Спосіб генотипування свиней за геном гормону росту по bsuri-поліморфному сайту рестрикції

Спосіб генотипування свиней за геном гормону росту по BsuRI-поліморфному сайту рестрикції, який характеризується тим, що рестриктний аналіз фрагмента гена гормону росту ендонуклеазою BsuR I, попередньо ампліфікованого за допомогою полімеразної реакції, в якій використовують специфічні праймери: 5'-ACCGGCTGTGATGGCTGCAGGCAA-3' та 5'-AGGTGGGCGCCTTCCCAGCCATGCCCTT-3'. (19) (21) u201103989 (22) 04.04.2011 (24) 26.12.2011 (46) 26.12.2011, Бюл.№ 24, 2011 р. (72) БАЛАЦЬКИЙ ВІКТОР МИКОЛАЙОВИЧ, ПОЧЕРНЯЄВ КОСТЯНТИН ФЕДОРОВИЧ, САЄНКО АРТЕМ МИХАЙЛОВИЧ (73) ІНСТИТУТ СВИНАРСТВА ІМ. О.В. КВАСНИЦЬКОГО НААН 3 65963 4 троні. У роботі цих же дослідників із співавторами описані Нае II-, MspI-, НрphI-, НіnРІ - поліморфні сайти рестрикції також у другому інтроні гена, а по рестриктазам Dde І, Нае II в другому екзоні. Недоліки аналогічних методів: висока трудомісткість та низька інформативність по інших класах молекулярно-генетичних маркерів. Пропонований спосіб генотипування свиней за геном гормона росту по BsuRI-поліморфному сайту рестрикції має наступні переваги: висока інформативність визначення генотипів, невелика трудомісткість, низька вартість реактивів. Можливість здійснення корисної моделі, що заявляється, підтверджується власними дослідженнями: рестрикційний аналіз за допомогою рестриктази BsuRI фрагментів BG3M/BG10M, які отримують ампліфікацією ДНК показав наявність алельних варіантів, та отже і поліморфного сайту рестрикції. Етапи дослідження включають наступні пункти: 1. Отримують біоматеріал (кров, щетина, тканини, сперма) від об'єкту дослідження. 2. Виділяють ДНК з біоматеріалу. 3. Здійснюють полімеразну ланцюгову реакцію для збільшення копій ділянки ДНК за допомогою специфічних праймерів. Структура ділянки гена гормона росту свині (Sus scrofa): Структура специфічних праймерів: Прямий праймер : 5'ACCGGCTGTGATGGCTGCAGGCAA-3' Зворотній праймер : 5'AGGTGGGCGCCTTCCCAGCCATGCCCTT-3' (місце розташування праймерів підкреслене на структурі ділянки гена гормону росту свині) Схема полімеразної ланцюгової реакції: Перший цикл ПЛР: 94 °С - 2 хв. 20 сек.; наступні: 31 цикл: 94 °С - 30 сек.; 68 °С - 30 сек.; 72 °С 30 сек., та останній 72 °С - 5 хв. 4. Обробляють ПЛР продукт ендонуклеазою рестрикції BsuRI та інкубують у твердотілому термостаті при 37 °С - 3 години. 5. Розділюють отримані фрагменти після рестрикції у 8 % поліакриламідному гелі і фарбують бромистим єтидієм. Переглядають у ультрафіолетовому світлі та фотодокументують. 6. Аналізують результати досліджень Фрагменти які відповідають наступним генотипам: Локус/ендонуклеаза Генотипи і відповідні фрагменти рестрикції в п.н. рестрикції GH/ BsuR I +/+: 80, 78, 75, 60, 31, 17 +/-: 80, 78, 75, 60, 48, 31, 17 -/-: 80, 78, 75, 60, 48 Ген гормону росту (соматотропін) є одним з найважливіших ендогенних факторів, що стимулює ріст і розвиток тварин та впливає на всі види обміну речовин в організмі. Результати досліджень вказують, що алельні варіанти в структурній і регуляторній частинах гена гормону мають важливе значення з погляду їхнього впливу на показники продуктивності тварин. Крім цього поліморфна система гена гормону росту може бути використана для оцінки і маркерування генотипів, вивчення мікроеволюційних процесів у популяціях свиней. Джерела інформації: 1. Балацкий В. Н. Полиморфный BsuRI - сайт рестрикции гена гормона роста свинки / В. Н. Ба Комп’ютерна верстка Л. Купенко лацкий, К. Ф. Почерняев // Цитология и генетика. 1995. - Т. 29, № 1. - С. 45-48. 2. Брэм Г. Использование в селекции свиней молекулярной генной диагностики злокачественного гипертемического синдрома (MHS) / Г. Брэм, Б. Бренинг // Генетика, 1993. - Т. 29. - № 6. - С. 1009-1013. 3. Маниатис Т. Методы генетической инженерии. / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук II молекулярное клонирование. - М.: Мир, 1984. - 480 с. 4. Kirkpatrick В. W. Double-strand DNA conformation polymorphisms as a source of highly polymorphic genetic markers / B. W. Kirkpatrick, В. М. Huff, E. Casas-Carrillo // International Society for Animal Genetics, - 1993. - 1365-2052 pp. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601