Спосіб одержання рекомбінантної плазмідной днк рrнw11 або prhw12, кодуючий омега-інтерферон

И з о б р е т е н и е - о т н о с и т с я к г е н е т и ч е с к о й инженерии, в ч а с т н о с т и к к о н струированию рекомбинантных пл.аэмидНых ДНК д л я получения и н т е р ф е р о н о в . Плазмиду р9А2 или Е79Е9 п е р е в а р и в а ют р е с т р и к т а з о й Ava I I , полученную Изобретение относится к г е н е т и ч е с кой инженерии, в ч а с т н о с т и к к о н с т руированию экспрессионных плазмид для получения интерФеронов, а именно к с п о с о б у к о н с т р у и р о в а н и я э к с п р е с сиокных плазмид pRHWl 1 и pRITVlZ, к о дирующих новые интерФероны. Способ осуіцествляют следующим образом. Человеческую В-лимфомную линию к л е т о к , например N a m a l m a - к л е т к и , в с т а в к у к ДНК переваривают Sa и ЗА, выделяют Фрагмент длиной 189 п . о , , плазмиду pER33 переваривают р е с т р и к т а т а м и EcoR T и Pvu I I , Фрагмент длиной 3 8 9 и . о . д а л е е п е р е в а р и в а ю т энзимом Ра и ЗА, выделяют фрагмент длиной 108 п . о . , который лигируют с фрагментом длиной 189 п . о , , попу-* ченную ДНК обрабатывают Hind I I I и лигирутат с Hind I I I л и н е а р и з о в а н н о й плазмидой ER 1 0 3 , полученной р е к о м бинантной ДНК трансЛо рмируют штамм Е. c o l i HB 1 0 1 , полученную п р и этом плазмиду pRHW 10 п е р е в а р и в а ю т Bam H I , инкубируют в п р и с у т с т в и и фрагмента Кленова ДНК-полимеразы 1 и четырех дезоксинуклеозидтрифосфаюв, плазмиду обрабатывают энзимом Nco I , выделяют большой фрагмент Nco I - Alu I плазмиды р9А2 или Е79Е9, который получают в р е з у л ь т а т е о б р а б о т к и п л а з мйды Ava I I с последующим гидролизом Nco I и Alu I , рекомбипантной п л а э мидой ДНК трансформируют Е. c o l i НВ 3 0 1 . I табл. обрабатывают в и р у с о м , например d a i - в и р у с . Вьделяют образовавшуюся из стимулированных N a m a l v a - к л е т о к мРНК и используют е е в к а ч е с т в е м а т рицы д л я с и н т е з а к Дії К. Чтобы повыс и т ь выход специфических д л я и н т е р ферона п о с л е д о в а т е л ь н о с т е й в п р о ц е с се к л о н и р о в а н и я , мРНК-препарат р а з деляют в с а к а р а х с г р а д и е н т о м п л о т н о с т и с о о т в е т с т в е н н о н а различной длины индивидуальные мРНК-молекулы. 1372419 Предпочтительнее собирать (накапливать) мРНК в области около 12S (примерно 800 - 1000 основании мРНК). В атой области седиментирует с п е ц и , фическая для о — и jb -интерферонов б мРПК. мРНК из "этой области градиентов концентрируется благодаря осаждению и ^ растворению в в о д е . Составление библиотеки кДНК о с у JQ ществляют известными методами. мРНК снабжают добавкой о л и г о - d t . Затем б л а г о даря добавке четырех дезоксинуклеоэидтрифосфатов(6АТР, dGTPs dCTP ,