Штам bacillus subtilis – продуцент позаклітинного лектину зі специфічністю до n-ацетилнейрамінової та d-глюкуронової кислот

Штам Bacillus subtilis 668 IMB, депонований в Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології НАН України за № В-7014, - продуцент позаклітинного лектину зі специфічністю до N-ацетилнейрамінової та D-глюкуронової кислот. (19) (21) 98116100 (22) 18.11.1998 (24) 15.11.2001 (46) 15.11.2001, Бюл. № 10, 2001 р. (72) Підгорський Валентин Степанович, Коваленко Емма Олександрівна, Гетьман Катерина Іллівна (73) ІНСТИТУТ МІКРОБІОЛОГІЇ І ВІРУСОЛОГІЇ ІМ. Д.К. ЗАБОЛОТНОГО НАН УКРАЇНИ, UA 42865 Приклад 1 Штам культивують при температурі 37°С, рН 6,8-7,0 в колбах Ерленмейера з робочим об'ємом 100 мл періодичним способом на середовищі Гаузе такого складу, г/л: бульон Хотінгера - 30 мл; пептон - 5,0; NaCI - 5,0; глюкоза - 10,0 /контроль/. Середовище інокулюють суспензією 24-годинної культури штаму із розрахунку 1 об.%. Протягом всього процесу вирощування швидкість перемішування підтримують 160 об/хв. По закінченню процесу від культуральної рідини центрифугуванням відділяють клітини, а культуральну рідину використовують для одержання лектину. При вирощуванні штаму на контрольному середовищі одержано позаклітинний лектин зі специфічністю до похідних глюкози, галактози, а також до фруктозо-1,6-дифосфату (таблиця). Найбільш виражена спорідненість відмічена для N-ацетилнейрамінової і D-глюкуронової кислот /мінімальні інгібуючі дози 1,9 мМ/. Приклад 2 Умови вирощування штаму, як в прикл. 1, за винятком того, що джерелом вуглецю є галактоза 10 г/л. При заміні основного вуглеводу в контрольному середовищі на еквівалентну кількість галактози спорідненість лектину до N-ацетилнейрамінової і D-глюкуронової кислот збільшується у два-чотири рази і їх мінімальні інгібуючі дози складають 0,5 мм і 0,9 мМ, відповідно (табл.). Приклад 3 Умови вирощування штаму, як в прикл. 1, за винятком того, що в середовище вводять лактозу як джерело вуглецю. При введенні дисахариду лактози (галактозаглюкоза) в середовище росту відмічається аналогічна, як на середовищі з галактозою, чутливість лектину до D-глюкуронової кислоти (мінімальна інгібуюча доза дорівнює 0,9 мМ), але інгібуюча доза N-ацетилнейрамінової кислоти значно підвищується (3,7 мМ). Джерела інформації 1. Лунин М.Д., Панасюк Е.Н., Луцик А.Д. Лектины / Львов: Вища школа, 1981. - 150 с. 2. Подгорский B.C., Коваленко Э.А,, Симоненко И.А. Лектины бактерий / Киев: Наукова думка, 1992, - 203 с. 3. Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б. Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий рода Bacillus из организма человека и животных. Киев, АН УССР, Минздрав УССР, 1983. - 49 с. Таблиця Вуглеводна специфічність штаму Bacillus subtilis 668 ІMB на середовищі з різними вуглеводами Мінімальні інгібуючі концентрації вуглеводів /мМ/ Вуглеводи в середовищі Глюкоза Галактоза Лактоза Dгалактозамін D-глюкозамін Dглюкуронова кислота Фосфоглюконова кислота Глюкозо-6фосфорна кислота 9,4 9,4 18,7 18,7 9,4 9,4 1,9 0,9 0,9 3,7 3,7 1,9 18,7 18,7 9,4 Nацетилнейрамінова кислота 1,9 0,5 3,7 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ __________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 __________________________________________________________ 2 Фруктозо1,6-дифосфат 18,7 2,3 9,4