де одна частина містить олігомер, кон'югат і/або фармацевтичну композицію за винаходом, а інша частина містить нестероїдний антиандроген і/або аналог релізинг-гормону лютеїнізувального гормону. Тому передбачено, що набір з декількох частин можна використовувати в способі лікування, згаданому в цьому документі, де спосіб включає в себе введення як однієї частини, так і іншої частини, або одночасно або по черзі. Медичні покази Олігомери і інші композиції за винаходом можна використовувати для лікування станів, пов'язаних з надмірною експресією або експресією мутантної версії АР. Провідні дослідники в даній галузі передбачають, що фармацевтичне втручання в АР призведе до додаткових можливостей лікування раку передстатевої залози або раку молочної залози. Додаткові стани, які можуть бути пов'язані з аномальними рівнями андрогенного рецептора і які, відповідно, можна лікувати за допомогою композицій, кон'югатів і сполук за винаходом, 21 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 включають розлади, вибрані з групи, що складається з раку, наприклад, раку молочної залози або раку передстатевої залози, алопеції, доброякісної гіперплазії передстатевої залози, спінальної і м'язової атрофії, хвороби Кеннеді і поліглутамінового захворювання. В одному з варіантів здійснення стану, які можуть бути пов'язані з аномальними рівнями андрогенного рецептора і які, відповідно, можна лікувати за допомогою композицій, кон'югатів і сполук за винаходом, включають розлади, вибрані з групи, що складається з раку, наприклад, раку молочної залози або раку передстатевої залози. Винахід додатково належить до використання сполуки за винаходом у виробництві лікарського засобу для лікування будь-яких або всіх станів, що описуються в цьому документі. У загальному випадку встановлено, що один аспект за винаходом належить до способу лікування ссавця, який страждає від або сприйнятливий до станів, пов'язаних з аномальними рівнями андрогенного рецептора, що включає введення ссавцеві терапевтично ефективної кількості олігомеру, націленої на АР і що містить одну або декілька ланок LNA. Представляючий інтерес аспект за винаходом належить до використання олігомеру у вигляді сполуки, як визначено в цьому документі, або олігомеру у вигляді кон'югата, як визначено в цьому документі, для одержання лікарського засобу для лікування стану згідно з вищезгаданим. Способи за винаходом переважно застосовують для лікування або профілактики захворювань,викликаних аномальними рівнями андрогенного рецептора. Крім того, винахід, що описується в цьому документі, належить до способу попередження або лікування захворювання, який включає введення терапевтично ефективної кількості олігомеру, що модулює андрогенний рецептор, людині, яка потребує такого лікування. Винахід додатково належить до застосування короткочасного введення олігонуклеотидної сполуки, що модулює андрогенний рецептор. В одному з варіантів здійснення винаходу олігомер (сполука) з'єднаний з лігандом або кон'югатом. Наприклад, для того, щоб збільшити захоплення олігомеру клітинами, в деяких варіантах здійснення кон'югатом є стерин, наприклад, холестерин. Олігомери за винаходом також можуть бути кон'юговані для того, щоб активувати лікарські речовини, наприклад, аспірин, ібупрофен, сульфаніламідні лікарські засоби, протидіабетичні, антибактеріальні засоби або антибіотики. Альтернативно встановлено, що, крім того, винахід належить до способу лікування аномальних рівнів андрогенного рецептора, вказаний спосіб включає введення олігомеру за винаходом, або кон'югату за винаходом або фармацевтичній композиції за винаходом потребуючому цього пацієнту і додатково включає введення додаткового хіміотерапевтичного засобу. Вказане додаткове введення може являти собою таке введення, при якому додатковий хіміотерапевтичний засіб, кон'югований із сполукою за винаходом, представлений в фармацевтичній композиції або вводиться у вигляді окремого складу. Винахід також належить до олігомеру, композиції або кон'югату, як визначено в цьому документі, для застосування як лікарського засобу. Винахід додатково належить до застосування сполуки, композиції або кон'югата, як визначено в цьому документі, у виробництві лікарського засобу для лікування аномальних рівнів андрогенного рецептора або експресії мутантних форм АР (наприклад, алельних варіантів, таких як ті, які пов'язані з одним із захворювань, згаданих в цьому документі). Крім того, винахід належить до способу лікування суб'єкта, страждаючого від захворювання або стану, вибраного з раку, наприклад, раку молочної залози або раку передстатевої залози, алопеції, доброякісної гіперплазії передстатевої залози, спінальної і м'язової атрофії, хвороби Кеннеді і поліглутамінового захворювання, спосіб включає стадію введення фармацевтичної композиції, як визначено в цьому документі, потребуючому цього суб'єкту. Крім того, даний винахід належить до способів регулювання генів і відповідних їм мРНК і білкових продуктів, які модулюються за допомогою андрогенного рецептора (тобто мішеней андрогенного рецептора), наприклад, генів, мРНК і/або білків, вибраних з групи, що складається з протеїнкінази С дельта (PRKCD), глутатіон S-трансферази тета 2 (GSTT2), 3 члени V підродини потенційних катіонних каналів тимчасових рецепторів (TRPV3), піролін-5карбоксилатредуктази 1 (PYCR1) або орнітинамінотрансферази (OAT). Залежно від мішені андрогенного рецептора, модулювання може призводити до збільшення експресії або активності мішені андрогенного рецептора або зниження експресії або активності. Варіанти здійснення Наступні варіанти здійснення даного винаходу можна використовувати в поєднанні з іншими варіантами здійснення, що описуються в цьому документі. 22 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1. Олігомер довжиною 10-50 нуклеїнових основ, який містить безперервну послідовність нуклеїнових основ загальною довжиною 10-50 нуклеїнових основ, де вказана безперервна послідовність нуклеїнових основ щонайменше на 80 % гомологічна відповідній області нуклеїнової кислоти, яка кодує андрогенний рецептор ссавця. 2. Олігомер згідно з варіантом здійснення 1, де вказаний олігомер містить щонайменше одну ланку LNA. 3. Олігомер згідно з варіантом здійснення 1 або 2, де безперервна послідовність нуклеїнових основ містить не більше ніж 3, наприклад, не більше ніж 2 невідповідності відносно відповідної області нуклеїнової кислоти, яка кодує андрогенний рецептор ссавця. 4. Олігомер згідно з варіантом здійснення 3, де вказана безперервна послідовність нуклеїнових основ містить не більше ніж одну невідповідність відносно відповідної області нуклеїнової кислоти, що кодує андрогенний рецептор ссавця. 5. Олігомер згідно з варіантом здійснення 4, де вказана безперервна послідовність нуклеїнових основ не містить невідповідностей (тобто комплементарна) відносно відповідної області нуклеїнової кислоти, що кодує андрогенний рецептор ссавця. 6. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-5, де послідовність нуклеїнових основ олігомеру складається з безперервної послідовності нуклеїнових основ. 7. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-6, де нуклеїнова кислота, яка кодує андрогенний рецептор ссавця, являє собою нуклеотидну послідовність андрогенного рецептора людини, наприклад, SEQ ID № 1, або її алельні варіанти, що зустрічаються в природі. 8. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-7, де безперервна послідовність нуклеїнових основ комплементарна відповідній області як послідовності нуклеїнової кислоти андрогенного рецептора людини, так і послідовності нуклеїнової кислоти андрогенного рецептора ссавця, що не є людиною, наприклад, послідовності нуклеїнової кислоти андрогенного рецептора миші. 9. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-8, де безперервна послідовність нуклеїнових основ містить безперервну підпослідовність щонайменше із 7 залишків нуклеїнових основ, яка при утворенні дуплекса з комплементарною цільовою РНК андрогенного рецептора, має здатність залучати РНКазу Н. 10. Олігомер згідно з варіантом здійснення 9, де безперервна послідовність нуклеїнових основ містить безперервну підпослідовність щонайменше з 8, щонайменше з 9 або щонайменше із 10 залишків нуклеїнових основ, яка при утворенні дуплекса з комплементарною цільовою РНК андрогенного рецептора, має здатність залучати РНКазу Н. 11. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 9 або 10, де вказана безперервна підпослідовність довжиною щонайменше 9 або щонайменше 10 нуклеїнових основ, наприклад, довжиною щонайменше 12 нуклеїнових основ або щонайменше 14 нуклеїнових основ, наприклад, 14, 15 або 16 залишків нуклеїнових основ, при утворенні дуплекса з комплементарною цільовою РНК андрогенного рецептора має здатність залучати РНКазу Н. 12. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-11, де вказаний олігомер кон'югований з однією або декількома сполуками, які не є нуклеїновими основами. 13. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-12, де вказаний олігомер має довжину від 10 до 22 нуклеїнових основ. 14. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-13, де вказаний олігомер має довжину від 12 до 18 нуклеїнових основ. 15. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-14, де вказаний олігомер має довжину 14, 15 або 16 нуклеїнових основ. 16. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-15, де вказана безперервна послідовність нуклеїнових основ відповідає безперервній нуклеотидній послідовності, представленій в послідовності нуклеїнової кислоти, яка вибрана з групи, що складається з SEQ ID № 86-106. 17. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-16, де олігомер або безперервна послідовність нуклеїнових основ містить (або вибрана з) відповідну послідовність нуклеїнових основ, представлену в нуклеотидній послідовності, яка вибрана з групи, що складається з SEQ ID № 2-22. 18. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-17, де вказана безперервна послідовність нуклеїнових основ містить щонайменше один нуклеотидний аналог, що збільшує афінність. 19. Олігомер згідно з варіантом здійснення 18, де вказана безперервна послідовність нуклеїнових основ містить всього 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 нуклеотидних аналогів, що збільшують афінність, наприклад, від 5 до 8 нуклеотидних аналогів, що збільшують афінність. 23 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 20. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-19, який містить щонайменше один нуклеотидний аналог, що збільшує афінність, де інші нуклеїнові основи вибрані з групи, що складається з дезоксирибонуклеотидів і рибонуклеотидів, і переважно являють собою дезоксирибонуклеотиди. 21. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-20, де олігомер містить послідовність нуклеїнових основ формули, в напрямку 5'-3', A-B-C і необов'язково формули A-BC-D, де А складається з або містить щонайменше один нуклеотидний аналог, наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 нуклеотидних аналогів, переважно 2-5 нуклеотидних аналогів, переважно 2, 3 або 4 нуклеотидних аналогів, найбільш переважно 2, 3 або 4 послідовних нуклеотидних аналогів і; В складається або містить щонайменше п'ять послідовних нуклеїнових основ, які мають здатність залучати РНКазу Н (при утворенні дуплекса з комплементарною молекулою РНК, наприклад, з цільовою мРНК АР), наприклад, дезоксирибонуклеїнових основ, наприклад, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 або 12 послідовних нуклеїнових основ, які мають здатність залучати РНКазу Н, або 6-10, або 7-9, наприклад, 8 послідовних нуклеїнових основ, які мають здатність залучати РНКазу Н, і; С складається з або містить щонайменше один нуклеотидний аналог, наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 нуклеотидних аналогів, переважно 2-5 нуклеотидних аналогів, наприклад, 2, 3 або 4 нуклеотидних аналогів, найбільш переважно 2, 3 або 4 послідовних нуклеотидних аналогів, і; D, якщо присутній, то складається з або містить, переважно складається з одного або декількох дезоксирибонуклеотидів, наприклад, з 1-3 або 1-2 дезоксирибонуклеотидів. 22. Олігомер згідно з варіантом здійснення 21, де А-область складається з або містить 2, 3 або 4 послідовних нуклеотидних аналогів. 23. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 21-22, де В-область складається з або містить 7, 8, 9 або 10 послідовних дезоксирибонуклеотидів або еквівалентних нуклеїнових основ, які мають здатність залучати РНКазу Н при утворенні дуплекса з комплементарною РНК, наприклад, з цільовою мРНК андрогенного рецептора. 24. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 21-23, де С-область складається з або містить 2, 3 або 4 послідовних нуклеотидних аналогів. 25. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 21-24, де D-область, у разі присутності, складається з одного або двох дезоксирибонуклеотидів. 26. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 21-25, де: А складається з або містить 3 суміжних нуклеотидних аналогів; В складається з або містить 7, 8, 9 або 10 суміжних дезоксирибонуклеотидів або еквівалентних нуклеїнових основ, які мають здатність залучати РНКазу Н при утворенні дуплекса з комплементарною РНК, наприклад, з цільовою мРНК андрогенного рецептора; С складається з або містить 3 суміжних нуклеотидних аналогів; D, у випадку присутності, складається з одного або двох дезоксирибонуклеотидів. 27. Олігомер згідно з варіантом здійснення 26, де безперервна послідовність нуклеїнових основ складається з 10, 11, 12, 13 або 14 нуклеїнових основ, і де А складається з 1, 2 або 3 суміжних нуклеотидних аналогів; В складається з 7, 8 або 9 суміжних дезоксирибонуклеотидів або еквівалентних нуклеїнових основ, які мають здатність залучати РНКазу Н при утворенні дуплекса з комплементарною РНК, наприклад, з цільовою мРНК андрогенного рецептора; С складається з 1, 2 або 3 суміжних нуклеотидних аналогів; D, у випадку присутності, складається з одного дезоксирибонуклеотиду. 28. Олігомер згідно з будь-яким з варіантів здійснення 21-27, де В містить щонайменше одну нуклеїнову основу LNA, яка знаходиться в альфа-L-конфігурації, наприклад, альфа-L-окси LNA. 29. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-28, де нуклеотидні аналоги незалежно або спільно вибрані з групи, що складається із ланок замкненої нуклеїнової кислоти (LNA); ланок 2'-O-алкіл-РНК, ланок 2'-OMe-РНК, 2'-аміно-дезоксирибонуклеотидних ланок, 2'фтор-дезоксирибонуклеотидних ланок, ланок PNA, ланок HNA і ланок INA. 30. Олігомер згідно з варіантом здійснення 29, де всі нуклеотидні аналоги являють собою ланки LNA. 31. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-30, який містить 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 ланок LNA, наприклад, від 2 до 8 нуклеотидних ланок LNA. 32. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 29-31, де LNA незалежно вибрані з окси-LNA, тіо-LNA і аміно-LNA, в бета-D- або в альфа-L-конфігурації, або в поєднанні. 33. Олігомер згідно з варіантом здійснення 32, де все LNA являють собою бета-D-окси-LNA. 24 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 34. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 21-33, де нуклеотидні аналоги або нуклеїнові основи областей А і С являють собою бета-D-окси-LNA. 35. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-34, де щонайменше одна з нуклеїнових основ, представлених в олігомері, являє собою модифіковану нуклеїнову основу, вибрану з групи, що складається з 5-метилцитозину, ізоцитозину, псевдоізоцитозину, 5бромурацилу, 5-пропінілурацилу, 6-амінопурину, 2-амінопурину, інозину, діамінопурину і 2-хлор6-амінопурину. 36. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-35, де вказаний олігомер гібридизується з відповідною мРНК андрогенного рецептора ссавця при T m щонайменше 50C. 37. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-36, де вказаний олігомер гібридизується з відповідною мРНК андрогенного рецептора ссавця при T m більше ніж 80 °C. 38. Олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-37, де міжнуклеозидні зв'язки незалежно вибрані з групи, що складається з фосфодіефірного, фосфоротіоатного і боранфосфатного зв'язку. 39. Олігомер згідно з варіантом здійснення 38, де олігомер містить щонайменше один фосфоротіоатний міжнуклеозидний зв'язок. 40. Олігомер згідно з варіантом здійснення 39, де межнуклеотидні зв'язки, що були поруч з або між ланками ДНК або РНК або в В-області, являють собою фосфоротіоатні зв'язки. 41. Олігомер згідно з варіантом здійснення 39 або 40, де зв'язки між щонайменше однією парою послідовних нуклеотидних аналогів являють собою фосфодіефірний зв'язок. 42. Олігомер згідно з варіантом здійснення 39 або 40, де всі зв'язки між послідовними нуклеотидними аналогами являють собою фосфодіефірні зв'язки. 43. Олігомер згідно з варіантом здійснення 42, де всі міжнуклеозидні зв'язки являють собою фосфоротіоатні зв'язки. 44. Кон'югат, що містить олігомер згідно з будь-яким варіантом здійснення 1-43 і щонайменше один ненуклеотидний або неполінуклеотидний фрагмент, ковалентно зв'язаний з вказаною сполукою. 45. Фармацевтична композиція, що містить олігомер, який визначений в будь-якому з варіантів здійснення 1-43, або кон'югат, який визначений у варіанті здійснення 44, і фармацевтично прийнятних розріджувач, носій, сіль або ад'ювант. 46. Фармацевтична композиція згідно з варіантом здійснення 45, в яку олігомер введений як пролікарський засіб. 47. Фармацевтична композиція згідно з варіантом здійснення 45 або 46, яка додатково містить додатковий терапевтичний засіб, вибраний з групи, що складається з нестероїдних антиандрогенів і аналогів релізинг-гормону лютеїнізувального гормону. 48. Застосування олігомеру, який визначений в будь-якому з варіантів здійснення 1-43, або кон'югата, який визначений у варіанті здійснення 44, у виробництві лікарського засобу для лікування захворювання або розладу, вибраного з групи, що складається з раку, такого як рак молочної залози або рак передстатевої залози, алопеції, доброякісної гіперплазії передстатевої залози, спінальної і м'язової атрофії, хвороби Кеннеді і поліглутамінового захворювання. 49. Олігомер, який визначений в будь-якому з варіантів здійснення 1-43, або кон'югат, який визначений у варіанті здійснення 44, для застосування в лікуванні захворювання або розладу, вибраного з групи, що складається з раку, такого як рак молочної залози або рак передстатевої залози, алопеції, доброякісної гіперплазії передстатевої залози, спінальної і м'язової атрофії, хвороби Кеннеді і поліглутамінового захворювання. 50. Спосіб лікування захворювання або розладу, вибраного з групи, що складається з раку, такого як рак молочної залози або рак передстатевої залози, алопеції, доброякісної гіперплазії передстатевої залози, спінальної і м'язової атрофії, хвороби Кеннеді і поліглутамінового захворювання, вказаний спосіб включає введення олігомеру, який визначений в будь-якому з варіантів здійснення 1-43, або кон'югата, який визначений у варіанті здійснення 44, або фармацевтичної композиції, яка визначена в будь-якому з варіантів здійснення 45-47, потребуючому цього пацієнту. 51. Спосіб лікування раку, такого як рак передстатевої залози або рак молочної залози, вказаний спосіб включає введення олігомеру, який визначений в одному з варіантів здійснення 1-43, або кон'югата, який визначений у варіанті здійснення 44, або фармацевтичної композиції, яка визначена в будь-якому з варіантів здійснення 45-47, потребуючому цього пацієнту. 52. Спосіб зниження або інгібування експресії андрогенного рецептора в клітині або в тканині, спосіб містить стадію приведення вказаної клітини або тканини в контакт зі сполукою, яка визначена в будь-якому з варіантів здійснення 1-43, або з кон'югатом, який визначений у варіанті здійснення 44, або з фармацевтичною композицією, яка визначена в будь-якому з 25 UA 100253 C2 5 10 15 20 25 варіантів здійснення 45-47, для того, щоб знизити або інгібувати експресію андрогенного рецептора. Спосіб модулювання експресії гена, який регулюється андрогенним рецептором (тобто мішені андрогенного рецептора) в клітині, яка експресує вказаний ген, вказаний спосіб містить стадію приведення вказаної клітини або тканини в контакт зі сполукою, які визначена в будьякому з варіантів здійснення 1-43, або з кон'югатом, який визначений у варіанті здійснення 44, або з фармацевтичною композицією, яка визначена в будь-якому з варіантів здійснення 45-47, для того, щоб модулювати експресію мішені андрогенного рецептора. Приклади Приклад 1: Синтез мономерів Мономерні будівельні блоки і похідні LNA одержували згідно з опублікованими процедурами і посиланнями, що цитуються в них - див. WO 07/031081 і посилання, що цитуються в ньому. Приклад 2: Синтез олігонуклеотидів Олігонуклеотиди синтезували згідно зі способом, описаним в WO 07/031081. У таблиці 1 наведені приклади антисмислових олігонуклеотидних послідовностей за винаходом. У таблицях 2 і 3 наведені приклади антисмислових олігонуклеотидів (оліго) за винаходом. Приклад 3: Конструювання олігонуклеотидів Відповідно до даного винаходу був розроблений ряд різних олігонуклеотидів для вибіркового зв'язування з різними областями мРНК андрогенного рецептора людини (інвентарний номер Genbank NM_000044, SEQ ID № 1). Антисмислові олігонуклеотидні послідовності за винаходом: SEQ ID №2-22 являються собою олігонуклеотидні послідовності, сконструйовані для вибіркового зв'язування з мРНК андрогенного рецептора людини. Таблиця 1 Антисмислові олігонуклеотидні послідовності за винаходом: SEQ ID №№ 2-22 являють собою олігонуклеотидні послідовності, сконструйовані для вибіркового зв'язування з мРНК андрогенного рецептора людини Таблиця 1 SEQ ID NO SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 5 SEQ ID NO: 6 SEQ ID NO: 7 SEQ ID NO: 8 SEQ ID NO: 9 SEQ ID NO: 10 SEQ ID NO; 11 SEQ ID NO: 12 SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 14 SEQ ID NO: 15 SEQ ID NO: 16 SEQ ID NO: 17 SEQ ID NO: 18 SEQ ID NO: 19 SEQ ID NO: 20 SEQ ID NO: 21 SEQ ID NO: 22 SEQ ID NO: 86 SEQ ID NO: 87 SEQ ID NO: 88 SEQ ID NO: 89 SEQ ID NO: 90 SEQ ID NO: 91 Послідовність (5'-3') GAGAACCATCCTCACC GGACCAGGTAGCCTGT CCCCTGGACTCAGATG GCACAAGGAGTGGGAC GCTGTGAAGAGAGTGT TTTGACACAAGTGGGA GTGACACCCAGAAGCT CATCCCTGCTTCATAA ACCAAGTTTCTTCAGC CTTGGCCCACTTGACC TCCTGGAGTTGACATT CACTGGCTGTACATCC CATCCAAACTCTTGAG GCTTTCATGCACAGGA GAAGTTCATCAAAGAA AGTTCCTTGATGTAGT TTGCACAGAGATGATC GATGGGCTTGACTTTC CAGGCAGAAGACATCT CCCAAGGCACTGCAGA GCTGACATTCATAGCC TGGGGAGAACCATCCTCACCCTGC TCCAGGACCAGGTAGCCTGTGGGG TGTTCCCCTGGACTCAGATGCTCC TGGGGCACAAGGAGTGGGACGCAC TTCGGCTGTGAAGAGAGTGTGCCA CGCTTTTGACACAAGTGGGACTGG 26 Довжина (основи) 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 16 24 24 24 24 24 24 Сайт мішені NM_000044 1389-1404 1428-1443 1881-1896 1954-1969 2422-2437 2663-2678 2813-2828 2975-2990 3008-3023 3263-3278 3384-3399 3454-3469 3490-3505 3529-3544 3594-3609 3616-3631 3809-3824 3845-3860 3924-3939 3960-3975 3114-3129 1385-1408 1424-1447 1877-1990 1950-1973 2418-2441 2659-2682 UA 100253 C2 Таблиця 1 SEQ ID NO SEQ ID NO: 92 SEQ ID NO: 93 SEQ ID NO: 94 SEQ ID NO: 95 SEQ ID NO: 96 SEQ ID NO: 97 SEQ ID NO: 98 SEQ ID NO: 99 SEQ ID NO: 100 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102 SEQ ID NO: 103 SEQ ID NO: 104 SEQ ID NO: 105 SEQ ID NO: 106 5 Послідовність (5'-3') CATAGTGACACCCAGAAGCTTCAT GAGTCATCCCTGCTTCATAACATT GATTACCAAGTTTCTTCAGCTTCC AGGCCTTGGCCCACTTGACCACGT AGCATCCTGGAGTTGACATTGGTG GACACACTGGCTGTACATCCGGGA GAGCCATCCAAACTCTTGAGAGAG CAGTGCTTTCATGCACAGGAATTC ATTCGAAGTTCATCAAAGAATTTT ATCGAGTTCCTTGATGTAGTTCAT GCACTTGCACAGAGATGATCTCTG AATAGATGGGCTTGACTTTCCCAG ATAACAGGCAGAAGACATCTGAAA ATTCCCCAAGGCACTGCAGAGGAG ATGGGCTGACATTCATAGCCTTCA Довжина (основи) 24 24 24 24 24 24. 24 24 24 24 24 24 24 24 24 Сайт мішені NM_000044 2809-2832 2971-2994 3004-3027 3259-3282 3380-3403 3450-3473 3486-3509, 3525-3548 3590-3613 3612-3635 3805-3828 3841-3864 3920-3943 3956-3979 3110-3133 Таблиця 2 Конструкції олігонуклеотидів за винаходом в SEQ ID №№ 23-43 заголовні букви означають ланки нуклеотидних аналогів і нижній індекс "s" означає фосфоротіоатний зв'язок. Малі букви означають нуклеотидні ланки. При відсутності "s" розуміється фосфодіефірний зв'язок 27 UA 100253 C2 Таблиця 2 5 Приклад 4: Модель in vitro: культура клітин Дію антисмислових олігонуклеотидів на експресію цільових нуклеїнових кислот можна тестувати на будь-якому з множини типів клітин за умови, що цільова нуклеїнова кислота присутня у вимірюваних концентраціях. Мішень може експресуватися ендогенно або за допомогою тимчасової або постійної трансфекції нуклеїновою кислотою, що кодує вказану 28