Стероїд як активний агент фармацевтичної композиції, призначеної для спрямованої компенсації дефіциту естрогену в центральній нервовій системі

1 Застосування стероїду загальної формули І в якій RI означає атом водню, гідроксильну групу або алкілоксигрупу, що має 1-5 атомів вуглецю, F 2 означає атом водню, алкільну групу, що має 1-5 ? атомів вуглецю, ацильну групу, що включає 1-5 атомів вуглецю, групу загальної формули SO2NR10R11, де R-іо і Rn незалежно один від одного означають атом водню, алкільну групу з 1-5 атомами вуглецю або разом з атомом азоту утворюють пірол ід ино-, піперидиноабо морфоліногрупу, R3 означає атом водню або гідроксильну групу, R4 означає атом водню, гідроксильну або алкільну групу, що має до 5 атомів вуглецю, Rs і R6 незалежно один від одного означають атом водню або атом галогену, R7 означає атом водню або метильну групу, Rs означає атом водню й гідроксильну групу, оксогрупу або групу загальної формули CR12R13, де R-I2 і R-із незалежно один від одного означають атом водню або атом галогену, Rg означає метильну або етильну групу, Z означає подвійний зв'язок С=С або заміщене чи незаміщене циклопропанове кільце, й група ^"CRsRe знаходиться в а - або р-положенні, причому, якщо група ^"CRsRe займає а положення, R7 знаходиться в р-положенні й навпаки, як активного компонента фармацевтичної композиції для спрямованого компенсування дефіциту естрогену в центральній нервовій системі (ЦНС) без впливу на ІНШІ органи або системи 2 Застосування стероїду за п 1, яке відрізняється тим, що стероїд являє собою сполуку з групи, яка включає 15рН,3'Н-циклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8тетраєн-3,17а -дюл, 15 р Н,3'Н-циклопроп[14,15]18а -гомоестра1,3,5(10),8-тетраєн-3,17а -дюл, 17 а -пдрокси-15 рН,3'Н-циклопроп[ 14,15]естра1,3,5( 10),8-тетраєн-3 ілпентаноат, 17-метилен-15 рН,3'Н-циклопроп[ 14,15]естра1,3,5( 10),8-тетраєн-3-ол, 15рН,3'Н-3',3'-дифторциклопроп[14,15]естра1,3,5(10),8-тетраєн-3,17а -дюл, 17-метилен-15рН,3'Н-циклопроп[14,15]естра1,3,5(10), 8-тетраєн-З-ілсульфамат, 17-дифторметилен-15рн,3'Нциклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-тетраєн-3-ол, З-метокси-15 р -метил-3'Н-циклопроп[14,15]естра1,3,5(10),8-тетраєн-3-ол, 15 а -метил-3'Н-циклопроп[ 14,15]естра-1,3,5( 10),8-тетраєн-3,17а -дюл, 17-дифторметилен-15рН,3'Нциклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-тетраєн-3іл(тетраметиленімшо)сульфонат, О о со 00 ю 57830 17-метилен-3'Н-циклопроп[8,9]-15рН,3'Нциклопроп[14,15]естра-1,3,5(10)-триєн-3-ол З Застосування стероїду за п 1 або 2, яке відрізняється тим, що зазначена фармацевтична композиція призначена для профілактики й терапії залежного від віку зниження пізнавальної здатності, вікової та перименопаузної дисформ, перед менструального синдрому, неврозу и неврастенії, станів страху й невротичних станів, приступів жару (припливів) внаслідок дефіциту естрогену (менопауза, гонадоектомія, лікування з використанням аналогів GnRH), психогенного пригнічення сексуальної поведінки Даний винахід стосується застосування деяких стероїдів при одержанні фармацевтичних композицій, що спрямовано компенсуватимуть дефіцит естрогену в центральній нервовій системі (ЦНС), не діючи на ІНШІ органи або системи Ці стероїди, на відміну від природних і синтетичних естрогенів, що діють системно, включаючи 17а-естрадюл, характеризуються вибірною нейротропною транскрипційною дією, подібною такій естрогену Ці стероїди являють собою сполуки загальної формули причому, якщо група >CRsR6 займає р-положення, R7 знаходиться в а-положенні, й навпаки Різке або поступове зниження концентрації естрогену може відбуватися в організмі як у жінок, так і в ЧОЛОВІКІВ, супроводжуючи певні фізіологічні (ЛІТНІЙ ВІК, менопауза) й патологічні стани (гонадоектомія, застосування аналогів GnRH (гормон, що вивільняє гонадотрогдн) як додаткова терапія при лікуванні раку) Де Ri означає атом водню, гідроксильну групу або алкілоксигрупу, що має 1-5 атомів вуглецю, F 2 означає атом водню, алкільну групу, що ? має 1-5 атомів вуглецю, ацильну групу, що включає 1-5 атомів вуглецю, групу загальної формули SO2NR10R11, де R-іо і Rn незалежно один від одного означають атом водню, алкільну групу з 1-5 атомами вуглецю, або разом з атомом азоту утворюють пірол ід ино-, піперидиноабо морфоліногрупу, F 3 означає атом водню або гідроксильну ? групу, R4 означає атом водню, гідроксильну або алкільну групу , що має до 5 атомів вуглецю, Rs і R6 незалежно один від одного означають атом водню або атом галогену, R7 означає атом водню або метальну групу, RS означає атом водню й гідроксильну групу, оксогрупу або групу загальної формули CR12R13, де R-I2 і R-із незалежно один від одного означають атом водню або атом галогену, Rg означає метальну або етильну групу, Z означає подвійний зв'язок С=С або заміщене чи незаміщене циклопропанове кільце, й група 6 знаходиться в а-, або р-положенні, До найвідоміших КЛІНІЧНИХ СИМПТОМІВ дефіциту естрогену відносяться порушення терморегуляції у формі приступів жару (припливів), остеопороз і підвищена схильність до захворювань серцевосудинної системи (Netter A , The menopause, під ред TMbault С , Levasseur М С , Hunter R H F , Reproduction in Mammals and Man, видавництво Ellipses, Pans, 627-642,1993) Сучасні КЛІНІЧНІ дослідження (van der Beld A W та IH , The role of estrogens in physical and psychsocial well-being in elderly men, The aging Male 1 (Suppl 1), 54, 1998) однозначно свідчать про існування залежності зниження рівня естрогену в сироватці від збільшення віку ЧОЛОВІКІВ При цьому особлива увага приділяється наявності "синдрому дефіциту естрогену" та його зв'язку з патофізіологією в старіючого чоловіка Головний мозок являє собою один із найважливіших органів, що є об'єктами (мішенями) дії естрогену Естрогени значною мірою діють на фізіологію цілого ряду нейробюломчних процесів Узагалі, виходячи з наслідків їхньої дм, и можна класифікувати на два основні типи організуючу (контролюючу) й активуючу (McEwen BS та ін , Steroid hormones as mediators of neural plasticity, J Steroid Biochem Мої Biol 39 223-232,1991) Перший тип являє собою специфічну по відношенню до статі оргшпзацію нейронних субстратів на стадії раннього онтогенезу Другий тип включає специфічні зміни функції нервово-регулюючої системи залежно від концентрацій естрогену, зумовлених пов'язаною з фізіологічним станом секрецією гонад після статевого дозрівання Активуюча дія естрогенів на ЦНС проявляється, серед іншого, в таких фізіологічних процесах, як специфічне по відношенню до статі регулювання секреції гонадотропшу (Fink G , Gonadotropm secretion and its control, під ред Knobil E , Neil J D , The Physiology of Reproduction, видавництво Raven Press, New York, 13491376,1988), керування сексуальною поведінкою (Ваші М J та ін , Hormonal basis of proceptivity and receptivity 57830 in female primates, Arch Sex Behav 6 173-192, 1977), регулювання нейроендокринної реакційної здатності до стресу (Viau V , Meaney M J , Variations in the hypothalamic-pituitary-adrenal response to stress during the estrous cycle in the rat, Endocrinology 129 2503-2511,1991), навчання й запам'ятовування стереотипів поведінки із здатністю до адаптації (O'Neal M F та ш , Estrogen affects performance of ovanectomized rats in a two-choice water-escape working memory task, Psychneuroendocnnology 21 51-65,1996), збереження реакційної здатності нейрохімічних механізмів, відповідальних за увагу й адекватне оброблення інформації (Fink G та ш , Estrogen control of central neurotransmission effects on mood, mental state and memory, Cell Мої Neurobiol 16 325-344,1996), динамічні зміни ЩІЛЬНОСТІ міжнейронних контактів у структурах головного мозку, що мають вирішальне значення по відношенню до пізнавальних здібностей і емоційного статусу (Wooley С S , McEwen В S , Estradiol mediates fluctuations in hippocampal synapse density during the estrous cycle in the adult rat, J Neurosci 12 2549-2554, 1992) Дуже високий нейротропний потенціал естрогенів зумовлює їхню здатність - індукувати експресію цілого ряду ЦНСспецифічних генів, продукти яких мають вирішальне значення по відношенню до життєздатності нервових клітин (Miranda R С , Sohrabji F, Toran-Allerand С D, Presumptive estrogen target neurons express mRNA for both the neurotrophms and neurotrophm receptors a basis for potential development interactions of estrogen with the neurotrophms, Мої Cell Neurosci 4 510525,1993), - забезпечувати різноманіття й необхідну якість перенесення сигналів у ЦНС (Lume V N , Estradiol increases cholme acetyltransferase activity in specific basal forebram nuclei and projection areas of female rats, Exp Neurol 89 489-490, 1985), Weiland N , Glutamic acid decarboxilase messenger nbonucleic acid is regulated by estradiol and progesterone in the hippocampus, Endocrinology 131 2697-2702, 1992), Bosse R, Di Paolo T , The modulation of brain dopamme and G A B A A receptors by estradiol a clue for CNS changes occurmg at menopause, Cell Мої Neurobiol, 16 199-212, 1996), а також - підвищувати СТІЙКІСТЬ нервових клітин проти патологічної дії (Goodman Y та ш , Estrogens attenuate and corticosterone exacerbates excitotoxicity, oxidative injury, and amyloid b-peptide toxicity in hippocampal neurons, J Neurochem 6 1836-1844,1996) КЛІНІЧНІ випробування дали змогу встановити, що дефіцит естрогену є причинним фактором патогенезу хвороби Альцгеймера, й показали, що шляхом компенсації дефіциту естрогену можна припинити КЛІНІЧНИЙ прояв або прогресивний розвиток цієї хвороби (Henderson V W та ш , Estrogen replacement therapy in older women comparison between Alzheimer's disease cases and controls, Arch Neurol 51 896-900, 1994), Paganim —11 A , Henderson V W , Estrogen deficiency and risk I 11 of Alzheimer's disease, Am J Epidemiol 140 256261, 1994) Цілий ряд нейропептидів, на транскрипцію генів яких діють фізіологічні КІЛЬКОСТІ естрогену (наприклад, окситоцин і арпнінвазопресин), відіграють важливу роль у керуванні компонентами емоційної поведінки (Adan R А , Burbach J P , Regulation of vasopressm and oxitocm gene expression by estrogen and thyroid hormone, Progr Brain Res 92 127-136,1992) З наукових публікацій відомо, що дефіцит естрогену корелює з вираженим ослабленням здатності організму виводити реакційноздатні різновиди кисню й ВІЛЬНІ радикали (Niki Е , Nakano М , Estrogens as antioxidants, Methods Enzymol 186 330-333, 1990), (Lacort M т а ї н , Protective effects of estrogens and catecholestrogens against peroxidative membrane damage in vitro, Lipids, 30 141-146, 1995) Надлишок вільних радикалів бере участь у механізмі ушкодження клітин у цілому ряді органів і систем, і пов'язується з патогенезом нейродегенеративних захворювань (Smith S D та ш , Excess brain protein oxidation and enzyme dysfunction in normal aging and in Alzheimer's disease, Proc Natl Acad Sci USA 88 10540-10543, 1991), Hastings TO, Zigmond MJ, Neurodegenerative disease and oxidative stress insights from an animal model of Parkinsomsm, під ред Fiskum G , Neurodegenerative Diseases, видавництво Plenum Press, New York, 37-46, 1996) Отже, компенсація дефіциту естрогену відіграє неабияку роль у стабілізації та підвищенні ендогенної антюкисної здатності (ВеЫ С та ш , 17(5-Estradiol protects neurons from oxidative stressinduced cell death in vitro, Biochem Biophys Res Commun 216 473-482,1995) На цей час дефіцит естрогену компенсують за допомогою природних і синтетичних естрогенів, що діють на всі органи й системи, які мають рецептори естрогену, тобто практично на весь організм Оскільки ЦІ естрогени навіть у невеликих фармакологічних дозах діють на проліферацію клітин у тканинах жіночої статевої системи (ендометрій) та в епітелії молочної залози, що призводить до карциногешюму дедифференціюванню, їхнє застосування при лікуванні симптомів дефіциту естрогену в ЦНС обмежується цілим рядом протипоказань (Bernstein В А , Ross R К , Henderson ВЕ, Relationship of hormone use to cancer risk, J Natl Cancer Inst Monograph 12 137-147,1992) Проліферативна дія естрогенів є безпосередніми факторами ризику розвитку доброякісної гіперплазії передміхурової залози і/або пнекомастм у ЧОЛОВІКІВ (Knabbe С , Endoknne Therapie von Prostataerkrankungen, під ред Allolio В, Schulte H M, Praktische Endokrmologie, видавництво Urban & Schwarzenberg, Munchen, 645-651, 1996) 3 цієї причини, незважаючи на наявні показання, компенсація дефіциту естрогену в ЧОЛОВІКІВ ніколи не розглядалася як реальна можливість Застосування природних і синтетичних естрогенів, що діють системно, тобто на всі органи й системи організму, при лікуванні нейродегенеративних захворювань описано в 57830 таких патентних публікаціях US 4897389, US 5554601 і WO 95/12402, WO 97/03661, DE 4338314 C1 В US 4897389 описано застосування естрадюлу, естрону й естрюлу як окремо, так і в комбінаціях із гонадотропшами, андрогенами, анаболічними андрогенами або гормоном росту людини для лікування старечої деменції, хвороби Паркінсона, церебральної атрофії, хвороби Альцгеймера, мозочкової атрофії, старечого або есенційного тремору В US 5554601 і WO 95/12402 описано застосування естрогенних речовин, у тому числі таких, що характеризуються слабкою дією на "сексуальну активність", для захисту нервових клітин від прогресуючого ушкодження й загибелі, а також при лікуванні нейродегенеративних захворювань Прикладом речовини, що помірно діє на "сексуальну активність" і, крім того, володіє нейрозахисною дією, є 17а-естрадюл В WO 97/03661 описано застосування неестрогенних речовин, у структурі яких існує принаймні дві кільцеві системи, причому принаймні одна з них являє собою кінцеве фенольне кільце, а їхня молекулярна маса не досягає 1000 Да, для захисту нейронів У DE 4338314 С1 описано стероїди з фенольною А-кільцевою структурою, властивості яких у відношенні зв'язування з радикалами й антюкисна активність не залежать від рівня активності, подібної такій естрогену Ці сполуки можна застосовувати для профілактики й терапії ушкоджень клітин, викликаних радикалами В усіх цих публікаціях за основу терапевтичної та нейрозахисної ефективності одержаних сполук береться один або кілька з таких кінцевих результатів їхнього застосування стимулювання біосинтезу природних нейронних факторів росту, - стимулювання активності ферментів, що синтезують ацетилхолін, або поглинання субстрату для синтезу ацетилхоліну, пряма цитозахисна дія в результаті підвищення СТІЙКОСТІ нервових клітин проти дефіциту живильних субстратів або факторів росту, - зниження чутливості нервових клітин до вільних радикалів і реакційноздатних різновидів кисню, що вивільняються внаслідок травми або нейротоксичної дії Проте, в жодній з вищенаведених публікацій не згадуються стероїди з вибірною нейротропною дією по відношенню до транскрипції, подібною такій естрогену, тобто стероїди, що при введенні in vivo, практично біологічно не діючи на репродуктивну систему, подібно до естрогену діють на транскрипцію в ЦНС залежних від останнього генів Слід підкреслити, що описана в US 5554601 і WO 95/12402 дія 17а-естрадюлу, тобто речовини, яка характеризується зниженою естрогенністю в 8 статевій системі (Clark J Н та ш , Effects of estradiol 17a on nuclear occupancy of the estrogen receptor, stimulation of nuclear type II sites, and uterine groth, J Steroid Biochem 16 323-328,1982), полягає виключно в захисті вирощуваних нервових клітин від загибелі, що індукується дефіцитом живильного середовища, при цьому відносну активність 17а-естрадюлу не було оцінено в порівнянні з активністю 17р-естрадюлу 3 цього можна зробити висновок, що в дослідженнях і патентних заявках, які публікувалися до цього моменту, немає жодної згадки щодо вибірної неиротропної дії 17а-естрадюлу або його похідних, тоді як відомо, що 17р-естрадюл нездатен вибірко діяти на ЦНС, а тому буде цілком слушним порівняти його з естрогеном системної дії У WO 97/03661 і DE 4338314 СІ цитозахисна дія естрогенів розглядається як результат здатності їхніх кінцевих фенольних А-кілець приєднувати радикали Дисоційовану нейротропну дію 17аестрадюлу, що спрямована на транскрипцію чутливих до естрогену генів, не описано ні в патентній, ні в науковій літературі Виходячи з вищенаведеного, за мету даного винаходу було взято розроблення таких фармацевтичних композицій, що дозволили б спрямовано компенсувати дефіцит естрогену в центральній нервовій системі (ЦНС), не діючи на ІНШІ органи або системи За даним винаходом ця мета досягається шляхом застосування при виготовленні фармацевтичних композицій певних стероїдів, що дають змогу здійснити компенсацію дефіциту естрогену в центральній нервовій системі (ЦНС), не діючи на будь-який інший орган або систему Ці стероїди відрізняються тим, що на відміну від природних або синтетичних естрогенів системної дії, включаючи 17а-естрадюл, вони володіють вибірною нейротропною дією по відношенню до транскрипції, подібною такій естрогену Під час створення даного винаходу несподівано було встановлено, що деякі стероїди при їхньому застосуванні за даним винаходом - вибірно діють на транскрипцію залежних від естрогену генів у ЦНС і викликають зміни ВІДПОВІДНИХ фізіологічних параметрів, характеризуються специфічною по відношенню до ЦНС дією на транскрипцію, коли їх застосовують у таких дозах, що виключають їхню біологічну дію на тканини репродуктивної системи, - володіють специфічною по відношенню до ЦНС дією на транскрипцію, коли їх застосовують у дозах, у яких як 17р-естрадюл, так і 17а-естрадюл є неефективними, а також - діють на транскрипцію залежних від естрогену генів у ЦНС незалежно від вторинно утвореного 17р-естрадюлу Ці стероїди являють собою сполуки загальної формули І 57830 означає атом водню, гідроксильну групу або алкілоксигрупу, що має 1-5 атомів вуглецю, F 2 означає атом водню, алкільну групу, що ? включає 1-5 атомів вуглецю, ацильну групу з 1-5 атомами вуглецю, групу загальної формули SO2NRIOR11, де R-іо і Rn незалежно один від одного означають атом водню, алкільну групу, що має 1-5 атомів вуглецю, або разом з атомом азоту утворюють піролідино-, пшеридиноабо морфоліногрупу, R3 означає атом водню або гідроксильну групу, R4 означає атом водню, гідроксильну або алкільну групу, що включає до 5 атомів вуглецю, Rs і R6 незалежно один від одного означають атом водню або галогену, R7 означає атом водню або метальну групу, Rs означає атом водню й гідроксильну групу, оксогрупу або групу загальної формули CR12R13, де R-I2 і R-із незалежно один від одного означають атом водню або галогену, Rg означає метальну або етальну групу, Z означає подвійний зв'язок С=С або заміщене чи незаміщене циклопропанове кільце, й група >CRsR6 знаходиться в а- або рположенні, причому, якщо група >CRsR6 займає аположення, R7 знаходиться в р-положенні, й навпаки, У бажаному варіанті застосовуються такі сполуки 15рН,3'Н-циклопроп[14,15]естра-1,3,5(10), 8тетраєн-3,17а-дюл, 15рН,3'Н-циклопроп[14,15]-18а-гомоестра1,355(10),8лгетраєн-3,17а-дюл, 17а-пдрокси-15рН,3'Н-циклопроп[14,15]естра1,3,5(10),8-тетраен-3 ілпентаноат, 17-метилен-15рН,ЗН-циклопроп[14,15]естра1,3,5(10),8-тетраен-3-ол, 15рН,ЗН-3',3'-дафторІщклопроп[14,15]естра1,3,5( 10),8-тетраєн-3,17а-дюл, 17-метилен-15рН,ЗН-циклопроп[14,15]естра1,3,5(10), 8-тетраен-З-ілсульфамат, 17-дафторметилен-15рН,ЗНциклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-тетраен-3-ол, З-метокси-15р-метил-ЗНпиклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-теграен-3-ол, 15а-метил-ЗН-циклопроп[14,15]естра1,3,5(10),8-тетраєн-3,17-а-дюл, 17-дифторметилен-15рН,3'Нциклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-тетраен-3іл(тетраметіленімшо)сульфонат, 17-меІилен-3'Н-циклопроп[8,9]-15рН,3'Н 10 циклопроп[14,15]естфа-1,3,5(10)-триен-3-ол У бажаному варіанті сполуки за даним винаходом застосовують для готування фармацевтичних композицій, призначених для профтактики й терапії залежного від віку зниження пізнавальних здібностей, вжової та перименопаузної дисформ, перед менструального синдрому, неврозу й неврастенії станів страху й неврозних станів, приступів жару в результаті дефіциту естрогену (менопауза, гонадоектомш, лікування з використанням аналогів GnRH) і психогенного пригнічення сексуальної поведінки При цьому було встановлено, що ризик несприятливої дії на чутливі до гормону тканини репродуктивної системи (ендометрій, мюметрій, передміхурова залоза, молочна залоза), а саме, виникнення неконтрольованої проліферації та карциногенезу, практично виключається Об'єктом даного винаходу є також фармацевтичні композиції для орального й парентерального, а також локального, ректального, підшкірного, внутрішньовенного, внутрішньом'язового, внутрішньочеревинного, штраназального, внутрішньоматкового, штрабукального або під'язичного застосування, що поряд зі звичайними носіями й розріджувачами містять у функції активної речовини вищенаведену сполуку Як фармацевтичні композиції можуть застосовуватися - таблетки або драже по 0,1-2мг для щоденного орального введення, - ампули по 0,1-2мг для щоденного введення шляхом підшкірної ін'єкції, - пластири для щоденного трансдермального вивільнення від 0,05 до 2мг, підшкірні імплантати з щоденним вивільненням 0,05-2мг, гелі й креми для трансдермального вивільнення від 0,05 до 2мг на день, - системи для букального застосування з щоденним вивільненням 0,1-1 мг Лікарські засоби за даним винаходом виготовляють у відомий спосіб із використанням загальноприйнятих твердих або рідких носив або розріджувачів і зазвичай застосовуваних у фармацевтиці допоміжних речовин, що відповідають необхідній формі введення з урахуванням відповідної дози активної речовини На прикладі 15рН,'Н-циклопроп[14,15]естра1,3,5(10),8-тетраєн-3,17а-дюлу (сполука загальної формули І, де R-і, R2, R3, R4, R5, R6 і R7 означають Н, Rs означає а-ОН, р-Н, Rg означає СНз, Z означає подвійний зв'язок С=С), що на нижченаведених малюнках позначено як сполукапрототип, експериментальним шляхом продемонстровано його вибірну дію за даним винаходом, подібну до такої естрогену, якщо порівнювати з 17р-естрадюломі 17а-естрадюлом Приклад 1 Дія тривалого гщдпкірного введення in vivo на масу матки Статевозрілих (вік 3 МІСЯЦІ, вага 250±30г) самок пацюків лінії Wistar (віварш Schonwalde GmbH, Німеччина) піддавали оварюектомм під наркозом із використанням кетаміну Через 14 днів 12 11 57830 тваринам підптарно імплантували осмотичні 1 ,3,5(10),8-тетраєн-3,17а-дюлу (трикутники) Дані, міншасоси (фірма Alzett, США), які щоденно наведеш на цьому малюнку, являють собою протягом 7 днів вивільняли по 0,01, 0,1, 0,3, 1, З, середні значення, одержані в ході двох ЗО і ЮОмкг випробуваних речовин (15рН,3'Ннезалежних експериментів циклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-тетраєн-3,17аОчевидно, що степінь стимулювання дюл, 17р-естрадюл і 17а-естрадюл) Тваринам випробуваними сполуками транскрипції репортера контрольної групи вводили ВІДПОВІДНІ об'єми носія залежав від їхньої дози Ефективність 15рН,3'Н(пропшенгліколь) На сьомий день після циклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-тетраєн-3,17аоброблення тварин умертвляли й визначали масу дюлу й 17а-естрадюлу є на порядок (тобто, сирої матки (у перерахуванні на 100г ваги тіла приблизно в 10 разів) нижчою за таку 17ртварини) естрадюлу На фіг 1 наведено дані щодо утеротропної дії Якщо виходити з цих результатів, естрогенна різноманітних доз 17р-естрадюлу (прямокутники), дія 5рН,3'Н-циклопроп[14,15]естра-1,3,5(10), 817а-естрадюлу (кружки) і 15рН,3'Нтетраєн-3,17а-дюлу на тканини раку молочної пиклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-тетраєн-3,17азалози була в кілька разів нижчою дюлу (трикутники) на пацюків, з якими було Приклад З проведено оварюектомію Кожна точка являє Стимулювання транскрипції гена окситоцину в собою середнє значення ± стандартне відхилення головному мозку в результаті тривалого (х±СКО) для 7-10 ПІДДОСЛІДНИХ тварин, оброблення in vivo дозами, що не діють на матку заштрихована ділянка є діапазоном розсіювання Статевозрілих (вік 3 МІСЯЦІ, вага 250±30г) цих параметрів серед оброблених плацебо тварин самок пацюків лінії Wistar (віварій Schonwalde (OVX) GmbH, Німеччина) піддавали оварюектомм під Очевидно, що при обробленні 17рнаркозом із використанням кетаміну Через 14 днів естрадюлом істотне збільшення матки тваринам підшкірно імплантували осмотичні спостерігається вже при добовій дозі 0,03-0,1 мкг міншасоси (фірма Alzett, США), які щоденно Щоб досягти порівнянної утеротрогшої дії, протягом 7 днів вивільняли по 0,01, 0,1 і 1мкг необхідно використовувати добові дози, що для випробуваних речовин (15рН,3'Н17а-естрадюлу становлять ЮОмкг, а для 15рН,3'Нциклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-тетраєн-3,17ациклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-тетраєн-3,17адюл, 17р-естрадюл і 17а-естрадюл), тваринам дюлу - ЗОмкг контрольної групи вводили ВІДПОВІДНІ об'єми носія Якщо виходити з цих результатів, дія (пропіленгліколь) Відразу після умертвіння тварин 15рН,3'Н-циклопроп[14,15]естра-1,3,5(10), 8визначали масу сирої матки (у перерахуванні на тетраєн-3,17а-дюлу на жіночу статеву систему є 100г ваги тіла тварини) приблизно в 1000 разів меншою за таку 17рМатричну рибонуклеїнову кислоту (мРНК), що естрадюлу й порівнянною з дією 17а-естрадюлу кодує біосинтез окситоцину, виявляли в паравентрикулярних ядрах (PVN) гіпоталамуса Приклад 2 шляхом гібридизації m-situ за допомогою Активація транскрипції in vitro репортерного спеціального олігодезоксинуклеотидного зонда, гена, що залежить від рецептора а-естрогену що ніс радіоактивну мітку (Fischer D та ш , Клітини раку молочної залози лінії MCF-7/2A, Lactation as a model of naturally reversible що експресують альфа-ізоформу рецептора hypercorticahsm plasticity in the mechanism естрогену (ERa), стабільно трансформували governing hypothalamo-pituiary-adrenal activity in the репортеркою плазмідою EREwtcLUC Репортер rat, J Clm Invest, 96 1208-1215, 1995) Зміни містив чутливий до дії естрогену елемент (ERE) транскрипції гена окситоцину, що виникли в вітелогеншу, промотор Іимідинкінази й ген, що результаті оброблення, оцінювали за допомогою кодує люциферазу з Photinus pyrahs До початку денситометричних вимірювань специфічних експерименту культуру клітин вирощували сигналів гібридизації у певних анатомічних протягом 7 днів у середовищі без умісту стероїдів, структурах а потім шкубували протягом 48год із 17рНа фіг 3 наведено дані щодо індукції естрадюлом, 17а-естрадюлом і 15рН,ЗНтранскриптів, що кодують окситоцин (ОТ-мРНК, циклопроп[14,15]естра-1,3,5(10),8-тетраєн-3,17аверхній графік), у паравентрикулярних ядрах дюлом, узятих у чотирьох різних концентраціях гіпоталамуса пацюків, із якими було проведено (10 11, 10 10, 10 9 і 10 8 М) Клітини лізували і шляхом оварюектомію, одержані в результаті тривалого оцінки люциферазної активності, використовуючи оброблення шляхом підшкірного введення 17рсполуку для тестування зі специфічною активністю естрадюлу (кружки), 17а-естрадюлу (фірма Serva/Promega, Німеччина), визначали (прямокутники) й 15рН,3'Н-циклопроп[14,15]естратранскрипцію репортерного гена люциферази 1,3,5(10),8-тетраєн-3,17а-дюлу (трикутники) у На фіг 2 наведено дані щодо індукції трьох різних дозах На нижньому графіку транскрипції стабільно трансформованого, проілюстровано дію випробуваних сполук на масу залежного від естрогену репортерного гена матки Кожна точка являє собою х±СКО за 5-7 (люциферази) у клітинах раку молочної залози окремими експериментами, Заштрихована ділянка лінії MCF-7/2A, що експресують рецептор є діапазоном розсіювання ВІДПОВІДНИХ параметрів естрогену, одержані в результаті 48-годинного серед пацюків, оброблених носієм Зірочками оброблення різноманітними дозами 17рпозначено достовірні розходження (р