Сіль нападисилату як антагоніст мускаринового рецептора м3

Реферат: Винахід стосується солі [2-(4-хлорбензилоксі)етил]-[2-((R)циклогексилгідроксифенілметил)оксазол-5-ілметил]диметиламонію нападисилату (нафталін1,5-дисульфонату), фармацевтичної композиції, що її містить, і її використання у терапії. UA 99604 C2 (12) UA 99604 C2 UA 99604 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Мускаринові рецептори є сполученим G-протеїном рецепторами (GPCR) з родини, яка має 5 членів: M1, M2, M3, M4 і M5. З п'яти мускаринових субтипів три (M1, M2 і M3), як відомо, створюють фізіологічну дію на легеневі тканини людини. Парасимпатичні нерви є головним шліхом для рефлексу бронхоконстрикції у дихальних шляхах людини і визначають тонус дихальних шляхів вивільненням ацетилхоліну на мускаринові рецептори. Тонус дихальних шляхів підвищується у пацієнтів з респіраторними розладами, наприклад, астмою і хронічною обструктивною пульмонарною хворобою (COPD), і тому антагоністи мускаринового рецептора використовують у лікуванні хвороб дихальних шляхів. Антагоністи мускаринового рецептора, які часто називають антихолінергетиками, у клінічній практиці знайшли широке застосування як першорядна терапія для осіб з COPD, і їх використання широко описано у літературі [див., наприклад, Lee et al, Current Opinion in Pharmacology 2001,1, 223-229]. При використанні для лікування респіраторних розладів антагоністи мускаринового рецептора звичайно вводять інгаляцією. Однак, при такому введенні значна частина антагоніста мускаринового рецептора часто абсорбується у системний обіг, викликаючи побічні явища, наприклад, сухість у роті. Крім того, більшість мускаринових антагоністів мають відносно малу тривалість дії, що зумовлює необхідність введення декілька разів на день. Такий множинний (за день) режим дозування є не лише незручним для пацієнта, але й створює значний ризик неадекватного лікування внаслідок несприйняття пацієнтом такого розкладу введення. Отже, існує потреба у нових сполуках, здатних блокувати мускаринові рецептори. Зокрема, існує потреба у нових мускаринових антагоністах з високою ефективністю і зниженими системними побічними явищами при введенні інгаляцією. Є також потреба у нових мускаринових антагоністах, які мають велику тривалість дії при введенні інгаляцією і які достатньо вводити один або два рази на день. У виготовленні фармацевтичних рецептур важливо, щоб активна сполука мала форму, з якою зручно працювати і яку зручно обробляти з використанням для отримання комерційно приваблюючого процесу виготовлення. Тому хімічна стабільність і фізична стабільність активної сполуки є важливими факторами. Активна сполука і рецептури, що містять її, мають бути здатними до надійного зберігання протягом прийнятного часу, без будь-яких значних змін у її фізико-хімічних характеристиках (наприклад, хімічного складу, щільності, гігроскопічності і розчинності. Крім того, якщо активна сполука підлягає введенню у рецептуру для пульмонарного введення, бажано, щоб вона могла бути достатньо мікронізована для отримання порошку з високою текучістю і містила значну тонкокристалічну фракцію часток (тобто фракцію, в якій частки активної сполуки мають масову медіану аеродинамчного діаметру менше 10 мкм. Така фракція може бути внесена глибоко у легені і тому забезпечить швидку і збільшену абсорбцію активної сполуки. У заявці на патент WO 2007/017669 (PCT/GB2006/002956) описано новий клас мускаринових антагоністів, які мають високу ефективність дії на рецептор M3. Одним таким мускариновим антагоністом, описаним у PCT/GB2006/002956 є [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній метансульфонат. Приготування [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол5-ілметил]-диметил-амоній метансульфонату, описане у PCT/GB2006/002956, дає аморфну тверду речовину, яка не є кристалічною і тому не є придатною для мікронізації і пульмонарного введення. Однак, виявилось можливим приготувати [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амонієву сіль, яка має високі фізико-хімічні якості і може бути використана у сухих порошкових рецептурах для пульмонарного введення. Згідно з винаходом, запропоновано сіль, яка є нападисилатною (нафталін-1,5дисульфонатом) сіллю [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)оксазол-5-ілметил]-диметил-амонію (далі - "нападисилатна сіль". Отже сіллю винаходу є 2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-фенілметил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній нападисилат. Назва [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній була утворена програмою Autonom 2000 plug in для IsisDraw Version 2.5 від MDL Information Systems Inc. і описує структуру, зображену на Фіг. A. Стереохімію визначено згідно з системою Cahn-IngoldPrelog System. 1 UA 99604 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Відношення катіон/аніон у нападисилатній солі винаходу може змінюватись і, наприклад, може становити 1:1 або 2:1. У втіленні винаходу нападисилатна сіль має відношення катіон/аніон 2:1, тобто є [2-(4-хлорбензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметиламоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонатом (далі - "гемі-нападисилатна сіль"): Винахід включає сольвати (наприклад, гідрати) нападисилатної солі. У втіленні винаходу нападисилатна сіль має кристалічні властивості і, бажано, є щонайменше на 50 % кристалічною, більш бажано, щонайменше на 60 % кристалічною, краще щонайменше на 70 % кристалічною, найкраще щонайменше на 80 % кристалічною. Кристалічність може бути оцінена звичайною рентгенівською дифрактометрією. В іншому втіленні винаходу нападисилатна сіль є кристалічною на від 50 %, 60 %, 70 %, 80 % або 90 % до 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % або 100 %. Прикладом кристалічної форми [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідроксифеніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5-дисуль-фонату є кристалічна Форма A, описана нижче. В одному з втілень винахід включає сіль Форми A, а саме, [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]диметил-амонію гемі-нафталін-1,5-дисульфонат, який виявляє щонайменше такі характеристичні рентгенівські дифракційні піки порошку (у град. 2): (1) 5,3, 10,5, 15,8 і 16,5, або (2) 5,3, 10,5, 15,8, 16,5, 18,6 і 19,4 або (3) 5,3, 10,5, 15,8, 16,5, 18,6, 19,4, 19,7 і 20,4 або (4) 5,3, 10,5, 15,8, 16,5, 17,8, 18,6, 19,4, 19,7, 20,4 і 21,7. Винахід також включає сіль Форми А, а саме, [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5дисульфонату з рентгенівською порошковою дифракційною картиною, яка має специфічні піки у 5,3, 7,1, 9,2, 10,5, 10,9, 11,1, 11,6, 12,6, 13,0, 13,8, 14,2, 15,2, 15,8, 16,5, 17,0, 17,4, 17,8, 18,4, 18,6, 19,4, 19,7, 20,3, 20,7, 21,2, 21,7, 22,3, 22,5, 22,9, 23,3, 25,8, 26,5 і 27,1. У даному описі рентгенівські порошкові дифракційні піки (у град. 2) виміряно мідним ренгенівським випромінювачем на довжині хвилі 1,5418 Å. Тут, якщо не зазначено інше, межі помилки для рентгенівських порошкових дифракційних піків (у град. 2) відповідають загальним вимогам US Pharmacopeia до рентгенівської дифракції (USP941) - див. United States Pharmacopeia Convention, X-Ray Difфракці, General Test (United States Pharmacopeia, 25th ed. Rockville, MD: United States Pharmacopeial Convention; 2002:2088-2089). У втілені винаходу межі помилки для рентгенівських порошкових дифракційних піківs (у град. 2) становлять (±0,1°). Фіг. 1 містить рентгенівську порошкову дифракційну картину форми солі Форми A - [2-(4хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметиламоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонату. Винахід також включає Форму солі, яка дає рентгенівську порошкову дифракційну картину, суттєво подібну наведеній на Фіг. 1. В одному з втілень винахід включає сіль Форми A, а саме, [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5дисульфонат, яка має щонайменше такі характеристичні значення d-інтервалів: 2 UA 99604 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (1) 16,8, 8,4, 5,6 і 5,4 або (2) 16,8, 8,4, 5,6, 5,4, 4,8 і 4,6 або (3) 16,8, 8,4, 5,6, 5,4, 4,8, 4,6, 4,5 і 4,4 або (4) 16,8, 8,4, 5,6, 5,4, 5,0 4,8, 4,6, 4,5, 4,4 і 4,1. Винахід також включає сіль Форми A, а саме, [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5дисульфонату з рентгенівською порошковою дифракційною картиною. яка має такі значення dінтервалів: 16,8, 12,5, 9,6, 8,4, 8,1, 8,0, 7,7, 7,0, 6,8, 6,4, 6,2, 5,8, 5,6, 5,4, 5,2, 5,1, 5,0, 4,8, 4,8, 4,6, 4,5, 4,4, 4,3, 4,2, 4,1, 4,0, 4,0, 3,9, 3,8, 3,5, 3,4 і 3,3. У втіленні винаходу сіль Форми A є ангідратом (тобто кристалічною фазою, яка не містить води). У втіленні винаходу сіль Форми A показує поглинання води менше 1 %, виміряне як збільшення маси, визначене GVS при 80 %-й відносній вологості і 25 °C. Одне з втілень винаходу включає сіль Форми A, суттєво вільну від інших фізичних Форм, тобто щонайменше 90 % (за масою), наприклад, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 або 100 % нападисилатної солі має саме цю фізичну форму. Нападисилатна сіль винаходу може бути приготовлена за описаною далі процедурою. Суміш [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5ілметил]-диметил-амоній броміду і нафталін-1,5-дисульфонатної динатрієвої солі вводять у реакцію у придатному розчиннику (наприклад, суміші ДХМ/вода) і перемішують при належній температурі (наприклад, 20-25 °C) протягом певного часу (наприклад, 6-24 год.). Твердий продукт може бути ізольований відділенням органічного шару від реакційної суміші і випарюванням розчинника з отриманням сирого [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5дисульфонату як аморфної твердої речовини. В іншому варіанті твердий продукт може бути ізольований доданням N-гептану до реакційну суміші, яку потім перемішують і залишають відстоюватись, потім додають певну кількість ДХМ і суміш перемішують до осадження твердої речовини. Тверду речовину збирають і сушать, отримуючи [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5дисульфонат. Сіль Форми A [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонату може бути приготовлена з сирого 4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]диметил-амоні гемі-нафталін-1,5-дисульфонату (наприклад, як це було описано вище) утворенням шламу солі в ацетонітрилі, перемішуванням шламу, доки він не міститиме сіль Форми A, і збиранням і сушінням твердої речовини. В одному з втілень, шлам обробляють при зовнішній температурі (наприклад, 20 °C). В іншому втіленні, шлам може бути нагрітий до певної температури і потім охолоджений до зовнішньої температури. В іншому варіанті сіль Форми A можна отримати розчиненням сирого 4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідроксифеніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонату в ацетонітрилі, нагріванням розчину протягом певного часу (тобто до розчинення зразка у розчиннику, наприклад, протягом 0,5-48 год.) і потім охолодженням розчину до зовнішньої температури (наприклад, 20 °C). Приготування [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонату і солі Форми A описано нижче в описі експериментів. Нападисилатна сіль винаходу має активність як фармацевтичний препарат, зокрема, як антихолінергічний агент, що включає антагоніст мускаринового рецептора (M1, M2 і M3), зокрема, антагоніст М3. Хвороби і стани, які можна лікувати цією сіллю, включають: 1. Респіраторний тракт: обструктивні хвороби дихальних шляхів, які включають: астму, включаючи бронхіальну, алергічну, природжену, зовнішню, викликану вправами, викликану ліками (включаючи аспірин і NSAID) і пилову астму, як переміжну, так і постійну, всіх рівнів важкості, і інші причини гіперреактивності дихальних шляхів; хронічну обструктивну пульмонарну хворобу (COPD); бронхіт, включаючи інфекційний і еозинофільний бронхіт; емфізему; бронхоектазію; цистозний фіброз; саркоїдоз; фермерські легені і споріднені хвороб; гіперчутливий пневмоніт; легеневий фіброз, включаючи, криптогенний фіброзний альвеоліт, ідеопатичні інтерстиціальні пневмонії, фіброзні ускладнення антинеопластичної терапії і хронічні інфекції, включаючи туберкульоз і аспергільйоз і інші грибкові інфекції; ускладнення трансплантації легенів; васкулітні і тромбозні розлади легеневих судин і пульмонарну гіпертонію; протикашлеву активність, включаючи лікування хронічного кашлю, пов'язаного з 3 UA 99604 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 запальним і секреторним станами дихальних шляхів, і ятрогенного кашлю; гострий і хронічний риніт, включаючи медикаментозний риніт і вазомоторний риніт; весняний і сезонний алергічний риніт, включаючи сінну лихоманку; назальний поліпоз; гострі вірусні інфекції, включаючи звичайну застуду і інфекції, викликані респіраторним синцитіальним вірусом, інфлюенцу, коронавірус (включаючи SARS) і аденовірус; 2. кістки і суглоби: артритиди, пов'язані з остеоартрит/остеоартрозом, первинні і вторинні, наприклад, як наслідок стегнової дисплазії; шийний і поперековий спондиліт і болі у спині і шиї; ревматоїдний артрит і хвороба Стила; серонегативні спондилоартропатії, включаючи анкілозний спондиліт, псоріазний артрит, реактивний артрит і недиференційовану спондартропатію; септичний артрит і інші інфекційні артропатії і кісткові розлади, наприклад, туберкульоз, включаючи хворобу Потса і синдром Понсе; гострий і хронічний кристальні синовіти, включаючи уратну подагру, хворобу відкладення пірофосфату кальцію і викликана апатитом кальцію хвороба сухожилля, бурсальне і синовіальне запалення; хвороба Бехчета; первинний і вторинний синдром Шегрена; системний склероз і обмежена склеродерма; системна червона вовчанка, змішана хвороба з'єднувальної тканини і недиференційована хвороба з'єднувальної тканини; запальні міопатії, включаючи дерматоміозити і поліміозит; ревматична полімалгія; юнацький артрит, включаючи ідіопатичні запальні артритиди суглобів і пов'язані синдроми і ревматичну лихоманку і її системні ускладнення; васкулітиди, включаючи артерит гігантських клітин, артерит Такаясу, ангіїт, нодозний поліартерит, мікроскопічний поліартерит і васкулітиди, пов'язані з вірусною інфекцією, реакції гіперчутливості, кріоглобуліни і парапротеїни; біль у нижній частині спини; Родинна Середземноморська лихоманка, синдром Макла-Велса і Родинні Ірландська лихоманка, хвороба Кікучі; викликана ліками арталгія, тендонітитиди і міопатія; 3. біль і ремоделювання з'єднувальної тканин м'язоскелетних розладів, викликаних травмою [наприклад, спортивною] або хворобою: артритиди (наприклад, ревматоїдний артрит, остеоартрит, подагра або кристальна артропатія), інші суглобні хвороби (наприклад, дегенерація міжхребцевих дисків або скронево-щелепного суглоба), хвороба ремодулювання кістки (наприклад, остеопороз, хвороба Педжета або остеонекроз), поліхондриліт, склеродермa, змішаний розлад з'єднувальної тканини, спондилоартропатія або періодонтальна хвороб (наприклад, періодонтит); 4. шкіра: псоріаз, атопічний дерматит, контактний дерматит або інші екземні дерматози і реакції гіперчутливості затриманого типу; фіто- і фотодерматит; себорейний дерматит, герпетоформний дерматит, лишай Вільсона, склерозний лишай з атропікою, гангренозна піодерма, шкірний саркоїд, дискоїдна вовчанка, пемфігус, пемфігоїд, бульйозний epiдермoліз, уртикарія, ангіодерма, васкулітиди, токсичні еритеми, шкірні еозинофілiї, гніздова алопеція, облисіння чоловіків, синдром Світа, синдром Вебера-христіана, мультиформна еритема; целюліт, інфекційний і неінфекційний; панікуліт; шкірні лімфоми, немеланомний рак шкіри і інші диспластичні пошкодження; викликані ліками розлади, включаючи сип; 5. Очі: блефарит; кон'юнктивіт, включаючи весняний і тривалий алергічний кон'юнктивіт; ірит; передній і задній увеїт; хороїдит; аутоімунні розлади; дегенеративні або запальні розлади, що вражають сітчатку; офтальміт, включаючи симпатетичний офтальміт; саркоїдоз; інфекції, включаючи вірусні, грибкові і бактеріальні; 6. шлунково-кишковий тракт: глосит, гінгівіт, періодонтит; запалення стравоходу, включаючи рефлюкс; еозинофільний гастроентерит, мастоцитоз, хвороба Крона, коліт, включаючи виразковий коліт, проктит, pruritis ani; черевна хвороба, синдром подразнення кишечнику і харчові алергії, з дією, віддаленою від кишечнику (наприклад, мігрень, риніт або екзема); 7. абдомінальні: гепатит, включаючи аутоімунний, алкогольний і вірусний; фіброз і цироз печінки; холецистит; панкреатит, гострий і хронічний; 8. Статево-сечові: нефрит, включаючи інтерстиціальний і гломерулонефрит; нефротичний синдром; цистит, включаючи гострий і хронічний (інтерстиціальнмй) цистит і виразку Гуннера; гострий і хронічний уретрит, простатит, епідидиміт, оофорит і сальпінгіт; вульво-вагініт; хвороба Пейроні; ерекційна дисфункція (чоловіча і жіноча); 9. відторгнення алотрансплантату: гостре і хронічне протікання, наприклад, трансплантату нирки, серця, печінки, легенів, кісткового мозку, шкіри або роговиці або наслідки трансфузії крові; або хронічна хвороба несприйняття трансплантату; 10. ЦНС: хвороба Альцгеймера і інші деменційні розлади, включаючи БКЯ і новий варіант БКЯ; амілоїдоз; множинний склероз і інші демієлінаційні синдроми; церебральний атеросклероз і васкуліт; скронево-оральний артерит; хронічна міастенія; гострий і хронічний біль (гострий, переривчастий або постійний, центрального або периферійного походження), включаючи скроневий біль, головний біль, мігрень, тригемінальна невралгія, атиповий лицевий біль, 4 UA 99604 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 суглобний і кістковий біль, біль від раку і інвазії пухлини, синдром нейропатичного болю, включаючи діабетичні, постгерпетичні і пов'язані з ВІЛ нейропатії; нейросаркоїдоз; ускладнення злоякісних, інфекційних або аутоімунних процесів у центральній і периферійній нервовій системах; 11. інші аутоімунні і алергічні розлади, включаючи тироїдит Хашимото, хворобу Грейвза, хворобу Адисона, цукровий діабет, ідіопатичну тромботичну пурпуру, еозинофільний фасцит, гіпер-IgE синдром, антифосфоліпідний синдром; 12. інші розлади з запальним або імунологічним компонентом, включаючи СНІД, проказу, синдром Сезарі і паранеопластичні синдроми; 13. Серцево-судинні розлади: атеросклероз, що вражає коронарний і периферійний кровоообіг; перикардит; міокардит, запальна і аутоімунна кардіоміопатія, включаючи міокардіальний саркоїд; ішемічні реперфузійні травми; ендокардит, вальвуліт і аортит, включаючи інфекційний (наприклад, сифілітичний); васкулітиди; розлади проксимальних і периферійних вен, включаючи флебіт і тромбоз, включаючи глибокий тромбоз вен і ускладнення варикозних вен; 14. онкологія: лікування звичайних раків, включаючи пухлини простати, грудей, легенів, яєчника, підшлункової залози, кишечнику, шлунку, шкіри і мозку і злоякісності, що вражають кістковий мозок (включаючи лейкемію) і лімфопроліферативні системи, наприклад, лімфома Ходжкіна і не-ходжкіна, включаючи профілактику і лікування метастазної хвороби і рецидиви пухлини і паранеопластичні синдроми; і 15. шлунково-кишковий тракт: черевна хвороба, проктит, еозинофільний гастроентерит, мастоцитоз, хвороба Крона, виразковий коліт, мікроскопічний коліт, невизначений коліт, розлад подразнення кишечнику, синдром подразнення кишечнику, незапальна діарея і харчові алергії, з дією, віддаленою від кишечнику (наприклад, мігрень, риніт або екзема). Відповідно, винахід також включає [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексилгідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній нападисилат, визначений вище і призначений для використання у терапії. В іншому аспекті винахід включає використання [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній нападисилату, визначеного вище, у виготовленні медикаменту для використання у терапії. Термін "терапія" також включає "профілактику", якщо не зазначено інше. Терміни "терапевтичний" і "терапевтично" інтерпретуються відповідним чином. Інший аспект винаходу стосується способу лікування хворобливого стану ссавця, що страждає або ризикує захворіти на зазначену хворобу, який включає введення ссавцю, що потребує такого лікування, терапевтично ефективної кількості [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній нападисилату, визначеного вище. Винахід також включає [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-фенілметил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній нападисилат, призначений для використання у лікуванні хронічної обструктивної пульмонарної хвороби (COPD) (наприклад, незворотної COPD). Винахід також включає використання [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексилгідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній нападисилату, визначеного вище, у виготовленні медикаменту для використання у лікуванні хронічної обструктивної пульмонарної хвороби (COPD) (наприклад, незворотної COPD). Винахід, крім того, включає використання [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексилгідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній нападисилату, визначеного вище, у виготовленні медикаменту для використання у лікуванні астми Винахід також включає спосіб лікування хронічної обструктивної пульмонарної хвороби (COPD) (наприклад, незворотної COPD) у теплокровної тварини, наприклад, людини, який включає введення ссавцю, що потребує такого лікування, ефективної кількості [2-(4-хлорбензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметиламоній нападисилату, визначеного вище. При використанні сполуки винаходу у терапевтичному лікуванні теплокровної тварини, наприклад, людини, зазначений інгредієнт звичайно приготовляють згідно з стандартною фармацевтичною практикою як фармацевтичну композицію. При зазначеному вище терапевтичному використанні доза введення залежить від режиму введення, бажаного лікування і розладу, і становить звичайно від 0,001 мг/кг до 30 мг/кг. Сіль згідно з винаходом може бути використана як така, але взагалі її вводять у формі фармацевтичної композиції, в якій [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси 5 UA 99604 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амонію нападисилат (активний інгредієнт) міститься разом з фармацевтично прийнятним ад'ювантом, розріджувачем або носієм. Звичайні процедури для приготування придатних фармацевтичних рецептур описано, наприклад, у "Pharmaceuticals-The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988. Залежно від способу введення фармацевтична композиція може включати від 0,05 до 99 % (за масою), бажано, від 0,05 до 80 % (за масою), більш бажано, від 0,10 до 70 % (за масою), найкраще від 0,10 до 50 % (за масою) активного інгредієнту (відносно повної маси композиції). Винахід також включає фармацевтичну композицію, яка містить [2-(4-хлор-бензилокси)етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній нападисилат разом фармацевтично прийнятними ад'ювантом, розріджувачем або носієм. Винахід, крім того, включає процес приготування фармацевтичної композиції згідно з винаходом, яка включає змішування [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідроксифеніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній нападисилату з фармацевтично прийнятними ад'ювантом, розріджувачем або носієм. Фармацевтичні композиції можна вводити топічно (наприклад, у шкіру або легені і/або дихальні шляхи) у формі, наприклад, кремів, розчинів, суспензій, гептафлуоралканових (HFA) аерозолів і сухих порошкових рецептур, наприклад, рецептур в інгаляційному пристрої ® Turbuhaler ; або системно, наприклад, перорально, у формі таблеток, капсул, сиропів, порошків або гранул; або парентерально, у формі розчинів або суспензій; або підшкірно; або ректально, у формі супозиторіїв; або трансдермaльно. У втіленні винаходу активний інгредієнт вводять інгаляцією. В іншому втіленні активний інгредієнт вводять порошковим інгалятором. Інгалятор може бути одно- або багатодозовим і може бути сухим порошковим інгалятором з активуванням диханням. При введенні інгаляцією доза активного інгредієнту може взагалі становити у межах 0,1 мкг 10000 мкг, 0,1-5000 мкг, 0,1-1000 мкг, 0,1-500 мкг, 0,1-200 мкг, 0,1-200 мкг, 0,1-100 мкг, 0,1-50 мкг, 5 мкг - 5000 мкг, 5-1000 мкг, 5-500 мкг, 5-200 мкг, 5-100 мкг, 5-50 мкг, 10-5000 мкг, 10-1000 мкг, 10-500 мкг, 10-200 мкг, 10-100 мкг, 10-50 мкг, 20-5000 мкг, 20-1000 мкг, 20-500 мкг, 20-200 мкг, 20-100 мкг, 20-50 мкг, 50-5000 мкг, 50-1000 мкг, 50-500 мкг, 50-200 мкг, 50-100 мкг, 100-5000 мкг, 100-1000 мкг або 100-500 мкг. Сухі порошкові рецептури і HFA аерозолі під тиском з активним інгредієнтом можна вводити пероральною або назальною інгаляцією. Для інгаляції сполуку бажано тонко подрібнити. Бажано, щоб тонко подрібнена сполука мала масову медіану з діаметром менше 10 мкм і була суспендована у пропелентній суміші з застосуванням диспергенту, наприклад, C 8-C20 жирної кислоти або її солі (наприклад, олеїнової кислоти), жовчної солі, фосфоліпіду, алкілсахариду, перфлуорованої або поліетоксилованої ПАР, або іншого фармацевтично прийнятного диспергенту. Одним з варіантів є змішування тонко подрібненої сполуки винаходу з носійною речовиною, наприклад, моно-, ди- або полісахаридом, цукровим спиртом або іншим поліoлем. Придатними носіями є цукри, наприклад, лактоза, глюкоза, рафіноза, мелецитоза, лактитол, мальтитол, трегалоза, сахароза, манітол і крохмаль. В іншому варіанті тонко подрібнена сполука може бути покрита іншою речовиною. Порошкова суміш може також бути внесена у тверді желатинові капсул, кожна з яких містить бажану дозу активної сполуки. Іншим варіантом є процес формування тонко подрібненого порошку у сфери, які руйнуються під час інгаляції. Такий сферонізований порошок може бути внесений у резервуар ліків ® багатодозового інгалятор, наприклад, Turbuhaler , в якому дозувальний вузол відміряє бажану дозу, яку потім інгалює пацієнт. Такою системою активний інгредієнт, з носієм або без, водиться пацієнту. Для перорального введення сполуку винаходу змішують з ад'ювантом або носієм, наприклад, лактозою, сахарозою, сорбітолом, манітолом; крохмалем, наприклад, картопляним крохмалем, кукурудзяним крохмалем або амілопектином; похідною целюлози; зв'язуючим агентом, наприклад, желатиною або полівінілпіролідоном; і/або змащувачем, наприклад, стеаратом магнію, стеаратом кальцію, поліетиленгліколем, воском, парафіном тощо, і потім пресують у таблетки. Якщо потрібно виготовити покриті таблетки, серцевина, приготовлена, як описано вище, може бути покрита концентрованим цукровим розчином, який може містити, наприклад, гуміарабік, желатин, тальк і діоксид титану. В іншому варіанті, таблетка може бути покрита полімером, розчиненим у леткому органічному розчиннику. Для приготування м'яких желатинових капсул сполука винаходу може бути змішана, наприклад, з рослинним маслом або поліетиленгліколем. Тверді желатинові капсули можуть містити гранули сполуки з зазначеними вище ексципієнтами для таблеток. Тверді желатинові капсули можуть бути заповнені рідкими або напівтвердими рецептурами сполуки винаходу. 6 UA 99604 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Рідкі препарати для перорального застосування можуть мати форму сиропів або суспензій, наприклад, розчинів, що містять сполуку винаходу, з збалансовано сумішшю цукру і етанолу, води, гліцеролу і пропіленгліколю. Як варіант, такі рідкі препарати можуть містити забарвлювачі, смакові добавки, сахарин і/або карбоксиметилцелюлозу як загущувач, або інші відомі ексципієнти. Винахід ілюструється наведеними далі необмежуючими Прикладами. У Прикладах: Фіг. 1: Рентгенівська порошкова дифракційна картина солі Форми A [2-(4-хлор-бензилокси)етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемінафталін-1,5-дисульфонату. Синтез [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонату Приготування [1] Загальні експериментальні деталі для Приготування [1] Якщо не зазначено інше, всі реакції проводять в атмосфері нітрогену. Спектри ЯМР отримують на спектрометрі Varian Unity Inova 400 з 5-міліметровим трирезонансним пробником з інверсним виявленням, який працює на 400 МГц, або на спектрометрі Bruker Avance DRX 400 з таким же пробником на 400 МГц, або на спектрометрі Bruker Avance DPX 300 з стандартним 5-міліметровим двочастотним пробником, що працює на 300 МГц. Зсуви дано у 1/ млн відносно тетраметилсилану. Якщо продукти очищають колонною хроматографією, "флеш-кремнезем" стосується силікагелю для хроматографії, 0,035-0,070 мм (220-440 меш) (наприклад, силікагель Fluka 60), з прискореним елююванням при тиску нітрогену до 10 фунт/кв. дюйм (0,7 ат). При використанні тонкошарової хроматографії (ТШХ) використовуються плати, звичайно 3 × 6 см, силікагелю на алюмінієвій фользі з флюоресцентною індикацією (254 нм) (наприклад, Fluka 60778). Усі розчинники і комерційні реагенти використовуються такими, як були отримані. Усі сполуки, що містять основні центри і які очищають РХВЕ, отримують як солі ТФК, якщо не зазначено інше. Умови препаративної РХВЕ: Зворотно фазова колонка С18 100 × 22,5 мм (вн. діам) Genesis з частками 7 мкм. УФ виявлення при 230 нм. Системи РХ/МС У системах Рідинна Хроматографія/Мас-спектроскопія (РХ/МС) використовується: РХ/МС - спосіб 1: Waters PlatForm LCT з зворотно-фазовою колонкою С18 100 × 3,0 мм Higgins Clipeus з частками 5 мкм, Елюювання з A: вода + 0,1 % мурашина кислота; B: ацетонітрил + 0,1 % мурашина кислота. Градієнт: Градієнт – потік %A %B Час (мл/хвил.) 0,00 1,0 95 5 1,00 1,0 95 5 15,00 1,0 5 95 20,00 1,0 5 95 22,00 1,0 95 5 25,00 1,0 95 5 Виявлення - МС, ELS, УФ (100 мкл розщеплення до МС з УФ детектором на 254 нм). Іонізаційний спосіб МС - електророзпилювання (позитивний іон) РХ/МС - спосіб 2: Waters Micromass ZQ з зворотно-фазовою колонкою С18 100 × 4,6 мм Phenomenex Luna, частки 3 мкм, елюювання з A: вода + 0,1 % мурашина кислота; B: ацетонітрил + 0,1 % мурашина кислота. Градієнт: Градієнт – потік %A %B Час (мл/хвил.) 0,00 2,0 95 5 0,50 2,0 95 5 4,50 2,0 5 95 5,50 2,0 5 95 6,00 2,0 95 5 Виявлення - МС, ELS, УФ (100 мкл розщеплення до МС з УФ детектором на 254 нм). Іонізаційний спосіб МС - електророзпилювання (позитивний і негативний іон) Абревіатури: 7 UA 99604 C2 5 10 ДХМ - дихлорметан ДМФ - диметилформамід EtOAc - етилацетат EtOH - етанол GVS - гравіметрична сорбція парів MeOH - метанол Rt - час затримання ТГФ - тетрагідрофуран Інтермедіати 1-7 використовуються у приготуванні [1] [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5дисульфонату. Інтермедіат 1: 2-оксо-2-феніл-N-проп-2-ініл-ацетамід O NH O 15 20 Оксалілхлорид (6,1 г, 48 ммоль) додають до розчину фенілгліоксилової кислоти (6,0 г, 40 ммоль) і 3 крапель ДМФ у сухому ДХМ (50 мл). Реакційну суміш перемішують при кімнатній температурі 3 год. потім розчинник видаляють. Залишок вносять у сухий ДХМ (50 мл) і розчин охолоджують до 0 °C. Обережно додають суміш пропаргіламіну (2,2 г, 40 ммоль) і тріетиламіну (4,05 г, 40 ммоль) протягом 10 хвил., потім суміш залишають нагрітись до кімнатної температури. Перемішування продовжують ще 2,5 год., потім додають воду (10 мл). Суміш промивають 1M HCl, насиченим натрі гідрокарбонатом (водн.), потім розсолом. Органічну фазу сушать (Na2SO4) і розчинник видаляють. Залишок кристалізують з циклогексану, отримуючи продукт як світло коричневу тверду речовину. + Вихід: 5,75 г, 76 %. РХ/МС, спосіб 2: Rt 2,47 хвил., m/z 188 [MH ]. Інтермедіат 2: (5-метил-оксазол-2-іл)-феніл-метанонe. N O 25 30 35 O Метансульфонову кислоту (10 г, 104 ммоль) краплями додають до розчину 2-оксо-2-фенілN-проп-2-ініл-ацетаміду (Інтермедіат 1) (2,4 г, 12,83 ммоль) у 1,4-діоксані (20 мл). Отриманий розчин нагрівають при 90 °C протягом 66 год. Реакційну суміш охолоджують і розчинник видаляють. Темний залишок розділяють між ДХМ і водою. Фракцію ДХМ промивають 1M HCl (2x), насиченим розчином гідрокарбонату натрію (водн., 2x), потім розсолом. Розчин сушать (Na2SO4) і розчинник видаляють, отримуючи сирий продукт. Очищення проводять колонною хроматографією, з елюентом циклогексан/EtOAc (4:1). Це дає продукт як білувату тверду речовину. + Вихід: 1,0 г, 41 %. РХ/МС, спосіб 2: Rt 2,94 хвил., m/z 188 [MH ]. Інтермедіат 3: циклогексил-(5-метил-оксазол-2-іл)-феніл-метанол N O HO 40 Розчин (5-метил-оксазол-2-іл)-феніл-метанону (інтермедіат 2) (3,0 г, 16 ммоль) у 32 мл сухого ТГФ при 0 °C під нітрогеном обробляють краплями 10 хвил. 2M розчином хлориду циклогексилмагнію у діетилетері (10 мл, 20 ммоль). Отриманий глибоко жовтий розчин перемішують при 0 °C приблизно 30 хвил., під час чого утворюється осад, і потім при кімнатній температурі ще 1,5 год. Реакційну суміш охолоджують до 0 °C і обережно обробляють насиченим розчином хлориду амонію розчин (водн.). Суміш перемішують при кімнатній температурі 10 хвил. потім розріджують водою (10 мл). Фази розділяють і органічну фаз промивають розсолом. Об'єднану водну фаз екстрагують ДХМ і об'єднану органічну фазу 8 UA 99604 C2 сушать (MgSO4) і концентрують in vacuo, отримуючи сирий продукт, який розтирають з етером, відфільтровують і сушать. + Вихід: 3,65 г, 84 %. РХМС Спос 2: Rt 3,78 хвил., m/z 272 [MH ]. Інтермедіат 4: (5-бромметил-оксазол-2-іл)-циклогексил-феніл-метанол. Br N O HO 5 10 15 Розчин циклогексил-(5-метил-оксазол-2-іл)-феніл-метанолу (Інтермедіат 3) (3,0 г, 11,1 ммоль) у 1,2-дихлоретану (22 мл) обробляють N-бром-сукцинімідом (2,16 г, 12,2 ммоль), потім 2,2’-азобіс(2-метилпропіонітрил)ом (0,18 г, 2,1 ммоль). Суміш нагрівають до 80 °C протягом 2,5 год. і потім залишають охолонути до кімнатної температури. Додають насичений розчин гідрокарбонату натрію (водн.) і фази розділяють. Органічний шар промивають розсолом і об'єднані водні шари екстрагують ДХМ. Об'єднану органічну фазу сушать (MgSO 4) і концентрують in vacuo, отримуючи сирий продукт як коричневе масло. Очищення проводять колонною хроматографією з елюентом 33-100 % ДХМ/циклогексан, потім 25 % EtOAc/ДХМ. + Вихід: 1,85 г, 48 %. РХМС, спосіб 2: Rt 4,27 хвил., m/z 350, 352 [MH ]. Інтермедіат 5: циклогексил-(5-диметиламінометил-оксазол-2-іл)-феніл-метанол N O HO 20 25 30 N Розчин (5-бромметил-оксазол-2-іл)-циклогексил-феніл-метанолу (Інтермедіат 4) (3,2 г, 9,2 ммоль) у ТГФ (40 мл) обробляють 2M розчином диметиламіну у ТГФ (40 мл, 80 ммоль). Суспензію перемішують декілька хвил. Реакційну суміш залишають при кімнатній температурі на ніч і потім тверду речовину відфільтровують і відкидають. Фільтрат концентрують під зниженим тиском і залишок розділяють між ДХМ і насиченим розчином гідрокарбонату натрію (водн.). Органічний шар сушать (Na2SO4) і випарюють, отримуючи названу сполуку як тверду речовину. Вихід: 2,74 г, 95 %. + РХ/МС (спосіб 1): Rt 6,57 хвил., m/z 315 [MH ]. 1 H ЯМР (ДМСО-d6): δ 0,92-1,29 (m, 6H), 1,42-1,74 (m, 4H), 2,10 (s, 6H), 2,22 (m, 1H), 3,45 (s, 2H), 5,90 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,18-7,22 (m, 1H), 7,27-7,34 (m, 2H), 7,40-7,46 (m, 2H) 1/ млн. Два енантіомери циклогексил-(5-диметиламінометил-оксазол-2-іл)-феніл-метанолу (Інтермедіат 5) (2,74 г) розділяють препаративною хіральною РХВЕ, використовуючи колонку ® 250 × 20 мм Chiralpak 1A, паковану амілаза-трис(3,5-диметилфеніл-карбамат)ом, іммобілізованим на 5 мкм силікагелі. Колонку елююють 5 % EtOH у гептані, буферованих 0,1 % діетиламіном при 15 мл/хвил. Перший енантіомер (Rt 8,5 хвил.) - (S)-циклогексил-(5диметиламінометил-оксазол-2-іл)-феніл-метанол (Інтермедіат 5a) як біла тверда речовина. Інтермедіат 5a: (S)-циклогексил-(5-диметиламінометил-оксазол-2-іл)-феніл-метанол N HO 35 40 O N Вихід: 0,73 г, 27 %. + РХ/МС (спосіб 1): Rt 6,50 хвил., m/z 315 [MH ]. 1 H ЯМР (CDCl3): δ 1,12-1,39 (m, 7H), 1,62-1,76 (m, 3H), 2,25 (s, 6H), 2,29-2,32 (m, 1H), 3,54 (ddAB, 2H), 3,70 (br.s, 1H), 6,84 (s, 1H), 7,24 (t, 1H), 7,33 (t, 2H), 7,64 (d, 2H) 1/ млн. Другий енантіомер (Rt 10,3 хвил.) - (R)-циклогексил-(5-диметиламінометил-оксазол-2-іл)феніл-метанол (Інтермедіат 5b) як біла тверда речовин. 9 UA 99604 C2 Інтермедіат 5b: (R)-циклогексил-(5-диметиламінометил-оксазол-2-іл)-феніл-метанол N O HO 5 10 15 20 25 30 35 N Вихід: 1,04 г, 38 %. + РХ/МС (спосіб 1): Rt 6,48 хвил., m/z 315 [MH ]. 1 H ЯМР (CDCl3): δ 1,10-1,39 (m, 7H), 1,62-1,76 (m, 3H), 2,25 (s, 6H), 2,29-2,35 (m, 1H), 3,54 (ddAB, 2H), 3,70 (br.s, 1H), 6,84 (s, 1H), 7,24 (t, 1H), 7,33 (t, 2H), 7,64 (d, 2H) 1/ млн. Інтермедіат 6: метансульфонової кислоти 2-(4-хлор-бензилокси)-етил-естер O S O O O Cl Розчин метансульфонілхлориду (980 мкл, 12,6 ммоль) у сухому ДХМ (10 мл) повільно додають до охолодженого (0 °C) розчину 2-(4-хлор-бензилокси)-етанолу (2,14 г, 11,46 ммоль) і діізопропілетиламіну (2,0 мл, 23 ммоль) у сухому ДХМ (10 мл). Реакційну суміш залишають нагрітись до кімнатної температури протягом ночі. Додають воду і органічний шар сушать (MgSO4) і концентрують. Залишок очищають колонною хроматографією на кремнеземі з градієнтом 0-20 % діетилетер/циклогексан, отримуючи чистий продукт. Вихід: 1,87 г, 67 %. 1 H ЯМР (CDCl3): δ 3,03 (s, 3H), 3,74 (m, 2H), 4,39 (m, 2H), 4,54 (s, 2H), 7,27 (d, 2H), 7,33 (d, 2H) 1/ млн. Інтермедіат 7: 1-(2-бром-етоксиметил)-4-хлор-бензол Br O Cl Суміш метансульфонової кислоти 2-(4-хлор-бензилокси)-етил-естеру (Інтермедіат 6) (1,37 г, 5,18 ммоль) і броміду літію (1,80 г, 20,7 ммоль) в ацетоні (15 мл) нагрівають під зворотним холодильником протягом ночі. Реакційну суміш концентрують до сухості і залишок розділяють між ДХМ і водою. Органічний шар сушать (MgSO4) і концентрують і очищають колонною хроматографією на кремнеземі з елюентом ДХМ/циклогексан (1:3), отримуючи продукт як безбарвне масло. Вихід: 0,67 г, 78 %. 1 H ЯМР (CDCl3): δ 3,49 (t, 2H), 3,79 (t, 2H), 4,55 (s, 2H), 7,30 (d, 2H), 7,32 (d, 2H) 1/ млн. Інтермедіат 8: [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній бромід Розчин (R)-циклогексил-(5-диметиламінометилоксазол-2-іл)-феніл-метанолу (Інтермедіат 5b) (0,40 г, 1,27 ммоль) і 1-(2-бром-етоксиметил)-4-хлор-бензол (Інтермедіат 7) (0,67 г, 2,68 ммоль) у хлороформі (4 мл) і ацетонітрил (4 мл) нагрівають при 50 °C протягом 3 днів. Реакційну суміш концентрують до сухості, отримуючи жовте масло, яке очищають колонною хроматографією з елюентом 2,5-25 % MeOH/ДХМ, отримуючи продукт як білу піну. Вихід, 0,68 г, 92 % N + O O N Br O Cl + 40 РХ/МС (спосіб 1): Rt 8,72 хвил., m/z 483 [M ]. 1 H ЯМР (CDCl3):  1,08-1,40 (m, 7H), 1,61-1,76 (m, 3H), 2,31 (m, 1H), 3,32 (s, 6H), 3,88 (m, 2H), 3,94 (m, 2H), 4,03 (br. s, 1H), 4,54 (s, 2H), 5,17 (ddAB, 2H), 7,21-7,26 (m, 3H), 7,28-7,34 (m, 4H), 7,46 (s, 1H), 7,56 (d, 2H) 1/ млн. 10 UA 99604 C2 5 10 [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]диметил-амоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонат Приготування [1] Суміш [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5ілметил]-диметил-амоній броміду (0,20 г, 0,36 ммоль), (Інтермедіат 8), нафталін-1,5дисульфонат динатрієвої солі (0,059 г, 0,18 ммоль), ДХМ (2,8 мл) і води (2,8 мл) перемішують енергійно при кімнатній температурі протягом ночі. Додають N-гептан (1,0 мл) і суміш енергійно перемішують. Після відстоювання утворюються два прозорі шари і жовте масло. Додають ДХМ (1,0 мл) (для розчинення масла) і суміш перемішують при кімнатній температурі протягом ночі і отримують осаджену білу тверду речовину, яку збирають фільтрацією, промивають сумішшю ДХМ/вода суміш і сушать у вакуумі при 50 °C. 1 Спектр H ЯМР відповідає гемі-солі (відношення катіон/аніон 2:1). Вихід: 0,17 г, 77 %. N + O N O O O S O O Cl Cl O O + N N 15 20 25 30 35 40 + O O S O O РХ/МС (cпосіб 1): Rt 8,62 хвил., m/z 483 [M ]. 1 H ЯМР (CD3OD): δ 1,04-1,37 (m, 12H), 1,53 (m, 2H), 1,64-1,76 (m, 6H), 2,38 (m, 2H), 3,03 (s, 12H), 3,46 (m, 4H), 3,85 (m, 4H), 4,52 (s, 4H), 4,70 (s, 4H), 7,24 (m, 2H), 7,34 (m, 12H), 7,43 (s, 2H), 7,52 (m, 6H), 8,20 (d, 2H), 9,02 (d, 2H) 1/ млн. "Сіль Форми A" [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонат [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]диметил-амоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонат (приготовлений вище) (107 мг, 0,17 ммоль) розчиняють у мінімальній кількості MeCN при кімнатній температурі. Розчин нагрівають і потім залишають охолонути до кімнатної температури. Отриману кристалічну тверду речовину відфільтровують і сушать у вакуумі. Вихід: 83 мг, 78 %. Аналіз XRPD продукту, приготовленого таким шляхом, ідентифікував продукт як "Сіль Форми AЄ". Приготування [2] Загальні експериментальні умови для Приготування [2] Всі реакції проводять в атмосфері інертного газу, якщо не зазначено інше. Спектри ЯМР отримують на спектрометрі Bruker AVANCE400: частота 400 МГц; 2-канал; zградієнт, температурні межі 0-120 °C. Умови РХВЕ: Колонка Phenomenex Luna C18(2) (50 × 4,6 мм), частки 3 мкм. УФ детектор - на 210 нм. Елюент - A: вода + 0,05 % трифлуороцтова кислота; B: ацетонітрил + 0,05 % трифлуороцтова кислота. Градієнт: Градієнт – потік %A %B Час (мл/хвил.) 0,00 1,0 90 10 8,00 1,0 10 90 9,00 1,0 10 90 9,50 1,0 90 10 12,00 1,0 90 10 РХ/МС, спосіб: LC - спосіб, описаний вище. MS: HP-1100 MSD. Виявлення – API-ES, позитивний режим. Приготування [2] 1 Суміш (R)-циклогексил-(5-диметиламінометилоксазол-2-іл)-феніл-метанолу (1 екв.) і 1-(2бром-етоксиметил)-4-хлор-бензолу (2 екв) у 2-пропанолі (5 об'ємів) нагрівають при 52 °C 164 год. РХВЕ показує 98 %-не перетворення. Реакційну суміш випарюють до сухості і отримують 11 UA 99604 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]диметил-амоній бромід. Сирий зразок [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідроксифеніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній бромід розчиняють у ДХМ (4,98 об.) і додають розчин динатрієвої солі 1,5-нафталін дисульфонової кислоти (1 екв.) у воді (10 об.) при кімнатній температурі протягом 10 хвил. Суміш розріджують ДХМ (4,98 об.) і перемішують 1 год. при кімнатній температурі. Перемішування припиняють і емульсію осаджують перед відділенням. До органічного шару додають суміш трет-бутил-метилового етеру (tBME) (10 об.) і 2-пропанолу (1,6 об.) при кімнатній температурі протягом 72 хвил. Отриману суспензію фільтрують і фільтрувальний залишок промивають tBME (2,15 об.). Сушіння (роторний випарник при температурі ванни 40-50 °C при 5-10 мбар) дає [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5дисульфонат. Використання 130 г (R)-циклогексил-(5-диметиламінометилоксазол-2-іл)-феніл1 метанолу дає 216 г, 83 %. Спектр H відповідає гемі-солі (відношення катіон/аніон 2:1). Перетворення у "сіль Форми A" здійснюють суспендуванням сирої партії [2-(4-хлорбензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметиламоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонату, приготовленого вище в ацетонітрилі (13,8 об.). Суспензію нагрівають до флегми і перемішують під зворотним холодильником протягом 1 год. Потім суспензію охолоджують до 70 °C і перемішують при цій температур протягом ночі. Суспензію охолоджують до кімнатної температури і тверду речовину фільтрують і промивають ацетонітрилом (1,4 об.) і сушать (роторний випарник при температурі ванни 40-50 °C при 5-10 мбар), отримуючи "сіль Форми A". Використання 216 г сирого [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2((R)-циклогексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5дисульфонату дає 203,5 г (94 %) вихідного матеріалу. 1 (R)-циклогексил-(5-диметиламінометилоксазол-2-іл)-феніл-метанол є Інтермедіатом 5b у Приготуванні [1]. Альтернативне приготування (R)-циклогексил-(5-диметиламінометилоксазол2-іл)-феніл-метанолу наведено нижче. (R)-циклогексил-(5-диметиламінометил-оксазол-2-іл)-феніл-метанол 2 (5-диметиламінометил-оксазо-2-іл)-феніл-метанон розчиняють у ТГФ (8,4 л/кг) і охолоджують до температур 0 5 °C, і потім додають циклогексил магній хлорид (1,3 екв. (20 % (маса/маса) розчин у толуолі/ТГФ) протягом щонайменше 1 год. Реакційну суміш нагрівають до 20 °C протягом 40 хвил. і перемішують при 20 °C щонайменше 1 год. Перетворення у продукт становить > 96 % згідно з РХВЕ. Реакційну суміш додають до суміші of 23,1 %-го (за масою) NH4Cl (3,97 л/кг) і води (3,97 л/кг). Фази розділяють і водний шар екстрагують етилацетатом (7 л/кг). Об'єднані органічні шари промивають водою (5,25 л/кг) 70 % об'єму видаляють дистиляцією (p ≥ 130 мбар, 50 °C). До дистиляційного залишку додають ацетонітрил (7,82 л/кг) і суспензію нагрівають до повного розчинення (70 °C). Реакцію охолоджують до 0 °C протягом 7 год. і перемішують при 0 °C протягом щонайменше 1 год. Реакційний продукт ()-циклогексил(5-диметиламінометил-оксазол-2-іл)-феніл-метанол збирають фільтрацією і промивають тричі холодним ацетонітрилом (1,65 л/кг). Вихід - 60-70 % і чистота > 97 % пікової площі (РХВЕ) і > 97 % (маса/маса) (ЯМР). (R)-циклогексил-(5-диметиламінометил-оксазол-2-іл)-феніл-метанол відділяють від цієї рацемічної суміші хіральною SMB хроматографією на колонці Chiralpak AD з елюентом ацетонітрил:ізопрoпанол:діетилметиламін (90:10:0,1). 2 Приготування (5-диметиламінометил-оксазо-2-іл)-феніл-метанону описано у WO 2007/017669 (інтермедіат 4). Приготування [3] Загальні експериментальні умови для Приготування [3] є такими ж, як для Приготування [2] Суміш (R)-циклогексил-(5-диметиламінометилоксазол-2-іл)-феніл-метанолу (1 екв.) і 1-(2бром-етоксиметил)-4-хлор-бензолу (2 екв.) у 2-пропанолі (5 об.) нагрівають до 70 °C (внутрішня температура) протягом 1 год., перемішують при 70 °C протягом 26 год. і потім охолоджують до 20 °C протягом 30 хвил. Перетворення перевіряють РХВЕ. Реакційну суміш випарюють до сухості (роторний випарник при температурі ванни 40-50 °C при10-15 мбар) і залишок розчиняють у ДХМ (8,9 об.). До цього розчину додають розчин динатрієвої солі 1,5-нафталін дисульфонової кислоти (1 екв.) у воді (17,7 об.) протягом щонайменше 10 хвил. Отриману суміш розріджують ДХМ (8,9 об.) і перемішування продовжують при кімнатній температурі 1 год., після чого емульсію осаджують перед відділенням. До органічного шару додають протягом щонайменше 60 хвил. при кімнатній температурі суміш tBME (17,7 об.) і 2-пропанолу (2,86 об.). Суспензію перемішують при кімнатній температурі протягом від 10 до 60 хвил. і фільтрують. Фільтрувальний залишок промивають tBME (2 × 3,46 об.) і сушать (роторний випарник при температурі ванни 40-50 °C при 10-15 мбар) до втрати після сушіння ≤ 2 % (за масою). Матеріал суспендують у 22,9 об. ацетонітрилу і суспензію нагрівають до флегми протягом 30 хвил., 12 UA 99604 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 перемішують під зворотним холодильником протягом 60-70 хвил., потім охолоджують 70 °C (внутрішня температура), перемішують при 70 °C ще 16-24 год. і охолоджують до 20 °C протягом 1 год. Суспензію фільтрують і фільтрувальний залишок промивають ацетонітрилом (4,61 об.). Матеріал сушать (роторний випарник при температурі ванни 40-50 °C при 10-15 мбар) до втрати ≤ 1 % (за масою). Вихід з використанням 25,0 г (R)-циклогексил-(5-диметиламінометилоксазол-2-іл)-фенілметанолу становить 38,7 г, 78 %. Вихід з використанням 129,9 г (R)-циклогексил-(5-диметиламінометилоксазол-2-іл)-фенілметанолу становить 203,6 г, 79 %. РХВЕ і ЯМР показують відповідність спектрів гемі-солі відношення катіон/аніон 2:1). Умови аналізу твердої солі Форми A [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексилгідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонату. "Сіль Форми A" приготовлену згідно з Приготуванням [2] випробують, як це описано далі. Опис інструментів - XRPD - машина PANalytical CubiX PRO у Ø-Ø конфігурації з межами сканування 2° - 40° 2Ø з 100-секундною експозицією на кожний 0,02°-й інкремент. Рентгенівське опромінювання забезпечується мідною довгофокусною трубкою, що працює при 45 кВ і 40 мА. Довжина хвилі мідного рентгенівського опромінювання - 1,5418 Å. Дані отримують на нульовому заземленому утримувачі, в якому закріплюють ~ 2 мг сполуки. Утримувач виготовлено з єдиного кристалу кремнію, вирізаному уздовж недифракційної площини, і потім піддано поліруванню на оптично плоскому доводочному пристрої. Рентгенівський інцидент на цю поверхню компенсують гасінням Брега. - Калориметрію DSC виміряють калориметром TA Q1000 Differential Scanning Calorimeter з алюмінієвим лотком і перфорованими кришками. Маса зразка - від 0,5 до 5 мг. Процедуру виконують у потоці нітрогену (50 мл/хвил.) і температуру визначають у межах 25-300 °C при постійній швидкості зростання температури 10 °C/хвил. - Термографію TGA виміряють аналізатором TA Q500 Thermogravimetric Analyser з платиновим лотком. Маса зразка - від 1 до 5 мг. Процедуру виконують у потоці нітрогену (60 мл/хвил.) і температуру визначають у межах 25-200 °C при постійній швидкості зростання температури 10 °C/хвил. - Профілі GVS виміряють інструментом Vapour Sorption DVS-1. Твердий зразок прибл. 1-5 мг розміщують у скляній посудині і масу зразка реєструють способом подвійної циклічної операції (відносна вологість від 40 до 90 до 0 до 90 до 0 %, кроками 10 %) при 25 °C. Температура плавлення Форми A згідно з DSC становила 233 °C (початок) (±3 °C). Втрата маси перед плавленням TGA була дуже низькою (0,0 % - 0,5 %). Визначення GVS дало збільшення маси менш, ніж на 0,5 % при 80 %-й відносній вологості (±0,3 %). Спектр XRPD "солі Форми A" наведено на Фіг. 1. "Сіль Форми A" мікронізували у вихровому млині 50 мм, з ежекторним тиском 5 бар і тиском мелення 1,5-2 бар, отримуючи 90 %-ний вихід. Розмір часток мікронізованого матеріалу, визначений подавальником сухого порошку Malvern Laser Diffraction, становив d(0,1): 0,77 мкм, d(0,5): 1,45 мкм, d(0,9): 2,65 мкм. Оцінювання деагрегаційних якостей мікронізованої "солі Форми A" показало відмінні якості тонкої фракції часток (FPF >60 %) при відносній вологості 075 %. Біологічна активність [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексил-гідрокси-фенілметил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амонію Інгібіторну дію сполуки нападисилатної солі визначали аналізом на зв'язування радіоліганду мускаринового рецептора. Дослідження зв'язування радіоліганду проводили у форматі аналізу 3 Scintillation Proximity (SPA), використовуючи [ H]-N-метил -скополамін ([3H]-NMS) і клітині мембрани, що експресують людські мускаринові рецептори (M2 або M3), якими були покриті 3 кульки SPA. Покриття кульок SPA інкубували у 96-коміркових планшетах у буфері HEPES з [ H]NMS і антагоністом М3 при різних концентраціях протягом 16 год. Зв'язування радіоліганду підраховували лічильником сцинтиляцій Wallac Microbeta. [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)цикло-гексил-гідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній показав pIC50 зв'язування М3 9,8. На фіг. 1 - XRPD для солі Форми A [2-(4-хлор-бензилокси)-етил]-[2-((R)-циклогексилгідрокси-феніл-метил)-оксазол-5-ілметил]-диметил-амоній гемі-нафталін-1,5-дисульфонату 13 UA 99604 C2 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 5 10 15 20 1. Сіль, яка є [2-(4-хлорбензилоксі)етил]-[2-((R)-циклогексилгідроксифенілметил)оксазол-5ілметил]диметиламонію нападисилатом (нафталін-1,5-дисульфонатом). 2. Сіль за п. 1, яка відрізняється тим, що є [2-(4-хлорбензилоксі)етил]-[2-((R)циклогексилгідроксифенілметил)оксазол-5-ілметил]диметиламонію гемінафталін-1,5дисульфонатом. 3. Сіль за п. 2, яка відрізняється тим, що має щонайменше такі характеристичні піки рентгенівської порошкової дифракції (у град. 2θ): (1) 5,3, 10,5, 15,8 і 16,5 або (2) 5,3, 10,5, 15,8, 16,5, 18,6 і 19,4 (3) 5,3, 10,5, 15,8, 16,5, 18,6, 19,4, 19,7 і 20,3 або (4) 5,3, 10,5, 15,8, 16,5, 17,8, 18,6, 19,4, 19,7, 20,4 і 21,7. 4. Сіль за п. 3, яка відрізняється тим, що має рентгенівську порошкову дифракційну картину, суттєво подібну до зображеної на фіг. 1. 5. Сіль за будь-яким з пп. 1-4, яка відрізняється тим, що є ангідратом. 6. Фармацевтична композиція, яка містить сіль за будь-яким з пп. 1-5 разом з фармацевтично прийнятними ад'ювантом, розріджувачем або носієм. 7. Сіль за будь-яким з пп. 1-5, яка відрізняється тим, що її призначено для застосування у терапії. 8. Застосування солі за будь-яким з пп. 1-5 у виготовленні медикаменту для використання у лікуванні хронічної обструктивної пульмонарної хвороби. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 14