Спосіб раннього прогнозування пухлинних захворювань ендометрія

Спосіб раннього прогнозування пухлинних захворювань ендометрія шляхом імунофенотипування лімфоцитів периферичної крові, що включає визначення відносного вмісту Т-хелперів, Тсупресорів і природних кілерів (ПК), який відріз няється тим, що додатково розраховують індекс пухлиноасоційованої реактивності (ІПР) за формулою: Корисна модель відноситься до медицини, зокрема - до імунології і гінекології, і може бути використана для виявлення осіб, що мають схильність до формування пухлинних захворювань ендометрію і порушення імунного статусу, які є передумовою для реалізації вищезгаданої схильності. Найближчим до технічного рішення, що заявляється, є метод визначення наявності пропухлинної імунної відповіді у обстежуваної шляхом пошуку імунних клітин, наприклад - В-лімфоцитів або дендритних клітин, які експресують на своїй поверхні особливий пухлиноасоційований антиген [1]. З цією метою обстежуваному парентерально вводять мічені радіоактивною міткою моноклональні антитіла до пухлиноасоційованого антигена. Після вказаної процедури вичікують від декількох днів до декількох тижнів, щоби введені антитіла зв'язалися з імунними клітинами, які експресують на своїй поверхні вказаний антиген (якщо такі присутні в організмі), а антитіла, що не зв'язалися з радіоактивною міткою, елімінувалися з організму. Після вказаного часу за допомогою спеціального приладу для реєстрації радіоактивного випромінювання визначають присутність в організмі мічених моноклональних антитіл, що зв'язалися з пухлиноасоційованим антигеном, і за результатами визначення роблять висновок про наявність пухлини і локалізацію пухлиноспецифічних імунних клітин в організмі обстежуваного. Проте, введення в організм радіоактивного ізотопу, приєднаного як мітка до моноклональних антитіл, є певною загрозою для здоров'я обстежуваної. Оскільки відомо, що радіоактивні елементи можуть викликати мутації в клітинах організму, що саме по собі є чинником ризику виникнення ракових захворювань. До того ж, негативним чинником є також забруднення навколишнього середовища радіоактивними ізотопами, що виводяться з організму досліджуваної. До недоліків методу слід віднести і необхідність повторних відвідин обстежуваною лікувальної установи і тривалий проміжок часу від початку дослідження до отримання кінцевих діагностично значущи х результатів (від декількох днів до тижнів). В основу корисної моделі поставлена задача вдосконалення способу раннього прогнозування пухлинних захворювань ендометрію шляхом додаткового розрахунку індексу пухлиноасоційованої реактивності за запропонованою формулою, що дозволить усун ути ризик для здоров'я пацієнтки, пов'язаний з парентеральним введенням радіоактивних ізотопів, прискорити отримання результату і усунути необхідність повторних відвідин обстежуваною лікувально-діагностичної установи. Поставлена задача вирішується тим, що згідно корисної моделі, додатково розраховують індекс пухлиноасоційованої реактивності (ІПР) за формулою: ІПР = ПК ´ Тс Тх , (19) UA (11) 21743 (13) U де: ПК - відсотковий вміст природних кілерів від числа усі х лімфоцитів; Тс - відсотковий вміст Т-супресорів від загального числа лімфоцитів; Тх - відсотковий вміст Т-хелперів, і при значеннях індексу 4 > ІПР > 9 прогнозують патологію ендометрія пухлинної природи. 3 21743 4 цитометрі, визначаючи відносний вміст у крові ПК, ПК ´ Тс ІПР = , Тх і Тс відповідно до стандартних інструкцій, опиТх саних у керівництві по проточній цитометрії [3]. де: ПК - відсотковий вміст природніх кілерів Результати обстеження 131 пацієнтки гінековід числа усі х лімфоцитів; логічної клініки і 11 практично здорових жінокТс - відсотковий вміст Т-супресорів від загадобровольців показали, що аномальні значення льного числа лімфоцитів; ІПР (4>ІПР>9) не зустрічаються у здорових жінок, в Тх - відсотковий вміст Т-хелперів, той час як серед онкохворих, що страждають на і при значеннях індексу 4 > ІПР > 9 прогнозують пухлинне захворювання ендометрію, відсоток патологію ендометрію пухлинної природи. аномальних значень ІПР досягає 78% (Фіг. 1). СеСпосіб виконується наступним чином. ред пацієнтів з патологією непухлинної природи У обстежуваної в стерильних умовах беруть аномальні значення ІПР виявляються не більше пробу крові і проводять імунофенотипування лімніж у 27% обстежених. фоцитів крові, при цьому визначають відносний Спосіб пояснюється наступними прикладами: вміст Т-хелперів, Т-супресорів і природніх кілерів Приклад 1 (ПК). Потім розраховують спеціальний індекс пухХвора З. 36 років. Поступила у клініку з діагнолиноасоційованої реактивності (ІПР) за запропозом: «Поліп ендометрію. Метрорагія, постгеморанованою формулою. Кров забирають з периферійгічна анемія». Результати дослідження крові: Тхної вени у кількості 1-2мл в стерильний шприц, 42,6%, Тс-23,9%, ПК-12,9%, ІПР=7,2 (нормальне стінки якого змочені розчином гепаріну або в стезначення). Нормальне значення ІПР дозволило рильні гепаринізовані пробірки (Falcon, США). Поприпустити відсутність онкопатології у пацієнтки. тім за допомогою проточного цитофлуоріметру Хворій проведена гістероскопія і видалення поліпа або світлового мікроскопу і мічених моноклональендометрію. Подальше гістологічне вивчення зіних антитіл визначають відсотковий вміст у крові скоба із порожнини матки і видаленого поліпа підПК, Тх і Тс. твердило відсутність пухлинної патології у паУ випадку, коли для визначення вказаних типів цієнтки. клітин використовують метод проточної цитометПриклад 2 рії, підготовку і фарбування зразків крові можна Хвора Т. 48 років. Поступила в клініку із діагпроводити за «безвідмивним» протоколом, тобто нозом «Міома матки». Результати дослідження без виділення лейкоцитів [2]: крові: Тх-28,6%, Тс-35,4%, ПК-13,7%, ІПР=16,9 - Кров пацієнта обережно перемішують, потім (аномальне значення). Аномальне значення ІПР за допомогою дозатора розносять по 100мкл у 3 дозволило запідозрити наявність у пацієнтки пухполіпропіленові пробірки для цитометрії. лини ендометрію. Подальше обстеження з прове- У пробірки за допомогою дозатора додають денням гістологічного вивчення біоптата ендометпо 5мкл мічених моноклональних антитіл за схерія підтвердило припущення, завершальний мою (Табл. 1), в якій вказані комбінації моноклонадіагноз - Рак тіла матки St1BpT1вNoMo. льних антитіл, що використовуються для визнаТаким чином, у порівнянні з прототипом, зачення типу лімфоцитів. пропонований спосіб дозволяє з високим ступенем - Всі пробірки, що містять суміш крові і антитіл, вірогідності виявляти групу ризику щодо виникненінкубують протягом 30 хвилин при кімнатній темня пухлинної патології ендометрію шляхом додатпературі в темряві. кового розрахунку індекса пухлиноасоційованої - Після інкубації в кожну пробірку додають по реактивності за запропонованою формулою, що 100мкл лізуючого розчину (наприклад, Cal-Lyse дозволить прискорити отримання результату і усуфірми Caltag Laboratories Inc). нути ризик для здоров'я пацієнта, пов'язаний з - Знов інкубують усі пробірки протягом 15 хвипарентеральним введенням радіоактивних ізотолин при кімнатній температурі у темряві. пів, усун ути необхідність повторних відвідин об- З метою лізису еритроцитів в кожну пробірку стежуваним лікувально-діагностичної установи. додають по Імл деіонізованої води (t=22±3°С) і Крім того, запропонований спосіб дозволяє адеквитримують пробірки при кімнатній температурі ватно планувати іммунокорегуючу терапію і відпротягом 20хв, після чого проби готові для дослістежувати її ефективність. дження методом проточної цитометрії. Література: 1. Method for detecting lymphoid tissue in tumor Таблиця 1 progression. Patent N 6,760,612 USA, Issued July 6, 2004. Inventors: Barbera-Guillem; Emilio. Номер Набір антитіл до Специфічність 2. Caltag Laboratories Inc. No-Wash Lysis proпробірки CD-маркерів 1 CD3+CD4+ Т-хелпери cedure, DCO#000933, Rev. 10-02. 2 CD3+CD8+ Т-супресори/цитотоксичні 3. Flow cytometry: a practical approach. Edited 3 CD16+CD56+ Природні кілери (ПК) by Ormerod M.G. - 3rd ed. Oxford university press. New York, 2000, 276p. Одержані зразки аналізують на проточному 5 Комп’ютерна в ерстка Н. Лисенко 21743 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601