Протизапальні конденсовані піролокарбазоли, фармацевтична композиція на їх основі та спосіб лікування захворювань (варіанти)

1. Сполуки формули I: 2 (19) 1 3 77159 4 за умови, що коли R1 являє собою (CH2)3OH і R2 O являє собою Н, то R3 не може бути -СН2ОН, R CH2OCH2CH3 або –CH2SCH2CH3. 3. Сполуки за п.1 або 2, де: N R1 являє собою алкіл, що містить 1-4 атомів R R 4 4 вуглецю (включно), заміщений ОН або -OR , де R Формула II , являє собою залишок амінокислоти після де: видалення гідроксильної групи з карбоксильної R1 і R2 однакові або різні і незалежно вибрані з Н групи; або алкілу, що містить 1-8 атомів вуглецю R2 являє собою Н; і (включно), заміщеного ОН або -OR4, де R4 являє R3 являє собою алкіл, що містить 1-4 атоми собою алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю вуглецю (включно), заміщений -ОН, -OR5, -OR8, (включно), арил або залишок амінокислоти після CH2OR7, -S(О)yR6 або -SR6; і де видалення гідроксильної групи з карбоксильної R5 являє собою алкіл, що містить 1-4 атоми групи; і вуглецю (включно), або арил; R3 являє собою -СН2ОН; -CH2OR7; -(CH2)nSR5; R6 являє собою Н, алкіл, що містить від 1 до 4 5 5 (CH2)nS(О)yR ; -CH2SR або алкіл, що містить 1-8 атомів вуглецю (включно), або арил, що містить 6атомів вуглецю (включно), заміщений -ОН, -OR5, 10 атомів вуглецю; OR8, -CH2OR7, -S(О)yR6 або -SR6; і де R7 являє собою Н або алкіл, що містить 1-4 атоми 5 R являє собою алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю (включно); вуглецю (включно), або арил; R8 являє собою залишок амінокислоти після 6 R являє собою Н, алкіл, що містить від 1 до 4 видалення гідроксильної групи з карбоксильної атомів вуглецю (включно), або арил, що містить 6групи. 10 атомів вуглецю; 4. Сполуки за п.1 або 2, де: R7 являє собою Н або алкіл, що містить 1-4 атоми R1 являє собою -СН2СН2СН2ОН або вуглецю (включно); CH2CH2CH2OCOCH2N(СН3)2; R8 являє собою залишок амінокислоти після R2 являє собою Н; і видалення гідроксильної групи з карбоксильної R3 являє собою -CH2OR7, де R7 являє собою групи; алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю (включно). n являє собою ціле число 1-4 (включно); і 5. Сполуки за п.1 або 2, представлені у таблиці I: у дорівнює 1 або 2; H N 3 1 2 Таблиця I Спол. 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 26 27 28 30 31 32 33 34 35 36 40 R1 СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СНОНСН3 СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН Н СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН CH2CH2CH2OCOCH2NH2 СН2СН2СН2ОСОСН(NH2)СН2-CH2CH2CH2NH2 CH2CH2CH2OCOCH2CH2NH2 СН2СН2СН2ОСОСН2СН2-CH2N(CH3)2 CH2CH2CH2OCOCH2N(СН3)2 СН2СН2СH2ОСОСН2СН2СН2-CH2CH2NH2 СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2ОН H H H СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН H H СН2СН2СН2ОН R2 Н Н Н Н Н Н Н Н Н Н Н Н СН2СНОНСН3 Н Н Н Н Н Н Н Н H H H H H Н H H H H H H СН2ОН R3 СН2ОСН3 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)СН2СН3 (S)-CH2OCH(CH3)CH2CH3 (R)-СН2ОСН(СН3)СН2СН3 СН2ОСН2СН3 СН2ОСН2СН2СН3 СН2ОСН2СН2СН2СН3 СН(СН3)ОСН2СН3 (хіральн.) СН(СН3)ОСН2СН3 (хіральн.) СН(СН3)ОСН2СН3 СН(СН3)ОСН3 СН2ОСН2СН3 СН(СН3)ОСН2СН2СН2СН3 СН(СН3)ОСН(СН3)2 СН2ОС(СН3)3 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)2 CH2SCH2CH3 СН2S(O)СН(СН3)2 CH2SCH(CH3)2 СН2ОН СН2ОН СН2ОСН2СН3 СН2ОСН(СН3)2 CH(OH)CH3 СН(ОН)СН2СН3 CH(ОH)СН3 (+/-)СН(ОСН3)СН3 СН2ОСН(СН3)2 5 77159 6 6. Фармацевтична композиція, що містить сполуку R5 являє собою алкіл, що містить 1-4 атоми за п.1 і фармацевтично прийнятний ексципієнт або вуглецю (включно), або арил; носій. R6 являє собою Н, алкіл, що містить від 1 до 4 7. Спосіб лікування або профілактики порушень атомів вуглецю (включно), або арил, що містить 6простати, що включає введення пацієнту, який 10 атомів вуглецю; 7 потребує такого лікування або профілактики, R являє собою Н або алкіл, що містить 1-4 атоми терапевтично ефективної кількості сполуки вуглецю (включно); формули І: R8 являє собою залишок амінокислоти після H видалення гідроксильної групи з карбоксильної N O групи; n являє собою ціле число 1-4 (включно); і R3 у дорівнює 1 або 2. N 10. Спосіб за п.9, де ангіогенними порушеннями є рак солідних пухлин, захворювання очей, R1 R2 дегенеративні зміни рогівки, ендометріоз, Формула I , діабетична ретинопатія, псоріаз або де: гемангіобластома. 1 2 R і R однакові або різні і незалежно вибрані з Н 11. Спосіб лікування або профілактики або алкілу, що містить 1-8 атомів вуглецю патологічних порушень, що включає введення 4 4 (включно), заміщеного ОН або -OR , де R являє пацієнту, який потребує такого лікування або собою алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю профілактики, терапевтично ефективної кількості (включно), арил або залишок амінокислоти після сполуки формули І: видалення гідроксильної групи з карбоксильної H N O групи; і R3 являє собою -СН2ОН; - CH2OR7; -(CH2)nSR5; (СН2)nS(О)yR5; -CH2SR5 або алкіл, що містить 1-8 R3 атомів вуглецю (включно), заміщений -ОН, -OR5, N OR8, -CH2OR7, -S(О)yR6 або -SR6; і де R1 R2 R5 являє собою алкіл, що містить 1-4 атоми Формула I , вуглецю (включно), або арил; де: R6 являє собою Н, алкіл, що містить від 1 до 4 R1 і R2 однакові або різні і незалежно вибрані з Н атомів вуглецю (включно), або арил, що містить 6або алкілу, що містить 1-8 атомів вуглецю 10 атомів вуглецю; (включно), заміщеного ОН або -OR4, де R4 являє R7 являє собою Н або алкіл, що містить 1-4 атоми собою алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю вуглецю (включно); (включно), арил або залишок амінокислоти після R8 являє собою залишок амінокислоти після видалення гідроксильної групи з карбоксильної видалення гідроксильної групи з карбоксильної групи; і групи; R3 являє собою -СН2ОН; - CH2OR7; -(CH2)nSR5; n являє собою ціле число 1-4 (включно); і (СН2)nS(О)yR5; -CH2SR5 або алкіл, що містить 1-8 у дорівнює 1 або 2. атомів вуглецю (включно), заміщений -ОН, -OR5, 8. Спосіб за п.7, де порушенням простати є ракове OR8, -CH2OR7, -S(О)yR6 або -SR6; і де захворювання або доброякісна гіперплазія R5 являє собою алкіл, що містить 1-4 атоми простати. вуглецю (включно), або арил; 9. Спосіб лікування або профілактики ангіогенних R6 являє собою Н, алкіл, що містить від 1 до 4 порушень, що включає введення пацієнту, який атомів вуглецю (включно), або арил, що містить 6потребує такого лікування або профілактики, 10 атомів вуглецю; терапевтично ефективної кількості сполуки R7 являє собою Н або алкіл, що містить 1-4 атоми формули І: H вуглецю (включно); N O R8 являє собою залишок амінокислоти після видалення гідроксильної групи з карбоксильної R групи; N n являє собою ціле число 1-4 (включно); і R R у дорівнює 1 або 2. Формула I 12. Спосіб за п.11, де патологічним порушенням є , неоплазія, ревматоїдний артрит, хронічний де: артрит, фіброз легень, мієлофіброз, ненормальне R1 і R2 однакові або різні і незалежно вибрані з Н загоєння ран, атеросклероз або рестеноз. або алкілу, що містить 1-8 атомів вуглецю 13. Спосіб лікування або профілактики (включно), заміщеного ОН або -OR4, де R4 являє нейродегенеративних захворювань і порушень, собою алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю хвороби Альцгеймера, аміотрофічного (включно), арил або залишок амінокислоти після латерального склерозу, хвороби Паркінсона, видалення гідроксильної групи з карбоксильної удару, ішемії, хвороби Хантінгтона, деменції, групи; і пов'язаної зі СНІД, розсіяного склерозу, R3 являє собою -СН2ОН; -CH2OR7; -(CH2)nSR5; периферичної невропатії, периферичної (СН2)nS(О)yR5; -CH2SR5 або алкіл, що містить 1-8 невропатії, викликаної хіміотерапією, атомів вуглецю (включно), заміщений -ОН, -OR5, периферичної невропатії, пов'язаної зі СНІД, або OR8, -CH2OR7, -S(О)yR6 або -SR6; і де 3 1 2 7 77159 8 уражень головного або спинного мозку, що R8 являє собою залишок амінокислоти після включає введення пацієнту, який потребує такого видалення гідроксильної групи з карбоксильної лікування або профілактики, терапевтично групи; ефективної кількості сполуки формули І: n являє собою ціле число 1-4 (включно); і H у дорівнює 1 або 2. N O 15. Спосіб за п.14, де лейкемією є гостра мієлогенна лейкемія, хронічна мієлогенна R лейкемія, гостра лімфоцитна лейкемія або N хронічна лімфоцитна лейкемія. R R 16. Сполука за п.2, де R1 являє собою (СН2)3ОН, Формула I , R2 являє собою Н, і R3 являє собою де: СН2ОСН(СН3)2. R1 і R2 однакові або різні і незалежно вибрані з Н 17. Сполука за п.2, де R1 являє собою або алкілу, що містить 1-8 атомів вуглецю (СН2)3ОСОСН2N(CH3)2, R2 являє собою Н, і R3 (включно), заміщеного ОН або -OR4, де R4 являє являє собою СН2ОСН(СН3)2. собою алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю 18. Фармацевтична композиція за п.6, що містить (включно), арил або залишок амінокислоти після сполуку за п.16. видалення гідроксильної групи з карбоксильної 19. Фармацевтична композиція за п.6, що містить групи; і сполуку за п.17. R3 являє собою -СН2ОН; -CH2OR7; -(CH2)nSR5; 20. Спосіб за п.7, що включає введення (СН2)nS(О)yR5; -CH2SR5 або алкіл, що містить 1-8 потребуючому такого лікування або профілактики 5 атомів вуглецю (включно), заміщений -ОН, -OR , пацієнту терапевтично ефективної кількості OR8, -CH2OR7, -S(О)yR6 або -SR6; і де сполуки за п.16. 5 R являє собою алкіл, що містить 1-4 атоми 21. Спосіб за п.7, що включає введення вуглецю (включно), або арил; потребуючому такого лікування або профілактики R6 являє собою Н, алкіл, що містить від 1 до 4 пацієнту терапевтично ефективної кількості атомів вуглецю (включно), або арил, що містить 6сполуки за п.17. 10 атомів вуглецю; 22. Спосіб за п.20, де порушенням простати є 7 R являє собою Н або алкіл, що містить 1-4 атоми ракове захворювання або доброякісна гіперплазія вуглецю (включно); простати. 8 R являє собою залишок амінокислоти після 23. Спосіб за п.21, де порушенням простати є видалення гідроксильної групи з карбоксильної ракове захворювання або доброякісна гіперплазія групи; простати. n являє собою ціле число 1-4 (включно); і 24. Спосіб за п.9, що включає введення у дорівнює 1 або 2. потребуючому такого лікування або профілактики 14. Спосіб лікування або профілактики множинної пацієнту терапевтично ефективної кількості мієломи та лейкемії, що включає введення сполуки за п.16. пацієнту, який потребує такого лікування або 25. Спосіб за п.9, що включає введення профілактики, терапевтично ефективної кількості потребуючому такого лікування або профілактики сполуки формули І: пацієнту терапевтично ефективної кількості H N сполуки за п.17. O 26. Спосіб за п.24, де ангіогенними порушеннями є рак солідних пухлин, очні захворювання, R дегенеративні зміни рогівки, ендометріоз, N діабетична ретинопатія, псоріаз або R R гемангіобластома. Формула I , 27. Спосіб за п.25, де ангіогенними порушеннями є де: рак солідних пухлин, очні захворювання, R1 і R2 однакові або різні і незалежно вибрані з Н дегенеративні зміни рогівки, ендометріоз, або алкілу, що містить 1-8 атомів вуглецю діабетична ретинопатія, псоріаз або 4 4 (включно), заміщеного ОН або -OR , де R являє гемангіобластома. собою алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю 28. Спосіб за п.11, що включає введення (включно), арил або залишок амінокислоти після потребуючому такого лікування або профілактики видалення гідроксильної групи з карбоксильної пацієнту терапевтично ефективної кількості групи; і сполуки за п.16. 3 7 5 R являє собою -СН2ОН; - CH2OR ; -(CH2)nSR ; 29. Спосіб за п.11, що включає введення 5 5 (СН2)nS(О)yR ; -CH2SR або алкіл, що містить 1-8 потребуючому такого лікування або профілактики 5 атомів вуглецю (включно), заміщений -ОН, -OR , пацієнту терапевтично ефективної кількості OR8, -CH2OR7, -S(О)yR6 або -SR6; і де сполуки за п.17. 5 R являє собою алкіл, що містить 1-4 атоми 30. Спосіб за п.28, де патологічним порушенням є вуглецю (включно), або арил; неоплазія, ревматоїдний артрит, хронічний артрит, 6 R являє собою Н, алкіл, що містить від 1 до 4 фіброз легень, мієлофіброз, ненормальне атомів вуглецю (включно), або арил, що містить 6загоєння ран, атеросклероз або рестеноз. 10 атомів вуглецю; 31. Спосіб за п.29, де патологічним порушенням є R7 являє собою Н або алкіл, що містить 1-4 атоми неоплазія, ревматоїдний артрит, хронічний артрит, вуглецю (включно); фіброз легень, мієлофіброз, ненормальне 3 1 2 1 2 3 9 77159 10 загоєння ран, атеросклероз або рестеноз. 36. Спосіб за п.34, де лейкемією є гостра 32. Спосіб за п.13, що включає введення мієлогенна лейкемія, хронічна мієлогенна потребуючому такого лікування або профілактики лейкемія, гостра лімфоцитна лейкемія або пацієнту терапевтично ефективної кількості хронічна лімфоцитна лейкемія. сполуки за п.16. 37. Спосіб за п.35, де лейкемією є гостра 33. Спосіб за п.13, що включає введення мієлогенна лейкемія, хронічна мієлогенна потребуючому такого лікування або профілактики лейкемія, гостра лімфоцитна лейкемія або пацієнту терапевтично ефективної кількості хронічна лімфоцитна лейкемія. сполуки за п.17. 38. Сполуки, представлені в наступній таблиці: H 34. Спосіб за п.14, що включає введення N O потребуючому такого лікування або профілактики 3 R пацієнту терапевтично ефективної кількості сполуки за п.16. 35. Спосіб за п.14, що включає введення N 1 2 R R потребуючому такого лікування або профілактики пацієнту терапевтично ефективної кількості сполуки за п.17. Таблиця Спол. 37 39 1 R CH2CH2CH2OCOCF3 CH2CH2CH2OH Даний винахід відноситься загалом до селективних конденсованих піролокарбазолів, включаючи фармацевтичні композиції, що їх містять, і способи лікування захворювань з їх використанням. Даний винахід відноситься також до проміжних сполук і способів одержання цих конденсованих піролокарбазолів. Цитовані публікації включені у даний опис за допомогою посилання у всій своїй повноті. Раніше були одержані різні синтетичні невеликі органічні молекули, які володіють біологічною активністю, і звичайно відомі фахівцям як «конденсовані піролокарбазоли» [див. патенти США 5475110; 5591855; 5594009 і 5616724]. Крім того, [у патенті США 5705511] розкриті сполуки конденсованих піролокарбазолів, які володіють різними функціональними фармакологічними активностями. Розкрито, що конденсовані піролокарбазоли можна використовувати для різних цілей, включаючи: посилення функції і/або виживаності клітин нейронного походження, або окремо, або у поєднанні з нейротрофічним фактором (факторами) і/або індолокарбазолами; посилення активності, що індукується трофічним фактором; інгібування активності протеїнкінази С ("РКС"); інгібування активності trk тирозинкінази; інгібування проліферації клітинної лінії раку простати; інгібування клітинних шляхів, що беруть участь у запальних процесах; і підвищення виживаності нейрональних клітин при ризику їх загибелі. Автори даного винаходу виявили, що деякі селективні конденсовані піролокарбазоли, вибрані зі сполук загальної формули [патенту США 5705511], але конкретно там не розкриті, володіють надзвичайною і несподіваною біологічною активністю у порівнянні зі сполуками, розкритими [у патенті США 5705511]. Відповідно, метою даного винаходу є 2 R H H 3 R CH2SCH2CH2CH3 CH2S(2-піримідил) створення нових піролокарбазольних сполук, загальною формулою І: конденсованих представлених Значення радикалів формули І детально розкриті нижче. Переважні конденсовані піролокарбазоли представлені наступною формулою II: Значення радикалів формули II детально розкриті нижче. Конденсовані піролокарбазоли даного винаходу можна використовувати для різних цілей, включаючи: інгібування ангіогенезу; як протипухлинні агенти; для посилення функцій і/або підвищення виживаності клітин нейронного походження, або окремо, або у комбінації з нейротрофічним фактором (факторами), і/або індолокарбазолами; для посилення активності, що індукується трофічним фактором; для інгібування кіназ; для інгібування кінази рецепторів фактора росту судинного ендотелію (VEGFR), переважно VEGFR2; для інгібування кінази змішаного походження (MLK); trk кінази; для інгібування кінази рецептора фактора росту, одержаного з 11 77159 12 тромбоцитів (PDGFR); для інгібування trk R3 являє собою -СН2ОН; -CH2OR7; -(CH2)nSR5; фосфорилювання, що стимулюється NGF; для -(CH2)nS(O)yR5; -CH2SR5 або алкіл, що містить 1-8 інгібування активності протеїнкінази С ("РКС"); для атомів вуглецю (включно), переважно алкіл, що інгібування активності trk тирозинкінази; для містить 1-4 атоми вуглецю (включно), заміщений інгібування проліферації клітинних ліній раку ОН, -OR5, -OR8, -CH2OR7, -S(O)yR6 або SR6; і де 5 простати; для інгібування клітинних шляхів, R являє собою алкіл, що містить 1-4 атоми залучених до запальних процесів; для підвищення вуглецю (включно), або арил, переважно феніл виживаності нейрональних клітин при ризику їх або нафтил; загибелі. Крім того, конденсовані піролокарбазоли R6 являє собою Н, алкіл, що містить 1-4 атоми можна використовувати для інгібування c-met, c-kit вуглецю (включно), арил, що містить 6-10 атомів і мутованих Flt-3, що містять внутрішній тандем вуглецю, переважно феніл або нафтил, або дуплікацій в юкстамембранному домені. Завдяки гетероарил; такому широкому колу активностей розкриті R7 являє собою Η або алкіл, що містить 1-4 сполуки знаходять застосування у різних атоми вуглецю (включно); ситуаціях, включаючи дослідницькі цілі і R8 являє собою залишок амінокислоти після терапевтичні застосування. видалення гідроксильної групи з карбоксильної Іншою метою даного винаходу є створення групи; фармацевтичних композицій, що містять n являє собою ціле число 1-4 (включно); і конденсовані піролокарбазоли даного винаходу, у дорівнює 1 або 2. де композиція містить фармацевтично прийнятний У деяких переважних втіленнях сполуки ексципієнт або носій і терапевтично ефективну формули І є сполуками формули II: кількість, принаймні, однієї зі сполук даного винаходу або її фармацевтично прийнятних солей або складних ефірів. Наступною метою даного винаходу є створення способів лікування або профілактики захворювань або порушень, що включають введення суб'єкту, який потребує цього, де R1, R2 і R3 мають значення, вказані вище терапевтично або профілактично ефективної для формули І. кількості, принаймні, однієї зі сполук даного У деяких переважних втіленнях R1 являє винаходу. собою алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю Ці та інші цілі, ознаки і переваги (включно), заміщений ОН або -OR4, де R4 являє конденсованих піролокарбазолів будуть розкриті собою алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю далі у докладному описі винаходу. (включно), арил, переважно феніл або нафтил, Докладний опис переважних варіантів або залишок амінокислоти після видалення винаходу гідроксильної групи з карбоксильної групи; Одним з втілень даного винаходу є R2 являє собою Н; і R3 являє собою -СН2ОН; конденсовані піролокарбазоли представлені CH2OR7; -(CH2)nSR5; -(CH2)nS(O)yR5; -CH2SR5 або формулою І: алкіл, що містить 1-8 атомів вуглецю (включно), переважно алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю (включно), заміщений -ОН, -OR5, -OR8, -CH2OR7, S(O)yR6 або SR6; де R5, R6, R7 і R8 мають значення, вказані вище для формули І. У деяких інших переважних варіантах R1 являє собою -СН2СН2СН2ОН або де: CH2CH2CH2OCOCH2N(CH3)2, R2 являє собою Η і R3 R1 і R2 однакові або різні і незалежно вибрані з являє собою -CH2OR7; де R7 являє собою алкіл, Η або алкілу, що містить 1-8 атомів вуглецю що містить 1-4 атоми вуглецю (включно). (включно), переважно алкілу, що містить 1-4 атоми У ще деяких інших переважних варіантах вуглецю (включно), заміщеного ОН або -OR4, де R4 конденсовані піролокарбазоли формули І і являє собою алкіл, що містить 1-4 атоми вуглецю формули II мають значення, представлені у (включно), арил, переважно феніл або нафтил, таблиці І. або залишок амінокислоти після видалення гідроксильної групи з карбоксильної групи; і Таблиця І Спол. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 R СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СНОНСН3 СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН 2 R Η Η Η Η Η Η Η Η Η 3 R СН2ОСН2СН3 СН2ОСН3 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)СН2СНз (S)-CH2OCH(CH3)CH2CH3 (R)-СН2ОСН(СН3)СН2СНз CH2OCH2CH3 CH2OCH2CH2CH3 СН2ОСН2СН2СН2СНз 13 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 77159 СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН Η СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН СН2СН2СН2ОН CH2CH2CH2OCOCH2NH2 CH2CH2CH2OCOCH(NH2)CH2 -CH2CH2CH2NH2 CH2CH2CH2OCOCH2CH2NH2 CH2CH2CH2OCOCH2CH2- CH2N(CH3)2 CH2CH2CH2OCOCH2N(CH3)2 СН2СН2СН2ОСОСИ2СН2СН2-CH2CH2NH2 CH2CH2OH CH2CH2CH2OH CH2CH2CH2OH CH2CH2CH2OH CH2CH2OH CH2CH2CH2OH Η Η Η CH2CH2CH2OH СН2СН2СН2ОН Η Η CH2CH2CH2OCOCF3 CH2CH2CH2OH CH2CH2CH2OH CH2CH2CH2OH Структури переважних піролокарбазолів формули II таблиці II: конденсованих представлені у Η Η Η Η CH2CHOHCH3 Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η Η СН2ОН 14 СН(СН3)ОСН2СН3 (хіральн.) СН(СН3)ОСН2СН3 (хіральн.) СН(СН3)ОСН2СН3 СН(СН3)ОСН3 СН2ОСН2СН3 СН(СН3)ОСН2СН2СН2СН3 СН(СН3)ОСН(СН3)2 СН2ОС(СН3)3 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)2 СН2ОСН(СН3)2 CH2SCH2CH3 CH2SCH2CH3 CH2S(O)CH(CH3)2 CH2SCH(CH3)2 CH2OH CH2OH СН2ОН СН2ОСН2СН3 СН2ОСН(СН3)2 СН(ОН)СН3 СН(ОН)СН2СН3 СН(ОН)СН3 (+/-)СН(ОСН3)СН3 CH2SCH2CH2CH3 СН2S(2-піридил) СН2S(2-піримідил) СН2ОСН(СН3)2 15 77159 16 Найбільш переважні сполуки таблиці II включають сполуки 1, 3, 4, 5, 6, 7 і 22, причому найбільш переважні сполуки 3 і 22. Сполуки, представлені формулами І і II і представлені у таблицях І і II, можуть також називатися тут як «сполуки», «сполука (сполуки) даного винаходу», «конденсований піролокарбазол», «конденсований піролокарбазол даного винаходу» і т.п. Деякі сполуки [патенту США 5705511] представлені у таблиці IIа. 17 77159 18 для парентерального введення, зокрема, у формі рідких розчинів або суспензій; або для перорального введення, зокрема, у формі таблеток або капсул; або інтраназального введення, зокрема, у вигляді порошків, крапель для носа або аерозолів; або для дермального використання, наприклад у вигляді черезшкірних пластирів. Відповідно, наступним аспектом даного винаходу є фармацевтичні композиції, що містять сполуку даного винаходу необов'язково у суміші з одним або більше фармацевтично прийнятних ексципієнтів або носіїв. Переважно, щоб фармацевтичні композиції включали сполуку формули II. Більш переважно, щоб фармацевтичні композиції включали сполуки, представлені у таблиці І або у таблиці II. У деяких переважних фармацевтичних композиціях композиції призначені для інгібування однієї або більше з активностей trk кінази, активностей VEGFR кінази, активностей РКС або PDGFR, причому композиція включає сполуку У тому значенні, як використано у даному формули І, формули II, таблиці Τ або таблиці II і 1 2 описі з посиланням на визначення R і R , термін необов'язково один або більше фармацевтично «амінокислота» означає молекулу, що містить як прийнятних носіїв. У випадку інших переважних аміногрупу, так і карбоксильну групу. Він включає фармацевтичних композицій, дані композиції «α-амінокислоту», яка має звичайне значення як призначені для посилення активності трофічного карбонова кислота, що містить фактора або активності ChAT спинного мозку, амінофункціональність біля атома вуглецю, причому композиція включає сполуку формули І, сусіднього з карбоксильною групою, αформули II, таблиці І або таблиці II і Амінокислота може бути природного або фармацевтично прийнятний носій. неприродного походження. Амінокислоти У випадку інших переважних фармацевтичних включають також «дипептиди», які визначені у композицій, композиція призначена для лікування даному описі як дві амінокислоти, з'єднані або профілактики ангіогенезу та ангіогенних пептидним зв'язком. Так, складові дипептидів не захворювань, таких як рак солідних пухлин, обмежені α-амінокислотами і можуть бути будьендометріоз, ретинопатія, діабетична ретинопатія, якими молекулами, що містять як аміногрупу, так і псоріаз, гемангіобластома, порушення зору або карбоксильну групу. Переважні а-амінокислоти, дегенеративні ушкодження рогівки. У випадку дипептиди, такі як лізил-β-аланін, та аміноалканові інших переважних фармацевтичних композицій, кислоти, що містять 2-8 атомів вуглецю, дані композиції призначені для лікування або наприклад, 3-диметиламіномасляна кислота. профілактики неоплазії, ревматоїдних артритів, Фармацевтично прийнятні солі конденсованих фіброзу легень, мієлофіброзу, ненормального піролокарбазолів даного винаходу також загоєння ран, атеросклерозу або рестенозу. У підпадають під об'єм сполук, що розкриваються. випадку інших переважних фармацевтичних Термін «фармацевтично прийнятні солі» у тому композицій, дані композиції призначені для значенні, як використано у даному описі, лікування або профілактики нейродегенеративних відноситься до солей приєднання неорганічних захворювань або порушень, хвороби кислот, таких як гідрохлорид, сульфат і фосфат, Альцгеймера, аміотрофічного латерального або до солей приєднання органічних кислот, таких склерозу, хвороби Паркінсона, удару, ішемії, як ацетат, малеат, фумарат, тартрат і цитрат. хвороби Хантінгтона, слабоумства, пов'язаного зі Прикладами фармацевтично прийнятних солей СНІД, епілепсії, розсіяного склерозу, металів є солі лужних металів, такі як солі натрію і периферичної невропатії, периферичної солі калію, солі лужноземельних металів, такі як невропатії, викликаної хіміотерапією, солі магнію і солі кальцію, солі алюмінію і солі периферичної невропатії, пов'язаної зі СНІД, або цинку. Прикладами фармацевтично прийнятних уражень мозку або спинного мозку. У випадку амонієвих солей є солі амонію і солі іншої переважної композиції, вона призначена для тетраметиламонію. Прикладами фармацевтично лікування або профілактики захворювань прийнятних солей приєднання органічних амінів є простати, таких як рак простати або доброякісна солі морфоліну і піперидину. Прикладами гіперплазія простати. У випадку однієї переважної фармацевтично прийнятних солей приєднання фармацевтичної композиції, вона призначена для амінокислот є солі лізину, гліцину і фенілаланіну. використання для лікування або профілактики Представлені у даному описі сполуки можна множинних мієлом або лейкемії, включаючи (але, скласти у фармацевтичні композиції шляхом не обмежуючись цим) гостру мієлогенну лейкемію, змішування з фармацевтично прийнятними хронічну мієлогенну лейкемію, гостру лімфоцитну нетоксичними ексципієнтами або носіями. Як було лейкемію і хронічну лімфоцитну лейкемію. вказано вище, такі композиції можна приготувати Композиції можна звичайно вводити в 19 77159 20 одиничній дозованій формі і їх можна приготувати інгібування. У переважному варіанті сполуки будь-якими, добре відомими у фармацевтичній даного винаходу запропоновані для лікування області способами, наприклад, [як описано у запалень, наприклад, неврологічного запалення і Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. хронічних запалень при артриті. В іншому Co., Easton, PA, 1980)]. Композиції для переважному варіанті рецептором trk кінази є trk А. парентерального введення можуть містити як В інших варіантах у даному винаході звичайні ексципієнти стерильну воду або запропонований спосіб лікування або фізіологічний розчин, поліалкіленгліколі, такі як профілактики порушень простати, що включає поліетиленгліколь, олії та рослинні олії, гідровані введення пацієнту, який потребує цього лікування нафталіни і т.п.Зокрема, біосумісні, біорозкладані або профілактики, терапевтично ефективної лактидні полімери, співполімери лактиду-гліколіду кількості сполуки даного винаходу. У переважному або співполімери поліоксіетиленуваріанті порушенням простати є рак простати або поліоксіпропілену можуть бути корисними доброякісна гіперплазія простати. ексципієнтами для контролювання виділення В інших варіантах у даному винаході активних сполук. Інші потенційно корисні системи запропонований спосіб лікування або парентеральної доставки таких активних сполук профілактики ангіогенних порушень, при яких у включають частинки співполімеру етиленупатологічні стани привносить свій внесок вінілацетату, осмотичні насоси, інфузійні системи, активність VEGFR кінази, причому спосіб включає що імплантуються, та ліпосоми. Композиції для забезпечення сполуки даного винаходу у кількості, введення за допомогою інгаляцій містять як достатній для контактування рецептора фактора ексципієнти, наприклад, лактозу, або можуть бути росту судинного ендотелію з ефективною водними розчинами, що містять, наприклад, кількістю, що інгібує, сполуки. поліоксіетилен-9-лауриловий простий ефір, В іншому варіанті у даному винаході глікохолат і дезоксихолат, або масляні розчини запропонований спосіб лікування або для введення у формі крапель для носа, або у профілактики ангіогенних порушень, що включає вигляді гелів для інтраназального введення. введення пацієнту, який потребує такого лікування Композиції для парентерального введення можуть або профілактики, терапевтично ефективної також включати глікохолат для введення за щоку, кількості сполуки даного винаходу. У переважному саліцилат для ректального введення або лимонну варіанті ангіогенними порушеннями є рак солідних кислоту для вагінального введення. Композиції пухлин, захворювання очей, дегенеративні для трансдермальних пластирів переважно є захворювання рогівки, ендометріоз, діабетична ліофільними емульсіями. ретинопатія, псоріаз або гемангіобластома. Сполуки даного винаходу можна В іншому варіанті у даному винаході використовувати як один активний агент у запропонований спосіб лікування або фармацевтичному препараті або можна профілактики порушень, при яких у патологічні використовувати у комбінації з іншими активними стани привносить свій внесок активність PDGFR, інгредієнтами, наприклад, з іншою групою причому спосіб включає забезпечення сполуки факторів росту, які можуть полегшити виживання даного винаходу у кількості, достатній для нейронів або забезпечити регенерацію аксонів при контактування рецептора фактора росту, захворюваннях або порушеннях, або іншими одержаного з тромбоцитів, з ефективною ангіогенезними або протипухлинними агентами. кількістю, що інгібує, сполуки. В іншому варіанті у Концентрації розкритих у даному описі сполук даному винаході запропонований спосіб лікування у терапевтичних або фармацевтичних композиціях або профілактики патологічних порушень, що будуть змінюватися в залежності від ряду включає введення пацієнту, який потребує такого факторів, включаючи дози ліків, що вводяться, лікування або профілактики, терапевтично хімічні характеристики (наприклад, гідрофобність) ефективної кількості сполуки даного винаходу. У сполук, що використовуються, і спосіб введення. переважних варіантах патологічними Загалом, сполуки даного винаходу можна порушеннями є неоплазія, ревматоїдний артрит, представити у водному забуференому хронічний артрит, фіброз легень, мієлофіброз, фізіологічному розчині, що містить близько 0,1ненормальне загоєння ран, атеросклероз або 10% мас/об., сполуки для парентерального рестеноз. введення. Типові інтервали доз складають від В інших варіантах у даному винаході близько 1мкг/кг до близько 1г/кг маси тіла на день; запропонований спосіб лікування порушень, що переважний інтервал доз складає від близько характеризуються порушеною активністю клітин, 0,01мг/кг до 100мг/кг маси тіла на день. Переважні які реагують на трофічний фактор, причому спосіб дози ліків, які потрібно вводити, очевидно включає введення сполуки формули І, формули II, залежать від таких змінних як тип і ступінь таблиці І або таблиці II у кількості, достатній для розвитку захворювання або стану, загального контактування рецептора клітин трофічного стану здоров'я конкретного пацієнта, відносної фактора з ефективною, такою що індукує біологічної ефективності вибраної сполуки і активність, кількістю такої сполуки. У переважних композиції сполуки з ексципієнтом і способу варіантах активністю клітин, які реагують на введення. трофічний фактор, є ChAT активність. В іншому В інших варіантах у даному винаході варіанті у даному винаході запропонований спосіб запропонований спосіб інгібування активності trk лікування або профілактики нейродегенеративних кінази, що включає введення сполуки даного захворювань і порушень, хвороби Альцгеймера, винаходу у кількості, достатній для ефективного аміотрофічного латерального склерозу, хвороби 21 77159 22 Паркінсона. удару, ішемії, хвороби Хантінгтона, «холінергічний нейрон» означає нейрони деменції, пов'язаної зі СНІД, епілепсії, розсіяного центральної нервової системи (CNS) і склерозу, периферичної невропатії, периферичної периферичної нервової системи (PNS), невропатії, індукованої хіміотерапією, нейротрансмітером яких є ацетилхолін; периферичної невропатії, пов'язаної зі СНІД, або прикладами служать нейрони базального уражень мозку або спинного мозку, що включає переднього мозку і нейрони спинного мозку. У введення пацієнту, який потребує такого лікування тому значенні, як використано у даному описі, або профілактики, терапевтично ефективної фраза «сенсорний нейрон» включає нейрони, які кількості сполуки формули І, формули II, таблиці І і реагують на сигнали зовнішнього середовища таблиці II. (наприклад, температуру), рух, наприклад, шкіри У тому значенні, як використано у даному м'язів і суглобів; прикладами служать нейрони описі, термін «вплив», коли його використовують DRG. для модифікації термінів «функція» або У тому значенні, як використано у даному «виживання», означає позитивну або негативну описі, термін «трофічний фактор» відноситься до переміну або зміну. Позитивний ефект можна молекули, яка прямо або непрямо впливає на трактувати у даному описі як «посилення» або виживання або функції клітин, що реагують на «той, що посилює», а негативний ефект можна трофічний фактор. Приклади трофічних факторів трактувати у даному описі як «інгібування» або включають війковий нейротрофічний фактор «той, що інгібує». (CNTF), основний фактор росту фібробластів У тому значенні, як використано у даному (bFGF), інсулінові та інсуліноподібні фактори росту описі, терміни «посилення» або «той, що (наприклад, IGF-I, IGF-II, IGF-III), інтерферони, посилює», коли їх використовують для модифікації інтерлейкіни, цитокіни та нейротрофіни, термінів «функція» або «виживання», означають, включаючи, фактор росту нервів (NGF), що присутність конденсованого піролокарбазолу нейротрофін-3 (NT-3), нейротрофін-4/5 (NT-4/5), здійснює позитивний ефект на функцію і/або нейротрофічний фактор, одержаний з мозку виживаність клітин, які реагують на трофічний (BDNF). фактор, у порівнянні з клітинами за відсутності Вираз «клітини, які реагують на трофічний конденсованого піролокарбазолу. Наприклад, але, фактор», у тому значенні, як використано у даному не будучи обмеженням, у відношенні виживаності, описі, відноситься до клітин, що містять рецептор, наприклад, холіпергічного нейрона, конденсований з яким може специфічно зв'язуватися трофічний піролокарбазол свідчить про продовження терміну фактор; приклади включають нейрони (наприклад, виживаності холінергічної нейрональної популяції холінергічні та сенсорні нейрони) і ненейрональні у випадку ризику їх загибелі (викликаної, клітини (наприклад, моноцити і неопластичні наприклад, ураженням, умовами хвороби, клітини). дегенеративними умовами або природним У тому значенні, як використано у даному розвитком) при порівнянні з холінергічною описі, вирази «активність трофічного фактора» і нейрональною популяцією, з якою не взаємодіють «активність, що індукується трофічним фактором», такі конденсовані піролокарбазоли, якщо визначені як будь-яка реакція, яка безпосередньо оброблена популяція буде володіти порівняно або опосередковано виникає внаслідок довшим періодом функціонування у порівнянні з зв'язування трофічного фактора (наприклад, NGF) необробленою популяцією. Як інший приклад (і з клітиною, що містить рецептор трофічного знову не будучи обмежуючим) відносно функцій, фактора (наприклад, нейрон, що включає trk). У наприклад, сенсорних нейронів, конденсовані випадку, наприклад, зв'язування NGF з trk, піролокарбазоли свідчать про посилення функцій приклад реакцій включає аутофосфорилювання (наприклад, подовження нейриту) сенсорної тирозинових залишків trk, що приводить до нейрональної популяції у порівнянні з сенсорною посилення ChAT активності, яке приводить до нейрональною популяцією, яка не взаємодіє з підвищення виживаності нейронів і/або до такими конденсованими піролокарбазолами, якщо посилення їх функцій. подовження нейриту обробленої популяції У тому значенні, як використано у даному порівняно більше, ніж подовження нейриту описі, у виразах «активність трофічного фактора» і необробленої популяції. «активність, що індукується трофічним фактором», У тому значенні, як використано у даному термін «трофічний фактор» включає як ендогенні, описі, терміни «інгібувати» та «інгібування» так і екзогенні трофічні фактори, де «ендогенний» означають, що специфічна реакція позначеного відноситься до звичайно присутніх трофічних матеріалу (наприклад, ферментативна активність) факторів, а «екзогенний» відноситься до порівняно знижується за присутності трофічних факторів, привнесених у систему. Як конденсованих піролокарбазолів даного винаходу. визначено, «активність, що індукується трофічним У тому значенні, як використано у даному фактором», включає активність, що індукується (1) описі, терміни «нейрон», «клітина нейронального ендогенними трофічними факторами; (2) походження» та «нейрональні клітини» включають екзогенними трофічними факторами; і (3) (але не обмежуються цим) гетерогенну популяцію комбінацією ендогенних та екзогенних трофічних нейрональних типів, що містять окремі або факторів. множинні трансмітери і/або володіють окремими У тому значенні, як використано у даному або множинними функціями; переважно, щоб це описі, термін «trk» відноситься до сімейства були холінергічні або сенсорні нейрони. У тому нейротрофінових рецепторів з високої афінністю, значенні, як використано у даному описі, фраза що включають у наш час trk A, trk В і trk С та інші 23 77159 24 зв'язані з мембранами білки, з якими може розкривається, у контейнер, який містить клітини зв'язуватися нейротрофін. для in vitro досліджень), так само як і введення У тому значенні, як використано у даному сполуки в об'єкт-мішень (наприклад, ін'єкція описі, фраза «стан гіперпроліферації» відносно сполуки, що розкривається, лабораторній тварині терміну «клітини» відноситься до клітин, для тестування in vivo або людині з метою розрегульованість і/або ненормальний ріст яких лікування або профілактичної обробки). може привести до виникнення небажаних станів, У тому значенні, як використано у даному наприклад, до стану ракового захворювання або описі, термін «проліки» включає будь-які стану псоріазу. ковалентно зв'язані носії, які вивільняють активну У тому значенні, як використано у даному частину ліків у вигляді сполуки даного винаходу in описі, терміни «рак» і «раковий» відносяться до vivo, коли такі проліки вводять ссавцеві. Оскільки будь-якої злоякісної проліферації клітин у ссавців. проліки, як відомо, поліпшують різні корисні Приклади включають рак простати, доброякісну властивості ліків (наприклад, розчинність, гіперплазію простати, рак яєчників, рак молочної біодоступність. виробництво і т.п.), сполуки даного залози та інші відомі ракові захворювання. У тому винаходу можна доставляти у формі проліків. значенні, як використано у даному описі, терміни Таким чином, даний винахід включає проліки «псоріаз» і «стан псоріазу» відносяться до сполук даного винаходу, які містять їх композиції порушень, що включають гіперпроліферацію та способи лікування захворювань і порушень за кератиноцитів, інфільтрацію запальних клітин і допомогою таких проліків. зміну цитокінів. Проліки сполук даного винаходу, наприклад, У тому значенні, як використано у даному сполук формули І, можна одержати, модифікуючи описі, фраза «при ризику загибелі» відносно присутні у сполуці функціональні групи таким біологічного матеріалу, наприклад, таких клітин, як чином, щоб такі модифіковані групи нейрони, означає стан або умову, що негативно розщеплювалися або внаслідок звичайних впливає на біологічний матеріал таким чином, що процедур, або in vivo, з утворенням вихідної даний матеріал володіє підвищеною ймовірністю сполуки. Відповідно, проліки включають, загибелі у зв'язку з таким станом або умовою. наприклад, сполуки даного винаходу, в яких Наприклад, сполуки, що розкриваються у даному гідроксильна група, аміногрупа або карбоксигрупа описі, можуть «врятувати» або підвищити зв'язана з якою-небудь групою таким чином, що виживаність мотонейронів, які звичайно коли проліки вводять ссавцеві, вони знаходяться у стані ризику загибелі в in ovo моделі розщеплюється з утворенням вільного гідроксилу, загибелі клітин, що програмується. Аналогічно, вільної аміногрупи або карбонової кислоти, наприклад, нейрони можуть знаходитися у стані відповідно. Приклади включають (але не ризику загибелі внаслідок природного процесу обмежуються цим) залишки амінокислот після старіння, що є причиною загибелі нейронів, видалення гідроксильної групи з карбоксильної внаслідок уражень, таких як травма голови, яка групи, ацетат, форміат і бензоат похідні спиртових може бути такою, що нейрони і/або глія, і амінофункціональних груп: і складні алкілові, наприклад, ушкоджені при такій травмі, можуть карбоциклічні, арилові та алкіларилові ефіри, такі зазнавати ризику загибелі. Іншим прикладом як метиловий, етиловий, пропіловий, можуть служити нейрони, що знаходяться у стані ізопропіловий, бутиловий, ізобутиловий, вторризику загибелі у зв'язку з хворобливим станом бутиловий, трет-бутиловий, циклопропіловий, або у зв'язку з умовами, такими, при яких нейрони феніловий, бензиловий та фенетиловий складні знаходяться у стані ризику загибелі, що ефіри і т.п. відбувається при захворюванні ALS. Таким чином, Конденсовані піролокарбазоли даного під підвищенням виживаності клітин, які винаходу володіють важливими знаходяться у стані ризику загибелі, при фармакологічними активностями, які знаходять застосуванні сполук, що заявляються у даному застосування у різних областях, включаючи як винаході, мають на увазі, що такі сполуки дослідниць κ), так і терапевтичну області знижують або запобігають ризику загибелі клітин. застосування. Для простоти уявлення і щоб не У тому значенні, як використано у даному обмежувати область застосувань, для яких описі, термін «контактування» означає сполуки даного винаходу можуть бути безпосереднє або непряме поєднання фрагментів, охарактеризовані, автори звичайно описують таке, коли фрагменти безпосередньо або непрямо активності конденсованих піролокарбазолів вступають у фізичну асоціацію один з одним, наступним чином: внаслідок чого досягається потрібний результат. Інгібування ферментативної активності. Так, у тому значенні, як використано у даному Вплив на функції і/або виживаність клітин, які описі, може існувати «контакт» клітини-мішені зі реагують на трофічний фактор. сполукою, що розкривається у даному винаході, Інгібування запальних реакцій у відповідь. хоча дана сполука і клітина не обов'язково фізично Інгібування росту клітин, пов'язаного з зв'язані одна з одною (наприклад, у випадку, коли гіперпроліферативними станами. ліганд і рецептор фізично зв'язані один з одним) Інгібування еволюційно запрограмованої доти, доки досягається потрібний результат загибелі мотонейронів. (наприклад, підвищення виживаності клітин). Інгібування ферментативної активності можна Контактування, таким чином, викликає такі дії, як визначити, використовуючи, наприклад, аналізи поміщення фрагментів разом у контейнер VEGFR інгібування (наприклад, VEGFR2 (наприклад, додавання сполуки, що інгібування), MLK інгібування (наприклад, MLK1, 25 77159 26 MLK2 або MLK3 інгібування), інгібування PDGFR піролокарбазоли мають позитивну дію на функції кінази, trk фосфорилювання. стимульованого NGF, та виживаність клітин, які реагують на трофічний РКС інгібування або аналіз інгібування trk фактор, внаслідок підвищення виживаності тирозинкінази. Вплив на функції і/або виживаність нейронів. Що стосується, наприклад, виживаності клітин, які реагують на трофічний фактор, холінергічних нейронів, дані сполуки можуть наприклад, клітин нейронального походження, запобігти виживаності популяції холінергічних можна встановити, використовуючи будь-який з нейронів при ризику їх загибелі (наприклад, наступних методів аналізу: (1) аналіз з пов'язаної з ураженням, хворобливим станом, використанням культивування дегенеративними умовами або при природній холінацетилтрансферази спинного мозку ("ChAT"); прогресії), при порівнянні з холінергічною (2) аналіз з використанням нейритного нейрональною популяцією, в якій відсутня така подовження задньокорінцевого ганглія, що сполука, якщо оброблена популяція має порівняно культивується ("DRG"); (3) аналіз з використанням більш тривалий період функціонування, ніж ChAT активності нейронів, що культивуються, необроблена популяція. базального переднього мозку ("BFN"). Інгібування Різні неврологічні порушення запальних реакцій у відповідь можна встановити, характеризуються нейрональними клітинами, які використовуючи аналіз мРНК індоламін-2,3гинуть, ушкоджуються, функціонально знаходяться діоксигенази ("1DO"). Інгібування росту клітин, під загрозою, зазнають дегенерації аксонів, пов'язане зі станами гіперпроліферації, можна зазнають ризику загибелі і т.п.Такі порушення визначити, вимірюючи ріст клітинних ліній, які включають (але не обмежуються цим) неврологічні представляють інтерес, таких як лінія АТ2 у захворювання і порушення, хворобу Альцгеймера, випадку раку простати. Інгібування еволюційно порушення мотонейронів (наприклад, запрограмованої загибелі мотонейронів можна аміотрофічний латеральний склероз), хворобу оцінити in ovo, використовуючи соматичні Паркінсопа, серцево-судинні захворювання мотонейрони ембріонів курчат, оскільки такі (наприклад, удар, ішемія), хворобу Хантінгтона, клітини зазнають природної загибелі між 6 і 10 СНІД деменцію, епілепсію, розсіяний склероз, днями ембріонального розвитку, і аналізуючи периферичні невропатії (наприклад, ті, які інгібування такої природної загибелі клітин, як впливають на DRG нейрони при пов'язаній з опосередковане сполуками, що розкриваються у хіміотерапією периферичній невропатії), даному описі. включаючи діабетичну невропатію і периферичну Інгібування ферментативної активності невропатію, пов'язану зі СНІД, порушення, сполуками конденсованих піролокарбазолів викликані збуджувальними амінокислотами, і даного винаходу можна визначити, порушення, пов'язані з контузією або використовуючи, наприклад, наступні аналізи: проникаючими ураженнями головного або Аналіз інгібування VEGFR. спинного мозку. Аналіз інгібування MLK. Дані сполуки корисні не тільки для підвищення Аналіз інгібування активності РКС. активностей, що індукуються трофічним фактором, Аналіз інгібування актив пості trkA у клітинах, які реагують на трофічний фактор, тирозинкінази. наприклад, у холінергічних нейронах, але також Аналіз інгібування trk фосфорилювання, що можуть використовуватися як агенти, що стимулюється NGF, у препаратах цілих клітин. промотують виживаність для інших типів Аналіз інгібування реиспторів фактора росту, нейронних клітин, наприклад, допамінергічних або одержаних з тромбоцитів (PDGFR). глутаматергічних. Фактор росту може регулювати Зокрема, інгібування рецептора фактора росту виживаність нейронів за допомогою сигнальних судинного ендотелію (VEGFR) знаходить каскадів, розміщених у прямому напрямі від застосування, наприклад, у випадках малих, що зв'язують GTP, білків ras, гас і cdc42 захворювань, при яких грає важливу роль (Denhardt, D.T., Biochem. J., 1996, 318, 729). Більш ангіогенез, таких як рак солідних пухлин, конкретно, активація ras приводить до ендометріоз, діабетична ретинопатія, псоріаз, фосфорилювання та активації кінази, що гемангіобластома, а також при інших активується позаклітинним рецептором (ERK), яка захворюваннях очей та ракових захворюваннях. пов'язана з процесами біологічного росту і Інгібування MLK знаходить застосування, диференціації. наприклад, при неврологічних захворюваннях. Стимулювання rac/cdc42 приводить до Інгібування trk знаходить застосування, наприклад, посилення активації JNK і р38, реакціям у при захворюваннях простати, таких як рак відповідь, які пов'язані зі стресом, апоптозом і простати і доброякісна гіперплазія простати, і при запаленнями. Хоча реакції у відповідь фактора лікуванні болю, пов'язаного із запаленнями. росту відбуваються, головним чином, по шляху Інгібування рецептора фактора росту, одержаного ERK, вплив на ці останні процеси може привести з тромбоцитів (PDGFR), знаходить застосування, до альтернативних механізмів нейронального наприклад при різних формах неоплазії, при виживання, які можуть імітувати властивості ревматоїдних артритах, фіброзі легень, посилення виживання фактора росту (Хіа et al, мієлофіброзі, ненормальному загоєнні ран, при Science, 1995, 270, 1326). Сполуки даного серцево-судинних захворюваннях, таких як винаходу можуть також функціонувати як агенти, атеросклероз, рестеноз, рестеноз після що промотують виживаність для нейрональних і не ангіопластики і т.п. нейрональннх клітин за рахунок механізмів, Було також показано, що конденсовані пов'язаних з виживаністю, опосередкованою 27 77159 28 фактором росту, (але також відмінних від них), для простоти, визначені наступним чином: «мкг» наприклад, інгібування JNK і р38 МАРК шляхів, які означає мікрограм, «мг» означає міліграм, «г» можуть привести до виживання за рахунок означає грам, «мкл» означає мікролітр, «мл» інгібування процесів загибелі апоптотичних клітин. означає мілілітр, «л» означає літр. «нМ» означає Сполуки даного винаходу можна також наномолярний, «мкМ» означає мікромолярний, використовувати для лікування порушень, «мМ» означає мілімолярний, «М» означає пов'язаних зі зниженою активністю або загибеллю, молярний і «нм» означає нанометр. з ураженням мотонейронів спинного мозку, а Синтез також можна використовувати, наприклад, при У даному винаході запропонований також захворюваннях, пов'язаних із загибеллю спосіб одержання конденсованих піролокарбазолів апоптозпих клітин центральної і периферичної даного винаходу. Сполуки даного винаходу можна нервової системи, імунної системи і при запальних одержати рядом способів, добре відомих захворюваннях. ChAT каталізує синтез фахівцям у даній області. Сполуки можна нейротрансмітерного ацетилхоліну і розглядається синтезувати, наприклад, способами, як ферментний маркер для функціонального представленими нижче на схемах, або їх холінергічного нейрона. Функціональний нейрон варіантами, очевидними для фахівців у даній також здатний до виживання. Виживаність області. Відповідні модифікації та заміщення нейронів аналізують, використовуючи кількісне очевидні і добре відомі або можуть бути легко визначення специфічного захоплення і з'ясовані фахівцями у даній області з наукової ферментативного перетворення барвника літератури. Всі способи, розкриті у зв'язку з даним (наприклад, кальцеїну AM) живими нейронами. винаходом, можна здійснити на практиці у будьСполуки, що розкриваються, можуть також знайти якому масштабі, включаючи міліграми, грами, застосування при лікуванні хворобливих станів, кілограми, десятки кілограмів, або у промисловому що включають проліферацію злоякісних клітин, масштабі. таких, які відповідають багатьом раковим Потрібно розуміти, що сполуки даного захворюванням. винаходу можуть містити один або більше Завдяки їх різноманітним властивостям, асиметрично заміщених атомів вуглецю, і їх можна ізомерні конденсовані піролокарбазоли та розділити на оптично активні або рацемічні ізоіндолони можна використовувати й в інших форми. Тому всі хіральні, діастереомерні, застосуваннях, таких як наукові дослідження. Так рацемічні форми і всі форми геометричних наприклад, сполуки можна використовувати при ізомерів структури включені в об'єм даного створенні in vitro моделей виживаності винаходу, якщо тільки не вказані конкретні нейрональних клітин, їх функціонування, стереохімічні або ізомерні форми. Фахівцям у ідентифікації або для скрпнінгу інших синтетичних даній області добре відомо як одержати такі сполук, які володіють активністю, аналогічною оптично активні форми. Наприклад, суміші активності ізомерних конденсованих стереоізомерів можна розділити, використовуючи піролокарбазольних та ізоіндолонових сполук. стандартні методики поділу рацемічних форм, Таким чином, сполуки, представлені у даному включаючи (але, не обмежуючись ними) звичайну винаході, є корисними як стандарти або хроматографію, хроматографію з оберненою порівняльні сполуки для використання у тестах фазою та хіральну хроматографію, вибірне або аналізах для визначення активності агента у солеутворення, перекристалізацію і т.п., або фармацевтичних дослідницьких програмах. хіральний синтез з активних вихідних речовин, або Сполуки можна також використовувати для методичний хіральний синтез центрів-мішеней. дослідження, характеристики і визначення Як можна легко зрозуміти, функціональні молекулярних мішеней, пов'язаних з групи, які присутні у сполуках даного винаходу, функціональними реакціями у відповідь. можуть містити захисні групи. Наприклад, Наприклад, шляхом введення радіомічення замісники бокових ланцюгів аміногруп можна ізомерні конденсовані піролокарбазольні або захистити захисними групами, такими як ізоіндолонові сполуки, пов'язані зі специфічною бензилоксикарбонільна або третклітинною функцією (наприклад, мітогенезом), бутоксикарбонільна групи. Захисні групи відомі можна визначити, виділити і очистити для самі по собі як хімічні функціональні групи, які характеризації об'єкта-мішені, з яким зв'язується можна селективно додати або видалити з похідне. Як додаткову ілюстрацію сполуки можна функціональних груп, таких як гідроксильні групи і використовувати для розробки аналізів і моделей карбоксильні групи. Такі групи присутні у хімічних для подальшого розуміння ролі, яку інгібування сполуках для додання таким функціональностям серин/треонін або тирозинпротеїнкінази інертності відносно хімічних реакцій, яким (наприклад, РКС, trk тирозинкінази) грає в піддаються дані сполуки. У рамках даного аспектах механізмів, пов'язаних з порушеннями і винаходу можна використовувати будь-які з захворюваннями. Так, сполуки даного винаходу різноманітних захисних груп.Переважні захисні корисні як діагностичні реагенти у діагностичних групи включають бензилоксикарбонільну (Cbz: Z) аналізах, таких як описані у даному описі аналізи. групу і трет-бутилоксикарбонільну (Вос) групу. Інші Результати, одержані у VEGFR і MLK аналізах, переважні захисні групи відповідно до даного представлені нижче. Інші аналізи також винаходу можна знайти [у Greene. T.W. and Wuts, описуються більш детально. Але їх жодним чином P.G.M, "Protective Groups in Organic Synthesis" 2d. не треба розглядати як такі, що обмежують об'єм Ed., Wiley & Sons, 1991]. даного винаходу. Деякі скорочення, використані 29 77159 30 31 77159 32 Опис синтезу наприклад, метиленхлориді, толуолі або 1,2Сполуки А і В одержують шляхом алкілування дихлоретані. індолу І 2-брометилбензиловим простим ефіром Спирти 33-35 використовували для одержання (А) або 3-бромпропілбензиловим простим ефіром простого ефіру прикладів 10-13, 15, 16 і 36. (В), використовуючи NaH у ДМФ, з подальшим Сполуки прикладів 33-35 одержують з кетонів XI і дебензилуванням (Pd(OH)2/H2) [за способом XII, як представлено на схемі 3. Прості ефіри та патенту США 5705511]. Порівняльну сполуку С тіоефіри одержують, використовуючи методики, одержують у результаті реакції сполучення В з представлені вище на схемі 4. Вос-лейцином з подальшим видаленням захисної Сполуку прикладу 7 одержують за способом, ВОС-групи, використовуючи стандартні методики, представленим на схемі 7. Сполуку прикладу 31 відомі фахівцям в області органічного синтезу. алкілують мезилгліцидолом, одержуючи сполуку Сполуку В можна також одержати внаслідок XIII. Відновлення триетилборгідридом у ТГФ відновлення складного ефіру IV відновлювальним приводить до одержання, наприклад, вторинного агентом, таким як LiBH4, з подальшим видаленням спирту 7. Сполуку прикладу 14 одержують (схема бензгідрольної захисної групи. Способи одержання 6), обробляючи сполуку XIV карбонатом цезію і бензилових простих ефірів і простих ефірів тіолу ацетальдегідом у суміші метиленхлорид/метанол. представлені на схемах. Для одержання 3Сполуку прикладу 40 одержують способом, гідроксиметильних проміжних сполук 28-30, 33-35 представленим на схемі 7. Захищену Di-TBS використовують два способи. На схемі 1 (Спосіб А) сполуку XVIII алкілують параформальдегідом, представлений спосіб карбонілювання, тоді як на використовуючи тритон В/піридин, з подальшим схемі 2 (спосіб В) представлений спосіб видаленням захисних груп, використовуючи формілування. На схемі 1 внаслідок реакції TMSC1, одержуючи сполуку прикладу 40. Ефіри Міхаеля сполуки І з етилакрилатом і такою амінокислот прикладів 18-23 одержують зі сполук основою, як DBU одержують II з подальшим прикладу 3 і відповідних карбонових кислот, захистом азоту лактаму диметоксибензгідролем, використовуючи стандартні реакції сполучення, одержуючи сполуку III. Відновлення складного відомі фахівцям в області органічного синтезу. етилового ефіру з використанням таких Інші відмітні ознаки винаходу стануть очевидні відновлювальних агентів як боргідрид літію з на основі подальшого опису прикладів втілення. подальшим бромуванням N-бромсукцинімідом Дані приклади представлені для ілюстрації забезпечує одержання проміжної сполуки V з винаходу, і жодним чином його не обмежують. хорошим повним виходом. Процес Приклади карбонілювання сполуки V з використанням Деякі скорочення, що використовуються, паладієвого каталізатора у метоксіетанолі визначені таким чином: "°С" градуси Цельсія, "д" приводить до одержання метоксіетокси складного дублет, "дд" дублет дублетів, "т" триплет, "м" ефіру VI. Після видалення захисних груп з мультиплет, "екв" еквівалент, "г" грам або грами, утворенням VII, складний ефір можна відновити за "мг" міліграм або міліграми, "мл" мілілітр або допомогою відновлювальних агентів, наприклад, мілілітри, "H" водень або водні, "год." година або діізобутнлалюмінійгідриду (DIBAL-H) з одержанням години, "М" молярний, "хв." хвилина або хвилини, діолу 29. У способі формілування до "МГц" мегагерц, "МС" мас-спектрометрія, "ямр" гідроксиметильних сполук (спосіб В, схема 2) або "ЯМР" спектроскопія ядерного магнітного використовують, наприклад, НМТА у ТФО або α,αрезонансу. дихлорметилметиловому простому ефірі і кислоту Одержання сполуки II: Льюїса. Альдегіди можна відновити до До суспензії І (8,0г, 0,258моль) в ацетонітрилі гідроксиметильних сполук, використовуючи (300мл) при кімнатній температурі в атмосфері відновлювальні агенти, такі як боргідрид натрію азоту додають етилакрилат (4,19мл, 0,387моль), а або діізобутилалюмінійгідрид. Метиловий простий потім 1,8-діазабіцикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU) ефір або тіоефір можна одержати, (1,93мл, 0,013моль). Після додавання DBU колір використовуючи загальну методику, представлену реакційного розчину змінюється від оранжевого до на схемі 4. В одному з варіантів, наприклад, діол зеленого. Реакційну суміш кип'ятять зі зворотним 29 можна перетворити у три-трифорацетатну холодильником протягом ночі. Суміш залишається проміжну сполуку, використовуючи ангідрид гетерогенною протягом реакції і стає темного трифтороцтової кислоти і основу, таку як кольору. Невелику аліквоту відбирають після 18 триетиламін, з подальшою обробкою даної годин і тверду частину відфільтровують. Спектр 1Н проміжної сполуки відповідним алкіловим спиртом ЯМР зразка свідчить про відсутність вихідної або алкілтіолом, з одержанням бензилового речовини. Реакційну суміш охолоджують до простого ефіру (1-25, 27, 31, 32, 36-40) кімнатної температури і тверду частину безпосередньо. У деяких випадках можна виділити відфільтровують. Тверду частину декілька разів три фтор ацетатний складний ефір первинного промивають холодним ацетонітрилом і сушать у спирту. У даних прикладах спирт можна виділити вакуумі при 55°С, одержуючи тверду речовину 1 внаслідок обробки трифторацетату основою, світло-оранжевого кольору (5,4г, 78% вихід). Н такою як гідроксид літію. В іншому варіанті прості ЯМР (ДМСО-d6, 300МГц): δ 9,72 (т, 3Н, J=6,8), 2,87 ефіри та тіоефіри можна одержати, здійснюючи (м, 2Н), 3,89 (кв, 2Н, J=6,8), 4,49 (с, 2Н), 4,88 (с, взаємодію діолу, наприклад, 28 або 29, зі спиртом 2Н), 4,92 (м, 2Н), 7,29-7,48 (м, 3Н), 7,50-7,73 (м, і кислотним каталізатором, таким як 3Н), 7,96 (д, 1Н, J=7,33), 8,56 (с, 1Н), 9,47 (д, 1Н, паратолуолсульфонова кислота або J=7,33). камфорсульфонова кислота, у розчиннику, Одержання сполуки III: 33 77159 34 До суспензії сполуки II (5,62г, 0,0137моль) у окисом вуглецю. Реакційну суміш нагрівають у бензолі (300мл) і N-метилпіролідині (NMP) (60мл) запаяній ампулі при 155°С на масляній бані при кімнатній температурі в атмосфері азоту протягом 3 годин. Реакційну суміш охолоджують додають моногідрат п-толуолсульфонової кислоти до кімнатної температури і додають додатково (2,48г, 0,013моль) і 4,4'-диметоксибензгідрол окис вуглецю. Суміш знову нагрівають при 150°С (3,19г, 0,013моль). Вміст колби кип'ятять зі протягом 3 годин. Додають додатково CO і зворотним холодильником протягом 8 годин. PdCl2(PPh3)2 і суміш нагрівають протягом 4 годин. Через 45 хвилин вихідна гетерогенна реакційна Реакційну суміш розбавляють метиленхлоридом і суміш стає гомогенною. Реакційну суміш швидко пропускають через шар целіту. Одержаний охолоджують до кімнатної температури, фільтрат концентрують у вакуумі до одержання розбавляють етилацетатом (300мл) і промивають залишку, який розчиняють в етилацетаті і насиченим розчином бікарбонату натрію, водою і промивають водою. Органічний шар сушать над розсолом. Органічний шар сушать над сульфатом сульфатом магнію, фільтрують і концентрують у магнію і концентрують у вакуумі, одержуючи вакуумі, одержуючи тверду речовину, яку тверду речовину оранжевого кольору (8,31г, вихід ретельно розтирають з етиловим ефіром і 95%). 1Н ЯМР (CDCl3, 300МГц): δ 1,18 (т, 3Н, відфільтровують, одержуючії тверду речовину J=7,1), 2,84 (м, 2Н), 3,80 (6H, с), 4,12 (кв, 2Н, світло-оранжевого кольору (0,7г, вихід 85%). 1H J=7,1), 4,38 (с, 2Н), 4,72 (2Н, с), 4,94 (м, 2Н), 6,90 ЯМР (CDCl3, 300МГц): δ 2,14 (м, 2Н), 3,44 (с, 3Н), (д, 4Н, J=8,5), 6,955 (с, 1Н), 7,26 (д, 4Н, J=8,5), 3,67-3,78 (м, 4Н), 3,81 (с, 6Н), 4,44 (с, 2Н), 4,51 (м, 7,34-7,49 (м, 5Н), 7,61 (д, 1Н, 1=7,4), 7,69 (д, 1Н, 2Н), 4,81 (м, 4Н), 6,91 (д, 4Н, J=8,53), 6,98 (с, 1H), J=7,7), 9,65 (д, 1Н, 1=7,8). 7,28 (д. 4Н, 8,6), 7,34-7,61 (м, 4Н), 8,21 (д, 1H, Одержання сполуки IV: J=8,32), 8,42 (с, 1Н), 9,67 (д, 1Н, J=7,61). До розчину III, що перемішується, (7,8г, Одержання сполуки VII: 0,0122моль) у ТГФ (480мл) і метанолі (93мл) по До розчину сполуки Vl (0,96 г, 0,00138моль) у краплях додають боргідрид літію (18,9мл 2,0Μ СН2Сl2 (30мл) при 0°С в атмосфері азоту додають розчин, 0,0379моль). Реакційна суміш спочатку тіоанізол (3,2мл, 0,110моль), а потім гомогенна, однак, по мірі протікання реакції суміш трифтороцтову кислоту (ТФО) (8,5мл 0,0276моль). перетворюється у гетерогенну. Після того як Після додавання ТФО колір реакційної суміші стає витрачена вся вихідна речовина, реакційну суміш червоним. Суміш перемішують при 0°С протягом 1 охолоджують на крижаній бані і обережно гасять години, а потім нагрівають до кімнатної 2Ν НСІ (60мл). Реакційна суміш перетворюється у температури протягом ночі. Реакційний розчинник гомогенну і забарвлюється у світло-оранжевий видаляють у вакуумі, залишається масло темноколір. До суміші додають воду (750мл), і при цьому червоного кольору. До масла додають етиловий утворюється молочно-білий осад. Осад ефір, і реакційна суміш набуває жовтого кольору, відфільтровують і сушать у вакуумі, одержуючи причому з розчину випадає осад жовтопухнасту тверду речовину білого кольору (7,2г, коричневого кольору. Тверду речовину вихід 99%). 1Н ЯМР (ДМСО-d6, 300МГц): δ 1,93 (м, відфільтровують (0,6г, вихід 92%). 1Н ЯМР (ДМСО2Н), 3,66 (м, 2Н), 3,71 (с, 6Н), 4,55 (с, 2Н), 4,73 (м, d6, 300МГц): δ 2,29 (м, 2Н), 3,3 (м, 2Н), 3,73 (м, 2Н), 2Н), 4,79 (с, 2Н), 6,70 (с, 1H), 6,93 (д, 4Н, J=8,44), 4,45 (м, 2Н), 4,54 (м, ЗН), 4,82 (м, 2Н), 4,99 (с, 2Н), 7,22 (д, 4Н, J=8,4), 7,26 (м, 1Н), 7,34-7,46 (м, 2Н), 7,40 (м, 2Н), 7,58 (д, 1Н), 7,85 (д, 1H), 8,13 (д, 1Н), 7,49 (м, 1Н). 7,65 (д, 1H, 1=7,01), 7,70 (д, 1Н, 8,52 (с, 1H), 8,6 (с, 1H), 9.49 (д, 1Н). J=8,26), 7,86 (д, 1H, J=7,82), 9,49 (д, 1Н, 1=7,49). Приклад 29 (спосіб А): Одержання сполуки V: До суспензії сполуки VII, що перемішується, До суспензії сполуки IV (2,02г, 0,0034моль) у (4,4г, 0,00935моль) в СН2Сl2 (220мл) при 0°С в ТГФ (131мл) при кімнатній температурі в атмосфері азоту повільно по краплях додають атмосфері азоту додають N-бромсукцинімід (0,63г, DIBAL-H. Реакційна суміш поступово стає 0,0036моль) однією порцією. Реакційну суміш гомогенною. Забарвлену в оранжевий колір перемішують при кімнатній температурі протягом реакційну суміш перемішують при 0°С протягом 1 ночі. Розчинник видаляють з реакційної суміші у години, потім нагрівають до кімнатної температури вакуумі, одержуючи у залишку тверду речовину і перемішують 6 годин. Суміш охолоджують до 0°С блідо-жовтого кольору. Тверду речовину ретельно на крижаній бані і дуже повільно додають воду розтирають з холодним метанолом і (50мл). На початковій стадії відбувається відфільтровують. Тверду частину сушать у інтенсивне виділення газу. Додають водний розчин вакуумі, одержуючи тверду речовину блідоNaOH (1М 300мл) і реакційну суміш перемішують жовтого кольору (1,98г, вихід 87%). 1Н ЯМР при кімнатній температурі протягом 1 години. (ДМСО-d6, 300МГц): δ 1,91 (м, 2Н), 3,44 (м, 2Н), Утворюється осад, який відфільтровують, 3,72 (с, 6Н), 4,53 (с, 2Н), 4,74 (м, 2Н), 4,87 (с, 2Н), одержуючи тверду речовину жовто-коричневого 6,71 (с, 1H), 6,93 (д, 4Н, J=8,14), 7,25 (д, 4Н, J=8,1), кольору (3,6г, 96%). 1H ЯМР (ДМСО-d6, 300МГц): δ 7,37 (м, 2Н), 7,59-7,69 (м, 3Н), 8,08 (с, 1H), 9,50 (д, 1,92 (м, 2Н), 3,46 (м, 2Н), 4,50 (с, 2Н), 4.65 (с, 2Н), 1H, J=7,01). 4,71 (м, 2Н), 4,88 (с, 2Н), 7,32-7,39 (м, 2Н), 7,47 (д, Одержання сполуки VI: 1H, J=8,34), 7,65 (м, 2Н), 7,89 (с, 1H), 8,53 (с, 1H), В ампулу Шленка вміщують сполуку V (0,79г, 9,46 (д, 1Н, J=7,44). 0,0017моль) у метоксіетанолі (25мл), а потім Одержання сполуки X: ацетат натрію (0,57г, 0,00702моль) і До розчину сполуки II, що перемішується, дихлорбіс(трифеніл-фосфін)паладій(ll) (0,082г. (2,77г, 6,75моль) у суміші метиленхлорид/толуол 0,000117моль). Ампулу відкачують і заповнюють (3:1. 30/10мл) додають хлорид олова (15екв.) і α,α 35 77159 36 дихлорметилметиловий простий ефір (20екв.). 7,36 (м, 3Н), 7,48 (д, 1Н), 7,64 (м, 2Н), 7,90 (с, 1Н), Колір суміші змінюється від оранжевого до темно8,55 (с, 1Н), 9,47 (д, 1Н). зелепого. За зникненням вихідної речовини у Приклад 2: R5=OMe, 95% вихід; МС (m/z): 413 + реакційній суміші стежать за даними ВЕРХ. Суміш (М +1), 435 (M++Na); 1H ЯМР (300МГц, ДМСО-d6) δ охолоджують до 0°С і гасять водним НСl. Суміш (м.д.): 1,99 (м, 2Н), 3,36 (с, 3Н), 3,54 (м, 2Н), 4,58 переносять у круглодонпу колбу і концентрують у (с, 2Н), 4,66 (с, 2Н), 4,79 (м, 2Н), 4.96 (с, 2Н), 7,40вакуумі, одержуючи масло зелено-коричневого 7,49 (м, 2Н), 7,52 (д, 1Н), 7,65-7,84 (м, 2Н), 7,98 (с, кольору. Додають додатково НСl та етилацетат і Ш), 8,60 (с, 1Н), 9,51 (д, 1Н). суміш знову концентрують у вакуумі. З розчину Приклад 3: R5=OiPr, 31% вихід; МС (m/z): 441 + осаджується тверда речовина коричнювато(М +1); 1Н ЯМР (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 1,15 рожевого кольору. Твердий продукт ретельно (д, 6Н), 1,92 (м, 2Н), 3,45 (м, 2Н), 3,67 (м, 1H), 4,52 розтирають з гексанами і розчинник декантують. (с, 2Н), 4,61 (с, 2Н), 4,73 (м, 2Н), 4.89 (с, 2Н), 7,3Цю процедуру повторюють 5 разів. Твердий 7,39 (м, 2Н), 7,47 (д, 1H), 7,62-7,69 (м, 2Н), 7,89 (с, продукт відфільтровують і сушать, одержуючи 1H), 8,54 (с, 1Н), 9,47 (д, 1Н). тверду речовину світлого розувато-коричневого Приклад 4: R5=OCH(CH3)CH2CH3, 25% вихід; кольору, 2,65г (90% вихід). МС (ESI): m/e 439 МС (m/z): 455 (М++1); 1Н ЯМР (300МГц. CDCl3) δ 1 (М+Н)+, Н ЯМР (ДМСО-d6, 300МГц): δ 1,00 (т, 3Н), (м.д.): 0.98 (т, 3Н), 1,26 (д, 3Н), 1,65 (м, 2Н), 2,03 2,94 (м, 2Н), 3,93 (кв, 2Н), 4,50 (с, 2Н), 4,97 (м, 4Н), (м, 2Н), 3,56 (м, 2Н), 4,095 (м, 1Н), 4,24 (с, 2Н), 7,37 (м, 2Н), 7,65 (д, 1Н), 7,96 (д, 1Н), 8,03 (д, 1Н), 4,57 (м, 2Н), 4,70 (м, 2Н), 4,71 (с, 2Н), 6,12 (с, 1Н), 8,52 (с, 1Н), 8,67 (с, 1Н), 9,48 (д, 1Н), 10,49 (с, 1Н). 7,33 (т, 1Н), 7,42-7,58 (м. 4Н), 7,75 (с, 1Н), 9,48 (д, Приклад 29 (спосіб В): 1Н). До суспензії сполуки X (2,37г, 0,005моль) у Приклад 5: R5=(R)-OCH(CH3)CH2CH3, 61% ТГФ (50мл) при 0°С в атмосфері азоту додають вихід; МС (m/z): 455 (М++1); 1Н ЯМР (300МГц, боргідрид літію (10екв.). Світло-коричневу суміш CDCl3) δ (м.д.): 0,98 (т, 3Н), 1,26 (д, 3Н), 1,65 (м, перемішують при кімнатній температурі протягом 2Н), 2,03 (м, 2Н), 3,56 (м, 2Н), 4,095 (м, 1Н), 4.24 3,5 годин, після чого за даними ВЕРХ не (с, 2Н), 4,57 (м, 2Н), 4,70 (м, 2Н), 4,71 (с, 2Н), 6,12 залишається вихідної речовини. Суміш (с, 1Н), 7,33 (т, 1Н), 7,42-7,58 (м, 4Н), 7,75 (с, 1Н), охолоджують до 0°С і дуже повільно додають 9,48 (д, 1Н). метанол доти, доки не спостерігається виділення Приклад 6: R5=(S)-OCH(CH3)CH2CH3, 93% газу. Суміш стає гомогенною, а потім починає вихід; МС (m/z): 455 (М++1); 1Η ЯМР (300МГц, утворюватися осад. Суміш концентрують у CDCl3) δ (м.д.): 0,98 (т, 3Н), 1,26 (д, 3Н), 1,65 (м, вакуумі, одержуючи тверду речовин) блідо2Н), 2,03 (м, 2Н), 3,56 (м, 2Н), 4,095 (м, 1Н), 4.24 жовтого кольору, яку ретельно розтирають з (с, 2Н), 4,57 (м 2Н), 4,70 (м, 3Н), 4,71 (с, 2Н), 6,12 водою і відфільтровують, одержуючи 2,0г продукту (с, 1Н), 7,33 (т, 1Н), 7,42-7.58 (м, 4Н), 7,75 (с, 1Н), (вихід 96%). 9,48 (д, 1Н). Одержання сполуки VIII: Приклад 8: R5=O-nPr, 62% вихід; МС (m/z): 441 + До суспензії сполуки 29 (1,13моль, 1екв.) у (M +1), 462 (M++Na); 1Н ЯМР (300МГц. ДМСО-d6) δ метиленхлориді (30мл) при 0°С в атмосфері азоту (м.д.): 0,88 (т, 3Н), 1,55 (м, 2Н), 1,933 (м, 2Н), 3,36додають трифтороцтовий ангідрид (3екв.), а потім 3,58 (м, 4Н), 4.53 (с, 2Н), 4,61 (с, 211). 4,73 (м, 3Н), триетиламін (3екв.). Реакційна суміш поступово 4,90 (с, 2Н), 7,33-7,39 (м, 2Н), 7,47 (д, 1Н), 7,62стає гомогенною, і її перемішують при 0°С 7,70 (м, 2Н), 8,54 (с. 1Н), 9,47 (д, 1Н). протягом 1 години, а потім при кімнатній Приклад 9: R5=O-nBu. 92% вихід; МС (m/z): температурі протягом ночі. Суміш розбавляють 455 (М++1); 1H ЯМР (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): метиленхлоридом і промивають водою та 0,854 (т, 3H), 1,34 (м, 2Н), 1,52 (м, 2Н), 1,93 (м, 2Н), розсолом. Органічну фазу сушать над сульфатом 3,48 (м, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 4,60 (с, 2Н), 4.73 (м, 3Н), магнію, фільтрують і концентрують у вакуумі, 4,89 (с, 2Н), 7,30-7,42 (м, 2Н), 7,47 (д, 1Н), 7,62одержуючи тверду речовину. Дану речовину 7,70 (м, 2Н), 7,89 (с, 1Н). 8,54 (с, 1Н), 9,47 (д, 1Н). використовують без додаткового очищення. Приклад 17: R5=O-tBu, 35% вихід; МС (m/z): Загальна методика одержання простого ефіру 455 (M++1), 477 (M++Na); 1H ЯМР (300МГц, ДМСО(Загальна структура IX): d6) δ (м.д.): 1,28 (с, 9Н), 1,97 (м, 2Н), 3,62 (м, 2Н), Продукт VIII розчиняють у відповідному спирті 4,56 (с, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 4,77 (м, 3Н). 4,94 (с, 2Н), (0,025М) і нагрівають до 80°С на масляній бані. 7,35-7,72 (3м, 3Н), 7,72 (м, 2Н), 7,90 (с, 1Н), 8,57 (с, Спостерігають за зникненням вихідної речовини у 1H), 9,50 (д, 1Н). реакційній суміші. Суміш охолоджують до Приклад 25: R6=SEt, 96% вихід; МС (m/z): 443 + кімнатної температури і розчинник видаляють у (М +1); 1Н ЯМР (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 1,17 вакуумі, одержуючи тверду речовину. Одержану (т, 3Η), 1,93 (м, 2Η), 2,42 (кв, 2Н), 3,48 (м, 2Н), 3,93 тверду речовину ретельно розтирають з ефіром і (с, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 4,72 (м, 3Н), 4.89 (с, 2Н), 7,33відфільтровують. У деяких випадках продукт 7,49 (м, 3Н), 7,65 (м, 2Н), 7,88 (с, 1Н), 8,56 (с, 1Н), піддають додатковому очищенню, використовуючи 9,46 (д, 1Н). 6 хроматографічні методи. Приклад 26: R =SOCH(CH3)2, МС (m/z): 494 + 1 За допомогою описаної вище загальної (M +Na); Н ЯМР (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 1,21 методики одержують наступні сполуки: (дд. 6H), 1,93 (м, 2Н), 2,82 (м, 1H), 3,49 (м, 2Н), Приклад 1: R5=OEt, 18% чистий вихід; МС 4,12 (д, 1Н), 4,23 (д, 1H), 2,52 (с, 2Н), 4.75 (м, 3Н), (m/z): 427 (М++1). 1Н ЯМР (300МГц, ДМСО-d6) δ 4,88 (с, 2Н), 7,33-7,45 (м, 2Н), 7,55 (д, 1Н), 7,65 (д, (м.д.): 1,148 (т, 3Н), 1,94 (м, 2Н), 3,46-3,52 (м, 4Н), 1Н), 7,71 (д, 1H), 7,94 (с, 1Н), 8,58 (с, 1H), 9,47 (д, 4,53 (с, 2Н), 4,60 (с, 2Н), 4,73 (м, 2Н), 4,91 (с, 2Н), 1Н). 37 77159 38 Приклад 27: R6=SCH(CH3)2, МС (m/z): 457 охолоджують до 0°С і обережно по краплях (М++1), 479 (M++Na); 1H ЯМР (300МГц. CDCl3) δ додають метанол. Під час гасіння надлишку (м.д.): 1.31 (д, 6Н), 2,34 (м, 2Н), 2,86 (м, 1Н), 3,98 боргідриду спостерігається інтенсивне виділення (с, 2Н), 4,29 (с, 2Н), 4,45 (м, 1H), 4,74 (м, 2Н), 4,92 газу. Суміш перемішують при кімнатній (с, 2Н), 6,07 (с, 1H), 7,39 (м, 2Н), 7,51 (м, 2Н), 7,57 температурі протягом ночі. Реакційну суміш (м, 1Н), 7,80 (с, 1Н), 9,53 (д, 1Н). розбавляють етилацетатом і промивають водою Приклад 37: R6=nPrS (три фтор ацетат), вихід та розсолом. Органічний шар сушать над 66%; 1Н ЯМР (ДМСО-d6, 300МГц): δ 0,92 (т, 3Н), сульфатом магнію, фільтрують і концентрують у 1,58 (кв, 2Н), 2,29 (м, 2Н), 2,44 (т, 2Н), 3,95 (с, 2Н), вакуумі, одержуючи тверду речовину, 69мг (90% 4,53 (м, 4Н), 4,82 (м, 2Н), 4,93 (с. 2Н), 7,41 (м, 2Н), вихід). МС (m/z): 413 (М++1), 435 (M++Na); 1Н ЯМР 7,52 (д, 1Н), 7,60 (д, 1Н), 7,72 (д, 1Н), 7,93 (с. 1Н), (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 1,41 (д, 3Н), 1,92 (м, 8,62 (с, 1Н), 9,51 (д, 1Н). 2Н), 3,46 (м, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 4,71 (м, 3Н), 4,89 (с, Приклад 38: R6=S(C5H4N), вихід 51%; МС (ESI): 3Н), 5,18 (с, 1Н), 7,32-7,39 (м, 2Н), 7,50 (д, 1Н), m/e 514 (М++Na); 1Н ЯМР (ДМСО-d6, 300МГц): δ 7,64 (м, 2 Н), 7,89 (с, 1Н), 8,55 (с, 1Н), 9,46 (д, 1Н). 1,014 (м, 2Н), 3,45 (м, 2Н), 4,51 (с, 2Н), 4,60 (с, 2Н), Відповідно до загальної методики одержання 4,72 (м, 3Н), 4,85 (с, 2Н), 7,11 (м, 1Н), 7,30-7,41 (м, простих ефірів одержують наступні сполуки, 3Н), 7,54-7,67 (м, 4Н), 8,02 (с, 1Н), 8,48 (д, 1Н, використовуючи три-трифорацетатні проміжні J=3,97), 8,55 (с, 1Н). 9.46 (д, 1Н, J=7,36). сполуки: Приклад 39: R6=S(C4H3N2), вихід 52%; МС Приклад 10: R5=OEt, вихід 68%: МС (m/z): 441 + 1 + (m/z): 493 (М +Н); Н ЯМР (300МГц. ДМСО-d6) δ (М +1), 395 (М+-ОСН2СН3); 1Н ЯМР (300МГц, (м.д.): 1,93 (м, 2Н), 3,45 (м, 2Н), 4,51 (с, 3Н), 4,60 ДМСО-d6) δ (м.д.): 1,08 (т, 3Н), 1,41 (д, 3Н), 1,93 (м, (с, 2Н), 4,72 (м. 2Н), 4,88 (с, 2Н), 7,22 (т, 1Н), 7,322Н), 3,47 (м, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 4,60 (м, 1Н), 4,73 (м, 7,68 (м, 6Н), 8,05 (с, 1Н), 8,55 (с, 1Н), 8,66 (д, 1Н), 2Н), 4,90 (м, 2Н), 7,33-7,39 (м, 2Н), 7,47 (д, 1Н), 9,46 (д, 1Н). 7,63 (д, 1Н), 7,69 (д, 1Н). 7,86 (с, 1Н), 8,55 (с, 1Н), Приклад 30: R5=H, вихід 44%; 1H ЯМР 9,47 (д, 1Н). (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 4,13 (с, 2Н), 4,64 (с, Поділ сполуки 10 за допомогою ВЕРХ з 2Н), 4,89 (с, 2Н), 7,28-7,42 (м, 3Н), 7,53 (д, 1Н), оберненою фазою дає ізомери 11 і 12. 7,64 (д, 1Н), 7,89 (с, 1Н), 8.49 (с, 1Н), 9,34 (д, 1Н). Приклад 11: (хіральний): R5=OEt, МС (m/z): 11,83 (с, 1Н). 441 (М++1), 395 (М+-ОСН2СН3). Приклад 31: R5=OEt, віхід 83%; 1Н ЯМР Приклад 12: (хіральний): R5=OEt, МС (m/z): (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 1,18 (т, 3Н), 3,55 (кв, 441 (М++1), 395 (М+-ОСН2СН3). 2Н), 4,62 (с. 211), 4,93 (с, 2Н), 7,34-7,46 (м, 3Н), Приклад 13: R5=OMe. вихід 76%; МС (m/z): 427 + 1 7,58 (д, 1Н), 7,68 (д, 1Н), 7,92 (с, 1Н), 8,54 (с, 1Н), (М +1); Н ЯМР (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 1,45 9,39 (д, 1Н), 11,91 (с, 1Н). (д, 3Н), 1,98 (м, 2Н), 3,14 (с, 3Н), 3,50 (м, 2Н), 4,58 Приклад 32: R5=OiPr. чистий вихід 41%; 1Н (м, ЗН), 7,75 (м. 211), 4,93 (с, 2Н), 7.33 (м, 2Н), 7,48 ЯМР (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 1,15 (д, 6Н), 3,68 (д, 1Н), 7,67 (д, 1Н), 7,72 (д, 1Н), 7,88 (с, 1Н), 8,58 (м, 1Н), 4,13 (с, 2Н), 4,59 (с, 2Н), 4,89 (с, 2Н), 7,28(с, 1Н), 9,49 (д, 111). 7,42 (м, 3Н), 7,54 (д, 1Н), 7,64 (д, 1Н), 7,88 (с, 1Н), Приклад 15: R5=OBu. вихід 73%; 1Н ЯМР 8,49 (с, 1Н), 9,35 (д, 1Н), 11,87 (с, 1Н). (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 0,81 (т, 3Н), 1,27-1,43 Одержання сполуки XI: (м, 7Н), 1.93 (м, 2Н), 3,48 (м, 2Н), 4,53 (с, 2Н), 4,58 До суспензії алюмінійхлориду (3екв.) у суміші (м, 1Н), 4,73 (м, 4Н), 4,92 (м, 2Н), 7,33-7,39 (м, 2Н), 1,2-дихлоретан/метилен-хлорид (1:1, 8мл) 7,46 (д, 1Н), 7,63 (д, 1Н), 7,69 (д, 1H), 7,86 (с, 1H), додають ацетилхлорид (3екв.) в атмосфері азоту. 8,55 (с, 1H), 9,47 (д, 1Н). Реакційна суміш стає гомогенною і її охолоджують Приклад 16: R5=OiPr. вихід 63%; 1H ЯМР до 0°С на крижаній бані. Суспензію В (0,84моль, (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 1,01 (д, 3Н), 1.10 (д, 1екв.) у метиленхлориді (3мл) додають по 3Н), 1,38 (д, 3Н), 1,95 (м, 2Н), 3,47 (м, 2Н), 3,98 (кв, краплях, і одержана суміш набуває коричневого 1Н), 4,26 (м, 1H), 4,52 (с, 2Н), 4,74 (м, 3Н), 4,90 (м, кольору. Крижану баню видаляють і реакційну 2Н), 7,33-7,39 (м, 2Н), 7,48 (д, 1H), 7,62-7,69 (м, суміш нагрівають до кімнатної температури. Суміш 2Н), 7,87 (с, 1Н), 8,54 (с. 1Н), 9,47 (д, 1H). кип'ятять зі зворотним холодильником протягом 2 Приклад 35: R5=H, вихід 98%; МС (m/z): 455 + годин, потім охолоджують до кімнатної (M +1), 337 (M+-H2O); 1Н ЯМР (300МГц, ДМСО-d6) температури. За даними ВЕРХ вихідна речовина δ (м.д.): 1,45 (д, 3Н), 4,25 (м, 3Н), 4,86 (с, 2Н), 5,16 відсутня. Суміш виливають у крижану воду і (д, 1Н), 7,28-7,39 (м, 2Н), 7,43 (д, 1Н), 7,56 (д, 1Н), додають концентровану НСІ (5мл). Осад, що 7,66 (д, 1H), 7,92 (с, 1H), 8,49 (с, 1Н), 9,35 (д. 1H), утворився, відфільтровують і сушать. 340мг (89% 11,78 (с, 1Н). вихід), МС (m/z): 453 (М++1); 1Н ЯМР (300МГц, Приклад 36: R5=OMe, вихід 50%; МС (m/z): 369 ДМСО-d6) δ (м.д.): 2,02 (с, 3Н), 2,18 (м, 2Н), 2,74 (с, (М++1); 1Н ЯМР (300МГц, ДМСО-d6) δ (м.д.): 1,43 ЗН), 4,12 (м, 2Н), 4,56 (с, 2Н), 4,83 (м, 2Н), 5,05 (с, (д, 31-1), 3,16 (с, 3Н), 4,15 (м, 2Н), 4,49 (м, 1H), 2Н), 7,43 (м, 2Н), 7,68 (д, 1Н), 7,86 (д, 1Н), 8,17 (д, 4,93 (с, 2Н), 7,32-7,40 (м, 3Н), 7,58 (д, 1H), 7,67 (д, 1Н), 8,56 (с, 1Н), 8,72 (1Н), 9,53 (д, 1Н). 1Н), 7,84 (с, 1H), 8,50 (с, 1Н), 9,44 (д, 1H), 11,87 (с, Приклад 33: 1H). До суспензії сполуки XI (0,18моль, 1екв.) у ТГФ Приклад 34: R5=H, (вихід 77% після 2 стадій); (6мл) в атмосфері азоту додають боргідрид літію МС (m/z): 427 (М++1), 409 (М+-Н2О); 1H ЯМР (10екв.) при 0°С. Реакційну суміш перемішують (300МГц, ДМСО-dб) δ (м.д.): 0,848 (т, 3Н), 1,70 (м, при 0°С протягом 1 години, потім нагрівають при 2Н), 1,93 (м, 2Н), 3,47 (м, 2Н), 4,52 (с, 2Н), 4,61 (м, кімнатній температурі протягом 4 годин. Суміш 1Н), 4,72 (м, 3Н), 4,89 (с, 2Н), 5,14 (с, 1Н), 7,29-7,39 39 77159 40 (м. 2Н), 7,44 (д, 1Н), 7.64 (м, 2Н), 7,87 (с, 1Н), 8,54 виходом 73%. 1,19 (т, 311), 2,78 (т, 1Н), 3,53 (т, (с, 1H), 9,46 (д, 1Н). 4Н), 4,53 (с, 2Н), 4,65 (с, 2Н), 4,78 (дд, 1Н), 4,96 (с, Загальна методика одержання складного 2Н), 5.20 (д, 1Н), 7,35-7,47 (м, 2Н), 7,51 (д, 1Н), ефіру прикладу 3: 7,68 (д, 1Н), 7,75 (д, 1Н), 7,95 (с, 1Н), 8,62 (с, 1Н), У висушену у термостаті трилітрову, тригорлу 9,55 (д, 1Н). круглодонну колбу, оснащену механічною Приклад 7: мішалкою, триходовим краном, з'єднаним з Сполуку XIII (100мг) розчиняють у ТГФ (10мл) і балоном з аргоном та імерсійним термометром, обережно по краплях додають боргідрид натрію завантажують сполуку 3 (148,6моль), потім (2мл). Реакційну суміш нагрівають при 70°С послідовно додають безводний Ν,Νпротягом 4 годин. Суміш охолоджують до диметилацетамід (654мл), 4кімнатної температури і додають IN HCІ. (диметиламіно)піридин (DMAP) (0,5екв.), Розчинник видаляють у вакуумі і матеріал амінокислоту (2,5екв.) і гідрохлорид 1-[3-(диметилвміщують у суміш метанолу та води. Одержаний аміно)пропіл]-3-етилкарбодііміду (2,5екв.) при 35°С осад відфільтровують і сушать. 1,19 (т, 3Н), 1,25 до прозорого розчину червоного кольору. (д, 3Н), 3,55 (кв, 2Н), 4,13 (м, 2Н), 4,58 (с, 2Н), 4.61 Реакційну суспензію нагрівають при 42-45°С (с, 2Н), 4,64 (с, 2Н), 4,93 (с, 2Н), 4,97 (т, 1Н), 7,34протягом 2 годин і додають послідовно додаткові 7,45 (м, 211), 7,49 (д, 1Н), 7.69 (т, 2Н), 7,92 (с, 1Н), кількості DMAP (0,08екв.), амінокислоти (0,5екв.) 8,57 (с, 1Н), 9,50 (д, 1Н). та гідрохлориду 1-[3-(димeтиламіно)пропіл]-3Приклад 14: етилкарбодііміду (0,5екв.). Через 1,5 години До суспензії сполуки XIV (0,75моль) у суміші реакційну суміш охолоджують до 0-5°С і гасять метилен-хлорид/метанол/НМРА (4:2:1мл) додають водою. Охолоджуючу баню видаляють і одержат' карбонат цезію (4,0екв.). Реакційну суміш суспензію блідо-жовтого кольору перемішують при перемішують протягом 30 хвилин, а потім додають кімнатній температурі протягом 1 години. ацетальдегід. Додатково ацетальдегід додають Суспензію фільтрують, промивають водою до при спостереженні за допомогою ТШХ невеликих рН=8 і сушать протягом ночі, використовуючи змін. Суміш розбавляють метиленхлоридом і звичайний вакуум. Тверда речовина блідо-жовтого промивають водою та розсолом. Органічну фазу кольору не висихає повністю, і її розчиняють у сушать над сульфатом натрію, фільтрують і метиленхлориді і водний шар відділяють. концентрують у вакуумі. Неочищений продукт XV Органічну фазу промивають розсолом, сушать над виділяють на хроматографічній колонці (33% MgSO4, фільтрують через целіт і концентрують, вихід). Сполуку XV (0,3моль) розчиняють у використовуючи роторний випарник і одержуючи метиленхлориді та охолоджують до 0°С. До неочищену тверду речовину. Неочищену речовину розчину додають етантіол (2 краплі) і знову розчиняють у метиленхлориді та переносять трифтороцтову кислоту (ТФО) (1 крапля) і суміш у трилітрову тригорлу круглодонну колбу, перемішують при 0°С протягом 1 години. Суміш оснащену механічною мішалкою. Обережно по нагрівають до кімнатної температури та краплях при кімнатній температурі додають перемішують 1 годину. Додають додатково ТФО (2 етилацетат (1л) до прозорого розчину червоного краплі), і через 30 хвилин реакція завершується. кольору протягом 70 хвилин при безперервному Продукт очищають на хроматографічній колонці з перемішуванні. Після додавання етилацетату силікагелем, використовуючи суміш (15мл) утворюється осад. Суспензію перемішують метиленхлорид/етилацетат. Виділяють один протягом 2,5 годин, потім тверду речовину діастереомер, 65мг (53%). 0,52 (д, 3Н), 1,21 (т, 3Н), відфільтровують. Осад послідовно промивають 2,47 (кв, 2Н), 3,96 (с, 2Н), 4,49 (с, 1Н), 4,86 (м, 1Н), етилацетатом, сумішшю етилацетат/метил-трет4,94 (с, 2Н), 6,18 (с, 1Н), 7,35-7,45 (м, 3Н), 7,64 (д, бутиловий простий ефір (3:2) та метил-трет1Н), 7,72 (д, 1Н), 7.92 (с, 1Н), 8,57 (с, 1Н). 9,41 (д, бутиловим простим ефіром і сушать, одержуючи 1Н), 10,99 (с, 1Н). не зовсім білу тверду речовину з 78% виходом. Одержання сполуки XVII: Приклад 18: МС (m/z) 498 (М++1) До розчину гексаметплентетрааміну (1,6г, Приклад 19: МС (m/z) 566 (М++1) 11,4моль) у ТФО додають сполуку XVI (2,0г, Приклад 20: МС (m/z) 569 (М++1) 4,6моль) при 60-65°С. Після перемішування Приклад 21: МС (m/z) 512 (М++1) протягом 2 годин реакційну суміш охолоджують до Приклад 22: МС (m/z) 554 (М++1) кімнатної температури, потім обережно по краплях Приклад 23: МС (m/z) 526 (М++1) додають у 2N суміш H2SO4-aцетон (150мл) (2:1). Приклад 24: МС (m/z) 554 (М++1) Тверду речовину збирають, суспендують у Одержання сполуки XIII: діоксолані (150мл) і кип'ятять зі зворотним Сполуку прикладу 31 (0,33моль) розчиняють у холодильником протягом 30 хвилин. Речовину, що ДМФ (10мл) і об'єм зменшують до половини не розчинилася, видаляють фільтруванням і відгонкою. Колбу охолоджують до кімнатної розчинник концентрують до приблизно 25мл. температури, додають гідрид натрію (1екв.) і суміш Додають МеОН (50мл) для осадження продукту, перемішують протягом 1 години. Додають який збирають і сушать, одержуючи 700мг мезилгліцидол (1,5екв.) і одержану суміш жовтуватої твердої речовині:. МС ES+ 467 (М+1). нагрівають при 50°С протягом 24 годин, потім Приклад 28: охолоджують до кімнатної температури. Суміш До суспензії сполуки XVII (500мг, 1,1моль) у фільтрують і розчинник видаляють у вакуумі. суміші СНС13/метанол (60мл, 5/1) додають Реакційну суміш очищають на хроматографічній твердий NaBH4 (200мг). Розчин перемішують при колонці з силікагелем, одержуючи сполуку XIII з кімнатній температурі протягом 4 годин. СНСІ3 41 77159 42 видаляють при зниженому тиску, потім додають випарювання розчинника залишок ретельно 2N НСІ. Розчин перемішують протягом 2 годин, розтирають з ефіром (3 1мл) та сушать, зібрана і висушена частина дає 420мг не зовсім одержуючи 10,8мг сполуки прикладу 40 (72%) з білої твердої речовини. МС (ES+) 469 (М+1). наступними спектральними характеристиками: 1H Неочищений спирт суспендують у СНСІ3-МеОН ЯМР (ДМСО-d6) 9,49 (д, 1H, J=7,7), 8,59 (с, 1Н), (25мл+10мл), потім додають 0,7мл 1Μ NaOMe з 7,96 (с, 1H), 7,80 (д, 1Н, J=7,3), 7,77 (д, 1H, J=8,5) подальшим перемішуванням протягом 12 годин 7,55 (д, 1H, J=7,3), 7,45 (м, 1H), 7,37 (m, 1H), 4,98 при кімнатній температурі. Розчинник (м, 3Н), 4,78 (м, 2H), 4,70 (с, 2Н), 4,20-4,16 (м, 2Н), концентрують, тверду речовину ретельно 3,76 (сеп, 1Н, J=6,l). 3,38 (м, 1Н), 3,36-3,25 (м, 2Н), розтирають з МеОН і продукт збирають, 1,80 (м, 2Н), 1,23 (д, 6Н, J=6,l); МС m/z 471 (М+Н). одержуючи діол, 420мг (84%). 1Н ЯМР (ДМСО-d6, Інгібування активності кінази рецепторів 300МГц,): δ 3,8 (м, 2Н), 4.55 (с, 2Н), 4,63 (д, 2Н), фактора росту ендотеліальних клітин судин 4,75 (м, 2Н), 4,97 (с, 2Н), 5,0 (м, 1Н), 5,23 (м, 1H), Сполуки конденсованих піролокарбазолів 7,34-7,51 (м, 4Н), 7,68 (м, 2Н), 7,94 (с, 1H), 8,57 (с, досліджують відносно їх дії, що інгібує, на кіназну + 1H), 9,51 (д, 1Н), MC (ES ) 385 (M+1). активність кіназного домену рецепторів VEGF, що Приклад 24: експресуються бакуловірусом (flk-1, KDR, VEGFR2 До суспензії продукту прикладу 28 (50мг, людини), використовуючи методику, описану для 0,13моль) у СНСІ3 додають камфорсульфонову ELISA аналізу trkA кінази, приведену нижче. кислот) (30мг, 0,26моль) і етантіол (0,39моль), з Реакційну суміш кінази, що містить 50мМ Hepes, подальшим перемішуванням протягом 12 годин в рН7,4, 40мкМ АТР, 10мМ МnСl2, 0,1% BSA, 2% атмосфері азоту. Додають надлишок СНСІ3 і потім ДМСО та різні концентрації інгібітору, переносять розчин промивають 2Μ розчином Na2CO3, водою, на планшети, покриті PLC- /GST. Додають VEGFR розсолом і сушать (MgSO4). Розчинник кіназу і реакції дають можливість протікати концентрують і продукт збирають після ретельного протягом 15 хвилин при 37°С. Детектування 1 розтирання з МеОН. H ЯМР (ДМСО-d6, 300МГц,): фосфорильованого продукту здійснюють, додаючи δ 1,1, 2,3 (м, 2Н), 3,85 (м, 2Н), 4,0 (с, 2Н), 5,5 (с, анти-фосфотирозинове антитіло (UBI). Вводять 2Н), 4,8 (м, 2Н), 4,9 (с, 2Н), 5,0 (т, 1Н), 7,35-7,5 (м, антитіло, кон'юговане з вторинниім ферментом 4Н), 7,7 (м, 2Н), 8,6 (с, 1Н), 9,5 (д, 1H), (м, 3Н), МС для захоплення комплексу антитіло(ES+) 429, 451 (М+1,+23). фосфорильований PLC- /GST. Активність Приклад 40: зв'язаного ферменту визначають за допомогою До розчину сполуки прикладу 3 (210мг, посиленої системи детектування (Gibco-BRL). 0,48моль) у ДМФ (10мл) додають DMAP (1мг), Et3N Результати інгібування аналізують, (267мкл, 1,92моль) і tBDMSCl (220мг, 1,47моль). використовуючи сигмоїдальне рівняння (з Після перемішування протягом 20 годин суміш нахилом, що змінюється) доза-відповідь за поміщають в ЕtOАс і послідовно промивають програмою GraphPad Prism. Результати водним NaHCO3, водою та розсолом. Органічний підсумовані у таблиці III. шар сушать над MgSO4, фільтрують і випаровують, одержуючи залишок, який очищають Таблиця III на хроматографічній колонці (силікагель, 10% Інгібування VEGFR EtOAc/гексан), одержуючи 225,1мг проміжної сполуки XVIII (70%). Сполука VEGFR2 (ІК50 або % інгіб. при 300нМ) Суміш XVIII (68,1мг, 0,10моль) і А 107 В 48 параформальдегіду (63,1мг, 2,1моль) у піридині С 17% (4мл) обробляють 0,25Μ розчином Тритону В у D 200 піридині (100мкл, 0,025моль). Після 1 4 перемішування протягом 2 годин додають 2 17 3 7 додатково Тритон В у піридині (150мкл, 4 12 0,038моль). Через 1 годину суміш поміщають в 5 12 ЕtOАс та інтенсивно промивають водним CuSO4. 6 19 Після промивання водою, водним NаНСО3 та 7 25 розсолом органічний шар сушать над MgSO4, 8 13 9 18 фільтрують і випаровують, одержуючи залишок, 10 83 який очищають на хроматографічній колонці 11 65 (силікагель, 22% EtOАс/гексан), одержуючи 45,2мг 12 240 сполуки ІХХ (64%) з наступними спектральними 13 73 характеристиками: 1H ЯМР (ДМСО-d6) δ 9,42 (д, 14 72 15 130 1Н, J=7,7), 7,97 (с, 1H), 7,75-7,72 (м, 2Н), 7,52 (д, 16 411 1Н, J=8,5), 7,44 (дд, 1H, J=7,7, 7,5), 7,36 (дд, 1Н, 17 11 J=7,7, 7,5), 5,13 (м, 1Н), 5,04 (с, 2Н). 4,77 (м, 1Н), 18 23 4,70 (с, 2Н), 4,10 (м, 1H), 3,76 (сеп, 1H, J=6,1), 3,54 19 60% (м, 1Н). 3,44 (м, 1H), 3,31 (м, 3Н), 1,79 (м, 2Н), 1,22 20 31 21 48% (м, 6Н), 1,07 (с. 9Н), 0,85 (с, 9Н), 0,52 (с, 6Н), 0,00 22 18 (с, 3Н), -0,03 (с, 3Н); МС m/z 699 (М+Н). 23 57% До розчину сполуки XXI (22,5мг, 0,032моль) у 24 31% iРrOН (10мл) додають TMSCl (100мкл) і одержану 25 21 26 31% суміш перемішують протягом 2,5 годин. Після 43 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 57 34% 208 302 77 33% 111 7 37% 12% 37% 45% 13% 16 Інгібування активності кінази-1 змішаного походження (MLK1) Кіназ ну активність MLK1 оцінюють, використовуючи формат Millipore Multiscreen ТС «у планшеті» за способом, описаним для протеїнкінази-С (Pitt & Lee, J. Biomol. Screening, і: 47-51, 1996). Коротше кажучи, кожні 50-мкл аналітичної суміші містять 20мМ Hepes, pH7,2, 5мМ EGTA, 15мМ MgCl2, 25мМ β-гліцерофосфату, 60мкМ АТР, 0,25мкКі [ -32Ρ]ΑΤΡ, 0,1% BSA, 500мкг/мл мієлінового основного білку (UBI #13104), 2% ДМСО, 1мкМ сполуки, що тестується, та 1мкг/мл бакуловірусного GST-MLKIKD. Зразки інкубують протягом 15 хвилин при 37°С. Реакцію зупиняють, додаючи охолоджену льодом 50% ТСА, і білкам дають випасти в осад протягом 30 хвилин при 4°С. Потім планшети промивають охолодженою льодом 25% ТСА. Додають сцинтилятор Supermix scintillation cocktail і планшети залишають для досягнення рівноваги протягом 1-2 годин, до того як здійснюють підрахунок, використовуючи Wallac MicroBeta 1450 PLUS сцинтиляційний лічильник. Інгібування активності кінази-2 змішаного походження (MLK2) Аналіз здійснюють, використовуючи формат планшетів Millipore Multiscreen, як описано для MLK1. Кожні 50-мкл аналітичної суміші містять 20мМ Hepes, pH7,2, 5мМ EGTA, 15мМ MgCl2, 25мМ β-гліцерофосфату, 100мкМ ATP, 0,25мкКі [ -32Ρ]ΑΤΡ, 0,1% BSA, 500мкг/мл мієлінового основного білку (UBI #13104), 2% ДМСО, різні концентрації сполуки, що тестується, і 3мкг/мл бакуловірусного GSTMLK1KDLZ. Зразки інкубують протягом 15 хвилин при 37°С. Реакцію зупиняють, додаючи охолоджену льодом 50% ТСА, і білкам дають випасти в осад протягом 30 хвилин при 4°С. Потім планшети промивають охолодженою льодом 25% ТСА. Додають сцинтилятор Supermix scintillation cocktail і планшети залишають для досягнення рівноваги протягом 1-2 годин, до того як здійснюють підрахунок. Інгібування активності кінази-3 змішаного походження (MLK3) Аналіз здійснюють, використовуючи формат Millipore Multiscreen пластин, як описано для MLK1. Коротше кажучи, кожні 50-мкл аналітичної суміші містять 20мМ Hepes, рН7,2, 5мМ EGTA, 15мМ MgCl2, 25мМ β-гліцерофосфату, 100мкМ АТР, 0,25мкКі [ -32Ρ]ΑΤΡ 0,1% BSA, 500мкг/мл мієлінового основного білку (UBI #13-104), 2% ДМСО, різні концентрації сполуки, що тестується, і 2 мкг/мл бакуловірусного GST-MLK1KD. Зразки 77159 44 інкубують протягом 15 хвилин при 37°С. Реакцію зупиняють, додаючи охолоджену льодом 50% ТСА, і білкам дають випасти в осад протягом 30 хвилин при 4°С. Потім планшети промивають охолодженою льодом 25% ТСА. Додають сцинтилятор Supermix scintillation cocktail і планшети залишають для досягнення рівноваги протягом 1-2 годин, до того як здійснюють підрахунок. Таблиця IV Інгібування MLK-ІК50 (нМ) або % інгібування при 100нМ Сполука А В С D 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 ЗІ 32 33 34 35 36 37 38 39 40 МLK1 22 31 8% 45 21 15 17 15 27 38 85% 19 26 37 78 28 20 93% 41 66% 35 47 44% 42 40% 74 31% 62% 22 59 22 76 9 30 46 24 50 45% 60% 26 17 58% 55% 21 MLK2 39% 46% 0% 45% 51% 76% 131 62% MLK3 8 17 30% 43% 4 8 9 4 16 19 30 13 15 15 20 16 26 9 27 49% 50% 23 28% 229 32 170 28 55% 12 64% 74 5 29 19 16 32% 62% 41% 30 56% 86 Інгібування активності trkA тирозинкінази Вибрані ізомерні сполуки конденсованих піролокарбазолів та ізоіндолонів можна протестувати за їх здатністю інгібувати кіназну активність цитоплазшчного домену trkA людини, що експресується бакуловірусом, використовуючи аналіз на основі ELISA, як було розкрито раніше [Angeles et al, Anal. Biochem. 236: 49-55, 1996]. Коротше кажучи, 96-ямкові мікротитраційні планшети покривають розчином субстрату (білок злиття рекомбінантної фосфоліпази С- 1/глутатіон S-трансферази людини [Rotin et al., EMBO J., 11: 559-567, 1992]. Дослідження інгібування здійснюють у 100мкл аналітичних сумішах, які 45 77159 46 містять 50мМ Hepes, рН7,4, 40мкМ АТР, 10мМ Arlington Heights, IL). Визначають площу смуги trk МnСl2, 0,1% BSA, 2% ДМСО та різні концентрації білка і порівнюють з NGF-стимульованим інгібітору. Реакцію ініціюють, додаючи trkA кіназу, і контролем. Система оцінок інгібування, яка залишають протікати реакцію протягом 15 хвилин базується на зменшенні процента смуги trk білка, при 37°С. Потім додають антитіло до може бути наступною: 0=немає зменшення; 1=1фосфотирозину (UBI), а потім вторинне, мічене 25%; 2=26-49%; 3=50-75%; 4=76-100%. лужною фосфатазою, козяче антимишаче IgG Інгібування активності кінази рецепторів антитіло, кон'юговане з ферментом (Bio Rad). фактора росту, одержаного з тромбоцитів Активність зв'язаного ферменту вимірюють за Сполуки ізомерних конденсованих допомогою посиленої системи детектування піролокарбазолів та ізоіндолонів можна дослідити (Gibco-BRL). Результати інгібування аналізують, відносно їх дії. що інгібує, на кіназну активність використовуючи сигмоїдальне рівняння (з домену кінази рецепторів PDGFP, що нахилом, що змінюється) залежності доза-реакція експресуються бакуловірусом, використовуючи за програмою GraphPad Prism. Концентрація, яка описаний вище ELISA аналіз trkA кінази. Аналізи забезпечує 50% інгібування активності кінази, здійснюють у 96-ямкових мікротитраційних називається як «ІK50». планшетах з нанесеним субстратом (PLC- /GST). Інгібування фосфорилювання trk, що Кожна 100-мкл реакційна суміш містить 50мМ стимулюється NGF, у препаратах цілих клітин HEPES, рН7,4, 20мкМ АТР, 10мМ МnСl2, 0,1% Інгібування фосфорилювання trk, що BSA, 2% ДМСО та різні концентрації інгібітору. стимулюється NGF, сполуками даного винаходу Реакцію ініціюють, додаючи заздалегідь можна здійснити, використовуючи модифіковану, фосфорильований рекомбінантний фермент як буде описано нижче, методику, описану раніше людини (10нг/мл PDGFRp). і залишають для [див. патент США №5516771]. NIH3T3 клітини, протікання реакції на 15 хвилин при 37°С. трансфіковані trkA, вирощують у 100-мм чашках. Передфосфорильований фермент одержують Субконфлюентні клітини примушують відчувати перед використанням внаслідок інкубування кінази нестачу сироватки шляхом заміни середовища на у буфері, що містить 20мкМ АТР і 10мМ МnСl2 те, яке не містить сироватки 0,05% BSA-DMEM, що протягом 1 години при 4°С. Детектування містить сполуку (100нМ і 1мкМ) або ДМСО фосфорильованого продукту здійснюють, додаючи (додають для контролю), протягом 1 години при кон'юговане з пероксидазою хрону (HRP) анти37°С. Потім до клітин додають NGF фосфотирозинове антитіло CUBI). Пізніше (Harlan/Bioproducts for Science) у концентрації додають розчин субстрату HRP, що містить 3,3'10нг/мл протягом 5 хвилин. Клітини піддають 5,5-тетраметилбензидин та перекис водню, і лізису у буфері, що містить детергент та інгібітор пластини інкубують протягом 10 хвилин при протеази. Очищені клітинні лізати нормалізують по кімнатній температурi. Реакцію гасять кислотою і білку, використовуючи метод ВСА, та зчитують одержані значення поглинання при імуноосаджують анти-trk антитілом. Поліклональне довжині хвилі 450нм, використовуючи Microplate анти-trk антитіло одержують проти пептиду, Bio-kinetics Reader (Bio-Tek Instrument EL 312e). відповідного 14 амінокислотам біля Результати інгібування аналізують, карбоксильного кінця trk [Martin-Zarica et al., Моl. використовуючи сигмоїдальне рівняння (з Cell. Biol. 9:24-33, 1989]. нахилом, що змінюється) залежності дозаІмунні комплекси збирають на кульках Protein відповідь за програмою GraphPad Prism. A Sepharose (Sigma Chem. Co., St.Lois, MO), Хоча даний винахід був розкритий досить розділяють за допомогою гель-електрофорезу на детально, фахівцям буде очевидно, що можливі SDS поліакрил-амідному гелі (SDS PAGE) та зміни та модифікації у запропонованих втіленнях і переносять на полівінілідендифторидну (PVDF) у переважних втіленнях винаходу, і що такі зміни мембрану. Мембрану піддають імуноблотингу, та модифікації можна здійснити, не відходячи від використовуючи анти-фосфотирозинове антитіло суті даного винаходу. Тому додана формула (UBI), з подальшим інкубуванням з козячим винаходу охоплює всі еквівалентні варіанти, які антимишачим IgG, зв'язаним з пероксидазою підпадають під об'єм даного винаходу. хрону (Bio-Rad Laboratories, Hercules, СА). Фосфорильовані білки візуалізують, використовуючи ECL (Amersham Life Science, Inc., Комп’ютерна верстка Т. Чепелева Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601