Спосіб одержання лектину

УКРАЇНА (19) UA (11) 13552 (13) U (51) МПК (2006) A61K 36/00 МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ ОПИС ДО ДЕКЛАРАЦІЙНОГО ПАТЕНТУ НА КОРИСНУ МОДЕЛЬ видається під відповідальність власника патенту (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ ЛЕКТИНУ 1 2 (13) 13552 (11) сті. Відповідно до цього були розроблені умови екстракції, які дозволяють з максимальною ефективністю провести видобування цих білків. Для екстрагування готують суміш шляхом об'єднання 0,2М Na2HPО4*12H2О та 0,1М лимонної кислоти до необхідного значення рН. Кожний з компонентів розчиняють в 0,9% NaCl на дистильованій воді. Для приготування 1 літра 0,2М розчину Na2HPO4*12H2O потрібно 71,64г реактиву, а 1 літр 0,1М лимонної кислоти - 19,21 препарату. Спосіб здійснюють наступним чином. Насіння калини розмелюють і екстрагують (10л фосфатноцитратного буферу при рН 4,5 5,0 на 1кг насіння) протягом 2-х годин при кімнатній температурі. Суміш фільтрують і фільтрат центрифугують 20 хвилин при 5000об/хв. Осад виводять з технічного процесу, надосадкову рідину доводять до рН 4,0, додаючи холодний етанол (-2°С) до кінцевої 75%ної концентрації і знову центрифугують. Надосадкову рідини виділяють, осад сушать під вакуумом, розчиняють в 600мл 0,9% NaCl. Після центрифугування осад виділяють і повторюють етанольне фракціонування, як описано вище. Отриманий при повторному осаджуванні 75%-ним етиловим спиртом осад висушують під вакуумом, розчиняють в 400мл 0,9%-ного розчину хлориду натрію, і повторюють етанольне фракціонування ще раз. Осад, отриманий після третього осаджування етанолом, розчиняють в дистильованій воді, диалізирують та висушують. Вихід лектину становить 0,3%. UA Корисна модель відноситься до галузі біології та медицини, а конкретно способам отримання лектинів і можливості використання для вивчення фізіологічних процесів, які відбуваються в клітинах, а також імунології. Відомий спосіб отримання лектину шляхом екстракції рослинної сировини, в якості якої використовують подрібнене насіння обліпихи крушиновидної [Hippophae rhamnoides L.], центрифугування, послідовного фракціонування екстракту етиловим спиртом та сушки цільового продукту. Екстракцію проводять буфером Мак-Ільвейна в розчині хлориду натрію (0,9%) при рН 5,0 6,0 [див. а.с. СРСР №1732998, МПК5 А61К35/78, 18.04.1990р.]. Даний спосіб взятий за найближчий аналог. Недоліком відомого способу є низький показник гемаглютинуючої активності одержаного лектину, що обумовлено недостатнім рівнем екстрактивності даної сировини при вказаному веденні процесу екстракції. Задача, на рішення якої спрямована корисна модель, складається з розширення сировинної бази і підвищення гемаглютинуючої активності лектинів за рахунок використання іншої рослинної сировини та особливого процесу екстракції. Вона достягається за рахунок того, що, як рослинну сировину використовують насіння калини звичайної, а екстракцію проводять при рН 4,5 5,0. Авторами вперше було встановлено, що насіння калини звичайної [Viburnum opulus L.] мають значну гемаглютинуючу активність, що обумовлено вмістом в них лектинів високої біологічної активно U (57) Спосіб одержання лектину шляхом екстракції рослинної сировини, центрифугування, послідовного фракціонування екстракту етиловим спиртом і висушування цільового продукту, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують насіння калини звичайної (Viburnum opulus L.), а екстракцію проводять при рН 4,5-5,0. (19) (21) u200507661 (22) 01.08.2005 (24) 17.04.2006 (46) 17.04.2006, Бюл. № 4, 2006 р. (72) Поспєлов Сергій Вікторович, Поспєлова Ганна Дмитрівна (73) ПОЛТАВСЬКА ДЕРЖАВНА АГРАРНА АКАДЕМІЯ 3 13552 Таблиця Ефективність виділення пектинів при різному рН екстрагенту Умови екстрагування Екстрагування при рН=4,0 Екстрагування при рН=4,5 Екстрагування при рН=5,0 Екстрагування при рН=5,5 Екстрагування при рН=6,0 Екстрагування при рН=6,5 Екстрагування при рН=7,0 Екстрагування при рН=7,5 Екстрагування при рН=8,0 Титр аглютинації 1:256 1:2048 1:2048 1:1024 1:512 1:256 1:256 1:256 1:128 Комп’ютерна верстка В. Мацело 4 Контроль за ефективністю виділення пектинів з насіння калини звичайної здійснюється шляхом постановки реакції гемаглютинації з використанням еритроцитів людини 0(1) групи в системі АВО. Дані таблиці свідчать, про те що при видобуванні пектинів забуференою системою в діапазоні рН 4,5 5,0 титр аглютинації складає 1:2048. Під час проведення екстракції за найближчим аналогом титр аглютинації складає 1:512-1:2048, що значно поступається запропонованому способу. Це свідчить про те, що під час виділення лектинів за пропонованим способом підвищується їх активність до гемаглютинації. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601