1-n-хлорбензил-8-(піридиніл-3′) метиліденгідразинотеобромін, який виявляє антиоксидантну дію

1-n-Хлорбензил-8-(піридиніл3')метиліденгідразинотеобромін, формули: O CH (19) (21) u200610204 (22) 25.09.2006 (24) 15.03.2007 (46) 15.03.2007, Бюл. № 3, 2007 р. (72) Іванченко Дмитро Григорович, Романенко Микола Іванович, Жмурін Руслан Вікторович, Белєнічев Ігор Федорович, Милосердова Ганна Володимирівна (73) ЗАПОРІЗЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, Іванченко Дмитро Григорович, Романенко Микола Іванович, Жмурін Руслан Вікторович, Белєнічев Ігор Федорович, Милосердова Ганна Володимирівна 2 3 21412 тіотриазоліну [Лек. препараты Украины под ред. В.П. Черных, И.А. Зупанца. - Харьков: Изд-во НФаУ "Золотые страницы", 2005. - с. 48-50; 383384] та прототипу, сполука що заявляється виявляє значно вищу антиоксидантну дію. Одержують сполуку, що заявляється, взаємодією 8-бромотеоброміну (І) з пхлорбензилхлоридом з подальшим нагріванням 8бромо-І-п-хлорбензил-теоброміну (П) з гідразингідратом та конденсацією 8-гідразинотеоброміну (III) з піридиніл-3-карбальдегідом. Приклад 1. Етап 1. Синтез 8-бромо-І-пхлорбензилтеоброміну (П). Суміш 51,8 г (0,2моль) 8-бромтеоброміну (І), 36 мл (0,21 моль) пхлорбензилхлориду, 24,0 г (0,22 моль) безводного Nа2СО3, 300мл диметил-формаміду кип'ятять 5,5 годин, фільтрують, фільтрат охолоджують, осад відфільтровують, промивають водою та кристалізують із водного діоксану. Вихід 95,3%, Ттопл. 2101°С. С14Н12Вr1СІ 1N4O 2. Знайдено, %: С - 43,9; Н 3,3; N - 14,7; Br - 20,9; СІ - 9,3. Розраховано, %: С 43,8; Н - 3,2; N - 14,6; Br -20,8; СІ-9 ,2. Етап 2. Синтез 8-гідразино-1-пхлорбензилтеоброміну (III). Суміш 3,83 г (0,01 моль) 8-бромо-1-п-хлорбензилтеоброміну (II), 4 мл гідразингідрату, 20 мл води, 40 мл діоксану кип'ятять 3 години, додають 40 мл води, розчин охолоджують, осад, що утворився, відфільтровують, промивають водою, ізопропіловим спиртом, ефіром та кристалізують із водного діоксану. Вихід 91,2%, Ттопл. 220-1°С. Сі4Ні5С1іМб02. Знайдено, %: С -50,3; Н - 4,6; СІ - 10,7; N - 25,2. Розраховано, %: С - 50,2; Н - 4,5; СІ - 10,6; N-25,1. ПМР-спектр d-шкала, м.д., розчинник - ДМСО): 8,23 (с., 1Н) – C8NH; 7,31 (кв., 4Н) - СНаром.; 4,97 (с., 2Н) – N1CH2; 4,42 (пош. с., 2Н) - NH2; 3,58 (с., 3Н) - М7СН3 ; 3,45 (с., 3Н) – N 3СН3. Етап 3. Синтез 1-п-хлорбензил-8-(піридиніл3')метиліденгідразино-теоброміну (IV) - сполука, що заявляється. При нагріванні розчиняють 1,3 г (4 ммоль) 8гідразино-1-п-хлорбензил-теоброміну (IIІ) у суміші 15 мл води, 15 мл ізопропілового спирту та 5 крапель НСІконц. і до отриманого розчину додають 0,5 г (5 ммоль) піридиніл-3-карбальдегіду. С уміш кип'ятять 10 хвилин, охолоджують, осад відфільтровують, промивають водою, 50% ізо 4 пропіловим спиртом, 100% ізопропіловим спиртом, ефіром. Вихід 88,8%, Ттопл. 234-5°С. C20H18Cl1N7О2. Знайдено, %: С - 56,8; Н - 4,4; СІ - 8,5; N - 23,2. Розраховано, %: С - 56,7; Н -4,3; СІ-8,4; N-23,1. ПМР-спектр (d-шкала, м.д., розчинник ДМСО): 11,72 (с., 1Н) – C8NH; 8,58 (пош. с., 2Н) a-СНшрид.; 8,15 (с., 1Н) - СН; 7,59 (пош. с., 2Н) (b,g-СНпірид; 7,42 (кв., 4Н) - СНаром.; 5,05 (с., 2Н) – N1CH2; 4,0 (с., 3Н) - N 7CH3; 3,44(с.,3Н)-N 3СН3. Приклад 2. Антиоксидантну активність (АОА) Іп-хлорбензил-8-(піридиніл3')метиліденгідразинотеоброміну вивчали in vitro методом неферментного ініціювання вільнорадикального окиснення (Pat. 5726063 USA, G01N 33/52. Method ofcolorimetric analysis ofmalonic dialdehydes and 4-hydroxy-2-enaldehydes as indexes oflipid peroxidation, kits for use in said mathod and their preparation / D. Gerard-Monnier, I. Erdelmeir, J Chaudiere, J. Yadan. -appl. №702197, date of patent Mar. 10, 1998.). В якості субстрату використано суспензію яєчних ліпопротеїдів (СЯЛ). СЯЛ готується шляхом гомогенізації яєчного жовтка з фосфа тним буфером (рН 7,4). До суспензії додають досліджувані сполуки в концентрації 10-3, 10-3, 10-7моль/л. Реакцію вільнорадикального окиснення ініціюють додаванням 25 мМ розчину FeS04'7H20. Суміш інкубують 60 хвилин при 37°С. Реакцію зупиняють 50% розчином трихлороцтової кислоти з трилоном Б. Після центрифугування протягом 30 хвилин до розчину тіобарбітурової кислоти (ТБК) додають надосадочну рідину і кип'ятять на водяній бані протягом 60 хвилин. Забарвлений комплекс малонового діальдегіду з ТБК вилучають додаванням н-бутанолу. Методом спектрофотометрії визначають концентрацію малонового діальдегіду, яка свідчить про інтенсивність процесів вільнорадикального окиснення. Антиоксидантну активність (у відсотках) визначають за формулою: АОА = (СK1-С 0/СK1-СK2)100%, де СK1, СK2 - вміст ТБК-реактантів у контрольних пробах, моль/л; С0 - вміст ТБК-реактантів у дослідній пробі, моль/л. Дані АОА сполуки, що заявляється, еталонів порівняння та прототипу наведені в таблиці 1. Таблиця 1 АОА сполуки, що заявляється, еталонів порівняння та прототипу № п/п Сполука М.м. С, моль/л АОА, % 1 424 2 1 -п-хлорбензил-8-(піридиніл3')метиліденгідразинотеобромін (сполука, що заявляється) Прототип 3 4 5 6 Аскорбінова кислота Тіотриазолін a-Токоферолу ацетат Дибунол 176 246 472 220 10-3 10-5 10-7 10-3 10-5 10-7 10-3 10-3 10-3 10-3 94,29 60,00 65,71 87,69 55,39 40,77 65,00 33,90 10,16 25,20 462 5 21412 Як видно із наведених в таблиці 1 даних, сполука, що заявляється, має значно вищі показники АОА ніж еталони порівняння. Так, 1-п-хлорбензил8-(піридиніл-3')метиліденгідразинотеоброміну в концентрації 10-3моль/л має показник АОА більший на 6,6%, 29,29%, 60,93%, 84,13%, 69,09% ніж прототип, аскорбінова кислота, тіотриазолін, aтокоферолу ацетат, дибунол відповідно. У концен Комп’ютерна в ерстка Д. Шев ерун 6 трації 10-5моль/л сполука, що заявляється, активніша за прототип на 4,61%, а в концентрації 107 моль/л - на 24,94%. Таким чином, наведені вище дані свідчать про те, що після поглиблених фармакологічних досліджень сполука, що заявляється, може бути використана в якості антиоксиданту в медичній практиці. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601