Набір моноклональних антитіл в1, в4, в5, в6, в10, специфічних до поверхневого антигену вірусу гепатиту в, придатних до використання у імуноферментному аналізі

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Набір моноклональних антитіл В1, В4, В5, В6, В10, специфічних до поверхневого антигену вірусу гепатиту В, придатних до використання у імуноферментному аналізі, який характеризується тим, що моноклональні антитіла набору мають високі константу афінності, титр у культуральній рідині та титр пероксидазного кон'югату.

Текст

УКРАЇНА (19) UA (11) 16037 (13) U (51) МПК (2006) C12N 5/00 МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ ОПИС ДО ДЕКЛАРАЦІЙНОГО ПАТЕНТУ НА КОРИСНУ МОДЕЛЬ видається під відповідальність власника патенту (54) НАБІР МОНОКЛОНАЛЬНИХ АНТИТІЛ В1, В4, В5, В6, В10, СПЕЦИФІЧНИХ ДО ПОВЕРХНЕВОГО АНТИГЕНУ ВІРУСУ ГЕПАТИТУ В, ПРИДАТНИХ ДО ВИКОРИСТАННЯ У ІМУНОФЕРМЕНТНОМУ АНАЛІЗІ 1 2 Характеристика моноклональних антитіл Назва МКАТ В1 В4 В5 В6 В10 Ізотип антитіл IgG1 IgG1 IgG2b IgG2a IgG2a Константа афінності, x1010 моль/л 5,0 2,0 1,0 1,0 2,0 Титр антитіл у культураль- Титр пероксидазного кон'югату ній рідині* антитіл** 1:1000 1:100000 1:1000 1:800 1:1000 1:1000 * тестування у непрямому твердофазному ІФА на HBs-Ag (сорбція 1мкг/мл) Приклад 1. Виділення моноклональних антитіл В1, В4 із асцитичної рідини. Розморожували асцитичну рідину із вмістом моноклональних антитіл та переносили її у центрифужну пробірку на 15мл. Пробірку поміщали у нагріту до 45-50°С воду на 5 хвилин. Зважу вали сульфат натрію в кількості, потрібній для 18 %-го насичення (вага на об'єм) асцитичної рідини, всипали у пробірку з асцитом та старанно струшували до розчинення сульфату натрію. Спостерігали помутніння, зумовлене випадінням в осад МКАТ. Пробірку центрифугували при 10000об./хв (13) 16037 Таблиця (11) Найбільш близьким до запропонованих є моноклональні антитіла, які взаємодіють із HBsAg [2]. У порівнянні із вищезгаданим антитілами клони В1, В4, В5, В6, В10 характеризуються більшою специфічністю та активністю у імуноферментному аналізі. Моноклональні антитіла продукуються гібридними клітинами, що одержані при злитті мієломних мишачих клітин Sp 2/0 та спленоцитів мишей лінії Balb/c. Клони МКАТ В1, В4, В5, В6, В10 характеризуються наступними ознаками. UA Корисна модель стосується імунхімії та гібридомної технології і може бути використаний для одержання моноклональних антитіл (МКАТ) до поверхневого антигену вірусу гепатиту В (HBs-Ag) та їхніх імуноферментних кон'югатів. Метою корисної моделі є одержання нових моноклональних антитіл до поверхневого антигену вірусу гепатиту В, придатних для використання у імуноферментному аналізі (ІФА). Відомі МКАТ до поверхневого антигену вірусу гепатиту В [1]. Проте згадані моноклональні антитіла непридатні для використання у імуноферментних тест-системах для серологічної діагностики. U (57) Набір моноклональних антитіл В1, В4, В5, В6, В10, специфічних до поверхневого антигену вірусу гепатиту В, придатних до використання у імуноферментному аналізі, який характеризується тим, що моноклональні антитіла набору мають високі константу афінності, титр у культуральній рідині та титр пероксидазного кон'югату. (19) (21) u200601612 (22) 16.02.2006 (24) 17.07.2006 (46) 17.07.2006, Бюл. № 7, 2006 р. (73) ТОВАРИСТВО З ОБМЕЖЕНОЮ ВІДПОВІДАЛЬНІСТЮ "НАУКОВО-ВИРОБНИЧА КОМПАНІЯ "ВІТРОТЕСТ" 3 16037 4 впродовж 5 хвилин у кутовому роторі. Після чого фату амонію. Для цього до охолодженого препанадосад видаляли, а осад антитіл розводили у 5 рату МКАТ додавали насичений розчин сульфату мл деіонізованої води. Пробірку поміщали у нагріамонію до 40-50% насичення. Витримували на ту до 45-50°С воду на 5 хвилин. холоді (4°С) 2-3 години, після чого центрифугуваЗнову зважуювали сульфат натрію у кількості, ли 20хв. при 4000об/хв. при кімнатній температурі. потрібній для 16%-го насичення (вага на об'єм) Осад МКАТ ресуспендували в розчині сульфату розчину антитіл, всипали у пробірку та старанно амонію 40%-ого насичення та переносили у струшували до розчинення сульфату натрію. Споцентрифужні пробірки на 15мл. Центрифугували у стерігали помутніння, зумовлене випадінням антикутовому роторі при 10000об/хв. протягом 20хв. тіл в осад. Пробірку центрифугували при Надосад старанно видаляли, а осад МКАТ розчи10000об./хв впродовж 5 хвилин у кутовому роторі. няли в мінімальній кількості (1-2мл) деіонізованої Після чого надосад видаляли, а осад антитіл розводи. Розчин переносили у мікропробірки та освітводили у 2-3мл деіонізованої води. ляли при 10000об/хв. протягом 10хв. Освітлені Одержаний розчин МКАТ фільтрували через МКАТ переносили до спільного флакону. Концентфільтри з порами 0,45мкм. рація МКАТ, одержаних таким способом, коливаДля переведення МКАТ у фосфатний буфер лася від 20 до 40мг/мл. використовували 0,02М фосфатний буфер (рН 7,2Приклад 3. Спосіб використання пероксидаз7,4) та колонку 1,5x20см з сефадексом G-25 зрівного кон'югату моноклональних антитіл B1. новажену фосфатним буфером. МКАТ, одержані Сорбцію МКАТ до HBs-Ag клонів В1 або В4 у раніше, в об'ємі 2-3мл наносили на гель, після полістиролових планшетах проводили у 0,05М поглинання розчину гелем наносили такий же карбонат-бікарбонатном буфері (рН9,6) протягом об'єм буферу. Після поглинання гелем буферу ночі при 4°С в концентрації 2,5мкг/мл. Для відмиколонку заповнювали фосфатним буфером довевання використовували фосфатно-сольовий бурху, вставляли адаптер та проводять елюцію фофер з додаванням 0,05% твін-20 (ФСБТ), рН7,2сфатним буфером із швидкістю 2мл/хв. Вихід піку 7,4. У лунки планшету вносили досліджувані на реєстрували при 280нм. Збирали фракцію МКАТ в наявність HBs-Ag зразки сироваток крові. Планшет окремий флакон, додавали 1% 10%-ого азиду наінкубували 1 годину при 37°С і потім відмивали. трію та зберігали при плюс 4°С до 6 місяців. Для виявлення зв'язаного HBs-Ag використовуваПриклад 2. Афінне виділення моноклональних ли кон'югат МКАТ В5 з пероксидазою хрону, який антитіл В5, В6, В10 із асцитичної рідини. інкубували 1 годину при кімнатній температурі. Розморожували асцитичну рідину з вмістом Планшет тричі відмивали ФСБТ і один раз водою. МКАТ та переносили її у центрифужну пробірку та Як субстрат використовували 0,003% розчин переосвітлювали при 4000об/хв. протягом 30хв. Після кису водню в 0,15М цитратному буфері, рН5,0, а цього асцитичну рідину фільтрували через фільтяк хромоген - тетраметилбензидін. ри з порами 0,45мкм. Реакцію зупиняли 2М сірчаною кислотою. ОпДля афінної очистки використовували колонку тичну щільність при довжині хвиль 492нм і 630нм з білком А-сефарозою об'ємом 10 мл. Перед наневимірювали на спектрофотометрі. сенням асцитичної рідини колонку промивали із Перелік літературних джерел: швидкістю 1,5-2мл/хв 10 об'ємами 0,02М натрій1. Zhenga X., Weinbergerc К., Gehrke R. et al. калій фосфатного буферу, рН7,0-7,2. Фільтровану Mutant hepatitis В virus surface antigens (HBsAg) are асцитична рідину в об'ємі 20мл пропускали через immunogenic but may have a changed specificity // колонку зі швидкістю 1мл/хв. Після цього промиVirology. - 2004. - Vol.329, 2. - P.454-464. вали колонку 10-15 об'ємами фосфатного буферу. 2. Канев А.Н., Бондарчук В.Б., Матвеев Л.Э. и Елюцію проводили за допомогою 0,1М лимонної др. Получение и отбор моноклональных антител кислоти в об'ємі 15мл. Вихід МКАТ реєстрували для выявления поверхностного антигена вируса при 280 нм. Пік, який виходив із колонки збирали у гепатита В в сыворотках крови // Вопросы вирусофлакон, що містить 2мл 1М трис-основи. рН одерлогии. - 2002. - Том 47, №1. - С.15-21. жаного розчину мав становити 7,0-8,0, що контро3. Tijssen P. Preparation of enzyme-antibody or лювали за допомогою індикаторного паперу. Знаenzyme-macromolecule conjugates // Laboratory чення рН корегували додаванням кислоти або techiques in biochemistry and molecular biology: трис-основи. Після виходу піка колонку промивали practice and theory of enzyme immunoassays / із швидкістю 2мл/хв 10 об'ємами 0,02М натрійEditors R.H. Burdon, P.H. van Knippenberg. калій фосфатного буферу до нейтрального рН. Amsterdam: Elsevier, 1985. - P.221-241. МКАТ, одержані після афінної очистки, концентрували за допомогою насиченого розчину суль Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

A set of monoclonal antibodies of в1, в4, в5, в6, в10, specific to surface antigen of hepatitis b virus, suitable for use in immuno fermentative analysis

Автори англійською

Nykolaienko Ihor Vasyliovych, Nikolaienko Ihor Vasyliovych, Raievska Halyna Yevhenivna, Halkin Oleksandr Yuriiovych, Honcharenko Vasyl Serhiioych

Назва патенту російською

Набор моноклональных антител в1, в4, в5, в6, в10, специфических к поверхностному антигену вируса гепатита в, пригодных к использованию в иммуноферментном анализе

Автори російською

Николаенко Игорь Васильевич, Раевская Галина Евгеньевна, Галкин Александр Юрьевич, Гончаренко Василий Сергеевич

МПК / Мітки

МПК: C12N 5/00

Мітки: антигену, в10, придатних, гепатиту, використання, моноклональних, специфічних, набір, антитіл, поверхневого, імуноферментному, аналізі, вірусу

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/2-16037-nabir-monoklonalnikh-antitil-v1-v4-v5-v6-v10-specifichnikh-do-poverkhnevogo-antigenu-virusu-gepatitu-v-pridatnikh-do-vikoristannya-u-imunofermentnomu-analizi.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Набір моноклональних антитіл в1, в4, в5, в6, в10, специфічних до поверхневого антигену вірусу гепатиту в, придатних до використання у імуноферментному аналізі</a>

Подібні патенти