Спосіб кріоконсервування еритроцитів кордової крові людини

Спосіб кріоконсервування еритроцитів кордової крові людини, що включає додавання до них розчину кріопротектора, еквілібрацію з кріопротектором і заморожування до -196°С шляхом занурення у рідкий азот, який відрізняється тим, що як кріопротектор застосовують оксіетильований гліцерин зі ступенем полімеризації n=30, який додають до еритроцитів дозовано зі швидкістю 0,4мл/хв при температурі 0-4°С, а еквілібрацію здійснюють протягом 50-60хв. (19) (21) u200805743 (22) 05.05.2008 (24) 10.12.2008 (46) 10.12.2008, Бюл.№ 23, 2008 р. (72) ГРИЩЕНКО ВАЛЕНТИН ІВАНОВИЧ, UA, ЦУЦАЄВА АЛЛ А ОЛЕКСАНДРІВН А, U A, НІКОЛЕНКО ОЛЕКСАНДРА ВІКТОРІВН А, UA, КОМП АНІЄЦЬ АНТОНІН А МИ ХАЙЛІВНА, UA, ЄСІПОВА ЮЛІЯ СЕРГІЇВНА, U A, ХОДЬКО ОЛЕКСІЙ ТАРАСОВИЧ, UA (73) ІНСТИТУТ ПРОБЛЕМ КРІОБІОЛОГІЇ І КРІОМЕДИЦИНИ НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ Н АУК УКРАЇНИ, U A 3 37636 До еритроцитів, отриманих з кордової крові людини, дозовано, зі швидкістю 0,4мл/хв при температурі 0-4°С додають 30%-ний розчин кріопротектора ОЕГ n=30, приготований на фізіологічному розчині NaCI, до досягнення його концентрації у суспензії клітин 15% . Одержану суспензію переносять у пластиковий контейнер місткістю 10 мл і заморожують до -196°С шляхом занурення у рідкий азот . Відігрівають на водяній бані при температурі 42°С протягом 60сек. Приклад 1. Еритроцити отримували з кордової крові людини, яка була заготовлена на гемоконсерванті «ЦФД» і зберігалася після ексфузії не більш 1 доби при 4°С. Кріопротектор ОЕГ n=30, приготований 4 на 0,15М розчині NaCI, у концентрації 30% додавали до еритроцитів 1:1 зі швидкістю 0,4мл/хв при температурі 0-4°С. Заморожували в пластикових контейнерах місткістю 10мл шляхом занурення у рідкий азот. Відігрівали на водяній бані при температурі 42°С протягом 60сек. Після відігріву визначали кількість життєздатних клітин за процентом гемолізу після перенесення еритроцитів в ізотонічне і гіпотонічне середовище. Осмотичну крихкість у 0,6 і 0,9%-них розчинах NaCI визначали спектрофотометричним методом [3]. Результати наведені у Табл. 1 у порівнянні з прототипом. Таблиця 1 Схоронність еритроцитів кордової крові після кріоконсервування, n=7 Спосіб кріоконсерву- Кількість життєздатних вання клітин, % Заявлений 85-90 Прототип 70-82 Осмотична крихкість у 0,6% NaCI, % 14,5±1,9 29,3±1,8 З Табл. 1 видно, що після кріоконсервування заявленим способом показники осмотичної крихкості після поміщення еритроцитів в ізотонічне і гіпотонічне середовище нижчі у порівнянні з прототипом на 10-15% і, відповідно, кількість життєздатних клітин вища ніж в прототипі на 10-15% Осмотична крихкість у 0,9% NaCl,% 10,3±1,5 18,7±1,2 Приклад 2. Спосіб здійснювали аналогічно Прикладу 1, за винятком того, що кріопротектор додавали при різних температурах. Результати наведені у Табл. 2 Таблиця 2 Показники схоронності еритроцитів кордової крові в залежності від температури додавання кріопротектора, n=7 Температура додавання, °С/мин 20-22°С 4°С 2°С 0°C Кількість життєздатних Осмотична крихкість уОсмотична крихкість у клітин, % 0,6%NaCl,% 0,9% NaCl,% 74-75 27,3±1,4 20,3±0,4 82-83 17,5±1,7 13,6±2,9 85-89 15,6±2,0 11,2±1,1 85-90 14,5±1,9 10,3±1,5 З Табл. 2 видно, що при додаванні ОЕГ n=30 при 0-4°С досягається найвища ступінь збереження еритроцитів. Джерела інформації 1. Виноград-Финкель Ф.Р., Федорова Л.И., Семенова Н.В. и др. Усовершенствование криоконсервирования эритроцитов при ультранизких тем Комп’ютерна в ерстка Л. Купенко пературах. //Проблемы гематологии и переливания крови.-1980.-№9.- С. 19-23. 2. Патент №14078 (Україна), МПК A61N 12. Публ. 25.04.1997. Кріопротектор еритроцитів людини. 3. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М: "Медицина".- 1987.С.119-120. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601