Індуктори монопараімунітету, основані на ослаблених вірусах міксоми кролика

1. Індуктор монопараімунітету на основі ослабленого вірусу міксоми або його компонентів. 2. Індуктор монопараімунітету за п. 1, який відрізняється тим, що ослаблений штам вірусу міксоми має модифікацію у вигляді додавання, заміни або делеції в одному або більше сегментах гена, що кодує продукцію рецепторів цитокінів, із втратою цитокіновим рецептором рецепторних властивостей внаслідок модифікації. 3. Індуктор монопараімунітету за п. 2, який відрізняється тим, що рецептори цитокінів вибрані з групи рецепторів до інтерферонів (IFN), інтерлейкінів (IL) і фактора некрозу пухлин (TNF). 4. Індуктор монопараімунітету за п. 3, який відрізняється тим, що рецептори цитокінів вибрані з групи рецепторів IFN -R, IFN -R, TNF-R, IL-1-R, IL-2-R, IL-6-R і IL-12-R. 5. Індуктор монопараімунітету за будь-яким із пп. 1-4, який відрізняється тим, що компоненти вірусу включають у себе вірусні оболонки або аберантні форми вірусних оболонок ослабленого штаму вірусу міксоми. 6. Індуктор монопараімунітету за будь-яким із пп. 1-5, який відрізняється тим, що штам ослабленого вірусу міксоми вибраний із групи, яка складається із штамів М2, М7, Lausanne, Aust/Uriarra/Verg-86/1. 7. Індуктор монопараімунітету за п. 6, який відрізняється тим, що штам вірусу міксоми являє собою штам М-2 із депозитарним номером ЕСАСС 03121801. 8. Індуктор монопараімунітету за будь-яким із пп. 1-7, який відрізняється тим, що штам вірусу міксоми ослаблений у культурі клітин. 9. Індуктор монопараімунітету за п. 8, який відрізняється тим, що культури клітин включають у себе клітини нирок мавпи Vero і/або клітини AVIVER. UA (21) a200609278 (22) 21.01.2005 (24) 10.08.2010 (86) PCT/EP2005/000582, 21.01.2005 (31) 10 2004 003 572.5 (32) 23.01.2004 (33) DE (46) 10.08.2010, Бюл.№ 15, 2010 р. (72) МАЙР АНТОН, DE, МАЙР БАРБАРА, DE (73) БАВАРІАН НОРДІК А/С, DK (56) MOSSMAN KAREN ET AL: "Myxoma virus MT7, a secreted homolog of the interferon-gamma receptor, is a critical virulence factor for the development of myxomatosis in European rabbits" VIROLOGY, Bd. 215, Nr. 1, 1996, Seiten 17-30 UPTON C ET AL: "MYXOMA VIRUS EXPRESSES A SECRETED PROTEIN WITH HOMOLOGY TO THE TUMOR NECROSIS FACTOR RECEPTOR GENE FAMILY THAT CONTRIBUTES TO VIRAL VIRULENCE" VIROLOGY, Bd. 184, Nr. 1, 1991, Seiten 370-382, SAITO J K ET AL: "ATTENUATION OF THE MYXOMA VIRUS AND USE OF THE LIVING ATTENUATED VIRUS AS AN IMMUNIZING AGENT FOR MYXOMATOSIS." THE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES. DEC 1964, Bd. 114, Dezember 1964 (1964-12), Seiten 417-428 MCCABE V J ET AL: "Vaccination of cats with an attenuated recombinant myxoma virus expressing feline calicivirus capsid protein" VACCINE, BUTTERWORTH SCIENTIFIC. GUILDFORD, GB, Bd. 20, Nr. 19-20, 7. Juni 2002 (2002-06-07), Seiten 2454-2462 BUETTNER M: "Principles of paramunization: Option and limits in veterinary medicine" COMPARATIVE IMMUNOLOGY MICROBIOLOGY AND INFECTIOUS DISEASES, Bd. 16, Nr. 1, 1993, Seiten 1-10 MAYR A ET AL: "A NEW CONCEPT IN PROPHYLAXIS AND THERAPY: PARAMUNIZATION BY PROXVIRUS INDUCERS" PESQUISA VETERINARIA BRASILEIRA BRASILIAN JOURNAL OF VETERINARY RESEARCH, ARMANDO AMORIM PUBLICIDADE, 2 (19) 1 3 91501 4 10. Індуктор монопараімунітету за будь-яким із пп. 24. Спосіб за п. 21, в якому віруси міксоми, прису1-9, який відрізняється тим, що ослаблений вірус тні в інфікованій тканині, ізольовані шляхом репліміксоми є інактивованим. кації в пермісивній клітинній системі. 11. Індуктор монопараімунітету за п. 10, який від25. Спосіб за п. 24, який відрізняється тим, що різняється тим, що ослаблені віруси міксоми є вірус виділяють шляхом культивування на хоріоалантоїсній мембрані (САМ) інкубованого курячого інактивованими -пропіолактоном. яйця. 12. Індуктор монопараімунітету за п. 11, який від26. Спосіб за п. 25, який відрізняється тим, що різняється тим, що концентрація -пропіолактону вірус послідовно адаптують на САМ у ході подастановить 0,01-1 %. льших пасажів, переважно 2 подальших пасажів. 13. Індуктор монопараімунітету за п. 12, який від27. Спосіб за будь-яким із пп. 21-26, який відрізрізняється тим, що концентрація -пропіолактону няється тим, що ослаблення вірусів міксоми відстановить 0,05 %. бувається в культурі клітин Vero у ході 80-150 па14. Індуктор монопараімунітету за будь-яким із пп. сажів, переважно 120 пасажів. 1-13, який відрізняється тим, що віруси міксоми є 28. Спосіб за будь-яким із пп. 21-27, який відрізліофілізованими. няється тим, що вірус пасивують у культурі клітин 15. Застосування індуктора монопараімунітету за AVІVER. будь-яким із пп. 1-14 для виробництва фармацев29. Спосіб за п. 28, який відрізняється тим, що тичної композиції для активації параспецифічної пасивування відбувається в ході 10-50 пасажів, імунної системи у людини і тварин. переважно 25 пасажів. 16. Застосування індуктора монопараімунітету за 30. Спосіб за будь-яким із пп. 21-29, в якому ослабудь-яким із пп. 1-14 для виробництва фармацевблені віруси міксоми додатково репліковані в ході тичної композиції для парентерального лікування додаткових ослаблювальних пасажів. і/або профілактики дисфункцій імунної системи, 31. Спосіб за п. 30, в якому реплікація відбуваєтьімуносупресії, порушень, пов'язаних із імунодефіся в клітинах нирок мавпи Vero. цитом, дисфункцій гомеостазу між гормональною, 32. Спосіб за п. 31, який відрізняється тим, що циркуляторною, метаболічною і нервовою систеподальше зростання відбувається в клітинах Vero мами, неонатальної інфекції, що являє загрозу в ході 100-200 пасажів. пухлинних захворювань, вірусних захворювань, 33. Спосіб за будь-яким із пп. 30-32, який відрізбактеріальних захворювань, стійких до терапії заняється тим, що збір вірусів у клітинній культурі хворювань, викликаних інфекційним фактором, має інфекційний титр від 105 до 107,5, переважно вірусних і бактеріальних змішаних інфекцій, хроніпринаймні 106,5, ТСID50/мл. чних проявів інфекційних процесів, захворювань 34. Спосіб за будь-яким із пп. 21-33, в якому ослапечінки різної етіології, хронічних захворювань блені віруси міксоми додатково інактивовані. шкіри, герпетичних захворювань, хронічних гепа35. Спосіб за п. 34, в якому ослаблені віруси міктитів, грипозних інфекцій, ушкоджень, викликаних соми для інактивації обробляють ендотоксином. пропіолактоном. 17. Застосування за будь-яким із пп. 15-16, при 36. Спосіб за п. 35, який відрізняється тим, що якому зазначене лікування проводять шляхом локонцентрація -пропіолактону становить 0,01-1 %. кального введення фармацевтичної композиції 37. Спосіб за п. 36, який відрізняється тим, що через шкіру або слизові оболонки пацієнта. концентрація -пропіолактону становить 0,05 %. 18. Фармацевтична композиція, що включає в себе індуктор монопараімунітету за будь-яким із пп. 138. Спосіб за будь-яким із пп. 21-37, що включає в 14 і фармацевтично прийнятний носій. себе стадії 19. Фармацевтична композиція за п. 18 для лока- виділення вірусів міксоми з інфікованої тканини льного або парентерального введення. кролика, страждаючого на міксоматоз, шляхом 20. Фармацевтична композиція за п. 18, представреплікації на САМ інкубованих курячих яєць і полена у вигляді букальних таблеток або таблеток, дальшої що розсмоктуються. - адаптації виділеного вірусу міксоми на САМ у 21. Спосіб одержання індуктора монопараімунітету ході 2 подальших пасажів за будь-яким пп. 1-14, що включає в себе стадії - ослаблення виділених вірусів шляхом - виділення вірусів міксоми з інфікованої тканини - пасивування клітин Vero в культурі, переважно в кролика, типовим чином страждаючого на генераході 120 пасажів, лізований міксоматоз; - перенесення вірусів у бінарну культуру клітин - адаптації вірусу до пермісивної клітинної систеAVIVER, із подальшим ослабленням вірусу в цій ми; культурі клітин, переважно в ході 24 проміжних - пасивування ізольованих вірусів у культурі клітин пасажів, Vero і бінарній культурі клітин до досягнення осла- подальшого перенесення вірусу назад на клітини блення вірусу. Vero нирок мавпи, і 22. Спосіб за п. 21, в якому виділені віруси іноку- реплікації ослаблених вірусів міксоми шляхом лювали в хоріоалантоїсну мембрану (САМ) інкубоподальших ослаблювальних пасажів у клітинах ваного курячого яйця для адаптації. Vero, переважно в ході приблизно 150 пасажів. 23. Спосіб за п. 22, в якому вірус реплікується у 39. Ослаблений вірус міксоми, який можна одерході 2-6 пасажів, переважно 3 пасажів, на САМ. жати способом за будь-яким із пп. 21-38. 5 91501 6 43. Вірус міксоми за п. 42, який відрізняється тим, 40. Вірус міксоми за п. 39, депонований у Європейській Колекції Клітинних Культур (ЕСАСС) під що рецептори цитокінів вибрані з групи рецепторів депозитарним номером 03121801. до інтерферонів (IFN), інтерлейкінів (IL) і фактора 41. Вірус міксоми за п. 39 або 40, який відрізнянекрозу пухлин (TNF). ється тим, що вірус міксоми генетично модифіко44. Вірус міксоми за п. 43, який відрізняється тим, ваний. що рецептори цитокінів вибрані з групи рецепторів 42. Вірус міксоми за п. 41, який відрізняється тим, до IFN -R, IFN -R, TNF-R, IL-1-R, IL-2-R, IL-6-R і що має модифікації у вигляді додавання, заміни IL-12-R. або делеції в одному або більше сегментах гена, 45. Ослаблений штам M2 вірусу міксоми М2 із дещо кодує продукцію цитокінових рецептів, при позитарним номером ЕСАСС 03121801. цьому рецепторні властивості цитокінових рецептів при модифікаціях втрачаються. Даний винахід стосується індукторів монопараімунітету на основі параімунізуючих вірусів і вірусних компонентів, які відрізняються тим, що віруси і вірусні компоненти походять із ослабленого штаму вірусу міксоми, способу одержання індукторів монопараімунітету та їх застосування як медикаментів. Ендогенна імунна система високорозвинених організмів, особливо така ссавців і птахів, включає в себе антигенспецифічну та антигеннеспецифічну частини. Обидві частини імунної системи пов'язані між собою і, більше того. взаємодіють одна з одною. Антигенспецифічні механізми відповідальні за побудову імунітету, а антигеннеспецифічні відповідальні за побудову параімунітету. Поняття "параімунітет" стосується стану тонко регульованої та оптимально функціонуючої системи неспецифічного захисту, пов'язаної із, обмеженим у часі посиленням захисту від великої кількості різних патогенів, антигенів та інших пагубних для здоров'я факторів, що швидко розвивається. Основою розвитку параімунітету є, з історичних і функціональних причин, неселективні або умовно селективні параспецифічні захисні механізми, які є древніми з філогенетичної точки зору та іменуються примітивними. Параспецифічна активність антигенспецифічної імунної системи (яка називається також "генетично предстермінованим імунітетом") включає в себе неселективні захисні елементи, такі, наприклад, як органоїди, що захоплюють чужорідні матеріали, та умовно селективні захисні елементи, такі, наприклад, як мікро- і макрофаги, природні клітини-кілери, дендритні клітини і розчинні фактори, такі як цитокіни, які демонструють патогеннеспецифічні або антигеннеснецифічні реакції відповідно до їхнього походження. Параспецифічна активність спостерігається у відповідних організмах негайно після контакту з антигеном, тоді як ефекти антигенспецифічної імунної системи виникають тільки через дні або тижні. У більш високоорганізованих формах життя цей час подовжується у зв'язку з організацією специфічних захисних систем проти шкідливих факторів, які організму ще не вдалося усунути та які мають антигенні властивості. Користь параімунізації, тобто параспецифічної активності імунної системи в профілактиці та терапії пацієнтів стає все більш очевидною з момен ту початку її розвитку (Anton Mayr, "Paramunisicrung: Empirie oder Wissensehaft", Biol. Med. edition 26(6): 256-261, 1997). Параспецифічні захисні механізми дають організму можливість негайно захищатися віл широкої різноманітності чужорідних матеріалів, інфекційних патогенів, токсинів і трансформованих ендогенних клітин. Існують тісні взаємодії між параспецифічною і специфічною активністю імунної системи, із потоком оброблюваної інформації, що йде звичайно від реагуючої насамперед параспецифічної частини до специфічної частини імунної системи, що включається пізніше (наприклад, опосередковані антигеном). У разі інфекцій особливо вірулентними патогенами параспецифічний захист організму здатний, таким чином, охопити час, поки розвивається специфічний імунітет (наприклад, антитіла, імунні клітини). Параспецифічні імунні системи захисту являють собою фізіологічний процес і можуть бути визначені як "первинний контроль" у конфлікті з навколишнім середовищем. Вони незамінні не тільки для нижчих організмів, але і для більш високорозвинених, у тому числі високорозвинених хребетних. Первинні природжені дефекти цієї захисної біологічної системи приводять до ситуацій, загрозливих для життя. Як приклад може бути згадана "хвороба Чедіака-Штейнбринка-Хігаші" у людини, яка характеризується дефіцитом гранулоцитів і дисфункціями природних клітин-кілерів (NKклітини) і в більшості випадків призводить до смерті пацієнта до 10-літнього віку. Стан параімунітету характеризується підвищеною швидкістю фагоцитозу, підвищеною функцією спонтанної клітинно-опосередкованої цитотоксичності (NK-клітини) і підвищеною активністю інших лімфоретикулярних клітин. У той же час відбувається виділення особливих цитокінів, що надають стимулюючий і/або інгібуючий ефекти (наприклад, через репресорні механізми) і на клітинні елементи, і один на одного. Ця міцно зв'язана і поетапно відповідаюча біологічна система параімунітету з її різноманітними акцепторами, ефекторами і клітинами-мішенями, а також цитокінами, що передають сигнали, крім того, тісно пов'язана з гормональною і нервовою системами. Вона, таким чином, являє собою важливий компонент мережі комунікації, взаємодії і регуляції. Параімунітет індукується параімунізацією. Під цим мається на увазі фармакологічна активація 7 91501 8 клітинних елементів параспецифічної частини імуніпуляцій, до підвищення вірулентності та контагінної системи і пов'язана з нею продукція цитокінів озності. із метою усунення дисфункцій, швидкого посиленВіруси міксоми є патогенами міксоматозу, коння патогеннеспецифічного та антигеннеспецифічтагіозного системного вірусного захворювання ного захисту організму (оптимальної біорегуляції), диких і домашніх кроликів, яке, на відміну від інших усунення імуносупресії або імунодефіциту, які виінфекційних хвороб, прогресує циклічно і характеникли внаслідок стресу або інших причин (наприризується генералізованими, у деяких випадках клад, фармакологічних), усуваючи дефіцит і/або підшкірними геморагічними набряками на голові та діючи як регулятор імунної, гормональної і нервопо всьому тілу, особливо в анальній ділянці, у дівої систем. Це означає, що певні ендогенні захисні лянці вульви і труб. Інтродукція міксоматозу до процеси можуть бути посилені, доповнені або прикраїни, раніше вільної від цього захворювання, гнічені, залежно від типу параімунізації і реактивпризводить до його швидкого і фатального пошиності, такої, наприклад, як стан здоров'я пацієнта. рення. Після того як вірус стає ендемічним, харакІндуктори параімунітету використовуються для тер хвороби змінюється доти, поки інфекція не параімунізації та повинні відповідати певним кристане клінічно неясною (Mayr A.: Medizinische теріям безпеки та ефективності, відрізняючись, Mikrobiologie, Infections- und Scuchcnlehre, 7th таким чином, від імуностимуляторів. Індуктори edition, Enke-Verlag, Stuttgart, 2002). параімунітету самі по собі не є порівнянними ні з Хвороба широко поширена серед американсьантитілами, ні з хімічними препаратами - антибіоких кроликів роду Sylvilagus, які мешкають виключтиками, вітамінами або гормонами. Навпаки, вони но у Новому Світі. Ця форма диких кроликів являє активують через ступінчастий механізм параспесобою єдиний природний резервуар захворюванцифічну імунну систему, так що остання значно ня. У цих тварин інфекція приймає помірні форми. мобілізує клітинні та гуморальні захисні механізми. Навпаки, хвороба дає майже 100% смертність у Індуктор параімунітету в цьому випадку надає і європейських диких і домашніх кроликів роду регуляторний, і відновлювальний впливи на імунOryctolagus, який також натуралізувався в Австраний захист. Що стосується способу дії індукторів лії, коли туди був інтродукований патоген. параімунітету, відомо, що вони захоплюються фаПриродний спектр тварин-хазяїнів для вірусу гоцитарними клітинами (клітинами-акцепторами), міксоми (рід Leporipoxvirus) має вузькі рамки. У які таким чином активуються і виділяють медіатоцілому вірус реплікується тільки в організмі америри, що в свою чергу, мобілізують ефекторні клітиканського кролика, а також європейського домашни. Останні здійснюють остаточний запуск регулянього і дикого кролика. Однак невелика кількість торних механізмів параспецифічного захисту. заражень спостерігалася і у європейських диких Численні індуктори параімунітету, основані на зайців. Спроби перенесення іншим видам і людині комбінаціях двох компонентів вірусу віспи, що попризвели до негативних результатів. ходять із різних штамів віспяного вірусу з параімуМетою даного винаходу є одержання нових нізуючими властивостями, описані в Європейсьмонопараімунних індукторів для медицини і ветекому Патенті ЕР 0669133 В1. ринарної практики. Ще однією метою даного винаДаний винахід обгрунтований на параімунізуходу є розробка способу одержання таких монопаючих властивостях ослаблених вірусів міксоми раімунних індукторів. Додатковою метою даного і/або їх вірусних складових. винаходу є одержання фармацевтичних композиПоняття "ослаблений" стосується модифікації цій для використання як медикаментів на основі властивостей інфекційного патогену, яка призвомонопараімунних індукторів. дить до ослаблення патогену ("attenuate" - ослабВідповідно, даний винахід стосується індуктоляти, пом'якшувати). Зміни інфекційних патогенів рів монопараімунітету на основі параімунізуючих часто зустрічаються в природі спонтанно, і це мовірусів або компонентів вірусів, які відрізняються жливо протягом проміжків часу, розтягнутих на тим, що віруси або компоненти вірусів походять із багато сторіч. ослаблених штамів вірусу міксоми кроликів. КомЗдатність інфекційних патогенів змінюватися, поненти вірусу переважно включають у себе вірупристосовуючись до змін навколишнього середосні оболонки або аберантні форми вірусних обовища, може бути використана експериментально, лонок ослаблених штамів вірусу міксоми. а проміжок часу, необхідний для ослаблення, моПереважними штамами, що мають параімунізуючі же бути різко скорочений шляхом, наприклад, тривластивості, відповідно до винаходу є штами М-2, валих пасажів у певних системах-хазяїнах. ОслабМ-7, Lausanne, Aust/Uriarra/Vеrg-86/1. Штами М-7, лення використовувалося до цього часу для Lausanne, Aust/Uriarra/Verg-86/1 також придатні одержання авірулентних штамів і нешкідливих для одержання живих вакцин, оскільки вони заіндукторів параімунітету. знали тільки часткового ослаблення вірулентності Ослаблення звичайно веде до втрати вірулендля одержання адекватного імунізуючого ефекту. тності та контагіозності, зниження імунізуючих Особливо переважним є індуктор монопараівластивостей і зменшення спектра хазяїнів, а тамунітету на основі штаму вірусу міксоми М-2. кож до невеликих змін у геномі патогену, при яких Ослаблений штам вірусу міксоми, одержаний спозустрічаються делеції, переважно в термінальних собом відповідно до винаходу та описаний далі в ділянках. Звичайно паралельно посилюється параданому документі, поміщений у депозитарій Служімунізуюча активність модифікованого патогену. би санітарно-гігієнічних лабораторій (Public Health У рідкісних випадках ослаблення також може Laboratory Service, PНLS), Центр прикладної мікпризводити, особливо якщо робиться експерименробіології та досліджень (Centre for Applied тальне ослаблення за допомогою генетичних маMicrobiology & Research), Європейська колекція 9 91501 10 культур клітин тварин (European Collection of ембріона (СЕF) або в культурах перманентних Animals Cell Cultures, ECACC), Сейлсбері, УїлтСЕF-клітин. шир, Об'єднане Королівство (Salisbury, Wiltshire, Переважним, відповідно до даного винаходу, United Kingdom) під номером доступу 03121801. для ослаблення вірусу міксоми є пасаж або репліДалі, даний винахід стосується способу одеркація вірусу в перманентній клітинній культурі, зокжання індукторів монопараімунітету на основі рема, клітинній культурі Vero, переважно протягом ослабленого штаму вірусу міксоми кролика. Для 80-150 пасажів, і особливо переважно - 120 пасацієї мети спочатку віруси міксоми виділяють із інжів. У порядку альтернативи або додатково вірус фікованої тканини кролика, страждаючого на генепасивується відповідно до даного винаходу на ралізовапий міксоматоз. Услід за цим вірус присбінарній перманентній клітинній лінії, і в цьому тосовується до пермісивної клітинної системи, випадку переважно використовують клітини тобто до клітинного матеріалу, який дозволяє репAVIVER. Ці клітини або клітинна культура були лікацію вірусу, такому, наприклад, як клітинні кульодержані шляхом клітинного злиття фібробластів тури, інкубовані курячі яйця або інші експерименкурячого ембріона (CEF) і клітини нирок мавпи тальні тварини. Зокрема, для адаптації можна Vero. Для ослаблення вірусів міксоми згідно з вивикористати клітини природного хазяїна або видів, находом виділені та адаптовані віруси переважно близьких до хазяїна. Прикладами придатних перпасивували на першій стадії в клітинній культурі місивних клітинних систем для вірусів міксоми є Vero, потім віруси переносили в бінарну клітинну фібробласти курячого ембріона (CEF), також як і культуру AVІVER, де вони реплікувались переважклітинні культури, одержані з нирок або сім'яників но протягом 10-50 пасажів, зокрема 20-30 пасажів, кролика. переважно, зокрема, протягом 25 пасажів. Згідно з даним винаходом, переважно адаптуОслаблений вірус міксоми міг бути потім додавати виділений вірус міксоми в хоріоналантоїсній тково реплікований у ході додаткових ослаблювамембрані (САМ) інкубованих протягом одного або льних пасажів. Подальша реплікація вірусів перебільше пасажів курячих яєць, переважно від 2 до 6 важно мала місце у ході подальших пасажів у пасажів, особливо переважно - 3 пасажі. Для такої клітинах нирок мавпи Vero, зокрема, протягом 100адаптації виділені віруси інокулюються в САМ і 200 пасажів. реплікуються на САМ. Особливо переважною подальшою стадією Віруси міксоми переважно спочатку виділяють способу є додаткова інактивація ослабленого віруіз інфікованої тканини шляхом реплікації в пермісу міксоми. Інактивація може мати місце внаслідок сивній клітинній системі. Для цієї мети можна інохімічної обробки, опромінення, дії тепла або рН, кулювати пермісивну клітинну систему, наприклад, зокрема, внаслідок хімічної обробки гомогенатом інфікованої тканини, одержаним внапропіолактоном. Обробка ослаблених вірусів мікслідок її руйнування. Потім віруси, одержані шлясоми -пропіолактоном додатково підвищує парахом первинної реплікації, далі адаптуються або в специфічну активність, тоді як імунізуючі властитій же самій пермісивній клітинній системі, яка вже вості, все ще представлені після ослаблення, використовувалася для ізоляції, або в іншій пермівтрачаються. сивній клітинній системі. Адаптація вірусу в перміОсобливо переважний варіант реалізації спосивній клітинній системі того ж типу, яка викориссобу згідно з винаходом включає в себе такі стадії: товувалася для виділення, є переважною. Таким - виділення вірусів міксоми з інфікованої ткачином, переважно віруси міксоми з інфікованої нини кролика, страждаючого звичайно на генератканини виділяють шляхом реплікації в пермісивлізований міксоматоз, шляхом реплікації на хоріоній клітинній системі, а потім адаптують у пермісиналантоїсній мембрані (САМ) інкубованих курячих вній клітинній системі шляхом подальших пасажів. яєць і подальшій адаптації вірусу на САМ протяПервинне культивування і виділення вірусів міксогом 2 подальших пасажів; ми шляхом реплікації на САМ інкубованого курячо- ослаблення виділених вірусів шляхом пасиго яйця і подальша адаптація вірусу на САМ провування в культурі клітин Vero, переважно протятягом подальших пасажів, переважно в ході 2 гом 120 пасажів; подальших пасажів, особливо переважні. Однак у - перенесення вірусів у бінарну клітинну кульвигляді альтернативи також можливе використантуру клітин AVIVER, в якій клітини AVIVER були ня алантоїсної рідини інкубованого курячого яйця одержані шляхом злиття клітин фібробластів курядля культивування і/або адаптації. чого зародка (CEF) і клітин нирок мавп Vero, і Власне ослаблення потім має місце внаслідок ослаблення вірусу в цій клітинній культурі протятривалих пасажів у одній або більше пермісивних гом 10-50, переважно 25, пасажів, клітинних культурах, поки не будуть досягнуті - подальше перенесення вірусу назад на кліослаблення або бажаний ступінь ослаблення. Для тини нирок мавпи Vero і реплікація вірусів шляхом цієї мети можна спочатку протестувати пермісивну подальших ослаблювальних пасажів у клітинах клітинну систему на предмет реплікації вірусу, а Vero, переважно протягом приблизно 150 пасажів; потім вибрати одну або більше клітинних систем, в і необов'язково, яких досягається найбільш високий титр інфекції, - інактивація ослаблених вірусів міксоми шлядля подальших пасажів, і первинна, і вторинна хом обробки -пропіолактоном, ця обробка підвиклітинні культури, також як і перманентні та безпещує параспецифічну активність, тоді як імунізуючі рервні клітинні лінії, придатні для ослаблення властивості, що все ще залишилися після ослабшляхом тривалих пасажів. Таким чином, ослаблення, втрачаються. лення може мати місце при реплікації в первинній Ослаблення шляхом довготривалого пасивуабо вторинній культурах фібробластів курячого вання звичайно завершується 3-5 кінцевим розве 11 91501 12 денням бляшок. Після того, як різні клони були клад, як ящірки, змії, черепахи. Отже, вони осободержані та тестовані, відбирали для подальшої ливо придатні для медичного застосування на реплікації ті клони, в яких досягнуті найбільш висолюдині та у ветеринарній практиці. кі інфекційні титри і виявлена висока параімунізуКрім того, індуктори монопараімунітету згідно з юча активність, наприклад, за провокаційним тесвинаходом демонструють дуже хорошу параімунітом на вірус везикулярного стоматиту (VSV) у зуючу активність із високою ефективністю. Вони мишат. Ця процедура спрямована на те, щоб пеможуть бути одержані способом згідно з винахоресвідчитися, зокрема, що для подальшого викодом придатним чином і безпечні для використання ристання одержаного генетично однорідного мав галузі медицини. Ослаблення вірусів міксоми теріалу. знижує імунізуючі властивості вірусів міксоми, тоді Термін "ослаблення'", використовуваний у як їхня параспецифічна активність зростає. Індукзв'язку з даним винаходом, стосується експериметори монопараімунітету згідно з винаходом, отже, нтальної модифікації початкового вірулентного мають параімунізуючі, але не імунізуючі, властивірусу міксоми в модифіковану форму, з одночасвості, роблячи тим самим можливим своє багатоним підвищенням параімунізуючих властивостей. разове і безперервне використання. Ці параімуніОслаблення визначається за одією або більше з зуючі властивості вірусу міксоми кроликів та їхніх наступних властивостей: вірусних компонентів несподівані та не були пе- зменшенням або ослабленням або втратою редбачені. вірулентності відносно європейських домашніх і Термін "параімунізація", як він використовудиких кроликів (рід Oryctolagus caniculus csp.), ється у зв'язку з даним винаходом, стосується фа- ослабленням або втратою контагіозпості, рмакологічної активації клітинних елементів пара- обмеженням спектра хазяїнів у клітинній куспецифічної імунної системи і продукції або льтурі, виділення, пов'язаного з нею, цитокінів з метою - зміною імунізуючих властивостей, усунення дисфункцій, швидкого підвищення не- набуванням параімунізуючої короткочасної патоген- і не-антигенспецифічного захисту організахисної активності. Ослаблення може призвести зму, що спричиняють регуляторний ефект на [взадо делецій у термінальних ділянках генома вірусу ємодію] імунної, гормональної, нервової і судинної міксоми. Зростаючий ступінь ослаблення часто систем. Параімунізація веде до захисного стану спостерігається у зв'язку із збільшенням кількості параімунітету. делецій у вірусному геномі. Термін "параімунітет", як він використовується Ступінь ослаблення може бути перевіреним і у зв'язку з даним винаходом, стосується активно оціненим у ході пасажів за допомогою відповідних досягнутого стану оптимально регульованої і фунтестів активності, відомих у даній галузі (пор., накціонуючої параспецифічної захисної системи, приклад, патент США № 6805870, колонка 12, і пов'язаної з обмеженим за часом захистом від подальші посилання, наведені в даному докуменвеликої кількості патогенів, антигенів та інших фаті), і шляхом клонування. кторів, що загрожують здоров'ю, який швидко розДаний винахід також стосується ослаблених вивається. Темп фагоцитозу, функція клітин ΝΚ вірусів міксоми, одержання яких доступне спосо(природних клітин-кілерів) і активність інших лімбом згідно з винаходом, фармацевтичних компофоретикулярних клітин (наприклад, дендритних зицій, що включають у себе ослаблений вірус мікклітин) підвищується до фізіологічного оптимуму. соми або індуктор монопараімунітету згідно з Термін "індуктор параімунітету", як він викоривинаходом, використання індукторів монопарімуністовується у зв'язку з даним винаходом, стосуєтьтету для активації параспецифічної імунної систеся апірогенного нетоксичного медикаменту, який ми у ссавця і використання ослабленого вірусу для призначений для застосування на людині та твавиробництва відповідного медикаменту. ринах для одержання і регуляції ендогенного заВнаслідок несподіваних параімунізуючих власхисту і захисних механізмів у значенні параімунітивостей індуктори монопарімунітету вірусу міксозації. ми згідно з винаходом придатні для лікування і/або Термін "індуктор мопопараімунітету вірусу мікпрофілактики дисфункцій імунної системи, імуносоми", як він використовується у зв'язку з даним супресії, порушень, пов'язаних з імунодефіцитом, винаходом, стосується медикаменту, який основадисфункцій гомеостазу між гормональною, циркуний на ослаблених вірусах міксоми або ослаблеляторною, метаболічною і нервовою системами, ному штамі вірусу міксоми, включаючи в себе пазагрозливої неонатальної інфекції, пухлинних зараімунізуючі компоненти вірусу та його складові, хворювань, вірусних захворювань, бактеріальних які спричиняють в організмі стан параімунітету, захворювань, захворювань, пов'язаних зі стійким переважно у ссавців (наприклад, у людини). до терапії інфекційним фактором, змішаних вірусТермін "вірус міксоми", як він використовуєтьно-бактеріальних інфекцій, хронічних проявів інся у зв'язку з даним винаходом, стосується видів фекційних процесів, захворювань печінки різної вірусу міксоматозу роду Leporipoxvirus. Вірус мікетіології, хронічних захворювань шкіри, герметичсоми належить до підсімейства Chordopoxviridiae і них захворювань, хронічних гепатитів, грипозних сімейства Poxviridae (віспяні віруси). інфекцій, ушкоджень, викликаних ендотоксином. Термін "параімунізуючі вірусні компоненти", як Індуктори монопараімунітету згідно з винаховін використовується у зв'язку з даним винаходом, дом у цілому нешкідливі для навколишнього серевключає в себе велику кількість вірусних структур, довища та ефективні відносно параімунізації ссавщо походять із вірусу міксоми, і мають параімуніців, таких, наприклад, як людина, коні, собаки, зуючі властивості, наприклад, життєздатні або коти, свині, а також птахів і рептилій, таких, наприінактивовані свіжовиділені віруси міксоми, життє 13 91501 14 здатні або інактивовані рекомбінантні віруси мікможе мати місце додаткова інактивація вірусу міксоми, що походять із свіжовиділених вірусів міксосоми шляхом опромінення, теплового впливу або ми, вірусні оболонки, видалені оболонки і продукти дії рН або, що особливо переважно, шляхом хімічїхньої деградації, а також аберантні форми цих ної обробки -пропіолактоном. Індуктори монопаоболонок, окремі природні або рекомбінантні поліраімунітету на основі ослаблених ліофілізованих пептиди або білки, зокрема, мембрани і поверхневірусів міксоми з окремими вірусними компоненві рецептори, які присутні в свіжовиділених вірусах тами вірусу міксоми, які придатні для індукування міксоми або рекомбінантно експресуються генетипараімунної активності в організмі, також охоплючним модифікованим вірусом міксоми або частиються даним винаходом.ною його генетичної інформації. Нижче описаний один із варіантів реалізації У таблицях 1-4 підсумовувані клінічні резульспособу виробництва індукторів монопараімунітету тати, одержані на людині за допомогою індуктора на основі виділеного та ослабленого штаму вірусу монопараімунітету вірусу міксоми PIND-MYXO на міксоми кроликів шляхом пасивування в культурі основі штаму М-2 вірусу міксоматозу, ослабленого клітин. Спосіб виробництва, крім того, не обмежев культурі клітин. ний даним переважним штамом, а може бути заУ таблиці 1 наведені клінічні результати простосований таким же чином з іншими штамами філактичного застосування індуктора монопараівірусу міксоми кроликів. Також даний винахід охомунітету PIND-MYXO із вірусу міксоми на людині. плює рекомбінантні форми штаму вірусу міксоми, У таблиці 2 показані клінічні результати тераякі були одержані внаслідок генетичної модифікапевтичного застосування індуктора монопараімуніції. У зв'язку з цим перевага віддасться рекомбінатету PIND-MYXO із вірусу міксоми на людині. нтним штамам вірусу міксоми, в яких один або У таблиці 3 показаний ефект параімунізації інбільше сегментів генома, які кодують рецептори дуктором монопараімунітету з вірусу міксоми цитокінів, були модифіковані шляхом додавання, (PIND-MYXO) у пацієнтів із низькими імунними заміщення або делеції, так що рецепторні властипоказниками (через 7 днів після введення PINDвості рецептора цитокінів внаслідок модифікації MYXO). втрачаються. Такими є переважно сегменти гена, У таблиці 4 показаний ефект параімунізації інякі кодують рецептори інтерферонів (IFN), інтердуктором монопараімунітету з вірусу міксоми лейкіпів (ІL) і фактора некрозу пухлин (TFN), зок(PIND-MYXO) у пацієнтів із підвищеними імунними рема. IFN- -R(рецептор), IFN -R, TNF-R, IL-1-R, ILпоказниками (через 7 днів після введення PIND2-R, IL-6-R і IL-12-R. MYXO). Крім того, чисельні значення, зазначені в даДаний винахід обгрунтований на несподіваноному документі, інкубації, що стосуються часу або му відкритті того факту, що ослаблені віруси міккількості пасажів у культурі клітин, не повинні розсоми або їх параімунізуючі складові здатні індукуглядатися як такі, що обмежують. Невеликі модивати дуже хороші параімунні властивості в фікації цих параметрів і модифікації. очевидні для організмі реципієнта, що призводить до захисного фахівців у даній галузі, і також ті, що призводять стану параімунітету. Основою даного винаходу до виготовлення ослаблених вірусів міксоми, у було, насамперед, успішне ослаблення вірусів рівній мірі охоплюються даним винаходом. міксоми кроликів у клітинній культурі. Переважний варіант реалізації даного винахоІндуктори монопараімунітету згідно з винаходу стосується успішного ослаблення штаму Μ-2 дом переважно основані на ліофілізованих, ославірусу міксоми. Штам М-2 вірусу міксоми був видіблених та інтактивованих вірусах міксоми кроликів лений з організму європейського дикого кролика, або їхніх параімунізуючих вірусних компонентах. страждаючого на міксоматоз (Herrlich А., Mayr A. Ослаблені віруси міксоми або їхні вірусні компонеand Munz E.: "Die Pocken", 2nd edition, Georg нти згідно з винаходом переважно походять з одThieme Verlag, Stuttgart. 1967). Змінені клітини шкіного штаму вірусу міксоми або з безлічі різних ри, одержані з підшкірної тканини хворого кролика, ослаблених штамів вірусу міксоми. У зв'язку з цим після їхнього руйнування інокулювали на хоріоапереважно, щоб індуктори монопараімунітету згідлантоїсну мембрану (САМ) курячих яєць, що інкуно з винаходом включали в себе комбінації одного бувалися переважно протягом 10-12 днів. Віруси або більше штамів вірусу міксоми або їхніх параіміксоми потім реплікувалися і адаптувалися у ході мунізуючих вірусних компонентів. 2-6 пасажів, переважно 3 пасажів, на хоріоалантоПараімунізуючі властивості, викликані за доїсній мембрані (пасажі на САМ; про спосіб див. помогою введення індуктора монопараімунітету Herrlich Α.. Mayr A. and Munz E.: "Die Росken". 2nd вірусу міксоми у ссавців, таких, наприклад, як люedition, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1967). Мадина, особливо корисні для усунення дисфункцій, теріал 2-6 пасажів, переважно третього пасажу на для підвищення антигеннеспецифічного захисту САМ, служив вихідним для подальшого ослабленорганізму, для усунення імуносупресії або імуноня вірусу міксоми в культурі клітин. Ослаблення дефіциту, які виникли як наслідок стресу або інмає місце після адаптації вірусів на хоріоалантоїсшим шляхом (наприклад, фармакологічно) і для ній мембрані (очевидне за типовими фокусами на одержання регуляторних ефектів взаємодії імунхоріоалантоїсній мембрані) у 3 стадії. На стадії 1 ної, гормональної та судинної систем. проводиться 80-150, переважно 120 безперервних Даний винахід обґрунтований також на успіштак званих пасажів кінцевого розведення на клітиному ослабленні штаму вірусу міксоми шляхом нах Vеro (клітини Vero, АТСС CCL-81). Вірулентпасивування клітин у культурі, при цьому віруленність вірусу міксоми, що проходить ці пасажі, тні і/або імунізуючі властивості штаму вірусу мікослабляється. соми зменшуються або втрачаються. Крім того, 15 91501 16 На 2 стадії, після 80-150 пасажу, переважно поліжелін, наприклад фірми Hausmann, Санктпісля 120 пасажу на клітинах Vero, вірусна суспенГаллен/Швейцарія), переважно 5% сукцинільовазія переноситься на так звані клітини AVIVHR, на ного желатину. Суміш, що утворилася, може бути яких проводять 10-50 пасажів, переважно 20-30, згодом ліофілізована порціями по 1,5 мл у придатособливо переважно, 25 пасажів. Клітини AVIVЕR них стерильних скляних флаконах або ампулах і, одержували шляхом злиття фібробластів курячого якщо потрібно, розчинена в дистильованій воді. ембріона (CHF) і клітин Vero, і розглядали їх як Об'єм 0,5-2 мл, переважно 1,0 мл ліофілізату, розбінарну постійну культуру клітин. чинений у дистильованій воді, відповідає інокуляПісля останнього пасажу на клітинах AVIVЕR, ційній дозі для внутрішньом'язового введення люпереважно 25 пасажу, переходять знов на клітини дині (див. також Маyr A. and Mayr В.: "Von der Vero. і на них продовжується 3 стадія ослаблення Lmpirie zur Wissenschaft", Tierarztl. Umschau, в ході подальших 100-200 пасажів, переважно edition 56: 583-587, 2002). близько 157 пасажів на клітинах Vero. Таким чиОслаблення може бути виявлено клінічно за ном, вірус міксоми реплікується загалом у ході втратою вірулентності для європейського домашбільше ніж 300 пасажів у культурі клітин. Після 3 нього і дикого кроликів (рід Oryctolagus caniculus стадії реплікації вірусу міксоми в культурі клітин csp.), за втратою контагіозності, за майже повним вірус міксоми істотно ослабляється. звуженням спектра хазяїв у культурі клітин і за Культури клітин Vero і клітин AVIVЕR перевазміною імунізуючих властивостей. жно культивуються з використанням повністю сниЛіофілізований продукт може зберігатися при тетичного середовища, особливо переважно сетемпературах переважно близько +4°С або більш редовища MEM (мінімальне підтримуюче низьких температурах, переважно близько -60°С, середовище) із додаванням 5-20%, переважно залишаючись стабільним необмежений час. 10% BMS (середовище, що замінює сироватку) і 5За допомогою досліджень на одержаних із ви20, переважно 10%, гідролізату лактальбуміну. користанням генних технологій ослаблених віруВірусним середовищем, використовуваним після сах міксоми було показано, що в геномі вірусу мікзаміни культурального середовища, переважно є соми присутні численні делеції. У випадку середовище МНМ із 5-20%, переважно 10% гідровихідного штаму М-2 геном вірусу міксоми складалізату лактальбуміну, без RMS або без фетальної ється з одиночної лінійної дезоксирибонуклеїнової телячої сироватки і без антибіотиків. Всі способи кислоти (ДНК) загальною довжиною близько 160 виробництва реалізовуються переважно при знатисяч нуклеотидів (т.п.), яка кодує декілька сотень ченнях рН 7,0-8,0, переважно при рН 7,25. Збір білків (Неrrlich А., Mayr А. and Munz E.: "'Die вірусів, що виросли в культурі з титром від 105,0 до Pocken", 2nd edition, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 7,5 6,5 10 , переважно принаймні 10 ТСID50/мл 1967). Послідовності термінально розташованих (TClD50=50% інфекційна доза культури тканин), інвертованих повторів (термінальні інвертовані переважно придатний як стартовий матеріал для повтори, TIR) займають сегмент генома приблизно одержання індуктора монопараімунітету PINDв 11 т.н. (McFadden, G. and Graham K.: "Modulation MYXO згідно з винаходом. of cytokine networks by pox virus", Virology, edition 5: Реплікація вірусу міксоми в клітинах Vero при421-429, 1994). зводить до типовою цитопатичного ефекту (срЕ), Таким чином, виявлено, що ослаблення віруякий зрештою характеризується деструкцією (лізисів міксоми шляхом послідовних пасажів на клітисом) інфікованих клітин. Інокуляція дози приблизнах Vero призвело до втрати сегментів генома, що но в 10 МОІ (множинність зараження) призводить кодують рецептори інтерферону і (IFN , IFN ), після короткої фази округлення (1-2 дні) до форфактора некрозу пухлин (TNF) та інтерлейкінів (IL) мування сітчастих клітинних структур на приблиз1, 2, 6 і 12. Цікаво, що ці цитокіни належать до пано 3 дні та до лізису клітин через приблизно 5 днів. распецифічних захисних факторів неспецифічної 301 пасаж на клітинах Vero мав інфекційний титр імунної системи. Цитокіни нейтралізуються шляблизько 106,5 TClD50/мл. хом зв'язування з відповідними вірусними рецепОслаблений вірус міксоми інактивується шляторами, так що вірус здатний реплікуватися безхом хімічної обробки -пропіолактоном у концентперешкодно. Делеції сегментів гена, який кодує згадані вище рецептори цитокінів, стосуються горації 0,01-1% -пропіолактону, переважно в концеловним чином термінальних ділянок ДНК. Однак, нтрації 0,05% -пропіолактону. Інактивація крім того, можна виявити і делеції, що відбуваютьпризводить до повної втрати імунізуючих властися в ході пасажів клітин AVIVER у консервативній востей, які у випадку необхідності ще присутні, частині ДНК. Ці делеції стосуються двох генів, які тоді як параспецифічна активність не тільки зберікодують імунний епітоп, і гену вірулентності. Такі гається, але і фактично значно збільшується. генетичні модифікації, ймовірно, є однією з причин Для подальшої переробки ослаблених та інакзниження імунізуючої, тобто антигенспецифічної, тивованих вірусів міксоми в індуктор монопараімуактивності та одночасного підвищення параспенітету вірусу міксоми (PIND-MYXO) стартовий віцифічної активності ослабленого вірусу міксоми. русний матеріал, що використовується для Імунізуючі епітопи і параспецифічний і неспевірусної інактивації, повинен мати вірусний титр цифічний епітопи конкурують. Зниження [рівня] приблизно в 105,0-107,0, переважно принаймні 106,5, згаданих першими пептидів або білків призводить TClD50/мл. до підвищення ефекту параспецифічної активносОчищення переважно проводиться шляхом ті. Залишки імунізуючих і підвищуючих вірулентцетрифугування при низьких обертах (наприклад, ність білків усуваються при приготуванні індукторів 1000 об/хвилину). Після цетрифугування додавали 0,5-10% сукцинільованого желатину (наприклад, 17 91501 18 монопараімунітету способом, описаним вище для введений назально, ректально або вагінально на інактивації ослаблених вірусів міксоми. придатному носії. Індуктор монопараімунітету згідно з винахоНижченаведені приклади є переважними варідом, що іменується також PIND-ΜΥΧΟ, оснований антами реалізації даного винаходу і служать для на використанні ослаблених вірусів міксоми або подальшого пояснення предмета даного винаходу. їхніх параімунізуючих компонентів і, внаслідок своПриклад 1 їх параімунізуючих властивостей, придатний при Вірус міксоми із підшкірною набряку європейнижченаведених показаннях у пацієнта: ського дикого кролика (рід Oryctolagus), характер- захворюваннях, викликаних інфекційним фаним чином страждаючого на міксоматоз, виділяли ктором, і змішаних інфекціях, хронічних проявах як вихідний матеріал для одержання індуктора інфекційних процесів, стійких зворотних інфекцій і монопараімунітету PIND-MYXO згідно з винаходом стійких до хіміотерапії бактеріальних і вірусних шляхом культивування на хоріоалантоїсній мемінфекцій брані (САМ) курячих яєць (яйця Valo), що інкубу- ослабленні захисних механізмів і порушеннях валися 10 днів, і адаптували три рази способом захисних систем організму НerrІich еt al. пасажами на САМ (НerrІich А., Mayr - неонатальній інфекції, що являє загрозу для A. and Munz E.: "Die Pocken", 2nd edition, Georg життя Thiemc Verlag, Stuttgart, 1967). Третій пасаж на - ад'ювантній терапії при певних пухлинних заСАМ адаптували на 1 стадії на клітинах Vеro 120 хворюваннях, наприклад для попередження метапасажами (АТСС CCL-81, ВОЗ (WHO), Американстазів, зменшення побічних ефектів хіміо- і рентгеська колекція типових культур), реплікували на 2 нотерапії стадії шляхом 24 проміжних пасажів на культурі - регуляції гомеостазу між гормональною, цирклітини AVIVЕR і потім культивували на 3 фазі в куляторною, метаболічною і нервовою системами. клітинах Vero. Загалом проводили близько 300 Індуктори параімунітету згідно з винаходом пасажів, спрямованих на ослаблення [вірусу]. Пісможуть бути введені ссавцям, включаючи людину, ля таких послідовних пасажів кінцевого розведенпареніерально або локально, а також птахам і реня початково вірулентний вірус міксоми ослаблявптиліям. Локальне введення індукторів параімуніся. тету специфічно стимулює параспецифічні захисні Ослаблений вірус міксоми реплікували в клімеханізми в слизових оболонках і в шкірі. Однак тинах Vero. Культуру клітин Vero культивували з при цьому присутній і певний системний ефект. використанням повністю синтетичного середовиНавпаки, проведена парентерально параімунізація ща, що складається з MEM (мінімального підтритрохи виливає на локальні захисні механізми шкімуючого середовища) із додаванням 10% BMS ри і слизових оболонок, впливаючи переважно (середовище, що заміняє сироватку) і 10% гідролісистемно. зату лактальбуміну. Вірусне середовище, викорисПобічних ефектів не виникає навіть при багатовуване після заміни культурального середовиторазових парентеральних введеннях, що провоща, являє собою тільки MEM із додаванням 10% дяться постійно людині і тваринам. Показання для гідролізату лактальбуміну без BMS або без фетавикористання PIND-MYXO на людині і тваринах льної телячої сироватки і без антибіотиків. Всі спооднакове. У той же час у складних випадках, зоксоби виробництва застосовували при значеннях рема, при веденні коням, свиням, собакам і котам, рН вищих ніж 7,25. Зібрані віруси з титром вищим рекомендується параімунізація новонароджених ніж 106,5 TClD50/мл служили вихідним матеріалом негайно, у день народження, переважно в перший для одержання індуктора монопараімунітету PINDі можливо також у другий день після народження. MYXO згідно з винаходом. Після інактивації зібраОдинична доза складає близько 0,5-5 мл розведених вірусів 0,05% -пропіолактоном і низькошвидного ліофілізату, для коней і свиней разова доза кісного цетрифугування до вірусного матеріалу переважно становить 2 мл, а для собак і котів пеперед ліофілізацією додавали 5% сукцинільованореважно 0,5 мл при парентеральному введенні. го желатину (поліжеліну). Також рекомендується відповідно до даного винаЛіофілізований продукт стабільний при кімнатходу вводити PIND-MYXO парентерально за один ній температурі і при температурах близько 4°С - день до і/або одночасно зі специфічними захисни80°С і може зберігатися необмежений час перевами щепленнями, щоб усунути вторинні реакції і жно при температурі близько 4°С або близько полегшити імунізацію при введенні вакцин. 60°С. Об'єм у 1 мл ліофілізату, розчиненого в стеОдин із варіантів реалізації даного винаходу рильній дистильованій воді, відповідає дозі для стосується виробництва фармацевтичної компоінокуляції. Проводять глибоке внутрішньом'язове зиції для локального введення з метою викликати або локальне введення (див. Приклади 3, 4 і 5). параімунітет у шкірі та слизових оболонках. ФарПриклад 2 мацевтична композиція переважно стосується буІндуктор PIND-MYXO згідно з винаходом ввокальних таблеток або таблеток, що розсмоктуютьдять аналогічно тому, як описано у Прикладі 1, у ся, основаних на компонентах ослабленого та сухій формі (ліофілізат не розчинений) локально інактивованого в культурі клітин вірусу міксоми. на слизові оболонки верхніх дихальних шляхів, Букальні таблетки згідно з винаходом переважно переважно назально, три рази на день, для профівиробляються з додаванням сорбіту, поліетиленглактики або терапії (2 мл на аплікацію) багатофакліколю - 6.00, кислого фосфорнокислого калію, торних інфекцій (наприклад, грипозних інфекцій). есенції для таблеток Tyrospirol, Kollidon 25 і стеаПриклад 3 рату магнію. PIND-MYXO може бути, однак, також Індуктор PIND-MYXO у рідкій формі, як у Прикладі 1, аналогічним чином втирають у шкіру для 19 91501 20 поліпшення кровопостачання шкіри, для прискоДля ліофілізації до рідкого матеріалу індуктора рення загоєння ран і для лікування варикозу вен і замість желатину додавали 5% Kollidon 25 (полівіхронічної венозної недостатності (трофічна виразнілпіролідон). Сечовина, сорбіт, поліетиленгліколь ка ніг) у людини. Для цієї мети ліофілізат може 6000 і стеарат магнію потрібні для виробництва бути взятий, наприклад, у вигляді жирного крему остаточної форми таблеток. Форма таблеток ма(наприклад, Bepanthen, Linola fat), у цьому випадку сою 500,5 мг за масою, що рекомендується, розрН повинен бути злегка лужним. Такий препарат поділяється так: повинен бути свіжоприготовленим для кожного PIND-MYXO ліофілізат 65 мг використання. Введення роблять декілька разів на Сечовина 50 мг день шляхом втирання руками у непошкоджену Сорбіт 267 мг шкіру. Відкриті рани можна обробляти краплинною Поліетіленгліколь 6000 118 мг аплікацією свіжорозчинного продукту в ділянку Стеарат магнію 0,5 мг рани. Лікування повинно проводитися кожний Вага таблетки 500,5 мг день, аж до загоєння. Пацієнт повинен приймати 4-6 таблеток з одПриклад 4 наковим інтервалом кожний день до досягнення Індуктор монопараімунітету PIND-MYXO, одеоптимальної параімунізації. ржаний, як у Прикладі 1, аналогічним чином ввоНижченаведена формула фармацевтичної дять парентерально для попередження повторних композиції визнана придатною для виробництва реакцій і для поліпшення результатів щеплення за букальних таблеток: один день до або одночасно із захисним щепленPIND-MYXO ліофілізат 155 мг ням загальноприйнятними специфічними вакциСорбіт 360 мг нами. Поліетіленгліколь 6000 300 мг Приклад 5 Кислий фосфорнокислий калій Індуктор монопараімунітету PIND-MYXO, оде(KH2PO4) безводний 2 мг ржаний, як у Прикладі 1. обробляється аналогічГідрофосфат натрію (Na2НPO4) безним чином у букальні таблетки або таблетки, що водний 8 мг розсмоктуються. Виробництво і використання табТаблеткова есенція Tyrospirol 0,8 мг леток, що розсмоктуються, для локальної параімуСтеарат магнію 20 мг нізації слизових оболонок вуха, носа, горла і рота Маса таблетки 805,8 мг є оригінальним і являє собою складову частину Таблетки повільно розчиняються в роті у паціданого винаходу. Через активовані слизові оболоєнта і можуть бути проковтнені після розчинення. нки рота [реалізовується] но тільки хомінг-ефект Результати клінічних випробувань індуктора (міграція захисних клітин у слизові оболонки і в монопараімунітету згідно з винаходом на основі інші сиситеми органів), але також і часткова пареліофілізату штаму М-2 вірусу міксоми зведені в нтеральна параімунізація. Доведено, що нижченаТаблиці 1-4 і свідчать про дуже хорошу параімуніведений спосіб виробництва придатний для вирозуючу активність ліофілізатів вірусу міксоми на бництва букальних таблеток і таблеток, що людині. Ці дані в рівній мірі є застосовними і до розсмоктуються. інших ссавців, а також до птахів і рептилій. Таблиця 1 Клінічні результати [дії] індуктора монопараімунітету з ослабленого в культурі клітин вірусу міксоми на організм людини - профілактичне застосування - (ліофілізований індуктор 1 ОР (1 мл) внутрішньом'язово) Показання Періоди високого інфекційного тиску Стрес Подорожі, екзамени і схожі стреси до або одночасно із захисним щепленням Хіміотерапія, опромінення (зменшення або попередження повторних реакцій) Операції (поліпшення загоєння ран) Підтримка оптимального ріння захисту і геодинаміки Профілактика раку і гепатитів Поліпшення стану здоров'я Придатний спосіб введення 2 ін'єкції перед стресом з інтервалом у 24 години 1 ін'єкція кожного дня або кожний другий день до завершення лікування або до вилікування 1-2 ін'єкції на місяць з інтервалом у 24 години 21 91501 22 Таблиця 2 Клінічні результати [дії] індуктора монопараімунітету з ослабленого в культурі клітин вірусу міксоми на людині - терапевтичне застосування - (ліофілізований індуктор 1 ОР (1 мл) внутрішньом'язово) Показання Герпетичні захворювання (оперізуючий лишай, інфекційний мононуклеоз, простий герпес і т.д.) Хронічні гепатити Грипозні інфекції Вірусні і бактеріальні змішані інфекції (у комбінації з антибіотиками або хіміотерапією) Придатний спосіб введення 1 ін'єкція на день протягом 3-5 днів або до зникнення симптомів; потім одна ін'єкція кожний 2 або 3 день, до повного видужання Курс кожний місяць: 3 ін'єкції з інтервалом у 24 години 1 введення на день до зникнення симптомів, потім 1 ін'єкція кожний 2 день, до повного видужання 1. інтенсивне лікування протягом 5-10 днів: 1 ін'єкція на день, Імунодефіцити і порушення регуляції захис2. потім 2 ін'єкції на тиждень з інтервалом у 24 години (можних систем (наприклад, у ході хіміотерапії) ливо лікування протягом тривалого періоду часу) Ураження ендотоксином 1 ін'єкція на день протягом 7 днів, до видужання Таблиця 3 Ефект параімунізації індуктором із міксоми (PIND-MYXO) у пацієнтів із низькими імунними параметрами (7 днів після введення PIND-MYXO) Пацієнт A.S. Жінка, 52 роки D.B. Жінка 54 роки U.S. чоловік, 38 років S.C. чоловік, 43 роки В.М. жінка, 56 років Дані про пацієнта Діагноз/Терапія Пригнічений імунітет параметр (нормальний діапазон) Лейкоцити (4000-10000/мкл) лімфоцити (900-3000/мкл) клітини CD4 (500-1800/мкл) клітини CD8 (100-1000/мкл) Лейкоцити (4000-10000/мкл) Виразковий коліт Кортизонова терапія Імунологічне порушення Радіотерапія метастазуючого Лейкоцити (4000-10000/мкл) раку простати Сприйнятливість до інфекції Цитотоксичні клітини (30-360/мкл) День 0 День 7 4000 620 400 80 3800 9400 1360 920 210 7400 3800 9900 0 248 Таблиця 4 Вплив параімунізації індуктора із міксоми (PIND-MYXO) у пацієнтів із підвищеними імунними параметрами (7 днів після введення PIND-MYXO) Пацієнт Діагноз/Терапія G.P., жінка, 59 Рак шийки матки, рак молочної залороків зи, сприйнятливість до інфекцій С.Η. жінка, 51 Психосоматичний синдром, ожиріння рік Комп’ютерна верстка О. Гапоненко Параметр (нормальний діапазон) Лейкоцити (4000-10000/мкл) гранулоцити (2400-6400/мкл) Лейкоцити (4000-10000/мкл) Гранулоцити (2400-6400/мкл) Підписне День 0 День 7 12600 8600 8420 5930 12700 6000 9270 4760 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601