Спосіб діагностики хронічної критичної ішемії нижніх кінцівок

Спосіб діагностики хронічної критичної ішемії нижніх кінцівок (ХКІНК), що включає відбір біологічного матеріалу з ураженої ділянки та визначення в ньому концентрації маркера гіпоксії, який відріз 3 ляє об'єктивно оцінити ступінь порушення метаболізму тканин, його використання ускладнює інтерпретацію результатів дослідження, що часто призводить до помилкових діагностичних висновків. Це зумовлене тим, що ендотелій-1 діє місцево, має короткий період напіврозпаду та на 90% інактивується вже при першому проходженні малого кола кровообігу, а визначення його концентрації лише у периферичній венозній крові, що пройшла мале коло кровообігу та мікроциркуляторне русло кінцівки, ступінь ураження якої невідома, не дає достовірного уявлення про ступінь ішемії ураженої кінцівки [3]. В основу корисної моделі, що заявляється, покладена задача вдосконалити спосіб діагностики хронічної критичної ішемії нижніх кінцівок за рахунок визначення відносних змін рівня маркера гіпоксії (HIF-1) ураженої кінцівки, що підвищує точність та інформативність діагностики на ранній стадії порушення магістрального кровотоку. Технічний результат від впровадження запропонованого способу діагностики хронічної критичної ішемії нижніх кінцівок буде полягати в більшій точності та інформативності діагностики, а також в можливості більш ранньої постановки діагнозу. Поставлена задача досягається тим, що у відомому способі діагностики хронічної критичної ішемії нижніх кінцівок, що включає відбір біологічного матеріалу з ураженої ділянки та дослідження в ньому концентрації маркера гіпоксії, згідно корисної моделі, в якості біологічного матеріалу з ураженої ділянки беруть міоцити, а в якості маркера гіпоксії в них досліджують індукований гіпоксією фактор-1 (HIF-1), для чого використовують гіпоксичну камеру, наприклад фірми GeneAmp System 2700" ("Applied Biosystems", США), з підтриманням стандартного газового вмісту і 5% вологості та імунологічний реактив, що містить антитіла до HIF1, наприклад реактивів анерсам RT-BCR, і при концентрації HIF-1 159-50нМ/мг білка діагностують функціональний клас ІІІб, а при концентрації HIF-1 нижче 50нМ/мг білка - функціональний клас IV ХКІНК. Відмінною особливістю запропонованого способу діагностики хронічної критичної ішемії нижніх кінцівок є те, що в якості біологічного матеріалу з ураженої ділянки беруть міоцити, а в якості маркера гіпоксії в них досліджують індукований гіпоксією фактор-1 (HIF-1), для чого використовують гіпоксичну камеру, наприклад фірми Billups-Rothenberg, з підтриманням стандартного газового вмісту і 5% вологості та імунологічний реактив, що містить антитіла до HIF-1, наприклад реактив анерсам RTBCR. Сукупність відомих та відмінних ознак корисної моделі дозволяє покращити точність та інформативність способу діагностики ХКІНК. Дослідження рівня HIF-1 дозволяє чітко визначити зміни, що відбуваються у м'язовій тканині, можливість росту та ступінь життєздатності м'язового волокна, визначити стадію ішемії в реальному часі. За доступними літературними даними такий спосіб діагностики хронічної критичної ішемії нижніх кінцівок невідомий. Запропонований спосіб діагностики хронічної критичної ішемії нижніх кінцівок здійснюється на 16132 4 ступним чином. У пацієнта, після попереднього отримання інформованої згоди, в горизонтальному положенні (шкіру попередньо обробляють спиртом) під місцевою анестезією виконують біопсію гомілкового м'язу голкою калібром 26мм. Відбір проби ішемізованої тканини здійснюють в ураженому сегменті кінцівки. Зразки м'язової тканини ділять на дві частини: одну використовують для гістологічної оцінки, а другу зберігають в стерильних умовах при температурі -20°С в розчині стабілізатору РНА (Qiagen, США) і використовують для виділення РНК за допомогою реактиву Trizol RNAPrep ("Изоген", Росія). Виділену РНК використовують для полімеразної ланцюгової реакції, яку проводять в термоциклері GeneAmp System 2700 ("Applied Biosystems", США). Візуалізація ДНК після горизонтального електрофореза (160V протягом 40хв) проводять за допомогою трансілюмінатора ("Біоком", Росія). Чисельні показники були встановлені наступним чином. В нашому спостереженні були отримані такі результати. В контрольній групі (пацієнти без ішемії) рівень HIF-1 в умовах нормоксії в барокамері було встановлено як 160-190нМ/мг білку. У хворих з функціональним класом II ішемії нижніх кінцівок рівень HIF-1 становив 240-359нМ/мг білку. При функціональному класі ІІІа рівень HIF-1 перевищував 359нМ/мг білку, при класі ІІІб - 15950нМ/мг білку, а при функціональному класі IV рівень HIF-1 був