Метод визначення глікованого кератину

Метод визначення глікованого кератину, який включає визначення колориметричним шляхом у клініко-лабораторних умовах неферментативно глікозованого (глікованого) кератину, який має строго певний і тривалий період життя, чітку спорідненість до неферментативного глікозування та обмежений вплив супутніх редукційних речовин. (19) (21) u200608288 (22) 24.07.2006 (24) 15.12.2006 (46) 15.12.2006, Бюл. №12, 2006р. (72) Каліман Віктор Павлович, Каліман Павло Авксентійович, Жуков Віктор Іванович, М'ясоедов Валерій Васильович, Клименко Микола Олексійович, Щербань Микола Гаврилович, Горбач Татьяна Вікторівна 3 19668 У основу методу, що заявляється, покладений процес посттрансляційного утворення глікованого кератину, який протікає у декілька етапів: 1. Перший етап полягає в утворенні основ Шиффа; він протікає швидко і зворотньо; кератинові сполуки, що виникають при цьому, легко гідролізуються. 2. Другий, триваліший, етап - перегруповування Амадорі - завершується утворенням стабільної кетоамінової сполуки. Вираженість процесу неферментативного глікозуваня кератину в першу чергу залежить від тривалості контакту з ним глюкози, який відбувається у волосяному фолікулі. Метод виконується наступним чином. У пацієнта біля кореня зрізають або висмикують волосся разом з волосяним фолікулом, можна зрізати частину нігтя. Зважують отриманий матеріал. Переводять кератин в розчин за допомогою суміші відновника та детергента, або іншим будьяким відомим і доступним шляхом, що дозволяє зруйнувати сульфідні зв'язки полімеру. Комп’ютерна верстка М. Ломалова 4 Потім 10 міліграмів отриманого розчину кератину інкубують протягом трьох годин при t° 100С° з 2,0мл насиченої щавлевої кислоти (1моль/л). Після охолоджування додають в пробірку 1мл 20% трихлороцтової кислоти та центрифугують протягом 10 хвилин при 3000об/хв. Потім 2 проби супернатанту (по 1мл кожна) відбирають і відставляють. Одну інкубують з 0,25мл насиченого розчину тіобарбітурової кислоти (дослідна проба), іншу - з 0,25мл дистильованої води (контрольна проба). Обидві пробірки інкубують протягом 50 хвилин при t° 40С°. Вимірювання проводять на спектрофотометрі в кюветах з довжиною оптичного шляху 1см проти контролю за хвилею 443нм. Для калібрування можна використовувати серію розчинів по 1ммоль/л фруктози. Одиниці вимірювання: мікромоль фруктозаміну (ФА) на 10 міліграмів кератину (мкмоль ФА/10мг). Допускаються незначні відхилення від заявлених параметрів та величин, що не впливають на кінцевий результат. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601