Тест-система імуноферментна для визначення наявності білкових компонентів тканин великої рогатої худоби у харчових та кормових продуктах, лікарських та косметичних препаратах

Тест-система імуноферментна для визначення наявності білкових компонентів тканин великої рогатої худоби у харчових та кормових продуктах, лікарських та косметичних препаратах, в складі якої як кон'югати використовують антивидові антитіла (анти-ВРХ) мічені ферментом, яка відрізняється тим, що специфічні антитіла, які приєднуються до білкових компонентів тканин великої рогатої худоби (ВРХ), сорбовані на поверхні полістиролових планшетів фатного буферу рН8,0 до отримання однорідної суспензії, центрифугують при 3000об/хв 20 - ЗОхв , зливають супернатант і використовують його, як антиген В кожну лунку стрипів планшету вносять по 80мкл розчину для розведення антигену і по 20мкл зразків досліджуваних проб, залишивши вільними 5 лунок першого ряду (лунки для контролів) В три лунки вносять по 20мкл негативного контролю (К~ -імуноглобуліни людини), а в дві ІНШІ - по 20мкл позитивного контролю (К+ - імуноглобуліни ВРХ) Накривають стрипи клейкою плівкою або кришкою та шкубують при температурі 37°С протягом бОхв Після закінчення інкубації видаляють вміст лунок за допомогою промивача або 8-канальноі піпетки та промивають лунки чотири рази розчином для промивання планшетів В лунки стрипів вносять по ЮОмкл розчину кон'югату - анти-ВРХ, мічені пероксидазою, та шкубують при 37°С протягом 45хв Після закінчення інкубації промивають лунки шість разів і вносять в лунки стрипів по ЮОмкл розчину проявника (субстратний розчин з хромо ю 49275 геном) та шкубують при 18 - 22°С в темному МІСЦІ 10-25ХВ Зупиняють кольорову реакцію внесенням до всіх лунок по 50мкл стоп-реагенту Не більше як через 1 хвилину після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометру Значення ОГ зразка прямо пропорційне КІЛЬКОСТІ антигену у досліджуваної пробі КІЛЬКІСТЬ імуноглобулінів ВРХ визначених із застосуванням нашої тест-системи, порівнювали з даними, отриманими при застосуванні тестсистеми RID KIT, IgG Bovine Low Level фірми Board ICN Pharmaceuticals (Великобританія) Приклад 2 Визначення білків ВРХ в складі кормової суміші для собак "Pedign" 1г продукта диспергують в 10мл 0.05М фосфатного буферу рН8,0 до отримання однорідної суспензії, центрифугують при 3000об/хв 20 - ЗОхв , зливають супернатант і використовують його, як антиген Імуноферментний аналіз проводять как описано прикладі І Приклад 3 Визначення білків ВРХ в складі лікарських засобів З ампули препарату натрію аденозинтрифосфату (АТФ) - розчин 1% для ІН'ЄКЦІЙ відбирають ЮОмкл і вносять в лунки планшету Імуноферментний аналіз проводять як в прикладі 1 Приклад 4 Визначення білків ВРХ в складі крему для змоложення шкіри, якій містить гормони тимусу ВРХ Проводять трьохкратну екстракцію крему хлороформом в ДІЛИЛЬНІЙ ЛІЙЦІ К 1г крему добавляють 5мл фосфатного буфера і три рази по Юмл хлороформу, кілька разів струшують і зливають розчин, якій використовують як антиген Імуноферментний аналіз проводять як в прикладі 1 Приклад 5 Визначення чутливості та специфічності пропонованої тест-системи З використанням тест-систем RID KIT, IgG Bovine Low Level [1] та пропонованої тест-системи досліджували наявність білків яловичини в харчових продуктах - ковбасах (15 зразків були достеменно позитивних та 10 - достеменно негативних) Усі зразки досліджували у 4 повторностях кожною тест-системою за описаною методикою Усі 15 позитивних зразків показали наявність домішок яловичини в ковбасах, що становить 100% чутливості Негативні зразки виявилися справді негативними (100% специфічність) В порівнюваній тестсистемі також чутливість та специфічність становили 100% Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення домішков яловичини в харчових продуктах, проста і надійна в роботі, проявляє високу специфічність та чутливість Література 1 RID KIT, IgG Bovine Low Level Количественное определение бычьих IgG методом радиальной иммунодиффузии Board ICN Pharmaceuticals (Вели кобрітанія), 1999 2 А Т Михайлов, В Н Симирский "Методы иммунохимического анализа в биологии развития" М "Наука", 1981 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71