Сполуки, придатні для інгібування chk1

Реферат: Винахід стосується нової сполуки амінопіразолу або її фармацевтично прийнятної солі або сольвату цієї солі, яка пригнічує Chkl та є придатною для лікування раку. UA 101998 C2 (12) UA 101998 C2 UA 101998 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Цей винахід стосується сполуки амінопіразолу, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі, яка (який) пригнічує Chk1 і є придатною(-им) для лікування раків, які характеризуються дефектами реплікації дезоксирибонуклеїнової кислоти (ДНК), сегрегації хромосом або поділу клітин. Chk1 являє собою протеїнкіназу, яка розміщується у 5-3 напрямку відносно Atm та/або Atr на шляху трансдукції сигналу на стадії пошкодження ДНК. У клітинах ссавців Chk1 фосфорилується у відповідь на дію агентів, які спричинюють пошкодження ДНК, у тому числі іонізуюче опромінення (IR), ультрафіолетове (УФ) світло та гідроксисечовину. Таке фосфорилування, яке активує Chk1 у клітинах ссавців, залежить від Atr. Chk1 відіграє роль на Atr-залежній стадії пошкодження ДНК, що спричинює затримку на S-фазі та G2M. Chk1 фосфорилує та інактивує Cdc25A, фосфатазу подвійної специфічності, яка, як правило, дефосфорилує циклін E/Cdk2 із зупинкою проходження через S-фазу. Chk1 також фосфорилує та інактивує Cdc25C, фосфатазу подвійної специфічності, яка дефосфорилує циклін B/Cdc2 (відомий також як Cdk1) із затримкою розвитку клітинного циклу на межі G2 та мітозу (Fernery et al., Science, 277:1495-1497, 1997). У обох випадках регуляція активності Cdk індукує затримку клітинного циклу, що заважає клітинам розпочати мітоз при наявності пошкодження ДНК або нереплікованої ДНК. Повідомлялось про різні інгібітори Chk1. Дивись, наприклад, WO 05/066163, WO 04/063198, WO 03/093297 та WO 02/070494. Крім того, у WO 05/009435 розкритий ряд амінопіразолових інгібіторів Chk1. Незважаючи на це, все ще залишається потреба у інгібіторах Chk1, які є активними інгібіторами стадій клітинного циклу і які можуть ефективно діяти як фактори, що потенціюють дію агентів, що пошкоджують ДНК. Цей винахід пропонує нову сполуку амінопіразолу, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі, яка (який) є активним інгібітором Chk1. Згадана сполука, фармацевтично прийнятна сіль цієї сполуки або сольват цієї солі активно нейтралізує Chk1-опосередковану затримку клітинного циклу, індуковану обробкою агентами, які пошкоджують ДНК, у культурі клітин тканини та in vivo. Крім того, згадана сполука, фармацевтично прийнятна сіль цієї сполуки або сольват цієї солі за цим винаходом також забезпечує пригнічення Chk2, що може бути корисним при лікуванні раку. Більш того, відсутність пригнічення певних інших протеїнкіназ, таких як CDK1, може надавати терапевтичну перевагу завдяки зведенню небажаного впливу до мінімального рівня. Крім того, згадана сполука, фармацевтично прийнятна сіль цієї сполуки або сольват цієї солі за цим винаходом пригнічує проліферацію ракових клітин механізмом, який залежить від пригнічення Chk1. Цей винахід пропонує нову сполуку амінопіразолу, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі, яка (який) є антагоністом Chk1. Такі нові сполуки можуть задовольнити потребу в безпечному та ефективному лікуванні раку. Цей винахід пропонує сполуку, яка являє собою 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі. Варіантами здійснення цього винаходу, яким віддається перевага, є 5-(5-(2-(3амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрил, сіль 5-(5-(2-(3амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрилу з мурашиною кислотою, дигідрохлорид 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрилу та сіль 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрилу з метансульфоновою кислотою та моногідрат 5-[[5-[2-(3амінопропокси)-6-метоксифеніл]-1H-піразол-3-іл]аміно]мономезилату 2-піразинкарбонітрилу. За конкретним варіантом здійснення цей винахід пропонує сполуку, яка являє собою 5-(5-(2(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрил. Цей винахід пропонує такі солі 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрилу як сіль мурашиної кислоти, дигідрохлорид та сіль метансульфонової кислоти. Цей винахід також пропонує сполуку, яка являє собою моногідрат 5-[[5-[2-(3-амінопропокси)6-метоксифеніл]-1H-піразол-3-іл]аміно]мономезилату 2-піразинкарбонітрилу. Цей винахід пропонує моногідрат 5-[[5-[2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл]-1H-піразол-3іл]аміно]мономезилату 2-піразинкарбонітрилу у кристалічній формі, яка характеризується порошковою рентгенодифрактограмою, яка має піки при 2±0,02 = 12,64, 21,25 та 26,15. Цей винахід пропонує фармацевтичну композицію, яка містить 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі в комбінації із фармацевтично прийнятними носієм, розріджувачем або наповнювачем. 1 UA 101998 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Цей винахід пропонує спосіб лікування раку, який включає введення в організм пацієнта, який потребує такого лікування, ефективної кількості 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрилу, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі. Крім того, цей винахід також пропонує спосіб лікування раку, який включає введення в організм пацієнта, який потребує такого лікування, ефективної кількості 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрилу, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі, та піддавання пацієнта іонізуючому опроміненню. Більш того, цей винахід пропонує спосіб лікування раку, який включає введення в організм пацієнта, який потребує такого лікування, ефективної кількості 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2карбонітрилу, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі та хіміотерапевтичного агента. Цей винахід пропонує застосування 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрилу, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі для виготовлення лікарського засобу для лікування раку. Крім того, цей винахід також пропонує застосування 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин2-карбонітрилу, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі для виготовлення лікарського засобу для лікування раку, причому згадане лікування включає комбінацію терапії з іонізуючим опроміненням. Крім того, цей винахід пропонує застосування 5(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрилу, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі для виготовлення лікарського засобу для лікування раку комбінованою терапією, причому згаданий комбінований спосіб лікувального впливу включає введення згаданого лікарського засобу та введення одного або декількох інших хіміотерапевтичних агентів в організм того самого пацієнта. Цей винахід пропонує 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі для застосування в терапії. Цей винахід також пропонує 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі для застосування при лікуванні раку. Крім того, цей винахід також пропонує 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі та іонізуюче опромінення для застосування в терапії. Більш того, цей винахід пропонує 5-(5-(2-(3амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі та хіміотерапевтичний агент для застосування в терапії. Цей винахід пропонує 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі для застосування при лікуванні раку. Крім того, цей винахід також пропонує 5-(5-(2-(3амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі та іонізуюче опромінення для застосування при лікуванні раку. Більш того, цей винахід пропонує 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1Hпіразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі та хіміотерапевтичний агент для застосування при лікуванні раку. Цей винахід пропонує застосування 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрилу, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі для виготовлення лікарського засобу для лікування раку, причому згаданий лікарський засіб призначений для введення одночасно, окремо або послідовно з іонізуючим опроміненням. Цей винахід пропонує застосування 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрилу, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі для виготовлення лікарського засобу для лікування раку, причому згаданий лікарський засіб також містить хіміотерапевтичний агент або згаданий лікарський засіб призначений для введення одночасно, окремо або послідовно з хіміотерапевтичним агентом. Цей винахід пропонує 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі для одночасного, окремого або послідовного застосування в комбінації з іонізуючім опроміненням при лікуванні раку. Цей винахід пропонує 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6-метоксифеніл)-1H-піразол-3іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі для одночасного, окремого або послідовного застосування в комбінації ³з хіміотерапевтичним агентом при лікуванні раку. 2 UA 101998 C2 5 10 15 Цей винахід пропонує фармацевтичну композицію, яка містить 5-(5-(2-(3-амінопропокси)-6метоксифеніл)-1H-піразол-3-іламіно)піразин-2-карбонітрил, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі, разом із фармацевтично прийнятним носієм та факультативно іншими терапевтичними інгредієнтами. Крім того, цей винахід пропонує варіанти здійснення способів та застосування, яким віддається перевага, описані нижче, в яких хіміотерапевтичний агент вибраний з групи, яку складають 5-фторурацил, гідроксисечовина, гемцитабін, метотрексат, пеметрексед, доксорубіцин, етопозид, цисплатин та таксол. Нижче описані варіанти здійснення способів та застосування, яким віддається перевага, в яких ракові захворювання вибрані з групи, яку складають рак сечового міхура, рак товстої кишки, рак шлунка, рак печінки, рак легень, рак молочної залози, меланома, рак яєчників, рак підшлункової залози, мезотеліома, рак нирок та рак матки. Сполука, фармацевтично прийнятна сіль цієї сполуки або сольват цієї солі за цим винаходом можуть існувати у таутомерних формах. Якщо таутомерні форми існують, то кожна форма та їх суміші охоплюються цим винаходом. H N N H N N H N N H N N H N 20 25 30 35 40 45 50 55 H N Якщо не зазначено інше, цей винахід охоплює фармацевтично прийнятні солі сполуки Прикладу 3, а також сольвати вільної основи сполуки Прикладу 3 або фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки. Термін "фармацевтично прийнятна сіль" при вживанні у цьому описі означає солі сполуки Прикладу 3. Приклади фармацевтично прийнятних солей та способів їх одержання є звичайними для цієї галузі. Дивись, наприклад, Stahl et al., "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use", VCHA/Wiley-VCH, (2002); Gould P.L., "Salt selection for basic drugs", International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986); та Bastin et al. "Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities", Organic Process Research and Development, 4: 427-435 (2000). Крім фармацевтично прийнятних солей, цей винахід охоплює інші солі. Вони можуть використовуватися як проміжні сполуки при очищенні сполук або у підготовчих синтезах інших фармацевтично прийнятних солей, або можуть використовуватися для ідентифікування, характеризування або очищення. При вживанні у цьому описі термін "пацієнт" означає ссавця – людину або тварину. Більш конкретно, термін "пацієнт" означає людину. Термін "лікувати" (або "лікування") означає процес, який включає уповільнення, припинення, затримання, регулювання, ослаблення або зміну напрямку розвитку або ступеня тяжкості симптому, розладу, стану або захворювання. При вживанні у цьому описі термін "ефективна кількість" означає кількість або дозу сполуки, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі за цим винаходом, описаних нижче, окремо або в комбінації з іонізуючім опроміненням або хіміотерапевтичним агентом, яка при введенні разовою дозою або декількома дозами в організм пацієнта забезпечує бажаний вплив на пацієнта при діагностуванні або лікуванні. Ефективна кількість може бути легко визначена діагностом-фахівцем у цій галузі, який оглядає пацієнта, з урахуванням численних факторів, таких як конкретний вид ссавця; його розміри, вік та загальний стан здоров’я; одночасне введення інших агентів, при необхідності; конкретне захворювання, яке підлягає лікуванню; стадія або ступінь тяжкості захворювання; індивідуальна реакція пацієнта; конкретна застосовувана сполука; спосіб введення; характеристики біодоступності застосовуваного препарату; обраний режим дозування; застосування будь-яких супутніх лікарських засобів; та інші суттєві обставини. Без обмеження будь-яким чином обсягу цього винаходу доза у 202 150 мг/м становить ефективну кількість сполуки, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі, описаних нижче. При вживанні у цьому описі термін "комбінована терапія" означає окреме, одночасне або послідовне введення сполуки, фармацевтично прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі за цим винаходом та хіміотерапевтичного агента. Крім того, термін "комбінована терапія" означає комбінацію окремого, одночасного або послідовного введення сполуки, фармацевтично 3 UA 101998 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 прийнятної солі цієї сполуки або сольвату цієї солі за цим винаходом та іонізуючого опромінення. Сполуці Прикладу 3, фармацевтично прийнятній солі цієї сполуки або сольвату цієї солі може бути надана форма, прийнятна для введення до складу фармацевтичної композиції. Як такі, фармацевтичні композиції, які містять сполуку Прикладу 3, фармацевтично прийнятну сіль цієї сполуки або сольват цієї солі в комбінації з одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями, наповнювачами або розріджувачами, є важливим варіантом здійснення цього винаходу. Приклади фармацевтичних композицій та способи їх одержання добре відомі у галузі. Дивись, наприклад, REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, th A. Gennaro, et al., eds., 19 ed., Mack Publishing (1995). Сполука, фармацевтично прийнятна сіль цієї сполуки або сольват цієї солі за цим винаходом може бути введена будь-яким шляхом, який робить її (його) біодоступною (-ним), в тому числі пероральним та парентеральним шляхами. Наприклад, сполука, фармацевтично прийнятна сіль цієї сполуки або сольват цієї солі може бути введена (-ний) пероральним, підшкірним, внутрішньом’язовим, внутрішньовенним, черезшкірним, місцевим, інтраназальним, ректальним, букальним та подібними шляхами. Альтернативно сполука, фармацевтично прийнятна сіль цієї сполуки або сольват цієї солі може бути введена (-ний) шляхом вливання. Внутрішньовенне вливання є шляхом введення, якому віддається перевага. При вживанні у цьому описі наведені нижче терміни мають такі значення: "BCA" означає біцинхонінову кислоту; "boc або t-boc" означає трет-бутоксикарбоніл; "BSA" означає коров’ячий сироватковий альбумін; "CPMS" означає кількість імпульсів на хвилину; "DIAD" означає діізопропілазодикарбоксилат; "DMEM" означає модифіковане за способом Дульбекко середовище Ігла; "DMF" означає диметилформамід; "DMSO" означає диметилсульфоксид; "DPBS" означає фізіологічний розчин із фосфатним буфером Дульбекко; "DTT" означає дитіотреітол; "EDTA" означає етилендіамінтетраоцтову кислоту; "EtOH" означає етанол; "FBS" означає сироватку плода корови; "HEPES" означає N-2-гідроксіетилпіперазин-N’-2етансульфонову кислоту; "MEM" означає мінімальне підтримувальне середовище; "MeOH" означає метанол; "PBS" означає фізіологічний розчин із фосфатним буфером; "PBST" означає фізіологічний розчин із фосфатним буфером та Tween-20, "PI" означає йодид пропідію; "РНКаза" означає рибонуклеазу A; "SDS" означає додецилсульфат натрію; "к.т." означає кімнатну температуру; "TBS" означає фізіологічний розчин із трис-буфером; "TBST" означає фізіологічний розчин із трис-буфером та Tween-20; "THF" означає тетрагідрофуран; "TR-FRET" означає флуоресцентне резонансне перенесення енергії із часовим розподілом; "Трис" означає трис(гідроксиметил)амінометан; "Triton-X" означає 4-(1,1,3,3тетраметилбутил)фенілполіетиленгліколь-третоктилфеноксиполіетоксіетанолполіетиленгліколь-трет-октилфеніловий ефір; та "Tween-20" означає полісорбат 20. Результати наведених нижче випробувань ясно показують, що сполука, фармацевтично прийнятна сіль цієї сполуки або сольват цієї солі за цим винаходом корисна (-ний) як інгібітор Chk1, як інгібітор Chk2 та як протираковий засіб. У значенні, вживаному у цьому описі, "IC 50" означає концентрацію агента, яка спричинює 50% максимальної пригнічувальної реакції, можливої для цього агента, а "EC50" означає концентрацію агента, яка спричинює 50% максимальної реакції, можливої для цього агента. Біохімічне випробування Chk1 Вплив сполук на біохімічну активність Chk1 можна визначити із застосуванням TR-FRET (флуоресцентне резонансне перенесення енергії із часовим розподілом) випробування. При проведенні цього випробування мічене тербієм антитіло застосовують для виявлення фосфорилованого продукту, який утворюється в результаті реакції кінази, міченого флуоресцеїном субстрату та АТФ. Це антитіло зв’язується з фосфорилованим субстратом, результатом чого є підвищення показника TR-FRET, який обчислюється як відношення сигналу акцептора (флуоресцеїн) до сигналу донора (тербій). Кіназні реакції (25 мкл реакційні об’єми) здійснюють на 96-лункових чорних полістиролових планшетах із половинним ребром (Costa, номер за каталогом 3694). Реакції ініціюють доданням АТФ. Кінцеві умови проходження реакцій: 50 мМ гепес-буфера, pH 7,5, 0,005% (у об’ємному TM відношенні) TRITON X-100, 2 мМ DTT, 2 мМ MgCl2, 104 нМ PKC субстрату із флуоресцеїном (Invitrogen, номер за каталогом PV3506), 30 мкМ АТФ, 1,5 нМ активного ферменту Chk1 (Millipore, номер за каталогом 14-346), 4% (у об’ємному відношенні) DMSO і послідовні розведення сполуки за Прикладом 2 (послідовне розведення 1:3, розпочинаючи з 20 мкМ, 10 точок). Після додання АТФ реакційні суміші інкубують при кімнатній температурі протягом 75 хв, після чого реакцію припиняють шляхом додання 25 мкл 4 UA 101998 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 TR-FRET буфера для розведення (Invitrogen, номер за каталогом PV3574), який містить 10 мМ EDTA та 2,1 нМ Tb-pSer антитіла (Invitrogen, номер за каталогом PV3574). Загашені реакційні суміші інкубують при кімнатній температурі протягом 60 хв, після чого визначають показник TRFRET із застосуванням планшет-рідера Envision від компанії PerkinElmer із фільтрами з довжиною хвилі Ex340 нм, Em495 нм та Em520 нм. Для визначення IC50 відсоткове пригнічення для кожної концентрації обчислюють із застосуванням показника TR-FRET контрольних сполук, присутніх на кожному планшеті. Після цього десятиточкові дані концентрації сполуки підганяють до чотирипараметричного логістичного рівняння із застосуванням програми ActivityBase 4.0. Абсолютні значення IC 50 обчислюють за кривою, яку одержують. За результатами визначення за допомогою згаданого випробування сполука за Прикладом 2 має IC50