Активний агент для одержання фармацевтичного препарату для лікування твердих пухлин і лімфом, похідна ara-c та фармацевтична композиція

Номер патенту: 55389

Опубліковано: 15.04.2003

Автори: Стуккє Хєлль Тургейр, Далєн Аре, Бєррєтсен Бернт, Мюхрєн Фінн

Є ще 4 сторінки.

Дивитися все сторінки або завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

1. Застосування похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для лікування твердих пухлин та лімфом:

,                               (I)

де R1 та R2 вибирають незалежно з водню та С18 та С20 - насичених та мононенасичених ацильних груп, за умови, що R1 та R2 обидва не можуть бути воднем.

2. Застосування за п. 1, де R1 та R2 обирають з водню та насичених або -9-мононенасичених С18 та С20 -ацильних груп.

3. Застосування за п. 2, де R1 являє собою водень.

4. Застосування за п. 3, де R2 являє собою елаїдоїльну або ейкозеноїльну (цис або транс) групу.

5. Застосування за будь-яким з попередніх пунктів похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для місцевого лікування твердих пухлин або лімфом.

6. Застосування за будь-яким з пп. 1-4 похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для системного лікування твердих пухлин або лімфом.

7. Застосування за будь-яким з попередніх пунктів похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для лікування твердих пухлин або лімфом у ретикулоендотеліальній системі (RES).

8. Застосування за будь-яким з пп. 1-6 похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для лікування твердих пухлин або лімфом у центральній нервовій системі (ЦНС).

9. Застосування за будь-яким з попередніх пунктів похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для лікування метастатичних пухлин.

10. Похідна Аrа-С формули І:

,                                 (I)

де R1 та R2 незалежно вибирають з групи, що включає водень, елаїдоїл, олеоїл, стеароїл, ейкозеноїл (цис або транс) і ейкозаноїл, за умови, що R1 та R2 обидва не можуть бути воднем, олеоїлом, елаїдоїлом, стеароїлом, ейкозаноїлом, і R1 не може бути воднем, коли R2 являє олеоїл або стеароїл, та R2 не може бути воднем, коли R1 представлений елаїдоїлом, олеоїлом, стеароїлом, ейкозаноїлом.

11. Фармацевтична композиція, що містить похідну Аrа-С формули (І) за п.10 та фармацевтично придатний носій або наповнювач.

Текст

1 Застосування похідної Ara-C формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для лікування твердих пухлин та лімфом 4 Застосування за п 3, де R2 являє собою елаїдоільну або ейкозеноільну (цис або транс) групу 5 Застосування за будь-яким з попередніх пунктів похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для місцевого лікування твердих пухлин або лімфом 6 Застосування за будь-яким з пп 1-4 похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для системного лікування твердих пухлин або лімфом 7 Застосування за будь-яким з попередніх пунктів похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для лікування твердих пухлин або лімфом у ретикулоендотеліальній системі (RES) 8 Застосування за будь-яким з пп 1-6 похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для лікування твердих пухлин або лімфом у центральній нервовій системі (ЦНС) 9 Застосування за будь-яким з попередніх пунктів похідної Ara-С формули (І) як активного агента для одержання фармацевтичного препарату для лікування метастатичних пухлин 10 Похідна Ara-С формули І (І) де Ri та R2 вибирають незалежно з водню та С-із та С20 - насичених та мононенасичених ацильних груп, за умови, що Ri та R2 обидва не можуть бути воднем 2 Застосування за п 1, де Ri та R2 обирають з водню та насичених або ю-9-мононенасичених Сіє та С20 -ацильних груп 3 Застосування за п 2, де Ri являє собою водень де Ri та R2 незалежно вибирають з групи, що включає водень, елаїдоїл, олеоїл, стеароїл, ейкозеноїл (цис або транс) і ейкозаноїл, за умови, що Ri та R2 обидва не можуть бути воднем, олеоілом, елаїдоілом, стеароілом, ейкозаноілом, і Ri не може бути воднем, коли R2 являє олеоїл або стеароїл, та R2 не може бути воднем, коли Ri представлений елаїдоілом, олеоілом, стеароілом, (21)98020922 ( 2 2 ) 1 2 07 1996 ( 2 4 ) 1 5 04 2 0 0 3 (о О 00 со ю ю 55389 еикозаноілом 11 Фармацевтична композиція, що містить похідну Ara-С формули (І) за п 10 та фармацевтично придатний носій або наповнювач Винахід стосується деяких нуклеозидних похідних, які, як було знайдено, мають ЦІННІ властивості для лікування пухлин Нуклеозидні ПОХІДНІ є складними ефірами 1-p-Dарабшофуранозилцитозину (Ara-С) формули А клініцістів у нагоді Механізм дії Ara-С базується на його ферментативному розпізнаванні як 2'деоксирибозид та наступному фосфорилуванні у нуклеозидтрифосфат, який конкурує з нормальним СТР (цитозин-5'-трифосфат) за включення у ДНК 2'-пдроксильна група викликає стеричні труднощі для обертання піримідинової основи навколо нуклеозид ного зв'язку Основи поліарабшонуклеідів не можуть нормально "нарощуватись", як це роблять основи полідезоксинуклеотидів Ага-С інгібує відновлення та синтез ДНК як шляхом уповільнення подовження ланцюгу "вниз за течією", так і руху заново реплікованої ДНК шляхом пов'язаного з матрицею апарату реплікації Механізм дії Ага-С призводить до "незбалансованого зростання" клітин, які діляться Ara-С діє під час S-фази клітинного циклу Для неперервного інгібування синтезу ДНК і, в кінцевому результаті, смерті клітини, необхідно, щоб Ara-С було присутнє в достатньо високій концентрації протягом, принаймні, одного клітинного циклу он (А) Ara-C ІНОДІ позначають як цитозар Ara-С давно відомий як хіміотерапевтичний засіб для лікування гострого мієлогенного лейкозу, але має обмежену ефективність проти твердих пухлин (Fre et al , Cancer Res 29 (1969), 1325-1332, Daws ef al , Oncology, 29 (1974), 190-200, Cullman et al , Cancer Treat Rep 61 (1977), 1725-1726) Проте, навіть при лікуванні лейкозу Ara-C використовувався обмежено, оскільки має короткий біологічний період напіврозпаду та високу токсичність З метою подолання цих труднощів багатьма дослідниками були одержані та випробувані пролікарські ПОХІДНІ Ага-С Наприклад, Hamamura et al , досліджували З'-ацил- та 3', 5'-діацилпохідні Ara-C (J Med Chem 19 (1976) №5, 667-674) Ці вчені одержали та випробували різні ПОХІДНІ Ага-С з насиченими або ненасиченими складними ефірними групами, що містять від 2 до 22 атомів вуглецю, і ними виявлено, що багато з цих сполук мають більш високу активність проти лейкемії L1210 у мишей, ніж сам первинний нуклеозид Праця Hamamura et al та ІНШІ роботи у галузі пролікарських аналогів Ага-С описані у Handfield et al в Advances in Pharmacology and Chemotherapy, 20, 1984, pages 21-67 При обговоренні складних 5' ефірів Ara-С ці автори прийшли до висновку (стор 27), що " незважаючи на те, що багато з цих засобів, очевидно, діють як дуже ефективні форми депо Ага-С в мишах, аналогічний вплив на людину не виявлений" Хоч дослідження продовжували на проліках, що базувались на Ara-С, включаючи 3' та 5'ацилпохідні (див , наприклад, Rubas et al в Int J Cancer, 37, 1986, pages 149-154, які випробовували ЛІПОСОМНІ готові препаратні форми, серед інших похідних, 5'-олеіл - Ara-С проти лейкозу L1210 та меланоми В16), на даний час НІЯКІ подібні лікарські засоби не стали для Основною причиною, через яку Ara-С не використовують для лікування твердих пухлин, є знову ж таки швидке виведення ракових клітин і плазми з лікарського середовища Очевидно, що неможливо досягти значного внутрішньоклітинного рівня лікарського засобу в тканині пухлини, навіть якщо ця пухлина чутлива до Ara-C in vitro Несподівано пролонгований час напіврозпаду та змінений розподіл продуктів за даним винаходом у тканині буде мати величезне значення для терапевтичної дії цих продуктів Виявлено, як це показано на фігурах 7, 8 і 9, що на відміну від самого Ara-С, а також й інших складних моно- і діефірів, 3' і 5'-О-ефіри Ara-С та деяких насичених і ненасичених жирних кислот несподівано виявляють високу активність проти різноманітних пухлин Вважають, що модель для випробування, яку здебільшого використовують (ін'єкції лейкозних клітин в черевну порожнину і внутрішньочеревинна обробка), є більш близькою до моделі in vitro, ніж до дійсної клінічної ситуації, і може призвести до неможливості визначення особливо цінних властивостей обраних складних ефірів Ara-С, що використовуються в даному винаході, як це буде описано нижче Більш конкретно, складні 3' і 5'-О-ефіри, які використовують ВІДПОВІДНО до даного винаходу, є ефірами, похідними від насичених і мононенасичених С-is або С20 жирних кислот Таким чином, складні ефіри, що використовуються у даному винаході, можна представити формулою 55389 де R-i, і R2 незалежно обирають з водню й С-is і С20 - насичених та мононенасичених ацильних груп, за умови, що Ri, і R2 обидва не можуть бути воднем Подвійний ЗВ'ЯЗОК мононенасичених ацильних груп може бути або у цис-, або у трансконфігурацм, хоча терапевтична дія може змінюватись в залежності від конфігурацій, яка в и ко р исто вується Положення подвійного зв'язку у мононенасичених ацильних групах, очевидно, також впливає на активність Тепер надають перевагу використанню складних ефірів, що мають ненасиченість в ш-9-положенні (В ш-системі номенклатури положення (ш) подвійного зв'язку мононенасиченої жирної кислоти рахують від кінцевої метил ьної групи, так, наприклад, ейкозенова кислота (С20 1 ш-9) має 20 атомів вуглецю у ланцюгу та єдиний подвійний зв'язок, що утворений між атомами 9 та 10, рахуючи від кінцевої метильної групи ланцюга) Таким чином, краще використовувати ефіри Ага-С, що є похідними від олеїнової кислоти (Сіє 1, ш-9, цис), елаїдинової кислоти (С-із 1, ш-9, транс), ейкозенової кислоти (С20 1 ш-9, цис), стеаринової кислоти (Сіє, О) та ейкозанової кислоти (С20 О) При лікуванні різних пухлин згідно з даним винаходом можна використовувати як складні 3іО- та 5'-О-моноефіри, так і складні 3', 5'-діефіри, але взагалі краще використовувати 5'-Омоноефіри Передбачається, що складні З', 5'-Одіефіри будуть корисні у випадках, коли ліпофільні умови є сприятливими, наприклад, за умов абсорбції або поглинання у ЛІПІДНИХ тканинах Сполуки формули (1), де R-і, та R2 незалежно обирають з групи, яка містить водень, елаїдоїл, олесил, стеароїл, ейкозеноїл ( цис- або транс-) та ейкозаноїл, за умови, що Ri, та R2 обидва разом не можуть бути воднем, олеоілом або етеаролом R-і, не може бути воднем, коли R2 є олесилом або стеароілом, та R2 не може бути воднем, коли Ri, представляє елаїдоїл, олесил або стеароїл, є новими сполуками, раніше не описані на даному технічному рівні Більш конкретно нові сполуки формули (1) визначені в наведеній нижче таблиці А, де вказані значення R-і, і R2 Таблиця А водень водень елаїдоїл ейкозеноїл (цис) водень ейкозеноїл ейкозеноїл ейкозеноїл ейкозеноїл ейкозеноїл ейкозеноїл ейкозеноїл ейкозеноїл елаїдоїл елаїдоїл ейкозеноїл ейкозеноїл олеоїл олеоїл ейкозаноїл ейкозаноїл стеароїл елаїдоїл ейкозеноїл ейкозеноїл елаїдоїл ейкозеноїл ейкозеноїл стеароїл олеоїл (цис) (транс) (цис) (транс) (цис) (транс) (цис) (транс) (цис) (транс) (цис) (гране) (цис) (транс) ейкозеноїл водень водень ейкозеноїл ейкозеноїл ейкозеноїл ейкозеноїл елаїдоїл елаїдоїл ейкозеноїл ейкозеноїл олеоїл олеоїл ейкозеноїл ейкозеноїл ейкозаноїл стеароїл ейкозаноїл стеароїл стеароїл стеароїл ейкозаноїл ейкозаноїл ейкозаноїл олеоїл стеароїл (транс; (цис) (транс) (транс) (цис) (цис) (транс) (цис) (транс) Фактором, що обмежує використання Ага-С, є руйнування його цитидиндеаміназою та деоксицитидинмонофосфат(сЮМР)деамшазою, внаслідок чого утворюються неактивні метаболіти Несподівано було виявлено, що складні моноефіри, які є предметом цього винаходу, є поганим субстратом для цих деактивуючих ферментів Ця ВІДМІННІСТЬ може бути свідченням того, що ПОХІДНІ ефіру є більш придатними, ніж сам Ага-С, для системного або локального лікування злоякісних пухлин, особливо злоякісних пухлин в RES (ретикулоендотеліальній системі) та CNS (центральній нервовій системі) Це чітко відображено в моделях лейкозних метастазів у головному мозку, представлених на фігурах 10, 11, та 12, і, особливо зі значно агресивнішою В-клітинною лімфомою, показаною на фігурі 11, де сам Ага-С є неактивним При клінічному лікуванні мієлогенного лейкозу швидку деактивацію Ага-С компенсують неперервним вливанням його протягом 5-7 днів, що дає змогу встановити достатньо стабільний терапевтичне активний рівень Ага-С в плазмі Виявлено, що шляхом внутрішньовенного введення пацюкам радюміченого Ага-С і Ага-С-5'елаїдилового ефіру в еквімолярних кількостях можна досягти успішних змін швидкості метаболізму та профілю (характеру) екскреції Як свідчать дані, наведені в таблиці 1 та представлені на фіг 20, введення Ага-С-5'елаїдилового ефіру призводить як до більш високої початкової його концентрації в ЦІЛЬНІЙ крові та плазмі, так і до більш повільного перетворення в Ara-U Деамшування Ага-С до АгаU складних ефірів цього винаходу, тут наведений приклад введення елаїдату, спостерігають як значно повільніше, тоді як рівні Ara-C\Ara-U в плазмі знаходяться нижче межі їх виявлення в аналізі в точці 48год, коли вводять чистий Ага-С, ці 55389 дві сполуки можна все ж таки КІЛЬКІСНО визначити в точці 72год після введення Ага-С-5'-елаідату Як свідчать дані таблиці 2, загальна екскретована КІЛЬКІСТЬ Ara-U (AUC, 0-72год) однакова для обох введених сполук В КЛІНІЧНИХ ситуаціях ці результати відображуються в значно ширшому часовому інтервалі терапевтично активної концентрації Ara-С в крові В моделі лейкозу m vitro, представленій на фіг 13, порівнюють Ara-С і 5'-елаідиновий ефір, і протиракову дію, що подібна до дії, яку зумовлює Ara-С, демонструють шляхом введення 1/20 молярної дози ефіру Якщо подібний профіль токсичності, який було виявлено в КЛІНІЦІ внаслідок використання Ага-С, спостерігають у випадку з ефірними похідними, покращення терапевтичного індексу повинно бути величиною такого ж порядку, як і покращення співвідношення доза/дія Основне значення при лікуванні лейкозних та інших захворювань, обмежених ретикулоендотеліальною системою (RES), має, звичайно, проміжок часу, протягом якого спостерігається активна концентрація лікарського засобу в крові, однак, крім того, величезне значення буде мати локалізація активної сполуки в тканині RES (визначена як печінка, селезінка, лімфа, легені, стінки кишечника і ВІЛЬНІ фагоцитарні клітини, які присутні, наприклад, в кістковому мозку і ЦІЛЬНІЙ крові) Спостерігали (фігура 21 та таблиця 1), що при внутрішньовенному введенні Ara-С і Ага-С-5'елаїдилового ефіру в еквімолярних кількостях, концентрація активного лікарського засобу в тканинах RES значно вища і зберігається протягом більш тривалого проміжку часу при введенні похідного ефіру Детально було досліджено характер розподілу і метаболізму, для печінки результати наведено на фігурі 19 Терапевтично істотний рівень Ara-С зберігається протягом, принаймні, 72 год після введення похідного ефіру Це може зробити можливим лікування початкових стадій раку печінки або метастазів в печінку колоректального раку, раку молочної залози, меланоми та інших форм раку Лікування можна проводити як монотерапію або як паліативне/допоміжне лікування в поєднанні з хірургією, опроміненням або з іншим видом хіміотерапії Спостерігають також підвищені концентрації Ara-С в інших тканинах, що у поєднанні з меншим об'ємом розподілу може відкрити шлях для терапії Ага-С-ефірами таких форм раку, що, як правило, не пов'язані з лікуванням за допомогою Ага-С Крім того, несподівано було встановлено, що складні ефіри, ВІДПОВІДНО до цього винаходу (фігура 15), значною мірою стимулюють активацію NFkappaB, в той час як Ara-С не дає ніякої стимуляції Стимуляція є біологічною дією, яка, як правило, не спостерігається при використанні терапевтичних ХІМІЧНИХ агентів, особливо, коли йдеться про використання звичайних цитостатичних агентів Це дозволяє припустити, що Лга-С-ефіри, ВІДПОВІДНО до даного винаходу, виявляють стимулюючу дію стосовно певних імунних факторів, що дає змогу пояснити несподіване покращення протиракової дії Це 8 особливо важливо при лікуванні хвороб, пов'язаних з пухлинами, що включають імунокомпетентні клітини, такі як лейкозні або лімфатозні Розвиток стійких ракових клітин є серйозною проблемою сучасної хіміотерапії раку Було виявлено (фігури 7-9), що ПОХІДНІ Ara-С, ВІДПОВІДНО до даного винаходу, виявляють таку ж дію як на клітини, СТІЙКІ до цисплатини (NHIK 3025/DDP)/, клітини, СТІЙКІ до MDR (A549), так І на ВІДПОВІДНІ нерезистентні КЛІТИННІ лінії Можна припустити, що це зумовлено тим, що ці ПОХІДНІ не є субстратами для клітинних механізмів витікання лікарського засобу з клітини, таким як "насос MDR gp 120°, який відповідає за феномен, відомий як резистентність до багатьох лікарських засобів Сіє - і С20 - складні моно - і діефіри Ага-С можна використовувати для лікування ряду неопластичних пухлин Особливо перспективним є те, що встановлений вплив на пухлині молочної залози, таких як гліома, та метастази інших пухлин, таких як саркоми, карциноми, а також лейкоз В теперішній час гліому лікують хірурпє л л радіаційною терапією та цитостатичними засобами, наприклад N, І\І-біс-(2-хлоретил) -Nнітрозосечовиною (BCNU) Однак, прогноз такого лікування є несприятливим Корисна дія складних ефірів Ага-С , ВІДПОВІДНО до даного винаходу, виявлена також у метастатичних пухлинах, таких як карцинома, саркоми, лейкоз та меланоми Обсяг винаходу та його суттєві та переважні ВІДМІННОСТІ визначені у формулі винаходу, що додається Біологічна дія Міцелярна препаративна форма Міцелярну готову препаративну форму 1мг/мл одержують шляхом змішування 1 1 (мас /мас) складного ефіру Ara-С (в DMSO) та лецитину ( в етанолі) у стерильній воді Аналіз колоногенної ага рози У пацієнта брали біопсію і одразу ж розміщували у середовищі для вирощування Тканину пухлини механічно подрібнювали, відбирали живі клітини, додавали хіміотерапевтичну досліджувану речовину, BCNU (у воді) та Ака-С, і ефіри Ara-С (у міцелах) і клітини культивували в середовищі м'якої агарози За 24 години до закінчення культивування (7 днів) додавали 3Н тимідин Активність досліджуваної речовини, таким чином, КІЛЬКІСНО визначали як число імпульсів за хвилину в сцинтиляційному лічильнику (1| G Unsgaard et al , Acta Neurochir (Wien) (1988)91 60-66 Фігура 1 Представлені результати, отримані з глюбластомою, взятою у пацієнта Аналогічна картина ВІДПОВІДІ отримана й у 8 інших біопсіях глюбластоми Графік дає змогу порівняти in vivo Ara-С і його З'-елаїдиловий ефір та 5'-елаідиловий ефір Результати наводяться у відсотках від необробленого контролю Значення 50% (CDso) вибирають як перспективне для використання в терапії цієї дійсної ракової лінії У порівнянні з елаїдиловими ефірами тут не має практичного 55389 значення концентрація Ага-С, вища, ніж 10 , що необхідна для отримання CDso Фігура 2 Представлені результати, отримані з тією ж глюбластомою, що й на фігурі 1 Графік дає змогу порівняти наслідки радіаційної терапії та хіміотерапії (BCNU) Доза радіації, вища від 10 грей (Гр), необхідна для отримання CDso, практичного значення в терапії не має Порівняння фігур 1 і 2 показує, що концентрація BCNU, необхідна для отримання CDso , приблизно у 10 разів вища, ніж концентрація, яка необхідна при використанні складного ефіру Ага-С, однак, її можна порівнювати з концентрацією самого Ага-С Фігура З Представлені результати, отримані з біопсією, взятою з метастаз меланоми головного мозку Різниця МІЖ Ага-С та 3'- и 5'-елаідиловими ефірами не так чітко виражена, як у випадку з гліомою, але все ж на 10 порядків вище Фігура 4 Показана активність BCNU по відношенню до клітинної лінії меланоми У порівнянні з ефірами Ага-С, для одержання CDso необхідна концентрація BCNU більша, ніж 1x102 Фігура 5 На цьому графіку показані результати з метастазою карциноми головного мозку Ці ракові клітини більш СТІЙКІ до хіміотерапії, але все ж присутня різниця між Ага-С та ефірами Ага-С Фігура 6 Результати обробки BCNU метастази карциноми легень, наведені нижче, схожі на результати, що вже демонструвались з іншими КЛІТИННИМИ ЛІНІЯМИ Щодо інших досліджених клітинних типів, очевидно, є явні розбіжності у активності складних ефірів Ага-С, Ага-С и BCNU Активність типу 1x102 є дуже перспективною для терапії Отримані дані показують, що 5'-ефіри більш активні, ніж З'-ефіри Інактивація клітин - здатність до утворення колоній Інактивацію клітин, що вимірюється за втратою здатності до утворення колоній, визначали для декількох сполук Клітини, що використовувались, були встановленими клітинними ЛІНІЯМИ походження in situ раку шийки матки людини, NHIK 3025, NHIK 3025/DDP, цисDDP-резистентним варіантом тих же клітин або клітини А549 (карцинома легень людини) Ці клітини піддавали впливу сполуки, яку досліджували, протягом від 4 аж до 24 годин Досліджувані сполуки вводили у вигляді міцелярного розчину Число колоній підраховували приблизно через 12 днів після інкубації Фігура 7 Графік дає змогу порівнювати in vitro досліджуваних сполук Ага-С, Ага-С-5'елаїдилового ефіру, Ага-С-5'-стеарилового ефіру, Ага-С-5'-ейкозенового ефіру і Ага-С-5'петроселінового ефіру Результати представлені у вигляді дози, необхідної для зниження виживання клітин на 90 % по відношенню до необробленого контролю Як видно з графіка, спостерігається значно вища інактивація клітин після впливу на них вказаних ефірів порівняно з самим Ага-С 10 Фактор, який модифікує дозу, при рівні виживання 10% знаходиться у діапазоні від 3 до 5 для Ага-С ефірів порівняно з Ага-С, який означає, що для отримання тієї ж зниженої здатності до утворення колоній, яка спостерігається для ефірів, потрібна доза Ага-С, в 3-5 разів вища Фігура 8 Отримані результати обробки клітин NHIK 3025/DDP протягом 4 годин Спостерігали посилену дію в клітинах NHIK 3025, аналогічну посиленій дії /Ага-С-5'-елаідатного ефіру у порівнянні з дією Ага-С Підсилення дії не залежить від резистентності до цис-DDP Фігура 9 Графік дає змогу порівнювати результати, отримані in vitro, щодо здатності клітин А549 (клітини карциноми легень людини) утворювати колонії для досліджувані сполук Ага-С, Ага-С-5'елаїдилового ефіру, Ага-С-5'-стеарилового ефіру, Ага-С-5'-ейкозенового ефіру і Ага-С-5'петроселінового ефіру Клітини піддавались дії протягом 24 годин Найвищу інактивацію спостерігали для Ага-С-5'-стеарилового ефіру, однак підвищену дію спостерігали також І для елаїдиловогота петроселінового ефірів В-лімфомні клітини Raji людини - модель лептоменшптного карциноматозу у голих пацюків Модель, яка використовується, є моделлю пухлини у голих пацюків для лептоменінптного росту пухлин 1х106 клітин В-клітинної пухлинної лінії Raji вводили шляхом ін'єкції в цереброспінальну рідину через cisterna magna (с m) (простір між павутинною оболонкою і поперечною щілиною мозочку) голим пацюкам у ВІЦІ 4-5 тижнів У тварин розвивались неврологічні симптоми через 12-14 днів, у випадку, коли їх не лікували Анестезованих тварин обробляли штрацеребрально ІН'КЦІЄЮ 40мкл в cisterna magna З або 4 болюсів Обробку розпочинали через 1 день після клітинної інокуляції Сполуки, які досліджувались, були Ага-С-5'-елаідиловий ефір (в міцелах) і Ага-С Ага-С вводили як в дозі, що максимально може бути витримана (MTD), так і в дозі, еквімолярній дозі Ага-С-5'-елаідинового ефіру У контрольних тварин (оброблених NaCI або пустими ліпосомами (міцели без ефірів Ага-С)) розвивались симптоми порушення центральної нервової системи приблизно через 14 днів Фігура 10 Ін'єкції 3 болюсів з Ara-C-елаідатом на 1, 2 і 4 дні збільшують латентний період без симптомів на 135% порівняно з Ага-С, з середнім значенням дня смерті, який було затримано від 13 до ЗО, 5 дня, як показано на фіг 10 Один пацюк був живий протягом понад 70 днів, можна вважати, що цей пацюк вилікувався При його розтині на 76 день не було помічено жодних видимих ознак пухлин Це підвищення тривалості існування без хвороби перевершує результати, які були отримані при застосуванні інших терапевтичних альтернативних засобів, досліджуваних з використанням моделей, що можуть порівнюватись для різних типів пухлин людини Фігура 11 На цій фігурі представлені криві виживання для додаткового експерименту з голими 12 11 55389 пацюками, інокульованими клітинами Raji в В-лімфомними клітинами Raji людини і/або головний мозок, і обробленими дозами 4 болюсів оброблені шляхом однієї внутрішньовенної ін'єкції Добову дозу, що становила 1 болюс, вводили на 1, Ara-C-елаідату протягом кожного з перелічених 2, 3 і 4 дні в cisterna magna Як і в попередньому днів - 7, 9, 11, 13 і 15, або контрольної групи експерименті, не спостерігали будь-якого впливу мишей Ці ДОЗИ складали 20мг/кг Ага-С-елаїдатута для Ara-С, як при дозі Ara-C (MTD), що 200мг/кг Ara-С На підставі еквімолярності, доза максимально може бути витримана, так і при дозі, Ara-C-елаідату, що знижена в 20 разів у порівнянні еквімолярній дозі Ara-C-елаідату, Результати для з дозою Ara-С, підвищувала середнє виживання у групи, що отримала Ara-C-елаідат, були навіть порівнянні з контролем та тваринами, що більш вражаючими, ніж результати, отримані в оброблялись Ara-С КІЛЬКІСТЬ тварин у кожній групі попередньому експерименті 3 з 5 пацюків все ще дорівнювала 7 були живими і не мали симптомів на 70 день, що Фігура 14 можна вважати випадками одужання Це На цій фігурі показане середнє виживання найбільш перспективний результат 5 з 6 мишей, інфікованих внутрішньовенно Вконтрольних пацюків загинули на 13 день Шостий лімфомними клітинами Raji людини і оброблених контрольний пацюк не мав зворотного закидання або внутрішньовенно однією ІН'ЄКЦІЄЮ В КОЖНИЙ З цереброспінальної рідини в шприц після ін'єкції дней 7-11 Ara-C-елаідатом чи Ara-С, або тих що є пухлинних клітин і не мав неврологічних симптомів контрольною групою Середній час виживання через 70 днів ВІДПОВІДНО ДО звичайної методики значно подовжений у випадку Ara-C-елаідату, коли цю тварину не враховують в результатах обробку повторюють кожного дня замість проведення її через день Лімфомні клітини Molt 4 людини - модель лептоменшптного карциноматозу в голих пацюках Активація клітинного фактору транскрипції NEkappaB Ця модель є моделлю пухлини у голих пацюків для лептоменшптного росту пухлин 1х106 клітин Були використані клітини аденокарциноми Т-клітинної пухлинної лінії Molt 4 вводили шляхом ободочної кишки SW480 людини стабільно ін'єкції В цереброспінальну рідину через cisterna трансфіковані промотор CMV/енхансер-вміщуючий magna (с m) голим пацюкам у ВІЦІ 4-5 тижнів У ген р-галактоз ід аз и Активація фактору тварин розвивались неврологічні симптоми через транскрипції NFkappaB призводить до підвищеного 20-22 дні, якщо їх не лікували Анестезованих вмісту ферменту р-галактоз ід аз и у цитоплазмі тварин обробляли штрацеребрально шляхом КІЛЬКІСТЬ р-галактозідази виз-начал и, ін'єкції 40МКЛ В cisterna magna з ІН'ЄКЦІЯМИ 4 використовуючи як параметр оптичну ЩІЛЬНІСТЬ болюсів Обробку розпочинали через 1 день після при 570нм Клітини SW380 шкубували 2-3 дні клітинної інокуляції Сполуками, які перед впливом на них досліджуваної сполуки досліджувались, були Ага-С-5'-елаідиловий ефір протягом 4 годин Клітини промивали, готували та (в міцелах) і Ага-С Ara-С вводили як в дозі, яка реєстрували оптичну ЩІЛЬНІСТЬ ДЛЯ різних сполук максимально може бути витримана (MTD), так і в Фігура 15 дозі, що еквімолярна дозі Ага-С-5'-елаідилового Після впливу Ara-С не спостерігалось ефіру У контрольних тварин (оброблених NaCI), (визначали шляхом вимірювання) ніякої активності розвивались симптоми порушення в центральній Р-галактозідази, тоді як після впливу Ага-Снервовій системі приблизно через 20 днів елоідату спостерігалось значне підвищення Фігура 12 активності р-галактоз ід аз и у вигляді збільшення На фігурі 12 представлено виживання як оптичної ЩІЛЬНОСТІ при 570нм Це вказує нате, що функцію часу для пацюків, яким шляхом ІН'ЄКЦІЙ з Ara-C-елоідатом одержують несподівано високу вводили в головний мозок клітини лімфоми Molt 4, індукцію транскрипційного активуючого білку і які були оброблені 4 рази в cisterna magna В NFkappaB Цей білок втягується у генний контроль цьому початковому експерименті початок загибелі низки імунних факторів, і ця активація Ага-Стварин, що отримували /Ага-С-елаїдат, елаїдатом може пояснити підвищену антиракову затримувався порівняно з тваринами, які дію, яка спостерігається у випадку з Ага-Сотримували Ara-С, або порівняно з контролем елаїдатом, Можна очікувати стимуляції деяких Число тварин в групі становило контроль (7), Агаімунних клітин за допомогою Ara-C-елаідату, яка С-елаїдат (3) і Ага-С (5) може бути особливо цікавою при лікуванні лейкозу та лімфом Модель лейкозу, в якій використовували Влімфомні клітини Raji людини Анти пухлинна активність Ara-C-алаідату у Мишам SC/D шляхом Ін'єкцій вводили порівнянні з Ara-С проти мишачої лімфоми TLX/5 6 внутрішньовенне 1x10 В-лімфомних клітин Raji Мишей СВА з масою 20-25г інокулювали під людини Мишей обробляли на 7, 9, 11, 13 і 15 дні шкіру у паху 1x105 пухлинних клітин TLX/5 у день після ін'єкції пухлинних клітин або 20мг/кг/день 0 Ага-С-елаїдат або Ara-С вводили Ara-C-елаідату чи 200мг/кг/день Ara-С, або вони внутрішньочеревинно у дні 3, 4, 5, 6 та 7 Дози були контрольною групою мишей Внаслідок росту знаходились в діапазоні 6, 25-50мг/кг/день пухлини у тварин розвивався параліч задніх лап Використовували по 5 мишей на кожну групу Середній день смерті для тварин, що зазнали обробки та 10 контрольних мишей з пухлинами обробки тим чи іншим препаратом, представлений Активність визначалась по збільшенню тривалості на фігурі 13 життя (ILS) відносно контрольної групи Фігура 13 Фігура 16 На цій фігурі показано середнє виживання На цій фігурі представлене у відсотках мишей SC/D, що були ін'єковані внутрішньовенне збільшення тривалості життя мишей, що мали 13 лімфомну пухлину TLX/5 (у середньому 5 на групу) після обробки Ara-C-елаідатом або Ага-С, внутрішньочеревинна обробка протягом 5 днів Ага-С виявляв активність тільки при дозі 25 мг/кг, тоді як Ага-С-елаїдат - при дозах 12,5мг/кг Максимальне збільшення тривалості життя складало ЛІ,2% у порівнянні з 32,7% для Ага-С Антипухлинна активність Ara-C-елаідату у порівнянні з Ага-С у мишей SCID, що інокулювались внутрішньочеревинно клітинами геманпосаркоми Мишей SCID інокулювали внутрішньочеревинно клітинами геманпо-сарюми PV/2b/35 Мишей обробляли протягом 5 днів на тиждень дозою у 25мг/кг/день Ага-С-елаїдату, виготовленого у міцелах, Ага-С-елаїдату, розчиненого у фізіологічному розчині PBS з фосфатним буфером Контрольні миші одержували пусті міцели, ВІДПОВІДНО DMSO та PBS Тварин не обробляли з суботи до понеділка Виживання було кінцевою точкою досліду Фігура 17 На цій фігурі представлено виживання мишей SCID, інокульованих внутрішньочеревинно клітинами геманпосаркоми PV/2b/35 Виживання значно підвищувалось для тварин, що оброблені Ara-C-елаідатом Підвищене виживання у порівнянні з контрольною групою спостерігалось як для Ага-С-елаїдату, що виготовлений у міцелах, так і для Ага-С-елаїдату, що розчинявся у DMSO Фігура 18 Наведені результати, які одержані при вивченні впливу 5'-Ага-С-елаідилового ефіру на збільшення глюбластомної пухлини у голих мишей Тканинну культуру глюбластомної клітинної лінії U-118 (Uppsala) ін'єкували під шкіру голим мишам Невелику частину (2х2мм) пухлини, що збільшувалась, пересаджували новим мишам Підшкірні пухлини виявляли у деякій мірі різну швидкість зростання у різних тварин, але при розмірі 4-6мм міцелярний розчин 10мг/мл ефіру Ага-С вводили за допомогою ін'єкції всередину пухлини В залежності від дійсного розміру пухлини тварини одержували ту ж саму відносну 55389 14 КІЛЬКІСТЬ досліджуваної речовини Контрольні миші одержували водний сольовий розчин Зростання пухлини реєстрували як відносний об'єм пухлини (RTV) Контрольна пухлина розвивалась ВІДПОВІДНО до нормальної моделі зростання, типової для цього виду раку Відмічена повна зупинка зростання пухлини у оброблених тварин Крім того, у тварин не спостерігалось симптомів токсичної побічної дії, якою у випадку з Ага-С є пошкодження кісткового мозку з розвиненням анемії або кровотечі, також не було помічено якихнебудь симптомів розладу ЦНС Порівняльна фармакокінетика, розподіл, метаболізм та екскреція 14С-Ага-С-елаідату та САга-С, введених внутрішньовенно самцям пацюків Радіоактивну речовину 14С-Ага-С-елаідат (у міцелах) або 14С-Ага-С вводили внутрішньовенно самцям пацюків у еквімолярних дозах, 5мг/кг для 14 Ага-С-елаідату та 2,4мг/кг для 14С-Ага-С Концентрацію у плазмі загальної радіоактивності та метаболітів визначали у різних точках часу Концентрацію загальної радіоактивності у тканині для різних тканин визначали у різних точках часу аж до 120 годин після ін'єкції Тканини печінки екстрагували і концентрацію метаболітів визначали аж до 72 годин після ін'єкції Розподіл Ага-С-елаїдату у тканинах значно змінювалось у порівнянні з розподілом Ага-С Максимальні концентрації у більшості тканин були значно вищими і спостерігались у більш ПІЗНІХ точках у часі після введення 14С-Ага-С-елаідату, особливо у ЦІЛЬНІЙ крові/плазмі, селезінці, печінці та легенях Максимальні концентрації у м'язах, слинних залозах, шкірі та сечовому міхурі були нижчими Було встановлено, що пропорція дози у ЦІЛЬНІЙ крові у точці 0,08 години після введення 1 С-Ага-С-елаїдату була 64,7%, що значно вище пропорції, наявної у великому колі кровообігу у цей час після введення 14С-Ага-С (7,76%) Екскреція через ниркову систему була значно ПОВІЛЬНІШОЮ для елаїдату, ніж для самого Ага-С Видалення з тканин відбувалось значно повільніше для 14С-АгаС-елаїдату у порівнянні з видаленням з тканин введеного 14С-Ага-С Таблиця 1 Максимальні концентрації радіоактивності (виражені як еквіваленти мкг/г) після введення еквімолярних доз 14С-Ага-С-елаідату або 14С-Ага-С з ВІДПОВІДНОЮ точкою у часі для максимальної концентрації Як видно з таблиці, максимальні концентрації для цих двох сполук мають місце у різних тканинах та в різних точках часу Тканина селезінка плазма цільна кров печінка клітини крові легені порожниста вена кістковий мозок серце нирки простата гіпофіз аорта С-Ага-С-елаїдат (Ттах, год) 175,2(0,25) 55,60 (0,08) 47,32 (0,08) 42,37(1 год) 34,37 (0,08) 28,97 (0,08) 17,29(0,08) 13,29(1 год) 10,15(0,08) 9,108(0,08) 9,014 (4 год) 8,359 (0,08) 7,795 (0,08) l4 C-Ara-C (Ттах, год) 2,406(0,08) 3,058 (0,08) 2,707 (0,08) 2,526 (0,08) 2,201 (0,08) 2,144(0,08) 1 ,887 (0,25) 1,950(0,08) 1,916(0,25) 7,752 (0,08) 2,810(0,25) 0,931 (0,08) 2,213(0,08) 15 Тканина сечовий міхур надниркова залоза слинні залози СЛІЗНІ залози лімфатичні вузли шкіра м'язи підшлункова залоза вилочкова залоза головний мозок 55389 4 С-Ага-С-елаідат 6,421 (4 год) 5,229 (0,08) 2,366 (0,25) 4,438 ( 4 год) 2,831 (1 год) 1,793(0,25) 1,990(0,25) 2,817(0,08) 2,090 (0,25) 1,408(0,08) 16 Продовження Таблиці 1 14 С-Ага-С 13,07(1 год) 1,764(0,08) 2,505 (0,08) 2,460 (0,08) 2,222 (0,08) 2,189(0,08) 2,158(0,08) 2,148(0,08) 2,054 (0,08) 0,233 (1 год) Таблиця 2 Екскреція радіоактивності (% дози) після внутрішньовенного Введення 14С-Ага-С-елаідату (5мг/кг) або 14 С-Ага-С-(2,4мг/кг) самцям пацюків Швидкість екскреції радіоактивності в сечі є нижчою для 14С-Ага-С-елаідату, ніж для 14С-Ага-С Зразок/час (години) 0-6 6-24 24-48 48-72 72-96 96-120 14С-Ага-С-елаїдат 59,1+3,7 34,1±2,5 2,7±0,8 0,5±0,1 0,2±0,1 0,1±

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Active substance for drug formulation designed for treating solid tumors and lymphoma, ara-c derivative and drug formulation

Назва патенту російською

Активный агент для получения фармацевтического препарата для лечения солидных опухолей и лимфом, производное ara-c и фармацевтическая композиция

МПК / Мітки

МПК: A61P 35/02, A61K 31/7068, C07H 19/06, A61P 35/04, A61P 35/00, A61P 7/06, C07H 19/067

Мітки: ara-c, лімфом, активний, пухлин, фармацевтична, агент, препарату, фармацевтичного, лікування, композиція, похідна, одержання, твердих

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/12-55389-aktivnijj-agent-dlya-oderzhannya-farmacevtichnogo-preparatu-dlya-likuvannya-tverdikh-pukhlin-i-limfom-pokhidna-ara-c-ta-farmacevtichna-kompoziciya.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Активний агент для одержання фармацевтичного препарату для лікування твердих пухлин і лімфом, похідна ara-c та фармацевтична композиція</a>

Подібні патенти