Спосіб оцінки морфо-функціонального стану тестикулярної тканини

Спосіб оцінки морфо-функціонального стану тестикулярної тканини шляхом морфометричних досліджень, який відрізняється тим, що на цифрову фотографію стандартного гістологічного зрізу яєчка накладають точкову сітку Автанділова, потім визначають питому щільність структурних елементів тканини яєчка і при виявленні змін питомої щільності досліджуваних структур судять про наявність патологічного стану яєчок. (19) (21) u200911259 (22) 06.11.2009 (24) 11.01.2010 (46) 11.01.2010, Бюл.№ 1, 2010 р. (72) ЗАПОРОЖАН ВАЛЕРІЙ МИКОЛАЙОВИЧ, ХОЛОДКОВА ОЛЕНА ЛЕОНІДІВНА, ЩЕРБАТЮК АЛІНА ЛЕОНІДІВНА, ПИХТЄЄВ ДМИТРО МИХАЙЛОВИЧ (73) ОДЕСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ 3 47118 плексність підходу до вивчення морфофункціонального стану тестикулярної тканини. Поставлена задача вирішується тим, що, згідно корисної моделі, на цифрову фотографію стандартного гістологічного зрізу тестикулярної тканини, накладають точкову сітку Автанділова, потім визначають питому щільність структурних елементів тканини яєчка, сім'яні канальці якого можуть знаходитись в будь-якій стадії сперматогенезу. Спосіб здійснюється наступним чином. Вилучають тестикули 60 мишей лінії ICR віком 6-7 місяців та поміщають їх у 10% розчин формаліну. Через добу поперечним розтином вирізають середню частину органу та протягом наступної доби дофіксовують в 10% розчині формаліну. Проводять спиртами зростаючої концентрації, роблять парафінові зрізи завтовшки 3-5мкм та зафарблюють гематоксилін-еозином. Структуру яєчок вивчають під світловим мікроскопом (збільшення ×200) із вбудованою відеокамерою, що з'єднана із комп'ютером. Роблять цифрові фотознімки п'яти полів зору з одного зрізу та проводять морфометричні дослідження з використанням комп'ютерної програми «Видео-тест мастер - Морфология». На зроблені знімки накладають сітку Автанділова на 100 точок, діаметр крапки дорівнює 1мм. Потім підраховують кількість точок, які приходяться на сперматогонії, ядра сперматоцитів, сперматид та сперматозоїдів, цитоплазму сперматоцитів, сперматид та сперматозоїдів, клітини Сертолі, клітини Лейдига, просвіти канальців, базальну мембрану, інтерстицій, простір між клітинами сперматогенного епітелію та простір, утворений злущеним епітелієм. Таким чином, кількість точок, що співпадали із досліджуваною одиницею, дорівнює її питомій щільності. Точки, які співпадали одразу з двома структурними одиницями, враховують як 0,5 точки на кожну одиницю. Для тканини яєчок інтактних мишей характерні такі показники питомої щільності: Сперматогонії - 5,43±0,7; ядра сперматоцитів, сперматид та сперматозоїдів - 21,7±2,1; цитоплазма сперматоцмтів, сперматид та сперматозоїдів 44,81±3,6; клітини Сертолі - 2,1 ± 0,3; клітини Лейдига - 0,65±0,2; просвіти канальців - 9,4±2,8; базальна мембрана - 3,5±0,65; інтерстицій - 4,76±0,9; простір між клітинами сперматогенного епітелію 7,5±1,1; простір, утворений злущеним епітелієм Комп’ютерна верстка А. Рябко 4 0,13±0,13. При змінах даних показників можна визначити наявність та характер патологічного процесу тканини яєчок. Даний спосіб оцінки стану тестикулярної тканини можливо використовувати без враховування стадійності, тому що сперматогонії, присутні в канальцях у будь-якій стадії сперматогенезу, підраховуються окремо, що має значення для оцінки стану гематотестикулярного бар'єру. А всі клітини сперматогенного епітелію, окрім сперматогоніїв, входять в один критерій, в зв'язку з тим, що склад їх протягом циклу сперматогенного епітелію не є статичним. Але, користуючись даною методикою, слід вибирати поля зору, до яких входять канальці, у клітинному складі яких обов'язково присутні сперматозоїди, тому що у циклі сперматогенного епітелію існують стадії, при яких в клітинному складі відсутні сперматозоїди, і такі канальці слід виключити із підрахунку. Це зменшує вірогідність помилки підрахунку в зв'язку з тим, що в стадіях, при яких в канальцях відсутні сперматозоїди, просвіти канальців взагалі більші. Таким чином, доведено, що запропонований спосіб оцінки стану тестикулярної тканини з використанням точкової сітки Автанділова є ефективнішим за прототип, тому що він являється не тільки економічним, зручним та сучасним, але й дозволяє вивчати сім'яні канальці в різних стадіях сперматогенезу одночасно, що підвищує комплексність підходу до вивчення морфофункціонального стану яєчок. У порівнянні з найближчим аналогом, запропоноване технічне рішення також дозволяє, за рахунок застосування точкової сітки Автанділова та визначення питомої щільності тестикулярних структур, досягти значного прогресуу вивченні морфо-функціонального стану яєчок, а саме: виявити наявність та характер структурних змін, функціональної активності органу, приділити окрему увагу цілісності та перепускності гематотестикулярному бар'єру, ендокринній та гаметоутворюючій функції яєчок. Література: 1. Ухов Ю.И. Морфометрические методы в оценке функционального состояния семенников / Ю.И. Ухов, А.Ф. Астраханцев // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1983. - Т.XXXIV, №3. С.66-72. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601