Спосіб лікування пов’язаного з bcl-2 порушення з використанням bcl-2-антисмислових олігомерів (варіанти), фармацевтична композиція (варіанти)

1. Спосіб лікування або профілактики раку людини, що включає введення вказаній людині, якій потрібне таке лікування або профілактика, bcl2-антисмислового олігонуклеотиду в одному або більше циклах лікування в дозі, що становить 0,0150мг/кг/доба у період 2-13 днів. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що bcl2-антисмисловий олігонуклеотид вводять у період 3-9 днів. 3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що bcl2-антисмисловий олігонуклеотид вводять у період 4-7 днів. 4. Спосіб за будь-яким з пп. 1-3, що включає введення 4-9мг/кг/доба bcl-2-антисмислового олігонуклеотиду. 2 UA 1 BCL-2 (19) ДЕРЖАВНИЙ Д ЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛ ЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ 3 77945 4 14. Спосіб за будь-яким з пп. 1-3 або 6, який відрісобою іринотекан, і вказана доза становить 5зняється тим, що вказаний рак являє собою рак 50мг/м 2/цикл. кровотворної системи, шкіри, кісткової тканини і 24. Фармацевтична композиція, що містить bcl-2м'яких тканин, статевої системи, сечовидільної антисмисловий олігонуклеотид в кількості, що засистеми, молочної залози, ендокринної системи, безпечує добову дозу 4-9 мг/кг, і фармацевтично мозку, центральної нервової системи, периферичприйнятний носій, призначена для введення проної нервової системи, нирок, легень, дихальної тягом 2-13 днів. системи, грудної клітини, шлунково-кишкового і 25. Фармацевтична композиція за п. 24, яка відрітравного тракту, лімфатичних вузлів, підшлункової зняється тим, що антисмисловий олігонуклеотид залози, гепатобіліарної системи або рак невідомоскладається з 10-35 основ і комплементарний прего місця первинного утворення. мРНК або мРНК, що кодує ген bcl-2. 15. Спосіб за будь-яким з пп. 1-3 або 6, який відрі26. Фармацевтична композиція за п. 25, яка відрізняється тим, що вказаний рак являє собою незняється тим, що антисмисловий олігонуклеотид ходжкінську лімфому, лімфому Ходжкіна, лейкоз, включає принаймні два зв'язки на основі фосфокарциному товстого кишечнику, карциному прямої ротіокислоти. кишки, рак підшлункової залози, рак молочної за27. Фармацевтична композиція за п. 26, яка відрілози, рак яєчника, рак передміхурової залози, нирзняється тим, що антисмисловий олігонуклеотид ково-клітинну карциному, гепатому, карциному включає послідовність TCTCCCAGCGTGCGCCAT жовчних протоків, хоріокарциному, рак шийки мат(SEQ.ID.NO: 17). ки, рак яєчка, карциному легень, карциному сечо28. Фармацевтична композиція, що містить bcl-2вого міхура, меланому, рак шиї і голови або мозку. антисмисловий олігонуклеотид в кількості, що за16. Спосіб за будь-яким з пп. 1-3 або 6, який відрібезпечує добову дозу 0,01-50мг/кг, призначена для зняється тим, що антисмисловий олігонуклеотид введення протягом 2-13 днів, в поєднанні з дозою складається з 10-35 основ і комплементарний препротиракового терапевтичного засобу, яка нижча, мРНК або мРНК, що кодує ген bcl-2. ніж ефективна доза вказаного протиракового те17. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що рапевтичного засобу самого по собі без bcl-2антисмисловий олігонуклеотид включає принаймні антисмислового олігонуклеотиду, і фармацевтично два зв'язки на основі фосфоротіокислоти. прийнятний носій, яка відрізняє ться тим, що вка18. Спосіб за п. 17, який відрізняється тим, що заний засіб являє собою дакарбазин, доцетаксель, антисмисловий олігонуклеотид включає послідовпаклітаксель, цисплатин, 5-фторурацил, доксоруність TCTCCCAGCGTGCGCCAT (SEQ. ID. N0.:17). біцин, етопозид, циклофосфамід, флударабін, 19. Спосіб лікування або профілактики раку у люіринотекан або цитозин-арабінозид (Аrа-С). дини, що включає введення вказаній людині, якій 29. Фармацевтична композиція, що містить bcl-2потрібне таке лікування або профілактика, одного антисмисловий олігонуклеотид в кількості, що заабо більше хімічних засобів і bcl-2-антисмислового безпечує добову дозу 10-50мг/кг; призначена для олігонуклеотиду в одному або більше циклах лікувведення протягом 2-13 днів, в поєднанні з дозою вання в дозі, що становить 0,01-50мг/кг/доба, де протиракового терапевтичного засобу, нижчою, хімічний засіб являє собою дакарбазин, доцетакніж ефективна доза вказаного протиракового тесель, паклітаксель, цисплатин, 5-фторурацил, докрапевтичного засобу самого по собі без bcl-2сорубіцин, етопозид, циклофосфамід, флударабін, антисмислового олігонуклеотиду, яка відрізняіринотекан або цитозин-арабінозид (Аrа-С), і де ється тим, що вказаний засіб являє собою дакарданий хімічний засіб вводиться в дозі, яка нижча, базин, доцетаксель, паклітаксель, цисплатин, 5ніж ефективна доза вказаного засобу самого по фтор урацил, доксорубіцин, етопозид, циклофоссобі без bcl-2-антисмислового олігонуклеотиду. фамід, флударабін, іринотекан або цитозин20. Спосіб за п. 19, який відрізняється тим, що арабікозид (Аrа-С) і фармацевтично прийнятний вказаний протираковий терапевтичний засіб являє носій. собою паклітаксел, і вказана доза становить 1030. Фармацевтична композиція за п.28 або за п.29, 135мг/м 2/цикл. яка відрізняється тим, що антисмисловий оліго21. Спосіб за п. 19, який відрізняється тим, що нуклеотид складається з 10-35 основ і комплеменвказаний протираковий терапевтичний засіб являє тарний пре-мРНК або мРНК, що кодує ген bcl-2. собою доцетаксел, і вказана доза становить 631. Фармацевтична композиція за п.30, яка відріз60мг/м 2/цикл. няється тим, що антисмисловий олігонуклеотид 22. Спосіб за п. 19, який відрізняється тим, що включає принаймні два зв'язки на основі фосфовказаний протираковий терапевтичний засіб являє ротіокислоти. собою флударабін, і вказана доза становить 2,532. Фармацевтична композиція за п.31, яка відріз25мг/м 2/цикл. няється тим, що антисмисловий олігонуклеотид 23. Спосіб за п. 19, який відрізняється тим, що включає послідовність TCTCCCAGCGTGCGCCAT вказаний протираковий терапевтичний засіб являє (SEQ.ID.NO.:17). 5 77945 Даний винахід відноситься до застосування bcl-2-антисмислових олігомерів для лікування і профілактики порушень, пов'язаних з bcl-2. Дані порушення включають рак, пухлини, карциноми і порушення, пов'язані з клітинною проліферацією. В одному з варіантів здійснення винаходу у великих дозах вводять bcl-2-антисмисловий олігомер. Даний винахід також відноситься до способу профілактики або лікування порушення, пов'язаного з bcl-2, зокрема злоякісної пухлини, що включає введення bcl-2-антисмислового олігомера протягом коротких періодів часу. Даний винахід, крім того, відноситься до застосування bcl-2антисмислових олігомерів для підвищення чутливості суб'єкта до протипухлинної терапії. Даний винахід також відноситься до фармацевтичних композицій, що включають один або більше bcl-2антисмислових олігомерів, які можуть включати однин або більше протипухлинних терапевтичних засобів. Традиційні підходи до лікування злоякісних пухлин є недостатньо специфічними. Більшість розроблених лікарських засобів являють собою природні продукти або похідні, які блокують ферментні шляхи або випадковим чином взаємодіють з ДНК. Більш того, застосування багатьох протиракових лікарських засобів супроводжується істотною токсичністю, що обмежує дозу, внаслідок їх низьких терапевтичних індексів. Наприклад, більшість протипухлинних лікарських засобів при введенні пацієнту приводять не тільки до загибелі ракових клітин, але і також до загибелі неракових клітин. Через наявність таких шкідливих ефектів виникає необхідність у способах лікування, які більш специфічно впливають на ракові клітини. Виявлено, що клас генів, онкогени, беруть участь у трансформації клітин і у підтримці ракового стану. Примітно, що порушення транскрипції даних генів або інгібування дії їх білкових продуктів іншим способом може приводити до сприятливого терапевтичного результату. Роль онкогенів в етіології багатьох типів раку у людини розкрита в [Bishop, 1987, "Cellular Oncogenes and Retroviruses", Science, 235: 305-311]. У багатьох типах раку людини понадекспресується ген, названий bcl-2 (В-клітинна лімфома/лейкоз-2), і така понадекспресія може бути асоційована з пухлиноутворенням [Tsujimoto et al., 1985, "Involvement of the bcl-2 gene in human follicular lymphoma", Science 228: 1440-1443]. Вважається, що ген bcl-2 бере участь в патогенезі раку, а також резистентності до лікування, головним чином, шляхом пролонгування рівня виживаності клітин, а не шляхом прискорення клітинного поділу. Ген bcl-2 людини бере участь в етіології деяких лейкозів, лімфоїдних пухлин, лімфом, нейропластом і карцином носоглотки, передміхурової залози, молочної залози і товстого кишечнику [Croce et al., 1987, "Molecular Basis Of Human В and Τ Cell Neoplasia, in: Advance in Viral Oncology, 7: 35-51, G. Klein (ed.), New York: Raven Press; Reed et al., 1991, Differential expression of bcl-2 protooncogene in neuroblastoma and other human tumor cell lines of neural origin", Cancer Res. 51: 6529-38; Yunis et al., 1989, "Bcl-2 and other genomic altera 6 tions in the prognosis of large-cell lymphomas", N. Engl. J. Med. 320: 1047-54; Campos et al., 1993, "High expression of bcl-2 protein in acute myeloid leukemia is associated with poor response to chemotherapy", Blood 81: 3091-6; McDonnell et al., 1992, "Expression of the protooncogene bcl-2 and its association with emergence of androgen-independent prostate cancer", Cancer Res. 52: 6940-4; Lu et al., 1993, «Bcl-2 protooncogene expression in Epstein Barr Virus-Associated Nasopharyngeal Carcinoma", Int. J. Cancer 53: 29-35; Bonner et al., 1993, "bcl-2 protooncogene and the gastrointestinal mucosal epithelial tumor progression model as related to proposed morphologic and molecular sequences", Lab. Invest. 68: 43А]. Виявлено, що bcl-2 понадекспресується в різних пухлинах, включаючи неходжкінську лімфому, рак легень, рак молочної залози, рак ободової і прямої кишки, рак передміхурової залози, рак нирки, гострий і хронічний лейкоз [Reed, 1995, "Regulation of apoptosis by bcl-2 family proteins and its role in cancer and chemoresistance", Curr. Opin. Oncol. 7: 541-6]. Антисмислові олігонуклеотиди являють собою потенційні терапевтичні засоби для специфічного порушення функції онкогену. Дані короткі (звичайно довжиною менше 30 основ) одноланцюгові синтетичні молекули ДНК характеризуються послідовністю, комплементарною ділянкам пре-мРНК або мРНК гена-мішені, і формують гібридний дуплекс за рахунок об'єднання основ в пари водневими зв'язками. Дана гібридизація може порушува ти експресію як мРНК-мішені, так і білка, що кодується нею, і, таким чином, може перешкоджати подальшим взаємодіям і передачі сигналу. Оскільки одна молекула мРНК визначає отримання множини копій білка, інгібування мРНК може бути більш ефективним і більш специфічним, ніж порушення, що викликається на білковому рівні, наприклад, здійснюване шляхом інгібування активного центра ферменту. Синтетичні олігонуклеотиди, комплементарні мРНК онкогену c-myc, застосовували для специфічного інгібування продукції білка c-myc, запобігаючи таким чином зростанню клітин лейкозу людини in vitro [Holt et al., 1988, Моl. Cell Biol. 8: 963-73; Wicstrom et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 1028-32]. Олігонуклеотиди також застосовували як специфічні інгібітори ретровірусів, включаючи вірус імунодефіциту людини [Zamecnik and Stephenson, 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75: 280-4; Zamecnik et al., 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83: 4143-6]. Показано, що застосування антисмислових олігонуклеотидів з їх здатністю націлюватися і інгібувати окремі гени, що відносяться до раку, є перспективними в преклінічних моделях раку. Показано, що дані антисмислові олігомери на основі фосфоротіоату здатні інгібувати експресію bcl-2 in vitro і придушувати пухлини в мишачих моделях з ксенотрансплантатами лімфоми. Резистентність деяких злоякісних пухлин до хіміотерапії зв'язують з експресією онкогену bcl-2 [Grover et al., 1996, "Bcl-2 expression in malignant melanoma and its prognostic significance", Eur. J. Surg. Oncol. 22 (4): 7 77945 8 347-9]. Введення bcl-2-антисмислового олігомера режими за даним винаходом надають терапевтичможе вибірково знижувати рівні білка bcl-2 в ксено ефективний спосіб лікування раку, що характенотрансплантатах пухлини у лабораторних мишей ризується зниженою тривалістю і токсичністю, і, як [Jansen et al., 1998, "bcl- 2 antisense therapy результат, підвищеною переносимістю. chemosensitizes human melanoma in SCID mice", В одному з варіантів здійснення даний винахід Nat. Med. 4 (2): 2324]. Більш того введення bcl-2відноситься до способу лікування пов'язаного з антисмислового олігомера лабораторним мишам bcl-2 порушення і до фармацевтичної композиції у може приводити до підвищення чутливості ксенотформі дозованих одиниць, що включає великі дози рансплантатів пухлини до хіміотерапевтичних заbcl-2-антисмислового олігомера, так що ефективсобів [Jansen et al., 1998, "bcl-2 antisense therapy ною кількістю bcl-2-антисмислового олігомера у chemosenstizes human melanoma in SCID mice", вказаній фармацевтичній композиції є ефективна Nat. Med. 4 (2): 232-4]. У мишей системне лікувандоза, яка приблизно дорівнює 10-50 мг/кг/доба. ня bcl-2-антисмисловим олігомером знижувало Відповідно до даного здійснення винаходу ефеккількість білка bcl-2 і посилювало апоптоз. Лікутивною кількістю bcl-2-антисмислового олігомера у вання тільки bcl-2-антисмисловим олігомером хавказаній фармацевтичній композиції є доза, ефекрактеризувалося помірною протипухлинною актитивна для досягнення рівня bcl-2-антисмислового вністю, однак підвищена протипухлинна активність олігомера в кровотоці не менше 30нМ (наномоспостерігається при його поєднанні з DTIC (також лей). В одному з варіантів здійснення рівень bcl-2відомим як дакарбазин). У десяти з тринадцяти антисмислового олігомера в кровотоці становить тварин після введення bcl-2-антисмислового олі1-10мкМ (мікромолей). В іншому варіанті здійсненгомера в поєднанні з лікуванням DTIC не детектуня необхідний рівень bcl-2-антисмислового оліговалось злоякісних ксенотрансплантатів меланоми. мера в кровотоці, який дорівнює принаймні 30нМ, Залишається гостра необхідність в розширенні досягається приблизно через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 таких протипухлинних способів лікування для боабо 10 годин після введення bcl-2-антисмислового ротьби з раком людини. олігомера. В іншому варіанті здійснення рівень bclДля багатьох пацієнтів з раком прогноз є не2-антисмислового олігомера в кровотоці, який довтішним, незважаючи на зростаючу доступність рівнює принаймні 30нМ, досягається приблизно біологічної, лікарської і комбінаторної терапії. Начерез 36-48 годин, переважно через 24-35 години, приклад, незважаючи на те, що DTIC звичайно більш переважно через 12-24 години; найбільш використовується для лікування метастазуючих переважно раніше 12 годин. меланом, у небагатьох пацієнтів розвивалося довЩе в одному варіанті здійснення даний винагострокове поліпшення. Більш того, розширені хід відноситься до способу лікування пов'язаного з клінічні випробування III фази не продемонструваbcl-2 порушення і до фармацевтичної композиції, ли поліпшення виживаності при використанні DTIC що включає дозу bcl-2-антисмислового олігомера, в поєднанні з цисплатином, кармустином і тамокщо підлягає введенню протягом короткого періоду сифеном [Chapman et al., 1999, "Phase III multicenчасу, тобто менше 14 днів, так що ефективна кільter randomized trial of the Dartmouth regimen versus кість bcl-2-антисмислового олігомера, що підлягає dacarbazine in patients with metastatic melanoma", J. введенню протягом такого короткочасного циклу Clin. Oncol. 17 (9): 2745-51]. Такі серйозні недоліки лікування, змінюється приблизно від 0,01 до при лікуванні раку підкреслюють необхідність в 50мг/кг/доба. В іншому варіанті здійснення ефекнових підходах до лікування. тивною кількістю bcl-2-антисмислового олігомера, Даний винахід відноситься до фармацевтичщо підлягає доставці протягом такого короткочасних композицій, що включають bcl-2-антисмислові ного циклу лікування, є доза, ефективна для досяолігомери, і способів лікування пов'язаних з bcl-2 гнення рівня bcl-2-антисмислового олігомера в порушень. Винахід частково оснований на виявкровотоці не менше 30нМ. В іншому варіанті здійленні авторами винаходу того, що введення пацієснення рівень bcl-2-антисмислового олігомера в нтам у великих дозах bcl-2-антисмислового олігокровотоці становить 1-10мкМ (мікромолей). мера для лікування пов'язаного з bcl-2 порушення, Ще в одному варіанті здійснення даний виназокрема раку, приводить до значущи х терапевтичхід відноситься до способу лікування пов'язаного з них реакцій, включаючи низьку токсичність, високу bcl-2 порушення і до фармацевтичної композиції, переносимість і поліпшення виживаності. Авторащо включає дозу bcl-2-антисмислового олігомера, ми винаходу також виявлено, що введення пацієнщо підлягає введенню протягом короткого періоду там у великих дозах bcl-2-антисмислових олігомечасу, тобто менше 14 днів, в поєднанні з одним рів протягом короткого періоду часу, тобто , менше або більше протираковими лікарськими засобами, 14 днів, також приводить до значущих терапевтипричому вказаний протираковий лікарський засіб чних реакцій при лікуванні раку у пацієнтів. Дані вводять перед, після або одночасно з bcl-2терапевтичні режими, додатково, включали ввеантисмисловим олігомером. Ефективна кількість дення bcl-2-антисмислового олігомера у великих bcl-2-антисмислового олігомера, що підлягає введозах в короткі проміжки часу в поєднанні з одним денню під час здійснення такого короткого протоабо більше протираковими лікарськими засобами. колу лікування, змінюється приблизно від 0,01 до Несподівано введення зниженої дози одного або 50мг/кг/доба. Ефективна кількість протиракового більше протиракових лікарських засобів в поєдлікарського засобу, що підлягає введенню в поєднанні з короткостроковим введенням bcl-2нанні з bcl-2-антисмисловим олігомером, може антисмислового олігомера також демонструвало вводитися в стандартній дозі або альтернативно значущі терапевтичні реакції при лікуванні пацієнможе вводитись у зниженій дозі. Відповідно до тів зі злоякісними пухлинами. Так, терапевтичні даного варіанту здійснення винаходу е фективною 9 77945 10 кількістю bcl-2-антисмислового олігомера у вказаситься до патологічного стану, при якому канцероній фармацевтичній композиції є доза, ефективна генний агент або агенти викликають трансформадля досягнення рівня bcl-2-антисмислового олігоцію здорової клітини в аномальну клітину, з мера в кровотоці, що дорівнює принаймні 30нМ. У подальшою інвазією прилеглих тканин даними конкретному варіанті здійснення рівень bcl-2аномальними клітинами, з подальшим можливим антисмислового олігомера в кровотоці досягається поширенням даних аномальних клітин з током приблизно через 36-48 годин, переважно через 24крові і лімфи в регіональні лімфатичні вузли і/або 35 години, найбільш переважно приблизно через віддалені місця, тобто метастазування. 24 години. Термін «пухлина» або «зростання», що викоЗа даним винаходом пов'язане з bcl-2 поруристовується тут, означає підвищену масу тканишення включає пухлини, рак, карциноми і поруни, яка включає великі кількості клітин внаслідок шення, пов'язані з проліферацією клітин. прискореного поділу клітин і/або уповільненої За даним винаходом короткостроковий період швидкості клітинної загибелі. Пухлини можуть відвключає період часу для введення bcl-2носитися до злоякісних або не злоякісних типів антисмислового олігомера, який складає менше 14 раку. днів у діапазоні від 2 до 13 днів, переважно у діаВираз «лікування раку», що використовується пазоні від 3 до 9 днів, від 4 до 7 днів або від 5 до 6 тут, означає інгібування реплікації ракових клітин, днів. інгібування поширення, зниження розміру пухлини, За даним винаходом доза bcl-2зменшення або зниження числа ракових клітин в антисмислового олігомера, що підлягає введенню організмі, або поліпшення або пом'якшення симппротягом короткострокового періоду, змінюється у томів захворювання, зумовлених раком. Лікування діапазоні від 0,01 до 50мг/кг/доба, переважно вважається терапевтичним, якщо при ньому споскладає від 4 до 9мг/кг/доба і більш переважно стерігається зниження смертності і/або захворюскладає від 5 до 7мг/кг/доба. ваності, або зниження виявів тяжкості захворюДаний винахід також включає фармацевтичні вання за рахунок зменшення в організмі кількості композиції, що включають ефективну кількість одзлоякісних клітин. ного або більше bcl-2-антисмислових олігомерів, Вираз «профілактика раку», що використовущо підлягають введенню відповідно до способів ється тут, означає запобігання виникненню або даного винаходу. Вказані фармацевтичні композирецидиву патологічного стану, викликаного раком. ції включають дозу bcl-2-антисмислового олігомеПо суті, лікування, яке перешкоджає, інгібує або ра у діапазоні від 0,01 до 50 мг/кг/доба, що перезаважає метастазуванню, пухлинному зростанню важно складає від 4 до 9мг/кг/доба і більш або злоякісній проліферації, володіє профілактичпереважно складає від 5 до 7мг/кг/доба, в поєдною активністю. нанні з фармацевтично прийнятним носієм. В інВираз «антисмисловий олігомер», що викоришому варіанті здійснення фармацевтичні композистовується тут, відноситься до антисмислового ції за даним винаходом також включають один або олігонуклеотиду або його аналогу або похідного, і більше додаткових протиракових лікарських засовідноситься до набору хімічних речовин, які розпібів. Вказані фармацевтичні композиції складаютьзнають полінуклеотидну послідовність-мішень ся для доставки у вигляді тривалої інфузії або у шляхом водневого скріплення згідно з Уотсономвигляді одного або більше болюсних введень, або Криком з нуклеотидними основами послідовносв один або більше прийомів введення протягом тей-мішеней. Послідовності-мішені можуть являти протоколу лікування. собою РНК або ДНК, і можуть бути одноланцюгоЗгідно з даним винаходом, фармацевтичні вими або дволанцюговими. Молекули-мішені композиції за даним винаходом, що включають включають як необмежувальні приклади преbcl-2-антисмисловий олігомер, можуть вводитися мРНК, мРНК і ДНК. окремо від фармацевтичних композицій, що вклюВираз «експресія гена bcl-2», що використовучають протиракові лікарські засоби. ється тут, відноситься до транскрипції гена bcl-2, Ці та інші аспекти даного винаходу будуть що приводить до продукування пре-мРНК bcl-2, більш зрозумілі при посиланні на наступні фігури і мРНК bcl-2 і/або білка bcl-2. докладний опис. Термін «похідне», що використовується тут, Вираз «пов'язане з bcl-2 порушення», що вивідноситься до будь-якого фармацевтично прийнкористовується тут, відноситься до захворювання, ятного гомолога, аналога або фрагмента, відповів якому бере участь регуляція гена bcl-2, і включає дного фармацевтичній композиції за даним винаяк необмежувальні приклади захворювання за ходом. участю клітин, що експерсують ген bcl-2. Таке поВираз «лікарський засіб», що використовуєтьрушення включає захворювання за участю клітин ся тут, відноситься до будь-яких молекул, сполук або тканин, які експресують ген bcl-2 або ген, поабо способів лікування, які використовуються при в'язаний з bcl-2, або захворювання за участю клілікуванні захворювання. По суті, протираковий тин або тканин, які більше не експресують ген bclлікарський засіб являє собою молекулу, сполуку 2, але в нормі роблять це. Порушення, пов'язані з або протокол лікування, які використовуються при bcl, включають як необмежувальні приклади, залікуванні пухлин або раку. Протокол лікування хворювання, пов'язані з проліферацією клітин і включає як необмежувальні приклади опроміненвиди патології клітин або тканин, що перебувають ня, дієтологічну терапію, фізіотерапію і психологічпід впливом клітин, які експерсують ген bcl-2 або ну терапію. ген, пов'язаний з bcl-2. Вираз «хімічний засіб» або «протираковий заТермін «рак», що використовується тут, відносіб», або «протипухлинний засіб», або «протира 11 77945 12 ковий лікарський засіб», що використовується тут, носії можуть являти собою стерильні рідини, такі відноситься до будь-якої молекули, сполуки або як сольові розчини у воді, або масла, включаючи способу лікування, які використовуються при лікумасла нафтового, тваринного, рослинного або ванні пухлин або раку. синтетичного походження, такі як арахісове масло, Вираз «мала доза» або «знижена доза», що соєве масло, мінеральне масло, кунжутне масло і використовується тут, відноситься до дози, меншої тому подібні. Сольовий розчин являє собою переінтервалу, що звичайно вводиться, тобто меншої важний носій, де фармацевтична композиція ввостандартної дози, що рекомендується [Physicians' диться внутрішньовенно. Сольові розчини і водні Desk Reference, 54th Edition (2000)] або схожим розчини декстрози і гліцерину також можуть застоджерелом. Така доза може бути достатньою для совува тися як рідкі носії, зокрема, для розчинів інгібування клітинної проліферації або впливає на для ін'єкції. Відповідні фармацевтичні наповнювачі людину сприятливим чином, або демонструє ефевключають крохмаль, глюкозу, лактозу, сахарозу, ктивність з меншими побічними ефектами в порівжелатин, солод, рис, муку, крейду, силікагель, стенянні зі стандартними способами лікування раку. арат натрію, гліцерину моностеарат, тальк, хлорид Нормальні інтервали доз, що застосовуються для натрію, сухе молоко, гліцерин, пропіленгліколь, конкретних терапевтичних засобів і стандартних воду, етанол і тому подібне. Якщо потрібно, носій способів лікування раку, що використовуються для може також містити малі кількості зволожуючого конкретних захворювань, розкриті, наприклад, у або емульгуючого засобу або засобів, буферних у [Physicians' Desk Reference, 54th Edition (2000) або відношенні рН. Дані композиції можуть приймати в Cancer: Principles & Practice of Oncology. DeVita, форму розчинів, суспензій, емульсій, таблеток, Jr., Hellman, and Rosenberg (eds.) 2nd edition, пілюль, капсул, порошків, препаратів уповільненоPhiladelphia, PA: J. B. Lippincott Co., 1985]. го вивільнення і тому подібного. Композиція може Вираз «знижена токсичність», що використобути складена у вигляді супозиторію з традиційвується тут, відноситься до знижених побічних ними зв'язуючими речовинами і носіями, такими як ефектів і видів токсичності, що спостерігаються в тригліцериди. Приклади відповідних фармацевтизв'язку з введенням антисмислових олігонуклеочних носіїв описані [Е. W. Martin в Reminton's тидів і протиракових засобів зі зменшеною триваPharmaceutical Sciences]. Прикладами відповідних лістю і/або в менших дозах в порівнянні з іншими фармацевтичних носіїв є різні катіонні ліпіди, протоколами лікування і дозованими препаратами, включаючи як необмежувальні приклади N-(1-(2,3що включають стандартні протоколи лікування і діолеїлокси)пропіл)-N,N,N-триметиламонію хлорид дозовані препарати, описані у [Physicians' Desk (DOTMA) і діолеїлфосфатидил етанол амін Reference, 54th Edition (2000) або в Cancer: Princi(DOPE). Ліпосоми також є відповідними носіями ples & Practice of Oncology, DeVita, Jr., Hellman, для антисмислових олігомерів за винаходом. Такі and Rosenberg (eds.) 2nd edition, Philadelphia, PA: композиції повинні містити терапевтично ефективJ. B. Lippincott Co., 1985]. ну кількість сполуки разом з відповідною кількістю Вираз «цикл лікування» або «цикл», що виконосія, так що утворюється форма для належного ристовується тут, відноситься до періоду, протявведення пацієнту. Препарат повинен задовольгом якого вводиться один терапевтичний засіб або няти вимогам способу введення. послідовність терапевтичних засобів. В одному зі Вираз «фармацевтично прийнятні солі», що здійснень, що включає застосування великої дози використовується тут, відноситься до солей, отриbcl-2-антисмислового олігомера в комбінації зі маних з фармацевтично прийнятних, по суті, нетостандартною дозою протиракового терапевтичного ксичних кислот і основ, включаючи неорганічні і засобу, переважний період часу для одного циклу органічні кислоти і основи. Фармацевтично прийнлікування складає менше 14 діб. За даним винаятні солі включають ті, що утворені вільними аміходом розглядається принаймні один цикл лікуногрупами, такі як ті, що походять з соляної, фосвання, в основному, переважно більше одного форної, оцтової, щавлевої, винної кислот і т.д., і ті, циклу. У деяких випадках потрібний один цикл ліщо утворені вільними карбоксильними групами, кування, як, наприклад, у разі досягнення значутакі як ті, що походять з гідроксидів натрію, калію, щого терапевтичного ефекту після одного циклу амонію, кальцію, заліза, ізопропіламіну, триетилалікування. міну, 2-етиламіноетанолу, гістидину, прокаїну і т.д. Вираз «фармацевтично прийнятний носій», що Фігура 1: Знижена регуляція ВсІ-2 через 5 днів використовується тут, відноситься до середовищалікування bcl-2-антисмисловим олігомером в біоносія, яке не перешкоджає ефективній біологічній птатах меланоми пацієнта №12. активності активного інгредієнта. Вказане несуче Фігура 2: Фарбування TUNEL пухлинних біосередовище є, по суті, інертним хімічно і нетоксичптатів пацієнта №12 (права нога) до лікування (а), ним. після лікування Bcl-2-антисмисловим олігомером Вираз «фармацевтично прийнятний», що ви(b) і після лікування Bcl-2-антисмисловим олігомекористовується тут, означає схвалений регулююром плюс DTIC. чою установою Федерального уряду або уряду Фігура 3: Ме тастази шкіри (а) і зображення держави, або вказаний у Фармакопеї США або комп'ютерної томографії тазової області (b) пацієіншій загальновідомій фармакопеї для застосунта №12 до або після трьох циклів лікування bcl-2вання у тварин, або, більш конкретно, для застоантисмисловим олігомером плюс DTIC в дозі сування у людей. 6,5мг/кг/доба. Термін «носій», що використовується тут, відДаний винахід відноситься до композицій і носиться до розчинника, ад'юванта, наповнювача способів для застосування bcl-2-антисмислового або носія, з яким вводять лікарський засіб. Такі олігомера для лікування або профілактики пору 13 77945 14 шень, пов'язаних з bcl-2, особливо раку. Винахід філактиці або лікуванню захворювання. Приклади також відноситься до фармацевтичних композицій, передбачуваних терапевтичних засобів включають що включають bcl-2-антисмисловий олігомер, а біологічні засоби, хімічні засоби і терапевтичні також до способів для їх використання при профіспособи лікування (наприклад, лікування опромілактичному і терапевтичному лікуванні, включаюненням). чи доставку лікарського засобу і лікувальні режиВ іншому конкретному варіанті здійснення вими. нахід відноситься до bcl-2-антисмислового олігоВинахід частково оснований на відкритті того, мера, який вводять людині в комбінації з одним що короткі цикли лікування bcl-2-антисмисловим або більше протираковими засобами для профілаолігомером, одним або в комбінації з іншими терактики або лікування раку. Такі протиракові засоби певтичними засобами, надавали пацієнтам, які включають одну і більше молекул, сполук або спостраждають від захворювання, несподівано сильні собів лікування, що володіють протираковою актиефекти поліпшення. Даний короткий лікувальний вністю. Приклади передбачуваних протиракових режим має додаткові переваги для суб'єкта - люзасобів включають біологічні засоби, хімічні засоби дини, такі як зручність, зниження психологічної і терапевтичні способи лікування (наприклад, лікутравми і велика імовірність згоди з проведенням вання опроміненням). даного протоколу лікування. Інші відкриття вклюЩе в одному конкретному варіанті здійснення чають: (1) короткі цикли лікування і знижені дози винахід відноситься до bcl-2-антисмислового олітерапевтичних засобів при використанні в комбігомера, який вводять людині в комбінації з одним нації з bcl-2-антисмисловим олігомером, (2) спроабо більше протираковими засобами в знижених щені способи доставки фармацевтичних композидозах для профілактики або лікування раку. Такі цій, що включають, принаймні, один bcl-2способи лікування можуть включати великі, станантисмисловий олігомер з іншими терапевтичними дартні або малі дози одного або більше bcl-2засобами або без них, і (3) клінічно значущі лікуантисмислових олігомерів, причому цикли лікуванвальні режими для багатьох типів раку. Таким чиня можуть бути великої або малої тривалості. У ном, виявлення авторами того, що bcl-2конкретному варіанті здійснення даний винахід антисмисловий олігомер при введенні протягом відноситься до особливо великої дози bcl-2короткого циклу лікування може викликати у пацієантисмислового олігомера, який вводять людині в нтів з порушенням, пов'язаним з bcl-2, значущі комбінації з одним або більше протираковими затерапевтичні реакції, надає поліпшені і відповідні собами в сильно знижених дозах протягом укородля застосування фармацевтичні композиції, курси чених циклів лікування для профілактики або лікулікування і способи доставки. вання раку. Винахід також частково оснований на відкритті Даний винахід відноситься до застосування того, що великі дози bcl-2-антисмислового олігоодного або більше bcl-2-антисмислових олігомерів мера, одного або в комбінації з іншими терапевтиабо їх по хідних, аналогів, фрагментів, гібридів, чними засобами, володіє зниженою токсичністю, міметиків і тому подібного. Термін «похідне», що включаючи несподівано незначні ефекти в поріввикористовується тут, відноситься до будь-якого нянні з більшістю стандартних способів лікування фармацевтично прийнятного гомолога, аналога раку, і надає пацієнтам, які страждають від захвоабо фрагмента, відповідного фармацевтичній комрювання, ефекти поліпшення. Лікувальний режим, позиції за даним винаходом. Антисмислові олігощо включає введення великої дози bcl-2мери, придатні для застосування за винаходом, антисмислового олігомера, виявляє додаткові певключають нуклеотидні олігомери з довжиною у реваги для суб'єкта людини, такі як скорочення діапазоні 5-10, 10-20, 20-50, 50-75 або 75-100 осциклів лікування, менше число медикаментів або нов, переважно з довжиною 10-40 основ, більш поліпшена ефективність. переважно з довжиною 15-25 основ, найбільш пеВ одному зі здійснень bcl-2-антисмисловий реважно довжиною 18 основ. Послідовності-мішені олігомер вводять людині протягом короткого циклу можуть являти собою РНК або ДНК, і можуть бути лікування для профілактики або лікування пов'яодноланцюговими або дволанцюговими. Молекузаного з bcl-2 порушення. Ще в одному здійсненні ли-мішені включають як необмежувальні приклади bcl-2-антисмисловий олігомер вводять людині у пре-мРНК, мРНК і ДНК. В одному зі здійснень мовеликих дозах для профілактики або лікування лекулою-мішенню є мРНК. У переважному варіанті пов'язаного з bcl-2 порушення. В доповнення до здійснення молекулою-мішенню є пре-мРНК bcl-2 впливу на уражені тканини, bcl-2-антисмисловий або мРНК bcl-2. У конкретному варіанті здійснення олігомер може захищати або лікувати нормальні антисмислові олігомери гібридизуються з частитканини, що включають тканини, які містять клітиною послідовності в будь-якому місці пре-мРНК ни, що в нормі експресують ген bcl-2. Крім того, bcl-2 або мРНК bcl-2. Антисмислові олігомери пеbcl-2-антисмисловий олігомер може захищати або реважно вибрані з тих олігомерів, які гібридизулікувати нормальні тканини, які, хоча і не експреються з сайтом ініціації трансляції, донорним сайсують ген bcl-2, наражаються на небезпеку за ратом сплайсингу, акцепторним сайтом сплайсингу, хунок уражених тканин. сайтами транспортування або сайтами деградації У конкретному варіанті здійснення даний випре-мРНК або мРНК bcl-2. нахід, крім того, відноситься до застосування комДеякі bcl-2-антисмислові олігомери випробобінованого лікування для профілактики і лікування вували раніше з різними результатами [див., напов'язаного з bcl-2 порушення. Таке лікування приклад, SEQ.ID.NOS: 1-17 в патенті США включає застосування однієї або більше молекул, №5831066]. Приклади bcl-2-антисмислових олігосполук або способів лікування, які сприяють промерів, які можуть використовуватися за даним ви 15 77945 16 находом, детально описані в [заявці на патент антисимслові олігомери, які характеризуються, США №08/217082, нині патент США №5734033; в наприклад, меншою гомологією за послідовністю, заявці на патент США №08/465485, нині патент більшою або меншою мірою модифікованими нукСША №5831066; і в заявці на патент США леотидами, або більшою або меншою довжиною в №09/080285, нині патент США №6040181], кожна з порівнянні з такими за переважними здійсненнями, яких включена сюди повністю як посилання. але які все одно викликають відповідь при клінічВ одному з варіантів здійснення bcl-2ному лікуванні, також знаходяться в об'ємі даного антисмисловий олігомер, по суті, комплементарвинаходу. ний частині пре-мРНК або мРНК bcl-2, або частині Антисмислові олігомери можуть являти собою пре-мРНК або мРНК, що відноситься до bcl-2. У РНК або ДНК або їх по хідні. Конкретна форма анпереважному варіанті здійснення bcl-2тисмислового олігомера може впливати на такі антисмисловий олігомер гібридизується з частифармакокінетичні параметри олігомера як біодосною сайта ініціації трансляції кодуючого ланцюга тупність, метаболізм, період півжиття і т.д. По суті, пре-мРНК. У більш переважному здійсненні bcl-2даний винахід відноситься до похідних антисмисантисмисловий олігомер гібридизується з частилового олігомера, що володіють властивостями, ною кодуючого ланцюга пре-мРНК, яка включає які посилюють захоплення клітинами і стійкість до сайт ініціації трансляції гена bcl-2 людини. Більш нуклеаз, які поліпшують скріплення з послідовніспереважно bcl-2-антисмисловий олігомер включає тю-мішенню або посилюють розщеплення або депослідовність ТАС, комплементарну послідовності градацію послідовності-мішені. ініціації AUG пре-мРНК або мРНК bcl-2. Антисмислові олігомери можуть містити осноВ іншому здійсненні bcl-2-антисмисловий оліви, що включають, наприклад, фосфоротіокислоти гомер гібридизується з частиною донорного сайта або метилфосфонові кислоти. Альтернативно ансплайсингу кодуючого ланцюга пре-мРНК гена bclтисмислові олігомери, можуть являти собою сумі2 людини. Переважно, даний нуклеотид включає ші олігомерів, що містять комбінації нуклеотидів на послідовність СА, комплементарну донорній пооснові фосфодіефірів, фосфоротіокислоти і/або слідовності сплайсингу GT гена bcl-2, і переважно метилфосфонової кислоти, серед інших. Такі олідодатково включає фланкуючі частини довжиною гомери можуть володіти модифікаціями, що вклю5-50 основ, більш переважно приблизно 10-20 осчають як необмежувальні приклади 2-О'-алкільні нов, які гібридизуються з частинами кодуючого або 2-О'-галогенові модифікації цукру, модифікації ланцюга гена bcl-2, які фланкують вказану донорну кістяка (наприклад, метилфосфонат, фосфородиділянку сплайсингу. тіоат, фосфор дитіоат, формацеталь, 3'Ще в одному варіанті здійснення bcl-2тіоформацеталь, сульфон, сульфамат, сполуки з антисмисловий олігомер гібридизується з частинітроксидним кістяком, морфоліно похідні і похідні ною акцепторного сайта сплайсингу кодуючого пептидної нуклеїнової кислоти (ПНК)) або похідні, ланцюга пре-мРНК гена bcl-2 людини. Переважно де модифіковані групи основ [Egholm, et al, 1992, даний нуклеотид включає послідовність ТС, комPeptide Nucleic Acids (PNA)-Oligonucleotide Anaплементарну акцепторній послідовності сплайсинlogues With An Achiral Peptide Backbone]. В іншому гу AG гена bcl-2, і варіанті здійснення антисмислові олігомери вклюакцепторній послідовності сплайсингу AG bcl-2 і чають кон'югати олігонуклеотидів і їх похідних переважно додатково включає фланкуючі частини [Goodchild, 1990, "Conjugates of oligonucleotides довжиною 5-50 основ, більш переважно приблизно and modified oligonucleotides: a review of their syn10-20 основ, які гібридизуються з частинами кодуthesis and properties", Bioconjug. Chem. 1(3): 165ючого ланцюга гена bcl-2, які фланкують вказану 87]. акцепторну ділянку сплайсингу. У іншому здійсДля терапевтичного застосування in vivo пененні bcl-2-антисмисловий олігомер гібридизується реважним є похідне фосфоротіокислоти bcl-2з частинами пре-мРНК або мРНК, що беруть антисмислового олігомера, принаймні частково, участь в сплайсингу, транспорті або деградації. внаслідок високої стійкості до деградації. В одному Фахівець в даній області може визначити, що з варіантів здійснення bcl-2-антисмисловий олігоантисмислові олігомери, придатні для використанмер являє собою гібридний олігомер, що містить ня за винаходом, можуть також бути, по суті, комоснови - похідні фосфоротіокислоти. В іншому плементарні іншим ділянкам пре-мРНК або мРНК варіанті здійснення bcl-2-антисмисловий олігомер bcl-2 і можуть утворювати гібриди. Фахівцеві в дамістить принаймні один фосфоротіокислотний ній області також буде зрозуміло, що антисмислові зв'язок. В іншому здійсненні bcl-2-антисмисловий олігомери, які гібридизуються з частиною преолігомер містить принаймні три фосфоротіокисломРНК або мРНК bcl-2, послідовність яких не є потні зв'язки. Ще в одному здійсненні bcl-2ширеною в транскриптах неспоріднених генів, є антисмисловий олігомер містить принаймні три переважними, оскільки підтримують специфічність суміжні фосфоротіокислотні зв'язки. Ще в одному лікування. здійсненні bcl-2-антисмисловий олігомер повністю Структура послідовності bcl-2-антисмислового складений фосфоротіокислотними зв'язками. Споолігомера може також визначатися шляхом емпісоби отримання похідних олігонуклеотидів добре ричного тестування і оцінки клінічної ефективності відомі в даній області. Див., наприклад, [Stein et незалежно від властивої йому гомології за посліal., 1988, Nucl. Acids Res., 16: 3209-21 (фосфоротідовністю або гібридизацією з геном bcl-2, з преокислота); Blake et al., 1985, Biochemistry 24: 6132мРНК bcl-2, з мРНК bcl-2 або з нуклеотидними по38 (метилфосфонова кислота); Morvan et al., 1986, слідовностями, що відносяться до bcl-2. Фахівцеві Nucl. Acids Res. 14: 5019-32 (альфав даній області буде зрозуміло, що bcl-2дезоксинуклеотиди); Monia et al., 1993, "Evaluation 17 77945 18 of 2'-modified oligonucleotides containing 2'deoxy біологічній активності bcl-2-антисмислового олігоgaps as antisense inhibitors of gene expression", J. мера, фа хівець в даній області може зрозуміти, що Biol. Chem. 268: 14514-22 (2'-Оефективна кількість bcl-2-антисмислового олігомеметилрибонуклеозиди); Asseline et al., 1984, Proc. ра може бути різною для кожного суб'єкта. Natl. Acad. Sci. USA 81: 3297-3301 (акридин); В іншому здійсненні bcl-2-антисмисловий оліKnorre et al., 1985, Biochemie 67: 783-9; Vlassov et гомер знаходиться в дозі, введення якої приводить al., 1986, Nucl. Acids Res. 14: 4065-76 (N-2до концентрації bcl-2-антисмислового олігомера в хлорацетиламін і феназин); Webb et al., 1986, Nucl. циркулюючій плазмі, яка дорівнює принаймні 30нМ Acids Res. 14: 7661-74 (5-метил-N4-N4(наномолей). Як зрозуміло фахівцеві в даній облаетаноцитозин); Boutorin et al., 1984, FEBS Letters сті, переважними можуть бути більш низькі або 172: 43-6 (Fe-етилендіамінтетраоцтова кислота більш високі концентрації bcl-2-антисмислового (EDTA) і аналоги); Chi-Hong et al, 1986, Proc. Natl. олігомера в плазмі, в залежності від способу ввеAcad. Sci. USA 83: 7147-51 (5-гліциламідо-1,10-одення. Наприклад, із згадуванням малої частини фенантролін); і Chu et al., 1985, Proc. Natl. Acad. можливих способів, концентрація bcl-2Sci. USA 82: 963-7 (похідні діетилентриамінантисмислового олігомера в плазмі, яка дорівнює пентаоцтової кислоти (DTPA)]. принаймні 30нМ, може відповідати внутрішньовенЕфективна доза bcl-2-антисмислового олігоному, підшкірному, внутрішньом'язовому способам мера, що підлягає введенню протягом циклу лікувведення, способу введення з вивільненням, що вання, знаходиться у діапазоні приблизно 0,01-0,1, контролюється, і пероральному способу введення. 0,1-1 або 1-10мг/кг/доба. Доза bcl-2В іншому прикладі будуть, навпаки, вимагатися антисмислового олігомера, що підлягає введенню, відносно низькі концентрації bcl-2-антисмислового може залежати від способу введення. Наприклад, олігомера в циркулюючій плазмі, наприклад при внутрішньовенне введення bcl-2-антисмислового використанні способів місцевого введення, таких олігомера, ймовірно, буде приводити до отриманяк, наприклад, внутрішньопухлинне введення, внуня всім організмом більшої дози, ніж доза, отритрішньоочне введення або імплантація, які проте мана всім організмом внаслідок місцевого застоможуть місцево приводити до високих, клінічно сування композиції, що містить bcl-2ефективних концентрацій bcl-2-антисмислового антисмисловий олігомер. В одному зі здійснень олігомера на місцевому рівні. bcl-2-антисмисловий олігомер вводять підшкірно в Ще в одному здійсненні концентрація bcl-2дозі, що становить 0,01-10мг/кг/доба; більш переантисмислового олігомера в циркулюючій плазмі, важно в дозі, що становить 4-9мг/кг/доба; найщо дорівнює принаймні 30нМ (наномолей), досябільш переважно в дозі, що становить 5гається приблизно через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 7мг/кг/доба. В іншому здійсненні bcl-210 годин після введення bcl-2-антисмислового оліантисмисловий олігомер вводять внутрішньовенно гомера. Ще в одному здійсненні концентрація bclв дозі 0,01-10мг/кг/доба; більш переважно в дозі 42-антисмислового олігомера в циркулюючій плаз9мг/кг/доба; найбільш переважно в дозі 5мі, яка дорівнює принаймні 30нМ, досягається 7мг/кг/доба. Ще в одному здійсненні bcl-2приблизно через 36-48 годин, переважно через 24антисмисловий олігомер вводять місцево в дозі 35 годин, більш переважно через 12-24 годин; 0,01-10мг/кг/доба; більш переважно в дозі 0,01найбільш переважно раніше ніж через 12 годин. 0,1мг/кг/доба; найбільш переважно в дозі 1У конкретному здійсненні доза bcl-25мг/кг/доба. Фахівцеві в даній області очевидно, антисмислового олігомера є великою дозою. В що місцеве введення може приводити до отриодному зі здійснень концентрація bcl-2мання організмом загалом більш низьких доз. Наантисмислового олігомера в циркулюючій плазмі приклад, способи місцевого введення, такі як внускладає принаймні 30нМ. В іншому здійсненні рітрішньопухлинне введення, внутрішньоочне вень bcl-2-антисмислового олігомера в циркуляції введення або імплантація, можуть місцево продудорівнює 1-10мкМ. Ще в одному здійсненні рівень кувати високі концентрації bcl-2-антисмислового bcl-2-антисмислового олігомера в кровотоці станоолігомера, але представляти відносно низькі дози вить 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10мкМ. Ще в одному відносно всієї маси тіла. Таким чином, в деяких здійсненні рівень bcl-2-антисмислового олігомера випадках передбачається, що місцеве введення в кровотоці, який дорівнює 1-10мкМ, досягається bcl-2-антисмислового олігомера приводить до дози приблизно через 36-48 годин, переважно через 24на цілий організм, яка дорівнює приблизно 0,0135 годин, більш переважно через 12-24 годин, 5мг/кг/доба. найбільш переважно раніше ніж через 12 годин. В іншому здійсненні протягом циклу лікування Велика доза може досягатися шляхом декільвводять особливо велику дозу bcl-2кох введень за цикл. Альтернативно, велика доза антисмислового олігомера, яка знаходиться у діаможе вводитися у вигляді одного болюсного ввепазоні приблизно 10-20, 20-30 або 30-50мг/кг/доба. дення. Одиничне введення великої дози може Більш того ефективна доза конкретного bcl-2приводити до тимчасового збільшення концентраантисмислового олігомера може залежати від доції bcl-2-антисмислового олігомера в циркулюючій даткових факторів, включаючи тип раку, стан заплазмі вище 30нМ. Більш того одиничне введення хворювання або стадію захворювання, токсичність особливо великих доз bcl-2-антисмислового олігоолігомера, швидкість захоплення олігомера зломера може приводити до концентрацій bcl-2якісними клітинами, а також масу тіла, вік і стан антисмислового олігомера в циркулюючій плазмі, здоров'я суб'єкта, якому має бути введення антищо складають від 1мкМ до 10мкМ, після періоду смислового олігомера. Через наявність in vivo банабагато меншого ніж 12 годин, навіть менше ніж гатьох факторів, здатних перешкоджати дії або через одну годину. 19 77945 20 Крім того, доза bcl-2-антисмислового олігомемРНК bcl-2 і гібридизується з відповідними оснора може змінюватися в залежності від конкретного вами РНК-мішені. bcl-2-антисмислового олігомера, що використовуВ одному зі здійснень G3139 вводять протягом ється. Доза, що застосовується, ймовірно, відо2-13 діб в дозі, що складає від 0,01 до бражає урівноважений набір міркувань, серед яких 10мг/мг/доба. У конкретному здійсненні G3139 стабільність, локалізація, захоплення клітинами і вводять протягом 2-3, 4-5, 6-7, 8-9, 10-11 або 12-13 токсичність конкретного bcl-2-антисмислового олідіб в дозі, що становить 0,01-1, 1-2, 2-3, 3-4, 4-5, 5гомера. Наприклад, конкретний хімічно модифіко6, 6-7, 7-8, 8-9 або 9-10мг/мг/доба; більш переважваний bcl-2-антисмисловий олігомер може виявляно в дозі 4-9мг/кг/доба і найбільш переважно в дозі ти велику стійкість до деградації, або може 5-7мг/кг/доба. В іншому здійсненні G3139 вводять виявляти більш високу афінність відносно нуклеїу вказаній дозі протягом 3-9 діб. Ще в одному здійнової кислоти-мішені, або може сильніше захопсненні G3139 вводять у вказаній дозі протягом 4-7 люватися клітиною або клітинним ядром; і всі ці діб. У переважному здійсненні G3139 вводять у міркування можуть дозволяти застосування малих вказаній дозі протягом 5-6 діб. У найбільш передоз. Ще в одному прикладі конкретний хімічно моважному здійсненні G3139 вводять в дозі 5дифікований bcl-2-антисмисловий олігомер може 7мг/кг/доба протягом 5-6 діб. Даний винахід відновиявляти меншу токсичність, ніж інші антисмислові ситься до інших переважних лікувальних режимів олігомери, і тому може застосовуватися у великих в залежності від конкретного bcl-2-антисмислового дозах. Таким чином, для даного bcl-2олігомера, що підлягає застосуванню, або в залеантисмислового олігомера відповідна доза для жності від конкретного способу введення, або в введення може бути відносно великою або відносзалежності від того, чи водять bcl-2но малою. Відповідні дози можуть оцінюватися антисмисловий олігомер як частину комбінованого фа хівцем в даній області і даний винахід передбалікування, наприклад, в комбінації з протираковим чає тривалу оцінку оптимальної схеми лікування терапевтичним засобом. Добова доза може вводля конкретного виду bcl-2-антисмислових олігодитися шляхом одного або більше прийомів лікумерів. Добова доза може вводитися шляхом одновання. го або більше прийомів лікування. В іншому здійсненні G3139 вводять в особлиІнші фактори, які потрібно розглядати при виво великій дозі, що становить приблизно 10значенні ефективної дози bcl-2-антисмислового 50мг/кг/доба. У конкретному здійсненні G3139 ввоолігомера, включають те, чи буде олігомер вводидять в особливо високій дозі, що становить притися в комбінації з іншими терапевтичними засоблизно 10-15, 16-20, 21-25, 26-30, 31-35, 36-40, 41бами. У таких випадках відносна токсичність іншо45 або 46-50мг/кг/доба. У подальшому здійсненні го терапевтичного засобу може бути показанням G3139 вводять у вказаній дозі протягом періоду до застосування bcl-2-антисмислового олігомера в тривалістю від 1 до 10 діб. Ще в одному здійсненні малих дозах. Альтернативно, лікування великими G3139 вводять у вказаній дозі протягом періоду дозами bcl-2-антисмислового олігомера може притривалістю від 2 до 7 діб. Ще в одному здійсненні водити до використання комбінованих способів G3139 вводять у вказаній дозі протягом періоду лікування зі зниженими дозами терапевтичних тривалістю від 3 до 4 діб. У переважному здійсзасобів. У конкретному здійсненні лікування особненні G3139 вводять в дозі, що становить 26-30, ливо великою дозою bcl-2-антисмислового оліго31-35, 36-40, 41-45 або 46-50мг/кг/доба, як мінімум, мера може приводити до використання комбіновапротягом 1 доби. Даний винахід відноситься до них способів лікування з сильно зниженими інших переважних лікувальних режимів в залежнодозами терапевтичних засобів. Наприклад, лікусті від конкретного bcl-2-антисмислового олігомевання пацієнта 10, 20, 30, 40 або 50мг/кг/доба bclра, що підлягає застосуванню, або в залежності 2-антисмислового олігомера може далі підвищувавід конкретного способу введення, або в залежноти чутливість суб'єкта до протиракових засобів. У сті від того, чи вводять bcl-2-антисмисловий оліготаких випадках особливо велику дозу bcl-2мер як частину комбінованого лікування, наприантисмислового олігомера комбінують, наприклад, клад, в комбінації з протираковим терапевтичним з сильно укороченою схемою опромінення. В інзасобом. Добова доза може вводитися шляхом шому прикладі особливо велика доза bcl-2одного або більше прийомів лікування. антисмислового олігомера приводить до значного Описаний тут винахід відноситься до способу посилення дії протиракових терапевтичних засопрофілактики або лікування раку, що включає ввебів. дення терапевтично ефективної кількості bcl-2Крім того, особливо великі дози bcl-2антисмислового олігомера, в тому числі, як необантисмислового олігомера можуть також дозволямежувальний приклад, великі дози даного оліготи скорочувати період введення терапевтично мера, людині, яка потребує такого лікування. Крім ефективної кількості bcl-2-антисмислового оліготого, даний винахід відноситься до застосування мера і/або протиракового засобу, так що тривакороткого періоду введення bcl-2-антисмислового лість циклу лікування складає набагато менше 14 олігомера. Нормальні, не ракові клітини діляться з діб. частотою, характерною для конкретного клітинного В одному зі здійснень протягом короткого циктипу. При трансформації клітини в злоякісний стан лу лікування із заданою тривалістю менше двох відбувається клітинна проліферація, що не конттижнів вводять bcl-2-антисмисловий олігомер на ролюється, і зниження клітинної загибелі, і тому основі фосфоротіокислоти довжиною 18 основ з ознакою ракового типу клітин є невпорядкований послідовністю 5'-TCTCCCAGCGTGCGCC AT-3', поділ клітин або клітинне зростання. Приклади який є комплементарним першим шести кодонам типів раку включають як необмежувальний список 21 77945 22 неходжкінську лімфому, лімфому Ходжкіна, лейкоз легень можна лікувати фармацевтичною компози(наприклад, гострий лейкоз, такий як гострий лімцією, що включає bcl-2-антисмисловий олігомер в фоцитарний лейкоз, гострий мієлоцитарний лейкомбінації з паклітакселом, доцетакселом, етопокоз, хронічний мієлоїдний лейкоз, хронічний лімзидом і/або цисплатином. Як інший приклад, нехофоцитарний лейкоз, множинна мієлома), джкінську лімфому можна лікувати фармацевтичкарциному товстого кишечнику, карциному прямої ною композицією, що включає bcl-2кишки, рак підшлункової залози, рак молочної заантисмисловий олігомер в комбінації з циклофослози, рак яєчника, рак передміхурової залози, нирфамідом, CHOP, етопозидом, блеоміцином, мітокково-клітинну карциному, гепатому, карциному сантроном і/або цисплатином. Як інший приклад, жовчних протоків, хоріокарциному, рак шийки матрак шлунка можна лікувати фармацевтичною комки, рак яєчка, карциному легень, карциному сечопозицією, що включає bcl-2-антисмисловий олігового міхура, меланому, рак шиї і голови, рак голомер в комбінації з цисплатином. Як інший приклад, вного мозку, рак з невідомим місцем виникнення, рак підшлункової залози можна лікувати фарманеоплазми, рак периферичної нервової системи, цевтичною композицією, що включає bcl-2рак центральної нервової системи, пухлини (наантисмисловий олігомер в комбінації з гемцитабіприклад, фібросаркома, міксосаркома, ліпосарконом. Дані комбіновані способи лікування також ма, хондросаркома, остеогенна саркома, хордома, можуть використовуватися для профілактики раку злоякісна гемангіома, ендстеліома, лімфангіосарабо рецидиву раку. кома, лімфангіоендотеліома, синовіома, мезотеліКомбіноване лікування також включає, в допоома, пухлина Юїнга, лейоміосаркома, рабдоміосавнення до введення bcl-2-антисмислового олігоркома, плоскоклітинна карцинома, базальномера, застосування однієї або більше молекул, клітинна карцинома, аденокарцинома, карцинома сполук або способів лікування, які сприяють пропотових залоз, карцинома сальних залоз, папілярфілактиці або лікуванню раку, причому дані молена карцинома, папілярні аденокарциноми, цистакули, сполуки або способи лікування включають як денокарцинома, медулярний рак, бронхогенна необмежувальні приклади хімічні засоби, засоби карцинома, семинома, ембріональна карцинома, імунотерапії, протиракові вакцини, антиангіогенні пухлина Вільмса, дрібноклітинна карцинома лезасоби, цитокіни, гормонотерапію, генотерапію і гень, епітеліальна карцинома, гліома, астроцитоопромінення. ма, медулобластома, краніофарингіома, епендиВ одному зі здійснень раковому хворому в домома, пінеалома, ангіобластома, слухова повнення до bcl-2-антисмислового олігомера ввоневрома, олігодендрогліома, менінгіома, нейробдять один або більше хімічних засобів. Приклади ластома і ретинобластома), хвороба важких ланхімічних засобів, що відносяться до даного винацюгів, метастазування або будь-яке захворювання ходу, включають як необмежувальний список циабо порушення, що характеризується неконтротозин-арабінозид, таксоїди (наприклад, паклітакльованим або аномальним клітинним зростанням. сел, доцетаксел), антитубулінові засоби У переважному здійсненні даний винахід до(наприклад, паклітаксел, доцетаксел, епотилон В датково відноситься до застосування комбінованої або їх аналоги), цисплатин, карбоплатин, адріамітерапії для профілактики або лікування раку. Нацин, тенопозид, мітозантрон, 2приклад, рак передміхурової залози можна лікувахлордезоксинаденозин, алкілуючі засоби (наприти фармацевтичною композицією bcl-2клад, циклофосфамід, мехлоретамін, тіоепа, хлоантисмислового олігомера в комбінації з паклітакрамбуцил, мелфалан, кармустин (BSNU), ломусселом, доцетакселом, мітоксантроном і/або антатин (CCNU), циклотосфамід, бусульфан, гоністом андрогенового рецептора (наприклад, дибромманіт, стрептозотоцин, мітоміцин С і цисфлутамідом). Як інший приклад рак молочної задихлордіаміноплатина (II) (DDP), цисплатин, тіотелози можна лікувати фармацевтичною композиціпа), антибіотики (наприклад, дактиноміцин (раніше єю, яка включає bcl-2-антисмисловий олігомер в актиноміцин), блеоміцин, мітраміцин, антраміцин), комбінації з доцетакселом, паклітакселом, цисплаантиметаболіти (наприклад, метотрексат, 6тином, 5-фторурацилом, доксорубіцином і/або VPмеркаптопурин, 6-тіогуанін, цитарабін, 516 (етопозид). Як інший приклад, лейкоз можна фтор урацил, флударабін, гемцитабін, дакарбазин, лікувати фармацевтичною композицією, що вклютемозоламід), аспаргіназу, бацилу Кальметтачає bcl-2-антисмисловий олігомер в комбінації з Герена, дифтерійний токсин, гексаметилмеламін, флударабіном, цитозин-арабінозидом, гемтузимагідроксисечовину, LYSODREN®, аналоги нуклеобом (MYLOTARG), да унорубіцином, метотрексазидів, рослинні алкалоїди (наприклад, таксол, пактом, вінкристином, 6-меркаптопурином, ідарубіцилітаксел, камптотецин, топотекан, іринотекан ном, мітоксантроном, етопозидом, аспаргіназою, (CAMPTOSAR, СРТ-11), вінкристин, алкалоїди преднізоном і/або циклофосфамідом. Як інший барвінку, такі як вінбластин), подофілотоксин приклад, мієлому можна лікувати фармацевтич(включаючи похідні, такі як епіподофілотоксин, VPною композицією, що включає bcl-216 (етопозид), VM-26 (теніпозид)), цитохалазин В, антисмисловий олігомер в комбінації з дексаметаграміцидин D, етидій-бромід, еметин, мітоміцин, зоном. Як інший приклад, меланому можна лікувапрокарбазин, мехлоретамін, антрацикліни (наприти фармацевтичною композицією, що включає bclклад, даунорубіцин (раніше дауноміцин), доксору2-антисмисловий олігомер в комбінації з дакарбабіцин, ліпосомальний доксорубіцин), дигідроксіанзином. Як інший приклад, рак ободової і прямої трациндіон, мітоксантрон, мітраміцин, актиноміцин кишки можна лікувати фармацевтичною композиD, прокаїн, тетракуїн, лідокаїн, пропранолол, пуцією, що включає bcl-2-антисмисловий олігомер в роміцин, антимітотичні засоби, абрин, рицин А, комбінації з іринотеканом. Як інший приклад, рак екзотоксин псевдомонади, фактор зростання нер 23 77945 24 вової тканини, тромбоцитарний фактор зростання, 60мг/м 2/доба або нижче) доцетакселу. В іншому тканинний активатор плазміногену, алдеслейкін, здійсненні раковому хворому вводять bcl-2алутамін, анастрозл, бікалутамід, біаоміцин, бусуантисмисловий олігомер і малу дозу (наприклад, льфан, капецитабін, карбоплаїн, хлорабусил, клавід 10 до 135мг/м 2/доба або нижче) паклітакселу. дрибін, циларабін, дакліноміцин, естрамустин, Ще в одному здійсненні раковому хворому вводять флоксурідин (floxuridhe), гамцитабін, гозереїн bcl-2-антисмисловий олігомер і малу дозу (напри(gosereine), ідарубіцин, ітофосфамід, лейпроліду клад, від 2,5 до 25мг/м 2/доба або нижче) флудара(lauprolide) ацетат, левамізоль, ломустин, мехлобіну. Ще в одному здійсненні раковому хворому ретамін, магестрол, ацетат, меркаптопурин, месвводять bcl-2-антисмисловий олігомер і малу дозу на, мітоланк, пегаспергазу, пентослатин, пікамі(наприклад, від 0,5 до 1,5г/м 2/доба або нижче) цицин, рітуксимаб (riuxhmab), кампат-1, тозин-арабінозиду (Ага-С). страплозоцин, тіогуанін, третиноїн, вінорелбін або Тому даний винахід відноситься до застосуїх будь-які фрагменти, члени їх сімейств або похівання одного або більше bcl-2-антисмислових олідні, включаючи їх фармацевтично прийнятні солі. гомерів, які вводять перед, після або одночасно з Також до даного винаходу відносяться композиції, малими дозами хімічних засобів для профілактики що включають один або більше хімічних засобів або лікування раку. (наприклад, FLAG, CHOP). FL AG включає флудаВ одному зі здійснень вказаним хімічним засорабін, цитозин-арабінозид (Аrа-С) і G-CSF. CHOP бом є цисплатин, наприклад, PLATINOL або включає циклофосфамід, вінкристин, доксорубіцин PLATINOL AQ (Bristol Myers) в дозі у діапазоні 5і преднізон. 10, 10-20, 20-40 або 40-75мг/м 2/цикл. В іншому В одному зі здійснень вказаним хімічним засоздійсненні пацієнту з раком яєчника вводять дозу бом є дакарбазин в дозі у діапазоні 200цисплатину в діапазоні 7,5-75мг/м 2/цикл. В іншому 2 4000мг/м /цикл. У переважному здійсненні вказана здійсненні пацієнту з раком сечового міхура вводоза знаходиться у діапазоні 700-1000мг/м 2/цикл. дять дозу цисплатину в діапазоні 5-50мг/м 2/цикл. В іншому здійсненні вказаним хімічним засобом є В іншому здійсненні вказаним хімічним засофлударабін в дозі у діапазоні 25-50мг/м 2/цикл. В бом є карбоплатин, наприклад PARAPL ATIN (Brisіншому здійсненні вказаним хімічним засобом є tol Myers) в дозі у діапазоні 2-4, 4-8, 8-16, 16-35 цитозинарабінозид (Ara-С) в дозі у діапазоні 200або 35-75мг/м 2/цикл. В іншому здійсненні пацієнту 2 2000мг/м /цикл. В іншому здійсненні вказаним хіз раком яєчника вводять дозу карбоплатину в діамічним засобом є доцетаксел в дозі у діапазоні пазоні 7,5-75мг/м 2/цикл. В іншому здійсненні паціє1,5-7,5мг/кг/цикл. В іншому здійсненні вказаним нту з раком сечового міхура вводять дозу карбопхімічним засобом є паклітаксел в дозі у діапазоні латину в діапазоні 5-50мг/м 2/цикл. В іншому 5-15мг/кг/цикл. Ще в одному здійсненні вказаним здійсненні пацієнту з раком яєчок вводять дозу хімічним засобом є цисплатин в дозі у діапазоні 5карбоплатину в діапазоні 2-20мг/м 2/цикл. 20мг/кг/цикл. Ще в одному здійсненні вказаним В іншому здійсненні вказаним хімічним засохімічним засобом є 5-фторурацил в дозі у діапазобом є циклофосфамід, наприклад, CYTOXAN (Brisні 5-20мг/кг/цикл. Ще в одному здійсненні вказаним tol Myers Squibb) в дозі у діапазоні 0,25-0,5, 0,5-1, хімічним засобом є доксорубіцин в дозі у діапазоні 1-2, 2-5, 5-10, 10-20, 20-40мг/кг/цикл. В іншому 2-8мг/кг/цикл. Ще в одному здійсненні вказаним здійсненні пацієнту зі злоякісною пухлиною ввохімічним засобом є епіподофілотоксин в дозі у дять дозу циклофосфаміду в діапазоні 4діапазоні 40-160мг/кг/цикл. Ще в одному здійсненні 40мг/кг/цикл. В іншому здійсненні пацієнту з добвказаним хімічним засобом є циклофосфамід в роякісною пухлиною вводять дозу циклофосфамідозі у діапазоні 50-200мг/кг/цикл. Ще в одному ду в діапазоні 0,25-2,5мг/кг/цикл. здійсненні вказаним хімічним засобом є іринотекан В одному зі здійснень вказаним хімічним засов дозі у діапазоні 50-75, 75-100, 100-125 або 125бом є цитарабін, наприклад, CYTOSAR-U (Phar150мг/м 2/цикл. Ще в одному здійсненні вказаним macia & Upjohn) в дозі у діапазоні 0,5-1, 1-4, 4-10, хімічним засобом є вінбластин в дозі у діапазоні 10-25, 25-50 або 50-100мг/м 2/цикл. В іншому здійс2 3,7-5,4, 5,5-7,4, 7,5-11 або 11-18,5мг/м /цикл. Ще в ненні пацієнту з гострим лейкозом вводять дозу одному здійсненні вказаним хімічним засобом є цитарабіну в діапазоні 10-100мг/м 2/цикл. В іншому вінкристин в дозі у діапазоні 0,7-1,4 або 1,5здійсненні пацієнту з менінгеальним лейкозом 2мг/м 2/цикл. Ще в одному здійсненні вказаним хівводять дозу цитарабіну в діапазоні 0,5мічним засобом є метотрексат в дозі у діапазоні 5мг/м 2/цикл. В іншому здійсненні раковому хворо2 3,3-5, 5-10, 10-100 або 100-1000мг/м /цикл. му вводять дозу цитарабінових ліпосом, наприУ переважному здійсненні даний винахід доклад DEPOCYT (Chiron Corp.), у діапазоні 5датково відноситься до застосування малих доз 50мг/м/цикл. хімічного засобу при введенні його як частини ліВ іншому здійсненні вказаним хімічним засокувального режиму з bcl-2-антисмисловим олігобом є дакарбазин, наприклад, DTIC або DTIC мером. Наприклад, початкове лікування bcl-2DOME (Ba yer Corp.) в дозі у діапазоні 15антисмисловим олігомером підвищує чутливість 250мг/м 2/цикл або у діапазоні 0,2-2мг/кг/цикл. В пухлини до подальшої обробки дозою хімічного іншому здійсненні пацієнту з хворобою Ходжкіна засобу, причому дана доза близька до нижньої вводять дозу дакарбазину в діапазоні 15межі дозування, прийнятого при введенні хімічного 150мг/м 2/цикл. В іншому здійсненні пацієнту зі злозасобу у відсутності bcl-2-антисмислового олігоякісною меланомою вводять дозу дакарбазину в мера, або менше нього. В одному зі здійснень радіапазоні 0,2-2мг/кг/цикл. ковому хворому вводять bcl-2-антисмисловий оліВ іншому здійсненні вказаним хімічним засогомер і малу дозу (наприклад, від 6 до бом є топотекан, наприклад, HYCAMTIN (Smith 25 77945 26 Kline Beecham) в дозі у діапазоні 0,1-0,2, 0,2-0,4, тарного фактора 4 [Maione et al., 1990, Cancer Res. 0,4-0,8 або 0,8-1,5мг/м 2/цикл. 51: 2077-2083], пептид довжиною 14 амінокислот, В іншому здійсненні вказаним хімічним засовідповідний фрагменту колагену І [Tolma et al., бом є іринотекан, наприклад CAMPTOSAR (Phar1993, J. Cell Biol. 122: 497-511], пептид довжиною macia & Upjohn), в дозі у діапазоні 5-10, 10-25 або 19 амінокислот, відповідний фрагменту тромбо25-50мг/м 2/цикл. спондину І [Tolsma et al., 1993, J. Cell Biol. 122: В іншому здійсненні вказаним хімічним засо497-511], пептид довжиною 20 амінокислот, відпобом є флударабін, наприклад FLUDARA (Berlex відний фрагменту SPARC [Sage et al., 1995, J. Cell. Laboratories), в дозі у діапазоні 2,5-5, 5-10, 10-15 Biochem. 57: 1329-1334], або будь-які їх фрагменабо 15-25мг/м 2/цикл. ти, члени їх сімейств або їх похідні, включаючи їх В іншому здійсненні вказаним хімічним засофармацевтично прийнятні солі. бом є цитозин-арабінозид (Аrа-С) в дозі у діапазоні Також описані інші пептиди, які інгібують ангіо200-2000мг/м 2/цикл. генез і відповідні фрагментам ламініну, фібронекВ іншому здійсненні вказаним хімічним засотину, проколагену і EGF [див. огляд Сао, 1998, бом є доцетаксел, наприклад TAXOTERE (Rhone Prog. Моl. Subcell. Biol. 20: 161-176]. Показано, що Poulenc Rorer), в дозі у діапазоні 6-10, 10-30 або моноклональні антитіла і циклічні пентапептиди, 30-60мг/м 2/цикл. що блокують деякі інтегрини, які зв'язують RGDВ іншому здійсненні вказаним хімічним засобілки (тобто білки, що містять пептидний мотив бом є паклітаксел, наприклад TAXOL (Bristol Myers Arg-Gl y-Asp), володіють активністю з придушення Squibb), в дозі у діапазоні 10-20, 20-40, 40-70 або васкуляризації [Brooks et al., 1994, Science 264: 70-135мг/кг/цикл. 569-571; Hammes et al., 1996, Nature Medicine 2: В іншому здійсненні вказаним хімічним засо529-533]. Більш того інгібування рецептора урокібом є 5-фторурацил в дозі у діапазоні 0,5назного активатора плазміногену рецепторними 5мг/кг/цикл. антагоністами придушує ангіогенез, пухлинне зроВ іншому здійсненні вказаним хімічним засостання і метастазування [Min et al., 1996, Cancer бом є доксорубіцин, наприклад ADRIAMYCIN Res. 56: 2428-33; Crowley et al., 1993, Proc. Natl. (Pharmacia & Upjohn), DOXIL (Al za), RUBEX (Bristol Acad. Sci. USA 90: 5021-25]. Застосування таких Myers Squibb), в дозі у діапазоні 2-4, 4-8, 8-15, 15антиангіогенних засобів також відноситься до да30 або 30-60мг/кг/цикл. ного винаходу. В іншому здійсненні вказаним хімічним засоВ іншому здійсненні bcl-2-антисмисловий олібом є етопозид, наприклад VEPESID (Pharmacia & гомер вводять в комбінації з режимом опроміненUpjohn), в дозі у діапазоні 3,5-7, 7-15, 15-25 або 25ня. 50мг/м 2/цикл. В іншому здійсненні пацієнту з раком В іншому здійсненні bcl-2-антисмисловий оліяєчок вводять дозу етопозиду в діапазоні 5гомер вводять в комбінації з одним або більше 50мг/м 2/цикл. В іншому здійсненні пацієнту з дрібцитокінами, які включають як необмежувальні приноклітинним раком легень вводять дозу етопозиду клади лімфокіни, фактори некрозу пухлини, цитов діапазоні 3,5-35мг/м 2/цикл. кіни, подібні факторам некрозу пухлини, лімфотокВ іншому здійсненні вказаним хімічним засосин-a, лімфотоксин-β, інтерферон-a, інтерферонбом є вінбластин, наприклад β, макрофагальні білки запалення, гранулоцитарVELBAN (Eli Lilly), в дозі у діапазоні 0,3-0,5, но-моноцитарний колонієстимулюючий фактор, 0,5-1, 1-2, 2-3 або 3-3,7мг/м 2/цикл. інтерлейкіни (включаючи як необмежувальні приВ іншому здійсненні вказаним хімічним засоклади інтерлейкін-1, інтерлейкін-2, інтерлейкін-6, бом є вінкристин, наприклад ONCOVIN (Eli Lilly), в інтерлейкін-12, інтерлейкін-15, інтерлейкін-18) , дозі, що становить 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6 або ліганди ОХ40, CD27, CD30, CD40 або CD137, Fas0,7мг/м 2/цикл. Fas-ліганд, 4-1BBL, ендотеліальний білок активації В іншому здійсненні вказаним хімічним засомоноцитів або будь-які їх фрагменти, члени їх сібом є метотрексат в дозі у діапазоні 0,2-0,9, 1-5, 5мейств або їх похідні, включаючи їх фармацевтич10, 10-20. но прийнятні солі. В іншому здійсненні bcl-2-антисмисловий оліЩе в одному здійсненні bcl-2-антисмисловий гомер вводять в комбінації з одним або більше олігомер вводять в комбінації з протираковою вакімунотерапевтичними засобами, такими як антитіциною. Необмежувальні приклади протиракових ла і імуномодулятори, які включають як необмежувакцин включають аутологічні клітини або тканини, вальні приклади рітуксан, рітуксимаб, кампат-1, неаутологічні клітини або тканини, канцероембріогемтузумаб або трастуз умаб. нальний антиген, альфа-фетопротеїн, людський В іншому здійсненні bcl-2-антисмисловий оліхоріонічний гонадотропін, живу вакцину BCG, білки гомер вводять в комбінації з одним або більше меланоцитарного ряду (наприклад, gp100, MARTантиангіогенними засобами, які включають як не1/MelanA, TRP-1 (gp75), тирозиназу, широко пошиобмежувальні приклади ангіостатин, талідомід, рені пухлиноспецифічні антигени (наприклад, крингл 5, ендостатин, серпін (інгібітор серинових BAGE, GAGE-1, GAGE-2, MAGE-1, MAGE-3, Nпротеаз), антитромбін, N-кінцевий протеолітичний ацетил-глюкозамінілтрансфераза-V, ρ15), мутантні фрагмент фібронектину масою 29кДа і С-кінцевий антигени, пухлиноспецифічні (β-катенін, MUM-1, протеолітичний фрагмент фібронектину масою CDK4), антигени, що не відносяться до меланоми 40кДа, протеолітичний фрагмент пролактину ма(наприклад, HER-2/neu (карцинома молочної залосою 16кДа, протеолітичний фрагмент тромбоцитази і яєчника), людський папіломавірус-Е6, Е7 (каррного фактора 4 масою 7,8кДа, пептид довжиною цинома шийки матки), MUC-1 (карцинома молочної 13 амінокислот, відповідний фрагменту тромбоцизалози, яєчника і підшлункової шлунка)). Загальну 27 77945 28 характеристику пухлинних антигенів людини, розцерину, етанол, N-1(2,3-діолеїлокси)пропіл- N,N,Nпізнаваних Т-клітинами, див. у [Robbins and Kawaтриметиламонію хлорид (DOTMA), діолеїлфосфаkami, 1996, Curr. Opin. Immunol. 8: 628-36]. Протитидилетаноламін (DOPE) і ліпосоми. Такі композиракові вакцини можуть являти собою обчищені ції повинні містити терапевтично ефективну кільпрепарати або можуть не бути такими. кість препарату, разом з відповідною кількістю Ще в одному здійсненні bcl-2-антисмисловий носія так, щоб являти собою форму для правильолігомер застосовується спільно з гормональним ного введення пацієнту. Склад повинен відповідалікуванням. Гормональні терапевтичні способи ти способу введення. Наприклад, пероральне ввевключають застосування агоністів гормонів, антадення вимагає кишкових покриттів для захисту гоністів гормонів (наприклад, флутамід, тамоксиантисмислового олігомера від деградації в шлунфен, лейпроліду ацетат (LUPRON)) і стероїди (наково-кишковому тракті. В іншому випадку антисмиприклад, дексаметазон, ретиноїди, бетаметазони, словий олігомер може бути введений в складі лікортизол, кортизон, преднізон, дегідротестостепосом для захисту антисмислового олігомера від рон, глюкокортикоїди, мінералокортикоїди, естроферментів деградації, полегшення транспорту в ген, тестостерон, прогестини). систему циркуляції і ефективної доставки через Ще в одному здійсненні bcl-2-антисмисловий клітинні мембрани у вн утрішньоклітинні ділянки. олігомер застосовується при лікуванні раку спільВ іншому здійсненні фармацевтична композино з генотерапевтичною програмою. ція включає bcl-2-антисмисловий олігомер, один В одному зі здійснень bcl-2-антисмисловий або більше терапевтичних засобів і фармацевтичолігомер вводять пацієнту з раком в комбінації з но прийнятний носій. У конкретному здійсненні одним або більше протираковими терапевтичними фармацевтична композиція містить bcl-2засобами протягом короткого циклу лікування, для антисмисловий олігомер, один або більше протилікування раку. В одному зі здійснень тривалість ракових терапевтичних засобів і фармацевтично вказаного циклу лікування лежить у діапазоні 2-13 прийнятний носій. діб. В іншому здійсненні тривалість вказаного цикВ одному зі здійснень фармацевтична комполу лікування лежить у діапазоні 3-9 діб. В іншому зиція, що містить bcl-2-антисмисловий олігомер, з здійсненні тривалість вказаного циклу лікування іншими терапевтичними засобами або без них і лежить у діапазоні 4-7 діб. Ще в одному здійсненні фармацевтично прийнятний носій знаходяться в тривалість вказаного циклу лікування лежить у ефективній дозі. діапазоні 5-6 діб. Тривалість лікування протиракоВ одному зі здійснень фармацевтична комповим терапевтичним засобом може змінюватися в зиція містить bcl-2-антисмисловий олігомер в дозалежності від конкретного протиракового терапезах приблизно 0,01-0,1, 0,1-1, 1-5 або 6втичного засобу, що застосовується. Даний вина10мг/кг/доба; переважно в дозі 4-9мг/кг/доба; хід також відноситься до введення добових доз з більш переважно в дозі 5-7мг/кг/доба і фармацевперервами, розділяючи їх на декілька неповних тично прийнятний носій. Діюча кількість будь-якого введень. Відповідний час введення конкретного конкретного введеного антисмислового олігомера протиракового терапевтичного засобу буде встаможе залежати від декількох факторів, таких як новлений фахівцем в даній області, і даний винатип раку, токсичність антисмислового олігомера хід передбачає тривале встановлення оптимальдля нормальних клітин тіла, рівень захоплення них схем лікування для кожного протиракового антисмислового олігомера клітинами пухлини і терапевтичного засобу. вага і вік індивіда, якому вводиться антисмисловий Даний винахід відноситься принаймні до одноолігомер. Внаслідок існування in vivo багатьох фаго циклу, переважно до більше ніж одного циклу, кторів, що можуть перешкоджати дії або вияву протягом яких вводиться один терапевтичний забіологічної активності антисмислового олігомера, сіб або послідовність терапевтичних засобів. У ефективна кількість антисмислового олігомера переважному здійсненні даний цикл за тривалістю може варіюватися для кожного індивіда. коротше 14 діб. В одному зі здійснень тривалість В іншому здійсненні фармацевтичні композиції одного циклу становить 10-13 діб. У переважному за винаходом містять bcl-2-антисмисловий олігоздійсненні тривалість одного циклу становить 7-9 мер у надзвичайно високій дозі, у діапазонах придіб. У найбільш переважному здійсненні триваблизно від 10 до 50мг/кг/доба. В особливому здійлість одного циклу становить 5-6 діб. Відповідний сненні надзвичайно висока доза bcl-2період часу для одного циклу буде встановлений антисмислового олігомера в межах 11-15, 16-20, фа хівцем в даній області, як і загальне число цик21-25, 26-30, 31-35, 36-40, 41-45, 46-50мг/кг/доба лів і інтервал між циклами. Даний винахід відновводиться протягом циклу лікування. ситься до тривалої оцінки оптимальних схем лікуВибір переважної ефективної дози може бути вання для кожного bcl-2-антисмислового олігомера визначений (наприклад, за допомогою клінічних і протиракового терапевтичного засобу. випробувань) фахівцем в даній області, беручи до Даний винахід додатково надає фармацевтичуваги декілька факторів, відомих звичайному фану композицію, що містить bcl-2-антисмисловий хівцеві в даній області. Такі фактори включають олігомер і фармацевтично прийнятний носій. Відконкретну форму антисмислового олігомера, фарповідні фармацевтично прийнятні носії включають макокінетичні параметри олігомера, такі як біодоспо суті хімічно інертні і нетоксичні композиції, які тупність, метаболізм, період півжиття і т.п., які не перешкоджають ефективному вияву біологічної встановлюють протягом процесів розробки, що активності фармацевтичної композиції. Приклади звичайно застосовуються для отримання схваленвідповідних фармацевтичних носіїв включають як ня фармацевтичного складу регулюючим органом. необмежені приклади розчини солей, розчини гліДодаткові фактори в підборі дози включають під 29 77945 30 лягаючу лікуванню хворобу, міру корисності пацієпередбачає множинні способи введення. Напринту, яку необхідно досягнути, масу тіла пацієнта, клад, bcl-2-антисмисловий олігомер вводять шляімунний статус пацієнта, шлях введення, розгляд хом підшкірної ін'єкції, тоді як комбінаційний тератого, чи є введення антисмислового олігомера або певтичний засіб вводиться шляхом комбінаційного терапевтичного засобу однократвнутрішньовенної інфузії. Більш того може мати ним або постійним, супутні лікувальні заходи і інші місце одночасне (наприклад, спільне введення) фактори, що впливають на ефективність введеноабо послідовне введення одного або більше видів го фармацевтичного засобу, відомі фахівцям в bcl-2-антисмислового олігомера з терапевтичним даній області. засобом або без нього. Наприклад, bcl-2Композиції за винаходом можуть бути складені антисмисловий олігомер вводиться першим для в нейтральній формі або у вигляді солей. Фармазбільшення чутливості пухлини до подальшого цевтично прийнятні солі включають солі, утворені введення протиракового терапевтичного засобу з вільними аміногрупами, такі як солі, отримані з або опромінення. В іншому здійсненні періоди соляної, фосфорної, оцтової, щавлевої, винної введення одного або більше видів bcl-2кислот і т.п., і солі, утворені з вільними карбоксиантисмислового олігомера з іншими терапевтичльними групами, такі як солі, отримані з гідроксиними засобами або без них можуть перекриватися. дів натрію, калію, аміаку, кальцію, заліза, ізопропіНаприклад, bcl-2-антисмисловий олігомер вволаміну, триетиламіну, 2-етиламіноетанолу, диться 7 діб, а другий терапевтичний засіб ввогістидину, прокаїну і т.п. диться, починаючи з п'ятої доби лікування bcl-2У переважному здійсненні відповідно до звиантисмисловим олігомером, і лікування другим чайних процедур композиції складають як фарматерапевтичним засобом продовжується після 7 діб цевтичні композиції, адаптовані для підшкірної лікування bcl-2-антисмисловим олігомером. ін'єкції або внутрішньовенного введення людині. Можуть бути надані фармацевтичні композиЗвичайно композиції для підшкірної ін'єкції або ції, адаптовані для орального введення, такі, навнутрішньовенного введення є розчинами в степриклад, як капсули або таблетки, порошки або рильному ізотонічному водному буфері. Коли негранули, розчини, сиропи або суспензії (у водних і обхідно, композиція може також включати розчиневодних рідинах), їстівні піни або креми, або емунювальний засіб і місцевий анестезуючий засіб, льсії. Таблетки або тверді желатинові капсули мотакий як лідокаїн, для полегшення болю в місці жуть, наприклад, містити лактозу, крохмаль або ін'єкції. Взагалі, складові постачають окремо або його похідні, стеарат магнію, сахарин натрію, цезмішаними разом в єдину дозовану форму, наприлюлозу, карбонат магнію, стеаринову кислоту або клад, таку як сухий збезводнений порошок або її солі. М'які желатинові капсули можуть, наприбезводний концентрат в герметично запаяному клад, містити олії, віск, жири, напівтверді або рідкі контейнері, такому як ампула або саше, з вказуполіолі і т.п. Розчини і сиропи можуть, наприклад, ванням кількості активної речовини. Коли компомістити воду, поліолі і цукор. зиція вводиться шляхом інфузії, його можна вмісДіючий засіб, призначений для орального вветити в інфузійні флакони, балони або іншому дення, може бути покритий або змішаний з речоприйнятному контейнері, що містить стерильну виною (наприклад, гліцерил моностеарат або гліводу фармацевтичної міри очищення, сольовий церил дистеарат), яка затримує руйнування що розчин або інші прийнятні розчинники. Коли комвпливає на абсорбцію діючого засобу в шлунковопозиція вводиться шляхом ін'єкції, можуть бути кишковому тракті. Так, наприклад, уповільнене надані ампули стерильної води для ін'єкцій або вивільнення діючого засобу може бути досягнуте сольовий розчин, так щоб інгредієнти можна було протягом багатьох годин і, якщо необхідно, діючий змішати до введення. засіб може бути захищений від деградації в шлунВведення фармацевтичних композицій за виково-кишковому тракті. Скориставшись різним рН і находом включає як необмежені приклади оральферментативними умовами вздовж по шлунковоне, внутрішньовенну інфузію, підшкірну ін'єкцію, кишковому тракту, фармацевтичні композиції для внутрішньом'язове, місцеве, ін'єкцію депоорального введення можуть бути розроблені так, препарату, імплантацію, спосіб тривалого вивільщоб сприяти вивільненню діючого засобу в конкнення, внутрішньопорожнинне, інтраназальне, ретному місці шлунково-кишкового тракту. інгаляцію, внутрішньопухлинне, внутрішньоокуляФармацевтичні композиції, адаптовані для парне і регульоване вивільнення. Фармацевтичні рентерального введення, включають як необмекомпозиції за винаходом також можуть бути ввежувальні приклади водні і неводні стерильні роздені парентерально, через слизові (наприклад, чини або суспензії для ін'єкцій, які можуть містити орально), інтраназально, ректально, інтравагінаантиоксиданти, буфери, бактеріостатичні компольно, під язик, через під слизову або черезшкірно. ненти і розчинені речовини, по суті, композиції, що Переважним є парентеральне введення, наприприводять в ізотонічний стан по відношенню до клад, не через травний тракт, але краще якимикрові передбачуваного реципієнта. Інші компоненнебудь іншими шляхами, наприклад внутрішньоти, які можуть бути присутніми в таких композицівенним, підшкірним, внутрішньом'язовим, внутрішях, включають, наприклад, воду, спирти, поліолі, ньоочеревинним, інтраорбітально, внутрішньосуггліцерин і олії. Композиції, адаптовані для паренлобовим, інтраспінальним, внутрішньогрудинним, терального введення, можуть бути надані в одновнутрішньоартеріальним або інтрадермальним дозових або багатодозових контейнерах, напришляхом. Фахівці в даній області можуть брати до клад, герметичних ампулах і флаконах, і можуть уваги певні переваги і незручності, що розглядазберігатися в умовах висушування виморожуванються при виборі способу введення. Даний винахід ням (ліофілізованих), вимагаючи додавання рідко 31 77945 32 го стерильного носія, наприклад стерильного содені із застосуванням внутрішньовенної інфузії, що льового розчину для ін'єкцій, безпосередньо перед імплантується, осмотичного насоса, трансдермавикористанням. Розчини або суспензії для негайльного пластиру, ліпосом або інших способів ввених ін'єкцій можуть бути приготовані зі стерильних дення. В одному зі здійснень може бути викориспорошків, гранул і таблеток. Такі композиції повитаний насос [див., наприклад, Langer, 1990, нні містити терапевтично ефективні кількості bcl-2Science 249: 1527-33; Sefton, 1987, CRC Grit. Ref. антисмислового олігомера або іншого терапевтичBiomed. Eng. 14: 201; Buchwald et al., 1980, Surgery ного засобу, разом з відповідною кількістю носія 88: 507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321: так, щоб забезпечити форму для правильного 574]. В іншому здійсненні, склад може бути доставведення пацієнту. Лікарська форма повинна відвлений у везикулі, зокрема в ліпосомі [див., наприповідати способу введення. клад, Langer, Science 249: 1527-33 (1990); Treat et Фармацевтичні композиції, адаптовані для al., 1989, в Liposoms in the Therapy of Infectious трансдермального введення, можуть бути надані Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler як окремі пластири, призначені для збереження (eds.), Liss, New York, pp.353-65; Lopez-Berestein, тісного контакту з епідермісом тривалий період ibid., pp.317-27 International Patent Publication часу. Фармацевтичні композиції, адаптовані для №WO 91/04014; патент США №4704355]. В іншому місцевого введення, можуть бути надані, наприздійсненні можуть застосовуватися полімерні маклад, як мазі, креми, суспензії, лосьйони, порошки, теріали [див., наприклад, Medical Applications of розчини, пасти, гелі, спреї, аерозолі або масла. Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Мазь або крем для місцевого введення переважно Press: Boca Raton, Florida, 1974; Controlled Drug застосовується для місцевого введення на шкіру, Bioavailability, Drug Product Design and Performрот, очі або інші зовнішні тканини. Коли активні ance, Smolen and Ball (eds.), Wiley: New York інгредієнти складаються в мазі, може бути засто(1984); Ranger and Peppas, 1953, J. Macromol. Sci. сована парафінова або мазева основа, що змішуRev. Macromol. Chem. 23: 61; Levy et al., 1985, Sciється з водою. Альтернативно активні компоненти ence 228: 190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25: можуть бути складені в креми на основі масло-в351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71: 105]. воді або вода-в-маслі. У ще одному зі здійснень система з вивільненФармацевтичні композиції, адаптовані для міням, що контролюється, може бути поміщена в сцевого введення в очі, включають, наприклад, безпосередній близькості від мети. Наприклад, очні краплі або ін'єковані композиції. У цих компомікронасос може доставляти дози, що контролюзиціях активні компоненти можуть бути розчинені ються, прямо в мозок, вимагаючи, таким чином, або суспендовані у відповідному носії, який вклютільки частину системної дози [див., наприклад, чає, наприклад, водний розчинник з карбоксимеGoodson, 1984, в Medical Applications of Controlled тилцелюлозою або без неї. Фармацевтичні компоRelease, vol.2, pp.115-138]. зиції, адаптовані для місцевого введення в рот, В одному зі здійснень може бути бажаним включають, наприклад, таблетки, пастилки і засоввести фармацевтичну композицію за винаходом би для полоскання рота. локально в область, яка потребує лікування; це Фармацевтичні композиції, адаптовані для наможе бути досягнуте, як необмежувальні приклазального введення, можуть містити тверді носії, ди, локальною інфузією протягом хірургічної опетакі як порошки (що переважно володіють розмірації, місцевим нанесенням (наприклад, в поєдром частинок у діапазоні від 20 до 500мкМ). Поронанні з рановою пов'язкою після хірургічної шки можуть бути введені способом, основаному на операції), ін'єкцією, за допомогою катетерів, суповдиханні через ніс, наприклад, шляхом швидкого зиторіїв або імплантатів. Імплантат може бути повдихання в ніс з контейнера, що містить порошок. ристим, непористим або гелеподібним матеріаАльтернативно, композиції адаптовані для назалом, що включає мембрани, такі як сіаластові льного введення можуть містити рідкі носії, такі як, мембрани або волокна. наприклад, назальні спреї або назальні краплі. Супозиторії звичайно містять активні компонеТакі композиції можуть містити водні або масляні нти в діапазоні від 0,5 до 10% за масою. Оральні розчини активних компонентів. Композиції для лікарські форми містять від 10 до 95% за масою введення за допомогою інгаляції можуть міститися активних компонентів. в спеціально адаптованому пристосуванні, що Bcl-2-антисмисловий олігомер може бути ввевключає як необмежувальні приклади аерозолі, дений до, протягом і/або після введення одного що знаходяться під тиском, розпилювачі або інгаабо більше терапевтичних засобів. В одному зі лятори, які можуть бути сконструйовані так, щоб здійснень bcl-2-антисмисловий олігомер може бути надати визначене наперед дозування активних введений першим для зменшення експресії bcl-2, компонентів. яка збільшує чутливість пухлини до подальшого Фармацевтичні композиції, адаптовані для ревведення протиракового терапевтичного засобу. В ктального введення можуть бути надані як супозиіншому здійсненні bcl-2-антисмисловий олігомер торії або клізми. Фармацевтичні композиції, адапможе вводитися після введення протиракового товані для вагінального введення можуть бути терапевтичного засобу для зменшення експресії надані, наприклад, як маточні кільця, тампони, bcl-2, яка може сприяти пухлинній резистентності і, креми, гелі, пасти, піни або спреї. таким чином, для запобігання рецидиву або зниВ одному зі здійснень, фармацевтичні компоження відповіді на протираковий терапевтичний зиції за винаходом доставляються за допомогою засіб. У ще одному здійсненні може існувати перісистем з вивільненням, що контролюється. Наприод перекриття між введенням bcl-2клад, фармацевтичні композиції можуть бути ввеантисмислового олігомера і одного або більше 33 77945 34 терапевтичних засобів. лікування інших типів раку. Додатково даний винахід надає фармацевтичЧотирнадцять пацієнтів з IV-ою стадією метаний набір, що містить ефективну кількість bcl-2стазуючої меланоми були придатними для цього олігомера в комбінації з протираковим терапевтидослідження фази І/ІІ зі збільшенням дози, якщо у чним засобом, для захисту від пов'язаного з bcl-2 них було підлягаюче оцінці захворювання, якщо порушення або його лікування. В одному зі здійсшкіряні метастази були доступні для біопсії і були нень ефективна кількість bcl-2-олігомера і фармаспочатку позитивними на експресію bcl-2 шляхом цевтично прийнятного носія можуть бути упаковані вестерн-блотингу. Пацієнти повинні були володіти в однодозовий флакон або інший контейнер. В нормальними ниркоподібними, печінковими і гемаособливому здійсненні bcl-2-олігомер містить топоетичними функціями і не повинні були зазнаG3I39 (SEQ. ID. NO.: 17). Набір може містити один вати хіміо- або імунотерапії за чотири тижні до або більше контейнерів, заповнених одним або включення в дослідження. більш компонентами фармацевтичних композицій Bcl-2-антисмисловий олігомер (послідовність за винаходом. До такого контейнера(ів) факульта5'-TCTCCCAGCGTGCGCC AT-3') вводився шляхом тивно може бути приєднане повідомлення у формі безперервної внутрішньовенної інфузії (CIV) 14 діб встановленій урядовим агентством, регулюючим амбулаторним інфузійним насосом [Sims Deltec виробництво, використання або реалізацію фарInc., St. Paul, MN, USA] через центральну венозну мацевтичних або біологічних продуктів, яке відолінію. Використовуючи окрему лінію периферичної бражає схвалення агентством виробництва, виковени, був введений DTIC в дозах 200мг/м 2/доба ристання або реалізацію для введення людині. шляхом одногодинної інфузії протягом 5 діб з 5 по Даний винахід може бути краще зрозумілий 9 добу лікування тривалістю 14 діб bcl-2при розгляді подальших необмежувальних приантисмисловим олігомером. Цикли лікування покладів, які надані тільки як ілюстрації винаходу. вторювалися щомісяця. Збільшення дози почалоПодальші приклади представлені для більш повної ся з 0,6мг/кг/доба і продовжувалося з 1,3, 1,7, 2,1, ілюстрації переважних здійснень винаходу. Однак 3,1 4,1, 5,3 і 6,5мг/кг/доба BSL-2 ASO. Як тільки вони жодним чином не повинні розглядатися як встановлювалася безпека в групі принаймні з 3 обмеження більш широкого об'єму винаходу. пацієнтів, у випробування вводили нові групи паціПриклад 1: Лікування Bcl-2-антисмисловим єнтів з введенням дози більш високої концентрації олігонуклеотидом приводить до чутливості злоякі[Waters et al., 2000, J. Clin. Oncol. 18 (9): 1812-23]. сної меланоми до хіміотерапії Повторення циклів тривалістю 28 діб і збільшення Даний приклад демонструє успішне застосудози, що вводиться одному пацієнту, дозволялося вання bcl-2-антисмислового олігомера для лікуу стабільних або реагуючи х пацієнтів після двотивання пацієнтів з прогресуючою злоякісною мелажневого періоду спостереження. номою. У даному дослідженні шістьом пацієнтам, Для отримання клінічних даних з іншим шлящо лікувалися bcl-2-антисмисловим олігомером, хом і графіком групі з шести пацієнтів в першому системно вводили олігомер в дозі від 5,3 до циклі вводили bcl-2-антисмисловий олігомер внут6,5мг/кг/доба протягом семи діб в комбінації з хімірішньовенним вливанням, а в подальших циклах чним засобом. Факти, надані в даному прикладі, підшкірним (SC) введенням в дозі 5,3демонструють, що коли bcl-2-антисмисловий олі6,5мг/кг/доба. Дані пацієнти, яких лікували шляхом гомер вводять у високих дозах протягом короткого підшкірного введення, отримували однакову сумаперіоду часу, лікування викликає низьку токсичрну добову дозу, що вводиться шляхом двох підність при оцінці за загальними критеріями токсичшкірних ін'єкцій на добу в дні 1-7 в комбінації з ності, зменшує кількість Всl-2 в пухлині, сприяє 800мг/м 2 DTIC, що отримується одногодинною апоптозу, веде до значущої відповіді пухлини і інфузією на день 5. пролонгує виживаність пацієнта. У число реагуюПротипухлинний ефект оцінювали після кожчих на лікування були включені декілька пацієнтів ного циклу лікування, застосовуючи вимірювання з «резистентною до лікування злоякісною пухлициркулем і детальну фото-документацію пацієнтів ною», у яких під час лікування стандартними проз шкіряними метастазами; вісцеральні метастази тираковими засобами, спостерігалося прогресудокументували і відстежували шля хом "гомографівання захворювання, де лікування стандартними чного сканування. Для класифікації відповіді пухзасобами, такими як дакарбазин, приводить до лини застосовували критерії WHO, що вимагають мінімального або нульового ефекту. У протилежпослідовної документації, що триває як мінімум 4 ність цьому, комбіноване лікування bcl-2тижня. Повну відповідь визначали як зникнення антисмисловим олігомером і дакарбазином вело детектованих метастазів. Часткову відповідь видо несподівано стійких відповідей і поліпшувало значали як 50%-е і більше зменшення метастазів, виживаність. Більш того, подальше дослідження, в що вимірюються. Коли у пацієнтів виявляли мноякому застосовувалися більш високі дози для жинні метастази в одному органі, документували більш коротких періодів у п'яти пацієнтів, показало як основу максимум 5 цільових пошкоджень, за достатню переносимість, коли bcl-2ними стежили для визначення відповіді. Збільантисмисловий олігомер був системно введений в шення ділянок метастазування в захворюванні, що дозі від 7мг/кг/доба протягом 5 діб. Так дані репідлягає оцінці, більше ніж на 25% або виникнення зультати показують, що введення bcl-2нових ділянок було визначено як прогресуюче заантисмислового олігомера у великих дозах в корохворювання. У доповнення, положення, коли діаткі проміжки часу є надійним і ефективним лікуметри пошкоджень-мішеней зменшувались менше ванням меланоми. Підхід, описаний в даному доніж на 50%, але більше ніж на 25% були позначені слідженні, надає широко застосовну стратегію для як мала відповідь. Всі інші ситуації були визначені 35 77945 36 як стабільне захворювання. Виживаність була оціПік концентрації 8,6мкг/мл +/-SD=1,26мкг/мл спонена від часу першого лікування за даним протостерігався через три-чотири години після ін'єкції колом. при підшкірній дозі 3,25мг/кг, введеній з 12Токсичність визначали за загальними критерігодинними інтервалами. Більше ніж 90% 12ями токсичності і контролювали щодня протягом годинного періоду в проміжку між підшкірними введення лікарського засобу, потім щотижня між введеннями концентрації в плазмі перевершували циклами. Будь-яка пов'язана з лікуванням токсичвказану концентрацію в плазмі, асоційовану з біоності III або IV ступеня, яка не проходила за два логічною активністю, яка дорівнює 1мг/мл. Не спотижня між циклами лікування, розглядалася як стерігалося змін фармакокінетичних властивостей лімітуюча дозу токсичність. Зразки плазми для у пацієнтів, що проходили множинні цикли лікувизначення фармакокінетики bcl-2-антисмислового вання; конкуруюче лікування DTIC не впливало на олігомера збирали з часу 0 до лікування, потім в стаціонарні концентрації bcl-2-антисмислового дні 2, 3, 5, 6, 10 і 14 у пацієнтів, що отримували олігомера в плазмі. двотижневу внутрішньовенну інфузію BCL-2 ASO; На вихідному рівні експресія білка bcl-2 метау пацієнтів, що отримували bcl-2-антисмисловий стазами шкіряної меланоми [Selzer et al., 1998,8 олігомер шляхом болюсної ін'єкції в ділянку живо(3): 197-203; Cerroni et al., 1995, Am. J. та, був визначений 12-часовий профіль фармакоDermatopathol. 17: 7-11] була підтверджена вескінетики. Концентрація bcl-2-антисмислового олітерн-блотингом у всі х 14 пацієнтів, відібраних для гомера в плазмі була визначена за Pharmanalyt, даного дослідження; серійні біопсії порівнянних Baden, Austria, із застосуванням HPLC [Chen et al., пошкоджень показали зменшення концентрацій 1997, J. Chromatogr. B. Biomed. Sci. Appl. 692: 43білка BCL-2 протягом введення bcl-251]. антисмислового олігомера (Таблиця 1). У пацієнта Експресія bcl-2 і ступінь апоптозу метастазів 10 серійні зразки пухлини не оцінювалися вестернмеланоми оцінювали вестерн-блотингом і способлотингом у зв'язку з відсутністю клітин меланоми бом TUNEL, відповідно [Jansen et al., 1998, Nat. в біопсії тканини. Максимальне зменшення концеMed. 4 (2): 232-4]. Зменшення bcl-2 менше ніж на нтрації білка BCL-2 у пацієнтів, що проходили лі20% в порівнянні з вихідним рівнем розглядалося кування безперервною інфузією bcl-2як незначуще внаслідок технічних обмежень. Пухантисмислового олігомера тривалістю 14 діб, звилини, що зазнавали біопсії, вибирали, основуючайно спостерігалося на 5 добу без подальшого чись на розмірі, місцеположенні і клінічних властизменшення до 14 діб. 83% пацієнтів, що піддаютьвостях подібно до пошкоджень-мішеней, що ся оцінці з концентраціями bcl-2-антисмислового використовувались для вимірювання відповіді. олігомера в плазмі, які перевершують 1мкг/мл (10 Вирізання біопсій метастазів шкіряної меланоми з 12 пацієнтів), показали чітке зменшення експресії проводили на вихідному рівні і на 5 добу кожної BCL-2 (Таблиця 1). Цикли лікування з дозами BCLконцентрації дози bcl-2-антисмислового олігомера 2-антисмислового олігомера >1,7мг/кг/доба покадо введення DTIC; додаткові біопсії проводили до зали середнє зменшення концентрації білка bcl-2 дня 14 циклу для документування ефектів комбіна 40% на 5 добу. нованого лікування bcl-2-антисмисловим олігомеЗбільшення апоптотичних клітин в зразках пуром і DTIC. Сумарно було досліджено 2-4 біопсії хлини після 5 діб лікування bcl-2-антисмисловим пухлини у кожного пацієнта при кожній концентраолігомером визначали фарбуванням TUNEL (збіції дози. Частина біопсії пухлини, що використовульшення від вихідного рівня 0,85%, +/-SD=047%; ється для вестерн-блотів і аналізу TUNEL, була до 3,17%, +/-30=1,16%) (Фігура 2В). Однак в біотакож охарактеризована за допомогою звичайної псіях, взятих після апоптотичних стимуляцій гістопатології, для гарантії відповідного змісту пух(DTIC), можна було спостерігати істотне збільшенлинних клітин і обмеження ефектів змішування ня апоптотичної загибелі клітин (Фігура 2С, 19,4% непухлинних клітин в зразку біопсії. +/-SD=4,2%). Комбіноване лікування bcl-2Всього bcl-2-антисмисловим олігомером (від антисмисловим олігомером і DTIC добре перено0,6 до 6,5мг/кг/доба) в комбінації з DTIC лікували силось до кількості bcl-2-антисмислового олігоме14 пацієнтів відповідно до 2-х схем лікування (I.V. ра, яка дорівнює 6,5мг/кг/доба включно, без обмеабо S.C.), описаних ви ще. жуючої дозу токсичності (Таблиця 2). Стаціонарні концентрації bcl-2-антисмислового Гематологічні аномалії були слабкими або поолігомера в плазмі спостерігалися після перших мірними (ступінь І-ІІІ, Таблиця 2) і слідували продіб безперервної внутрішньовенної інфузії і лінійно філю значень нижчих меж між циклами лікування, збільшувалися з дозою, що вводиться. Введення типовому для одного засобу DTIC. Жоден з пацієдоз bcl-2-антисмислового олігомера >1,7мг/кг/доба нтів не відчував фебрильної нейтропенії або інших приводило до підтримки його стійкої стаціонарної основних видів гематологічної токсичності. Анемія концентрації в плазмі, що складає понад 1мкг/мкл, ІІ-ІІІ ступеня, що вимагає переливання крові, спопричому концентрація, що визначається, в плазмі стерігалася протягом дослідження у двох пацієнбула біологічно активна на експериментальних тів, але анемія у даних пацієнтів була представлетваринах. [Ra ynaud et al., 1997, J. Pharmacol. Exp. на вже на вихідному рівні, можливо внаслідок Ther. 281: 420-7]. При 6,5мг/кг/доба, середня стапопереднього лікування. Лімфопенія ІІ-ІІІ ступеня ціонарна концентрація в плазмі 6,47мкг/мл +/спостерігалася в більшості випадків, але без клініSD=2,51мкг/мл була досягнута за 24 години. Кончних наслідків, таких як незвичайні вірусні або грицентрації bcl-2-антисмислового олігомера в плазмі бкові інфекції або інші клінічні свідчення імуносуппри підшкірній болюсній ін'єкції, що вводиться двічі ресії, незважаючи на повторення циклів, що на добу, були дзвоноподібними близько 12 годин. тривають у деяких пацієнтів більше одного року. 37 77945 38 Транзиторне збільшення часткового часу з DTIC. Очікувана середня виживаність перевертромбопластину ІІ-ІІІ ступеня спостерігалося у шує як мінімум один рік у всі х пацієнтів. трьох пацієнтів без клінічних кровотеч. Даний звіт демонструє безпеку і здійсненність Негематологічні побічні ефекти перераховані в лікування пацієнтів з раком антисмисловим лікарнижній частині таблиці 2. Дози bcl-2ським засобом в поєднанні з хіміотерапією. Лікуантисмислового олігомера вище 4,1мг/кг/доба бування bcl-2-антисмисловим олігомером добре пели асоційовані з транзиторною лихоманкою у біреносилося, знижувало вміст цільового білка в льшості пацієнтів. Лихоманка звичайно досягала пухлині, сприяло апоптозу і вело до об'єктивної 38°С на 2-3 добу лікування і припинялась або савідповіді пухлини з пролонгованою виживаністю мостійно або введенням ацетамінофену і продовнавіть у пацієнтів, які вступили в дослідження пісжуваним введенням антисмислового олігомера. ля невдалого лікування іншими видами терапії При концентраціях доз у діапазоні від 4,1 до (таблиця 1). 6,5мг/кг/доба у 4 пацієнтів спостерігали транзиторОсновна мета даного дослідження полягала у ні підвищення рівня трансамінази і/або білірубіну визначенні токсичності лікування BCL-2ІІ-ІІІ ступеня;однак причинного зв'язку з bcl-2антисмисловим олігомером в поєднанні з DTIC. антисмисловим олігомером не встановлено у всіх Що стосується негематологічних побічних ефектів пацієнтів, хоча двоє пацієнтів страждали гепати(таблиця 2), то до рівня доз bcl-2-антисмислового том і алкоголізмом, відповідно, і транзиторні аноолігомера, які дорівнюють 3,1мг/кг/доба, включаюмалії функції печінки спостерігалися після DTIC, чи вказану дозу, в даному дослідженні не відмічеякий також може вести до таких лабораторних но ніяких побічних ефектів, крім описаних для лізмін. Аномалії функції печінки звичайно зникали кування одним засобом DTIC. При дозах bcl-2протягом 1 тижня між циклами лікування і не розантисмислового олігомера 4,1мг/кг/доба і вище в глядалися як клінічно значущі або такі, що лімітупоєднанні з DTIC спостерігалося транзиторне збіють дозу. Дерматологічні побічні ефекти включали льшення рівня трансамінази і/або білірубіну ІІ-ІІІ транзиторні висипи і кропивниці І ступеня у всіх, ступеня (таблиця 2). У даному дослідженні аномакрім одного пацієнта, що зазнав кропивниці II стулії функції печінки ні лімітували дозу, ні асоціювапеня; ці дерматологічні реакції реагували на антилися з побічними клінічними ефектами. Відмічені гістамінні препарати і не перешкоджали подальзміни aРТТ, які не лімітують дозу, при дозах bcl-2шому лікуванню. Токсичності, що антисмислового олігомера, що складають від нагромаджуються, не спостерігалося. Деякі паціє5,3мг/кг і вище. нти проходили до 10 циклів терапії без необхідноЛімфопенія також була самим частим побічсті модифікації схеми лікування, що планується. ним ефектом, що спостерігається в даному досліНавіть якщо токсичність була основною межею дженні. Лімфопенія була клінічно не значуща, а збільшення дози даного випробування, протипухтакож не було незвичайних інфекцій у пацієнтів, линна активність була виражена у 6 з 14 пацієнтів що лікуються за допомогою циклічної терапії і спо(43%, таблиця 1) в IV стадії меланоми, включаючи стерігаються більше одного року. Навпаки, сповідповіді, що спостерігалися серед 12 пацієнтів, стерігали деякий рівень тромбоцитопенії при виковключених в дослідження після безуспішного сисристанні різних лікарських засобів на основі темного лікування меланоми різними способами. фосфоротіокислоти, і дана токсичність лімітувала Відмічені 1 CR, 2 PR і 2 MR з пролонгованою стадозу в дослідженні bcl-2-антисмислового олігомебілізацією хвороби, що триває більше 1 року (табра у пацієнтів з NHL [Waters et al., 2000, J. Clin. лиця 1). У двох додаткових пацієнтів також споOncol. 18 (9): 1812-23]. Навіть якщо дане дослістерігалася клінічна протипухлинна активність зі дження, що поєднує застосування bcl-2стабілізацією захворювання, що виразно прогреантисмислового олігомера з хіміотерапією, привосує до включення в дослідження. Пацієнт 12 з ведило до транзиторної мієлосупресії після введення ликим метастатичним ураженням в тазових лімDTIC, і стаціонарні концентрації в плазмі перевифатичних вузлах і в ділянці попереднього щували ті, що надавали в дослідженні NHL, дані шкіряного трансплантату, розміром більше 5см від заявники не спостерігали тромбоцитопенію, яка вихідного рівня, показав швидку відповідь після 2-х лімітує дозу. В результаті, в даній популяції пацієциклів і повну відповідь після 4-х циклів (таблиця нтів не спостерігалися ні такі, що перекриваються, 1, фігура 3). Після 4-х циклів лікування біопсія шкіні кумулятивні обмежуючі дозу види токсичності ряної області, яка була раніше позитивна на новоміж DTIC і BCL-2-антисмисловим олігомером. утворення, показала тільки фіброз без меланоми Представлені дані демонструють, що біологіч(патологічно повна відповідь). Пацієнти 2 і 3 харано значущі стаціонарні концентрації в плазмі ктеризувалися частковою відповіддю пошкоджень(>1мкг/мл) можуть бути легко досягнуті при дозах мішеней і виживаністю з відсутністю прогресії проbcl-2-антисмислового олігомера від приблизно тягом більше одного року. На початку даного до2мг/кг/доба до максимально переносимої дози, яка слідження у пацієнтів 2 і 3 спостерігалося прогрене досягається при поєднанні з хіміотерапією суюче метастазування, незважаючи на попереднє DTIC. лікування карбоплатином з інтерфероном (пацієнт У нещодавньому здійсненні лікувальних ре2) і DTIC з IL-2 (пацієнт 3). Обидва пацієнти 5 і 9 жимів, досліджених в даному випробуванні, bcl-2вступили в дослідження з прогресуючим метастаантисмисловий олігомер вводили внутрішньовентичним ураженням, незважаючи на системне лікуно шляхом інфузії (7мг/кг/доба) протягом 5 діб вання DTIC з інтерфероном або одним інтерферорозширеній групі (5 пацієнтів) перед введенням ном, і у них розвинулася мала відповідь після 1000мг/м 2 DTIC в кожному циклі тривалістю 21 лікування BCL-2 антисмисловим олігонуклеотидом доба, і це характеризувалося задовільною пере 39 77945 40 носимістю. початкова протипухлинна активність протягом 2-3 Таким чином, дані результати означають, що циклів. Більшість пацієнтів вступили в дослідження bcl-2-антисмисловий олігомер може безпечно ввоз прогресуючим метастатичним ураженням після дитися в комбінації з протираковим лікарським невдалого лікування схемами, які містять DTIC, засобом для лікування раку в клінічних умовах. або після стандартного лікування метастазуючої Результати відрізняються від раніше опубліковамеланоми. Проте, протипухлинні відповіді були них даних, що описують біологічну активність і відмічені у 6 з 14 пацієнтів (43%) і у двох додаткоклінічну відповідь при інфузії протягом 14 діб, тільвих пацієнтів спостерігали стабілізацію захворюки шляхом безперервної підшкірної інфузії [Waters вання. Очікувана середня виживаність всіх пацієнet al., 2000, J. Clin. Oncol. 18 (9): 1812-23], оскільки тів перевищує 12 місяців. Дані початкові описані тут результати показують, що множинні результати сприятливо відрізняються від незначспособи введення (внутрішньовенна інфузія, баганих мір відповіді і середніх часів виживаності, притоденна підшкірна ін'єкція) і більш короткі програблизно 4-5 місяців, що спостерігаються у пацієнтів ми введення з 5-7 діб можуть також приводити до з розвиненою меланомою після невдалого лікубіологічної активності G3139 і клінічної відповіді. У вання першочерговою системною терапією. реагуючих пацієнтів незабаром спостерігалася Таблиця 1 Короткий огляд дослідження № па- Вік/ Дата Метастази цієн-та стать першого меланоми діагнозу 1 49/Ж 8/95 LNN, шкіра 2* 41/Ж 3/95 3* 69/Ч 6/94 4 5 6 7 52/Ч 63/Ж 56/Ч 61/Ж 5/98 1/92 8/96 5/97 8* 9* 10 11 60/Ж 75/Ж 44/Ж 63/Ч 3/95 6/98 4/86 4/97 12* 13* 14 90/Ж 67/Ч 76/Ч 7/94 6/96 4/99 Стадія Первинне BCL-2 ASO Ma x. % Відповідь Виживання пухли- лікування (мг/кг/доба) зниження (місяці) ни BCL-2 IV DTIC, IF, RT, 0,6 0 PD 6,6 HЕР Шкіра IV 0,6-6,5 40 PR 20,5 СР, IFN-a, RT, HEP LNN, шкіра IV DTIC, IL-2, 0,6-6,5 40 PR 23,3+ GM-CSF LNN, шкіра IV 0,6-4,1 35 MR 13,7 DTIC, IFN-a Шкіра IV 3,1-4,1 20 MR 5,1 DTIC, IFN-a Легені, шкіра IV 3,1-5,3 60 PD 2,4 DTIC, IFN-a Легені, печінIV DTIC, FOT 4,1 20 PD 7,1 ка, шкіра Шкіра IV 5,3-6,5 60 Стійкий 15,3+ IFN-a, RT LNN, шкіра IV 5,3-6,5 60 MR 15,3+ IFN-a LNN, шкіра IV 6,5 N.A. PD 14,4+ IFN-a Легені, шкіра IV 6,5 0 PD 12,5+ IFN-a, СР, CIS LNN, шкіра IV Ні 6,5 70 CR 12,5+ Легені, шкіра IV Ні 6,5 0 PD 1,1 Легені, шкіра IV 6,5 40 Стійкий 7,8 IFN-a СР=карбоплатин, СІS=цисплатин, FОТ=фотемустин, НЕР=гіпертермічна екстремальна перфузія, IFN-a=інтерферон a, NA= не застосовувалося, RТ=опромінення. Було проведене сумарне число з 47 циклів BCL-2 ASO плюс DTIC. * Пацієнти, що отримали також BCL-2 ASO підшкірно в дозах від 5,3 до 6,5мг/кг/доба, введені після початкових внутрішньовенних циклів лікування. + Період спостереження продовжується. 41 77945 42 Таблиця 2 Побічні ефекти під час лікування Звичайна шкала критеріїв токсичності 0 Гематологічні прояви Анемія Лейкопенія Нейтропенія Лімфопенія Тромбоцитопенія Коагуляція Негематологічні прояви Серцево-судинні Легеневі Ниркові Шлунково-кишкові Печінкові (SGOT, білірубін) Неврологічні (Головний біль) Дерматологічні Лихоманка Число пацієнтів 1 2 3 12 7 10 1 8 3 2 2 1 4 8 14 14 14 9 1 11 9 7 5 7 3 4 1 3 2 7 2 2 2 4 2 2 5 1 4 1 6 Прояви приведені незалежно від взаємозв'язку з терапією BCL-2 ASO. Приклад 2: Кореляційне дослідження фази І, фармакокінетики і біологічної залежності застосування G3139 (bcl-2-антисмислового олігомера) і доцетакселу у пацієнтів з несприйнятливим до гормонів раком передміхурової залози Даний приклад демонструє успішне застосування bcl-2-антисмислового олігомера для лікування пацієнтів з несприйнятливим до гормонів раком передміхурової залози, який стійкий до антиандрогенного лікування і цитотоксичної хіміотерапії, bcl-2-антисмисловий олігомер був системно введений в дозі 5-7мг/кг/доба п'ять діб в поєднанні з хімічним засобом. Дане дослідження надає дані про двох пацієнтів, яких лікували bcl-2антисмисловим олігомером і хімічним засобом, що відповідали на лікування. Отримані дані, що описуються в даному прикладі, демонструють, що коли bcl-2-антисмисловий олігомер вводиться у високих дозах короткий період часу, лікування виявляє низьку токсичність, хоча демонструє об'єктивні клінічні реакції. Підхід, описаний в даному дослідженні, надає широко застосовну стратегію для лікування інших типів раку. У даному дослідженні G3139 вводили шляхом безперервної внутрішньовенної інфузії п'ять діб на цикл при циклі лікування в 1-6 діб з подальшим внутрішньовенним введенням доцетакселу на 6 добу. Курси повторювали кожні21 добу. Одинадцять пацієнтів з несприйнятливим до гормонів раком передміхурової залози отримали до трьох концентрацій доз у діапазоні від 5мг/кг/доба G3139 з 60мг/м 2 доцетакселу до 7мг/кг/доба G3139 з подальшими 75мг/м 2 доцетакселу. Основні види токсичності були схожі з такими при застосуванні тільки доцетакселу. Один пацієнт, що зазнавав інтенсивного попереднього лікування, зазнав тривалої (>5 діб) неускладненої нейтропенії 4-ого ступеня. Інші види токсичності включають 1 ступінь стоматиту у трьох пацієнтів і фебрильну нейтропенію протягом 2 курсу у одного пацієнта. Попередні результати фармакокінетики (HPLC) показують середні стаціонарні концентрації в плазмі 3,09мкг/мл при концентрації дози 5мг/кг/доба. Попередні аналізи проточної цитометрії і вестерн-блоту показали >50% понижувальну регуляцію bcl-2-антисмислового олігомера на 6 добу в мононуклеарних клітинах периферичної крові до лікування доцетакселом. Антиген, специфічний для передміхурової залози, і симптоматичні реакції, що включають дев'ятикратне зменшення антигену, специфічного для передміхурової залози, що тривають довше, ніж більший з циклів, спостерігалися у 2 з 3 пацієнтів, що піддаються оцінці, які не приймали раніше таксан. G3139 можна безпечно вводити в поєднанні з доцетакселом і, як показують дані результати, поєднання володіє значущими терапевтичними ефектами при лікуванні раку. Результати відрізняються від опублікованих раніше даних, що показують біологічну активність і клінічні реакції при інфузії протягом 14 діб, що вводиться шляхом безперервної підшкірної інфузії [Waters et al., 2000, J. Clin. Oncol. 18 (9): 1812-23], оскільки описані тут результати показують, що більш короткі програми введення (5 діб) можуть також вести до біологічної активності G3139 і клінічних реакцій. Лікування G3139 є біологічно активним протягом 5 діб введення, що показується ефективною понижувальною регуляцією білка Всl-2 в мононуклеарних клітинах периферичної крові, і мало у пацієнтів з несприйнятливим до гормонів раком передміхурової залози підтримуючу попередню протипухлинну активність. Приклад 3: фаза і випробування 43 77945 44 GENASENSE™ (G3139), BCL-2-антисмислового в лікуванні лейкозу і інших видів раку. Факти, виолігонуклеотиду, при стійкому або рецидивуючому кладені в даному прикладі, показують об'єктивні гострому лейкозі клінічні відповіді, що отримуються при введенні Даний приклад показує успішність застосуванbcl-2- антисмислового олігомера в короткий період ня bcl-2-антисмислового олігомера для лікування часу. пацієнтів з гострим лейкозом. Bcl-2-антисмисловий G3139 (4мг/кг/доба) вводили пацієнтам (усього олігомер вводили системно в дозі 4мг/кг/доба в десять пацієнтів) на 1-10 добу, тоді як флударабін поєднанні з двома хімічними засобами протягом (починаючи зі зменшеної дози 15мг/м 2), арабіно10 діб. Відповідно до даного дослідження п'ять з зид цитозину (Аrа-С) (починаючи зі зменшеної додесяти пацієнтів, що пройшли лікування bcl-2зи 1000мг/м 2) і G-CSF (FL AG) вводили на 6-10 доантисмисловим олігомером і хімічним засобом, бу циклу лікування і збільшували в успішній групі. відповідали на лікування. Більш того, відповіді Нормальна схема комбінації FLAG включає в два були також відмічені у пацієнтів, яким вводили рази більші дози флударабіну і Аrа-С, ніж дози, що флударабін і цитозин-арабінозид в дозах менших, застосовувалися в даному дослідженні. ніж нормальні стандартні дози, що застосовуються Пацієнти Вік/ стать 69/Ж 55/Ж 57/Ж 23/Ч 61/Ж 54/Ч 61/Ж 73/Ж 39/Ч 55/Ж Dx&Статус PreG3139 Час до ПопеREL редня (м)1 схема Первинна REF ALL NA4 1 Первинна REF AML NA 3 2 REL AML 12 2 1 REL AML 3 1 1 REL AML 7 1 Первинна REF AML NA 1 1 REL AML 6 2 2 REL AML 8 2 2 REL AML 3 2 2 REL AML 6 3 Попередні HDAC2 Hi Так Так Так Ні Ні Ні Так Так Так Відповідь CR5 CR CR PR6 PR NR7 NR NR NR NR Статус захворювання (доба)3 NED8 (53) REL (142) NED (111) REL (83) NED (76) REF REF REF REF REF 1 (м), місяці після CR; 2високі дози Ака-С; 3доба), доба після початку застосування G3139; 4NА, не застосовно; 5CR, повна відповідь; 6R, часткова відповідь; 7NR, відсутність відповіді; 8NED, немає ознак захворювання; REF, стійкість; REL, рецидив. Результати Пов'язана з лікуванням лихоманка, нудота, блювота, гіпокальцинемія, гіпофосфатемія і затримка рідини не лімітували дозу. Гематологічні види токсичності відповідали очікуваним. Стаціонарні концентрації G3139 в плазмі, що перевершували релевантну концентрацію-мішень (1мкг/мл), досягалися через 24 години. У трьох пацієнтів мала місце повна відповідь, і вони отримали другий курс лікування; у двох не спостерігалося ознак захворювання на 53 і 111 добу. У двох пацієнтів були відсутні ознаки захворювання, але спостерігалася стійка нейтропенія/тромбоцитопенія на 52 і 55 добу; у одного з них не спостерігали ознак захворювання без ознак захворювання на 76 добу. Три з п'яти відповідаючих пацієнтів проходили лікування високими дозами Аrа-С, і тому те, що була відмічена сильна відповідь на застосування іншої комбінованої програми з Аrа-С, описаної в даному дослідженні, особливо з використанням менших доз, ніж в попередніх лікувальних режимах, було несподіваним. Висновок Результати вказують, що G3139, що продемонстрував в даному дослідженні 50%-ну міру відповіді, включаючи пацієнтів з стійким гострим лейкозом, що раніше проходили лікування високими дозами Ага-С, підходить для додавання до схем багатоциклової індукції для гострого лейкозу. Сильні реакції також спостерігалися при застосуванні доз з більш низькими, ніж звичайно концентраціями флударабіну і Аrа-С в схемах комбінування з bcl-2-антисмисловим олігомером. Всі посилання, що цитуються тут, особливо включені сюди як посилання так, як якби були приведені тут повністю. Маючи описані тут ви ще типові здійснення, фа хівці в даній області усвідомлюють, що даний опис є лише прикладом, оскільки в об'єм винаходу входять його різні альтернативи, адаптація і модифікації, передбачувані даними заявниками. Відповідно, даний винахід не обмежений конкретними, проілюстрованими вище здійсненнями, але визначений формулою винаходу. 45 77945 46 47 77945 48 49 77945 50 51 Комп’ютерна в ерстка Л.Литв иненко 77945 Підписне 52 Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601