5-бромо-1-{2-[5-(4-хлорофеніл)-3-(4-метоксифеніл)-4,5-дигідропіразол-1-іл]-2-оксоетил}-1н-індол-2,3-діон, що виявляє антитрипаносомну активність

5-Бромо-1-{2-[5-(4-хлорофеніл)-3-(4метоксифеніл)-4,5-дигідропіразол-1-іл]-2оксоетил}-1Н-індол-2,3-діон формули: 2 CH3 Br O O N N N O O Cl , O O N N (13) 62457 (11) UA thiosemicarbazone inhibitors of the trypanosomal cysteine protease cruzain // Journal of Medicinal Chemistry - 2002, V. 45, - P. 2695-2707], які мають високу антитрипаносомну активність. Тому пошук нових синтетичних антипротозойних засобів із групи похідних 3,5-діарилпіразолінів є актуальним для сучасної фармацевтичної і медичної хімії. В основу корисної моделі поставлена задача створення ефективного антитрипаносомного засобу з меншими побічними ефектами. Поставлена задача вирішується тим, що синтезований 5бромо-1-{2-[5-(4-хлорофеніл)-3-(4-метоксифеніл)4,5-дигідропіразол-1-іл]-2-оксоетил}-1H-індол-2,3діон формули: CH3 Br (19) Корисна модель належить до синтезу органічних сполук і фармації, зокрема одержання біологічно активних сполук, що виявляють антитрипаносомну активність і можуть бути використані в клінічній медицині як антипротозойні лікарські засоби. Відомий лікарський засіб з антитрипаносомною активністю, наприклад, меларсопрол [Bisser S., N' Siesi F.X., Lejon V. et al. Equivalence trial of melarsoprol and nifurtimox monotherapy and combination therapy for the treatment of secondstage Trypanosoma brucei gambiense sleeping sickness // The Journal of Infectious Diseases - 2007, - V. 195, - P. 322-329]. Меларсопрол - синтетичний препарат з групи дитіоарсолану з селективною дією на Trypanosoma brucei gambiense при лікуванні африканського трипаносомозу. Препарат має необхідні лікувальні властивості, проте характеризується значними побічними ефектами: судоми, лихоманка, втрата свідомості, нудота і блювота тощо. Серед похідних піразоліну ідентифіковано ряд антипротозойних агентів, серед яких особливу увагу викликають 3-арил-4,5дигідропіразолілтіокарбаміди [Xiaohui Du, Chun Guo, Elizabeth Hansell et al. Synthesis and structureactivity relationship study of potent trypanocidal U що виявляє антитрипаносомну активність. N O O Cl , що виявляє антитрипаносомну активність. 3 Синтезована сполука є оранжевим кристалічним порошком, розчинним у ДМСО і ДМФА, малорозчинним в оцтовій кислоті, нерозчинним в спирті, ацетоні, воді та ефірі. Для доказу складу і структури синтезованої сполуки були використані відомі фізико-хімічні ме1 тоди, зокрема ІЧ-, Н ЯМР-спектроскопія та елементний аналіз. Одержані результати свідчать про відповідність синтезованої сполуки заявленій. Заявлену сполуку одержують взаємодією 2хлор-1-[5-(4-хлорфеніл)-3-(4-метоксифеніл)-4,5дигідропіразол-1-іл]-етанону та 5-бромізатину в середовищі ДМФА з двократним надлишком калію карбонату та каталітичною кількістю калію йодиду. Для визначення антипротозойної активності 5бромо-1-{2-[5-(4-хлорофеніл)-3-(4-метоксифеніл)4,5-дигідропіразол-1-іл]-2-оксоетил}-1H-індол-2,3діону попередньо проведено прескринінг досліджуваної речовини в концентраціях 10 мкг/мл та 1 мкг/мл на Trypanosoma brucei brucei TBB. Розчини речовини вносили в 96-лункову мікропластину з НМІ9 культуральним середовищем та додавали -5 розчин ТВВ в концентрації 10 клітин/мл. В результаті визначали відсотки інгібування росту паразитів за рівнем флуоресценції барвника Alamar Blue у порівнянні з контролем (негативний контроль - розчин DMCO). За результатами проведеного прескринінгу 5бромо-1-{2-[5-(4-хлорофеніл)-3-(4-метоксифеніл)4,5-дигідропіразол-1-іл]-2-оксоетил}-1Н-індол-2,3діону встановлено, що середнє значення відсотків інгібування росту клітин відносно контролю становило 99,61 % (10 мкг/мл) та 41,02 % (1 мкг/мл). На основі одержаних результатів прескринінгу проведено ґрунтовні in vitro дослідження, які полягали у визначенні інгібуючої концентрації ІС50 досліджуваної речовини на клітинах Trypanosoma brucei gambiense TBG та Trypanosoma brucei brucei TBB. [Raz В., Iten M., Grether-Buhler Y., Kaminsky R., Brun R. The Alamar Blue asssay to determine drug sensitivity of African trypanosomes (T. b. rhodesiense, T. b. gambiense) in vitro // Acta Trop. 1997, V. 68. - P. 139-147]. Дослідження проводилося на мікропластинах з 96 лунок у середовищі НМІ9 для серії двократних розведень від 10 мкг/мл до 4,88 нг/мл. За негативний контроль вибрано лунки з розчином DMCO, середовищем та клітинами паразитів. Мікропластини інкубувалися при 37 °С та 5 % СО2 атмосфері протягом 24 год. з Комп’ютерна верстка Л. Купенко 62457 4 наступним додаванням 20 мкл барвника Alamar Blue. Після 4-годинного інкубування вимірювали флуоресценцію. Відсотки росту паразитів визначалися за рівнем флуоресценції барвника Alamar Blue, a ІС50 - за дозозалежною кривою відсоткового росту паразитів від концентрації досліджуваної сполуки. В умовах експерименту 5-бромо-1-{2-[5-(4хлорофеніл)-3-(4-метоксифеніл)-4,5дигідропіразол-1-іл]-2-оксоетил}-1Н-індол-2,3-діон проявив високу антитрипаносомну активність, про що свідчать значення інгібуючої концентрації (ІС50) на Trypanosoma brucei gambiense (IC50=0,8218 мкг/мл) та Trypanosoma brucei brucei (IC50=0,4154 мкг/мл). Таким чином, сполука, що заявляється, проявляє високу антитрипаносомну активність і є перспективним антипротозойним засобом. Для розуміння запропонованої корисної моделі нижче наведено приклад одержання 5-бромо-1{2-[5-(4-хлорофеніл)-3-(4-метоксифеніл)-4,5дигідропіразол-1-іл]-2-оксоетил}-1Н-індол-2,3діону. Сполуку синтезують наступним чином. Синтез 5-бромо-1-{2-[5-(4-хлорофеніл)-3-(4метоксифеніл)-4,5-дигідропіразол-1-іл]-2оксоетил}-1Н-індол-2,3-діону. Суміш 0,003 моль 2хлоро-1-[5-(4-хлорфеніл)-3-(4-метоксифеніл)-4,5дигідропіразол-1-іл]-етанону, 0,003 моль 5бромізатину, 0,006 моль калію карбонату та каталітичної кількості калію йодиду в 10 мл ДМФА перемішують протягом 8 год. при кімнатній температурі. Осад, який утворився після осадження 100 мл води, відфільтровують, промивають водою, етанолом та ефіром. Перекристалізовують з суміші ДМФА-EtOH (1:2). Одержують оранжевий порошок з Т.топл. 258-260 °С, вихід - 78 %. Знайдено, %: С, 56,58; Н, 3,38; N, 7,75 %. С26Н19ВrСlN3O4. Вираховано, %: С, 56,49; Н, 3,46; N, 7,60. -1 ІЧ [см ]: 1740 (СО), 1668 (СО), 1608 (СО), 1444 1 (аром), 1256, 1176, 832. ЯМР Н, δ, м.ч.: 3,22 дд (1Н, J=18,1, 4,0 Hz, СH2СН), 3,84 с (3Н, СН3), 3,93 дд (1Н, J=18,1, 11,8 Hz, СН2СН), 4,96 д (1Н, J=17,5 Hz, СН2), 5,08 д (1Н, J=17,5 Hz, СН2), 5,58 дд (1Н, J=11,8, 4,0 Hz, СН), 7,05 д (2Н, J=8,4 Hz, аром), 7,11 д (1Н, J=8,3 Hz, аром), 7,28 д (2Н, J=8,0 Hz, аром), 7,37 д (1Н, J=8,0 Hz, аром), 7,72 с (1H, аром), 7,81-7,77 м (3Н, аром). Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601