Спосіб діагностики схильності до виникнення пухлинних захворювань ендометрія

Спосіб діагностики схильності до виникнення пухлинних захворювань ендометрія, що включає визначення вмісту у периферичній крові досліджуваних Т-цитотоксичних клітин (Тц) і природних 3 21744 4 Кров для дослідження одержують з вени у значення вмісту ПК в крові однієї і тієї ж обстежустерильних умовах в кількості 1мл в стерильну ваної за стандартним і запропонованим методами пробірку, що містить антикоагулянт (в якості антинезначна і складає 1,39%. коагулянта можна використовувати, наприклад, Статистична обробка результатів проведеного гепарин з розрахунку 25-50ОД на 1мл крові). Підпорівняльного визначення вмісту ПК в крові у 20 готовка і фарбування клітинної суспензії для циобстежених за стандартним і запропонованим метометріі' проводиться за стандартним протоколом тодами виконувалась за допомогою комп'ютерної [2]. Використовують моноклональні антитіла до програми Statistica 6.0. Достовірність відмінностей CD-антигенів, мічені різними флюоресцентними оцінювалася у Т-тесті. Дані статистичного аналізу, фарбниками (наприклад, антитіла фірми Caltag наведені на діаграмі Фіг.4, показують, що відмінабо фірми Becton Dickinson). Послідовність пробоності між результатами визначення вмісту ПК у підготовки: крові за двома використаними методами статисти1) Кров для дослідження обережно перемішучно неістотні. Отже, запропонований метод дозвоють, і потім за допомогою дозатора 100 мкл крові ляє в умовах значної економії ресурсів і часу вносять у поліпропіленову пробірку для цитометотримувати такі ж достовірні результати, як і загарії. льноприйнятий метод. 2) За допомогою дозатора у пробірку додають Спосіб пояснюється наступними прикладами: мічені моноклональні антитіла до CD3 і CD8 (по Приклад 1. Пацієнтка К, 28 років. Діагноз: гі5мкл) і перемішують. перпластичний процес ендометрію. Результати 3) Пробірку, що містить суміш крові і антитіл, імунофенотипування лімфоцитів периферичної інкубують протягом 30 хвилин при кімнатній темкрові за стандартним методом: Тц=24,37%; пературі в темноті. ПК=13,79%. Результати імунофенотипування за 4) Після інкубації в пробірку додають 100мкл запропонованим способом: вміст Тц=24,37%, лізуючого розчину (наприклад, розчин Cal-Lyse, ПК=7,02х2=14,04%. Висновок: результати визнафірми Caltag Laboratories Inc). чення ПК за стандартною і запропонованою мето5) Знов інкубують пробірку протягом 15 хвилин дикою різняться лише на 0,25%; вміст Тц і ПК у при кімнатній температурі, в темноті. обстежуваної - в межах норми, ознак пригноблен6) 3 метою лізису еритроцитів у пробірку доня ефекторної ланки клітинного імунітету не виявдають Імл дейонізованої води (t=22±3°С), після лено. Вірогідність пухлинної трансформації, не чого пробірку витримують при кімнатній темперадивлячись на наявність залізисто-кістозної гіпертурі протягом 20хв. плазії на момент взяття біоптату ендометрія, низьПриготовану таким чином пробу крові аналіка. зують на проточному цитометрі «Galaxy» фірми Приклад 2. Пацієнтка В, 58 років. Діагноз: атиDAKO або на проточному цитометрі будь-якої інпова гіперплазія ендометрію. Результати імуношої фірми. Вміст Тц визначають відомим спософенотипування лімфоцитів периферичної крові за бом: шляхом виділення на одержаній діаграмі верстандартним методом: Тц=11,16%; ПК=6,4%. Рехньої правої популяції клітин, при цьому зультати імунофенотипування за запропонованою комп'ютерне забезпечення цитометра автоматичметодикою: вміст Тц=11,16%, ПК=3,5х2=7,0%. Вино визначає і показує процентний вміст клітин з сновок: результати визначення ПК за стандартною виділеної області в пробі, як це зображено на і розробленою методикою розрізняються всього на Фіг.1. Для визначення вмісту ПК виділяють об0,6%; вміст Тц у обстежуваної нижче норми, вміст ласть клітин, розташовану посередині діаграми: ПК - на нижній межі норми. Можна зробити виснонижче області Тц, але ви ще області незабарвлевок про ослаблення ефекторної ланки клітинного них клітин, що дають слабкий сигнал неспецифічімунітету у даної хворої, що створює умови для ного свічення; на Фіг.3 вказана область позначена розвитку пухлини. Отже, хвора потребує системасимволом «R». Поряд з символом вказаний відсотичного обстеження у онкогінеколога. тковий вміст клітин даного типу на гістограмі. Для Таким чином, порівняно з прототипом, розрообчислення відсотка ПК у пробі набуте значення блений метод дозволяє при високому ступеню необхідно помножити на 2, оскільки антиген CD8 вірогідності діагностики скорочувати в 2,5 рази експресується лише приблизно на половині усіх витрати на реактиви і час проведення дослідженПК. У випадку, зображеному на прикладі, вміст ПК ня, при цьому також економиться ресурс коштовдорівнює: 9,87х2=19,74%. На Фіг.2 приведена гіного устатк ування. стограма, одержана на цитометрі при визначенні Література: ПК у крові тієї ж обстежуваної за стандартною ме1. Flow cytometry: a practical approach. Edited тодикою - з антитілами на CD3, CD16 і CD56; ПК by Ormerod M.G. - 3 rd ed. Oxford university press. знаходяться у квадратах Q1 і Q2, їх загальний New York, 2000, 276 p. вміст дорівнює 21,13%. Зіставлення одержаних 2. Caltag Laboratories Inc. No-Wash Lysis даних показує, що різниця між результатами виprocedure, DCO#000933, Rev. 10-02. 5 Комп’ютерна в ерстка М. Мацело 21744 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601