Спосіб кріоконсервування штаму перещеплюваних клітин нирки вівці flk-sbbl, який продукує вірус лейкозу великої рогатої худоби

Спосіб кріоконсервування штаму перещеплюваних культур нирки вівці FLK - SBBL, який продукує вірус лейкозу великої рогатої худоби, що вклю 3 60996 вування, що містить суміш поживних середовищ ДМЕМ та 199 успіввідношенні 1:1, 20% інактивованої при 56°С сироватки крові ВРХ більш дешевої ніж ембріональна, 10% димексиду, що дає змогу забезпечити 90% збереженості клітин після їх розморожування. Спосіб виконується таким чином. Суспензію клітин FLK кріоконсервують в в кріопробірках об'ємом від 2 до 5мл в суміші ростових живильних середовищ ДМЕМ і 199 у два етапи. За необхідністю, після збереження кріопробірок з FLK в рідкому азоті від декількох діб до десятків років, кріопробірки піддають розморожуванню на водяній бані за температури 39°С. Потім видаляють середовище кріоконсервування та визначають концентрацію живих та мертвих клітин і розливають у культуральні посудини. Приклад 3 Суспензію клітин FLK у концентрації 6млн/см кріоконсервували у два етапи. На першому етапі суспензію клітин в кріозахисному середовищі охолоджували протягом години за температури +4°С в умовах холодильника для холодової адаптації клітин. На другому етапі заморожування проводили протягом 18 годин в парах рідкого азоту за температури (-165°С) з послідуючим занурюванням в рідкий азот за температури (-196°С). Як середовище кріоконсервування використовували суміш Комп’ютерна верстка М. Ломалова 4 поживних середовищ, що містить, середовище ДМЕМ, середовище 199, 20% інактивованої при 56°С сироватки крові ВРХ, 10% фармакологічного препарату - димексиду. Суспензію клітин фасували в кріопробірки об'ємом від 2 до 5мл. Режим відтаювання: кріопробірки, які зберігались у рідкому азоті піддавали розморожуванню у водяній бані з температурою води 39°С. Розморожену клітинну суспензію переносили до стерильного флакону. Відмивання клітин від кріопротекторів здійснювали додаванням (по краплині) ростового живильного середовища (суміш рівних обємів середовища 199 і ДМЕМ з додаванням 20% сироватки крові ВРХ 3 без антибіотиків) до 50-100см , після чого центрифугували. Визначали концентрацію живих та мертвих клітин за методом суправітального забарвлення, після чого готували суспензію клітин у ростовому середовищі з посівною концентрацією 3 90-125 тис.клітин у 1см та розливали у культуральні посудини. Через 24 години замінювали живильне середовище на свіже, що сприяло видаленню залишків кріопротектору. Таким чином, запропонований спосіб кріоконсервування штаму перещеплюваних культур нирки вівці FLK-SBBL, який продукує вірус лейкозу великої рогатої худоби є більш ефективним, технологічним та не потребує обладнання, що дорого коштує. Підписне Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601