Спосіб виділення імунокомпетентних клітин молозива

Спосіб виділення імунокомпетентних клітин молозива, що включає видалення жиру, розділен 3 21789 4 ня 0,1М фосфатним буфером при pH7,4 забезперетримкою цих клітин в ферментативно агресивчує фізіологічний характер середовища щодо кисному середовищі, що закономірно приводить до лотно-лужного балансу, що складає фізіологічний змін в найбільш вразливому мембранооптимум для імунокомпетентних клітин і сприяє їх рецепторному апараті імунокомпетентних клітин високій життєздатності. та впливає на їх стр уктурний малюнок. Значно - Додавання інгібітора ензимів контрикала в змінює морфологію і утруднює ідентифікацію клідозі 50 од. на кожні 10см 3 молозива ефективно тин незбалансованість середовища за осмомолязменшує ензиматичну активність гідролізних феррністю та онкотичним тиском. Наявність в таких ментів молозива, що сприяє зменшенню пошконекоректно підготовлених пробах «перетравлених джуючого впливу ферментів на імунокомпетентні і мовчазних» мононуклеарних фагоцитів та лімфоклітини і підвищенню їх життєздатності. цитів призвела до поширення помилкового погля- Розведення після розділення клітин виділеду на такі клітини як на колостральних «пасажиної суспензії сироваткою великої рогатої худоби рів». нормалізує осмотичний та онкотичний баланс в Використання запропонованого методу дозвосуспензії і забезпечує підвищення життєздатності ляє уникнути зазначених недоліків, забезпечує клітин. високу життєздатність імунокомпетентних клітин в Загалом наведені суттєві ознаки корисної мосуспензіях (до 85-88%) із збереженням повноцінделі забезпечують досягнення її мети: отримання ного морфологічного малюнку в мазках. Все це суспензій імунокомпетентних клітин молозива з забезпечує впевнену цитологічну ідентифікацію і більш високою життєздатністю клітин, покращениточність отриманих результатів. ми можливостями ідентифікації клітин на основі Особливостями запропонованого способу є: збереження їх стр уктури та функцій. - Оптимізація параметрів виділення та розвеСпосіб виділення імунокомпетентиих клітин дення імунокомпетентних клітин молозива; молозива включає проведення наступних опера- врахування значення ензиматичного аутолізу цій: розведення, нейтралізація колостральних прота включення операції теаз та стабілізація проб молозива; знежирення та - зменшення ферментативного тиску на імуноотримання суспензії клітинних елементів молозикомпетентні клітини у зразках молозива; ва; виділення імунокомпетентних клітин на градіє- визначення та застосування оптимальних оннті щільності фіколу та верографіну при питомій котичних та осмотичних умов при виділенні клітин щільності 1, 077; отримання суспензії імунокомпемолозива та приготуванні суспензії імунокомпететентних клітин. нтних клітин. Від лактуючих корів в перші 72 години після Література отелення відбирають зразки молозива об"ємом по 1. Карташова В.М., Касянчук В.В. Уровень со50-100мл і розводять холодним поживним середоматических клеток в молоке коров, больных лейвищем RPMI 1640, Ігла, середовищем 199 або козом/УВетеринария.- 1991. - №11. - С.43-44. 0,15М фосфатним буфером pH7,4 з додаванням 2. Lee C.S., McCauley I., Hartmann P.E. Light інгібіторів протеаз (наприклад, 50од. контрикалу на and electron microscopy of cells in pig colostrums, кожні 10мл молозива). Отриманий матеріал достаmilk and involution secretion // Acta Anatomica вляють в лабораторію при температурі +4°С на (Basel). - 1983. - 116(2). - P.126-135. протязі до 2 годин. Зразки знежирюють триразо3. Jensen D.L., Eberhart R.J., Macrophagesin вим послідовним центрифугуванням при 400g і Bovine Milk // American Jomal of Veterinary Reпереносять в інші флакони, які повторно центриsearch. 1985. - v.36.- N 5. - P.619-624. фугують, а з осаду готують суспензії клітин моло4. Tuboly S., Berhath S., Glavits R. Intestinal зива для подальших досліджень. Для збереженосAbsorption of Colostra! Lymphoid Cells in Newbom ті функціональних та стр уктурних характеристик Piglets//Veterinary Immunology and контролюють температуру (близько +4°С), фізіолоImmunopathology. 1988. - v.20. - P.75-85. гічну осмомолярність суспензії, точне витримуван5. Salmon H. The mammary gland and neonate ня відповідного показника pH 7,35 та онкотичну mucosal immunity // Vet.Immunol. Immunopathol. рівновагу. Відмиті шляхом подвійного центрифугу1999. - Dec 15. - 72. - (1-2). - P.143-155. вання клітини нашаровують на градієнт фіколу з 6. Salmon H. Mammary gland immunology and верографіном і після центрифугування відбирають neonate protection in pigs. Homing of lymphocytes лейкоцитарний шар. Відібрані клітини вносять в into the MG // Adv.Exp.Med.Biol. - 2000. - 480. 1мл сироватки ВРХ, ретельно ресуспендують та P.279-286. готують мазки на предметних скельцях подібно до 7. Вирусологая. Ред. Б.Филдс й Д.Найл. М., мазків крові. «Мир». - 1989. - т.2. - С.30-31. Проведення досліджень за запропонованим 8. Ульянов А.Г., Карпуть И.М. Цитологический методом дозволяє максимально точно ідентифікусостав молозива коров и его влияние на лейкоповати та визначати кількісний склад імунокомпетенэз у новорожденных телят// В сб.: «Ветеринарная тних клітин в молозиві. Існуючі в результатах донаука - производству». Межведомств, темат. сбосліджень різних авторів певні невідповідності в рник. 1983. Минск., вып. 21. - С.69-71. типізації лімфоїдних клітин та мононуклеарних 9. Кононский А.И. Гистохимия. К., «Вища шкофагоцитів молозива в значній мірі пов'язані з пела». -1976. - С.261-263. 5 Комп’ютерна в ерстка В. Мацело 21789 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601