Спосіб виділення геномної днк

Спосіб виділення геномної ДНК, що полягає у відборі біологічного матеріалу, його мацерації, 3 53248 Корисною моделлю ставиться завдання підвищення ступеня чистоти препарату, ефективності та економічності способу. Поставлене корисною моделлю завдання досягається тим, що у способі виділення геномної ДНК, що полягає у відборі біологічного матеріалу, його мацерації, екстракції ДНК в присутності в лізуючого буфера з хаотропною хімічною сполукою, очищенням діоксидом кремнію, відмивці та елюації готового продукту, згідно корисної моделі, перед екстракцією препарату ДНК проводять протеінізацію зразка у буфері з протеїназою К, а в якості хаотронної хімічної сполуки використовують 5,4 М гуанідінгідрохлорид, при цьому суспензію діоксиду кремнію готують на лізуючому буфері з гуанідінгідрохлоридом, що підвищує ступінь чистоти препарату, чутливості та відтворюваності результатів, а також ефективності та економічності. Порівняльний аналіз з прототипом проведено шляхом постановки контрольних дослідів. В експериментальних дослідженнях брали одні і ті ж біологічні зразки осетрових риб за використанням наборів реагентів, прописаних у відповідних про 4 токолах прототипу і корисної моделі, що заявляється. Концентрацію ДНК визначали стандартним методом на спектрофотометрі СФ-46, вимірюючи ступінь поглинання за довжини хвилі 260 нм. Розрахунок концентрації ДНК (мкг/мкл) проводили за формулою: ДНК = А260 ×50×F/1000, де: А260 - екстинція при довжині хвилі 260 нм; F - фактор розбавлення; 1000 - коефіцієнт для приведення концентрації в мкг/мкл; 50 - концентрація ДНК (мкг/мл) при А260=1. Ступінь чистоти препарату ДНК визначали за співвідношенням А260/А280. Для чистих препаратів ДНК це співвідношення дорівнює 1,8-2,0. Якщо значення більше 2,0, то препарат ДНК забруднений домішками білків, а якщо менше 1,8 - домішками РНК. Порівняльні показники способів виділення ДНК за корисною моделлю, що заявляється та прототипом наведено в таблиці: Таблиця Показники кількості і чистоти препарату ДНК Корисна модель Проба тканин Плавці Кров Ікра концентрація ДНК, мг/мл 0,39±0,044 0,76±0,050 0,18±0,065 Прототип ступінь чистоти А260/А280 концентрація ДНК, мг/мл ступінь чистоти А260/А280 1,8 1,8 1,9 0,32±0,022 0,56±0,012 0,15±0,024 2,2 2,2 2,3 Аналіз отриманих результатів показує, що послідовна протеїнізація матеріалу біологічного зразка осетрових риб у буфері з протеїназою К, екстракція ДНК з отриманого супернатанту лізуючим буфером з 5,4 М гуанідінгідрохлоридом та наступним очищенням суспензією діоксиду кремнію, приготованою на цьому ж буфері дозволили на 2035% збільшити кількість препарату ДНК та більш ніж на 20% ступінь чистоти. Крім того гуанідінгідрохлорид значно дешевше гуанідінтіоцианата. Таким чином, корисна модель, що заявляється, за простотою, високою чутливістю, відтворю Комп’ютерна верстка Л. Купенко ваністю та низькою собівартістю вигідно відрізняється від прототипу і має очевидні переваги. Спосіб виділення ДНК із зразків тканин осетрових видів риб та їx ікри пройшов апробацію на базі лабораторії генетичних досліджень ДП АзПівденНІРО м. Бердянськ (свідоцтво про атестацію № АВ-25-08) під час проведення досліджень з видової ідентифікації осетрових видів риб та продуктів їх переробки. Встановлена його чітко виражена ефективність та економічність. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601