Засіб визначення вірулентності ешеріхій

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выявления виру лентности эшерихий. Цель изобретения повышение точности способа Выделенные штаммы патогенных эшерихий засевают Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выявления вирулентности эшерихий Цель изобретения - повышение точности способа. Способ осуществляется следующим образом. Выделенные штаммы патогенных эшерихий различных серогрупп засевают секторами по 6~8 штаммов на одну чашку с мясопептонным агаром (МПА) Для получения более четкого результата МПА осветляют путем фильтрации в горячем виде через взтно-марлевый фильтр, последующего отстаивания и декантирования Посевы в чашках инкубируют в термостате при 3 7 ± 0,2°С в течение 16-20 ч, т.е. до получения четкого роста по штриху. На выросшие культуры осторожно, не касаясь штриха посева и поверхности питательной среды, вносят пипеткой 4-5 см раствора азурэозинз по Романовскому, разведенного секторами по 6-8 штаммов на одну чашку с мясопетонным агаром, инкубируют в термостате при 37 ± 0,2°С в течение 16-20 ч На выросшие культуры вносят пипеткой 4 - 5 см' раствора азурэозина по Романовскому, дополнительно разведенного 1 10 дистиллированной водой Через 1-2 мин краску спивают и учитывают наличие темно-синего или черного окрашивания роста вирулентных штаммов Способ дает совпадающие результаты со способами Н1у CFA, ККП (соответственно гемолиз в среде с 5% эритроцитов d маннозореэистентная тема г л юти нация, кератоконъюнктивэльная проба). 1 табл. 1.10 дистиллировзнной водой Через 1-2 мин краску сливают и при наличии темносинего ( или черного) окрашивания колоний культуру относят к вирулентной Колонии и штриховой рост невирулентных штаммов патогенных эшерихий остаются бесцветными или окрашенными лишь по краям в светло-зеленоватый или голубоватый оттеиок Для учета степени выраженности виру- * лентности используют следующую систему. 4+ - черное окрашивание (резко выраженная реакция); 3+ - темно-синее окрашивание (выраженная реакция), 2-* - синее окрашивание (положительная реакция). 1+ - зеленовато-голубоватое окрашивание всего штриха или колонии (слабо выраженная реакция, " ± - слабое окрашивание по краю штриха или колонии (сомнительная реакция); ив* т ЧЭ 1648978 я ~ и отсутствие окрашивания роста (отрицательная реакция). Вирулентными штаммами считают лишь те, которые дают реакцию не менее чем на 2 плюса, Данным способом изучена вирулентность 167 штаммов патогенных эшерихий, выделенных из различных источников. Положительйый результат выявлен в 26,9±3,2% культур, 10 У 60 штаммов совпадение положительных результатов наблюдают по 3-4 способам, а в 18% -по5-6. У остальных22% было совпадение по 2 способам или вообще не выявлено такового. Преимущества предлагаемого способа заключаются е его экспрессное™ (3-5 мин), простоте, экономичности, четкости результатов, высокой чувствительности, воспроизводимости на простой питательной среде (МПА), доступной для любой бактериологической лаборатории. В таблице приведены сравнительные Формула изобретения данные по выявлению вирулентности эшерихий предлагаемым способом и тремя друСпособ определения вирулентности гими: Hly, CFAnKKH. 15 эшерихий, включающий выращивание чисКак видно из приведенных данных, той культуры на плотной питательной среде, предлагаемый способ дал совпадающие рео т л и ч а ю щ и й с я тем, что. с целью зультаты со статистически несущественныповышения точности способа, на выросшую ми различиями (t = 0,8-Ї, 8). культуру наносят стандартный раствор азу20 рэозина по Романовскому а разведении 1:10 дистиллированной водой на 1-2 мин, Совпадающие результаты предлагаезатем краску удаляют и при наличии черного мого метода с тремя другими достигают или темно-синего окрашивания колоний 46,7%, а при сравнении с шестью другими культуру относят к вирулентной. способами (кул ьтур клеток и др) - до 77,78%. 25 Способы Предлагаемый (КРГ) Гемолиз в среде с 5 % эритроцитов(Hiy) с) - Мэннозорезистентная гемагглютинация ( CFA) Кератоконъюктивальная п£о6а_[ККП) Редактор Л Веселовская Код Положительный результат Р ± m Сравнивае- Критерий мые спосо- Стьюдента бы (t) а 26,9 3,2 6 23,3 3,4 аб 0,8 в 22,9 3,1 ав 0.9 г 19,1 3,0 аг 1,8 Составитель А. Завадская Техред М.Моргентал Корректор О. Кравцова Заказ 1499 Тираж 370 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб , 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул.Гагарина, 101