Спосіб одержання екстракту бруньок берези, що володіє протимікробною активністю і зменшує рівень резистентності стафілококів до антибіотиків

Спосіб одержання екстракту бруньок берези з протимікробними властивостями і новою фармакологічною активністю здатністю 3 27940 4 S. intermedius 1 0 0 0 камері при температурі –10...-18°С. Заморожену S. hominis 6 0 0 1/16,7 сировину подрібнюють на порошок з розміром частинок, що проходять крізь сито з отворами 0,3S. cohnii ssp. cohnii 1 0 0 0 S. capitis 2 0 0 0 0,5мм. Одержаний порошок знежирюють гексаном S. sciuri 1 0 0 0 у апараті Соксклета впродовж 3 год., висушують і S. simulans 1 0 0 0 далі екстрагують у герметично закритій посудині в S. saprophyticus 2 0 0 0 темному місці методом мацерації (настоювання холодним способом) за допомогою 90% водного Всього: 51 1/2,0 2/3,9 6/11,8 етанолу у співвідношенні сировина:екстрагент 1:51:10 впродовж 10-14 днів. Готовий екстракт Примітка: 1.* - розведення водно-етанольних екстрактів, відфільтровують, надлишок спирту із сировини 2. ** - концентрація екстрагованих речовин (мкг/мл). відтискають за допомогою пресу, кількість 3. § - кількість штамів з відповідними значеннями МБцК. втраченого екстрагента доповнюють до вихідного 4. §§ - відсоток штамів з відповідними значеннями МБцК. об'єму. Екстракт зберігають у герметично закритій посудині без доступу світла при кімнатній температурі. Стандартизацію екстракту здійснювали за масою сухого залишку, МБсК 90% водно-етанольного екстракту одержаного після випаровування 1,000мл при берези бородавчастої відносно клінічних штам кімнатній температурі (30мг). Дослідження протимікробних властивостей Види стафілококів Розведення екстракту Значен екстракту бруньок берези бородавчастої виконано на 150 клінічних штамах золотистих і коагулазо S. aureus 1:640 негативних стафілококів, виділених (від пацієнтів з S. epidermidis 1:128:0 фур ункульозом, абсцесами, флегмонами, опіками, S. haemolyticus 1:320 маститом, сепсисом, уретритами, дизбактеріозом S. hominis 1:1280 кишечника) за період 1999-2005pp. Тест-штами S. cohnii ssp. cohnii 1:640 були ідентифіковані за комплексом культуральних S. capitis 1:1280 і біохімічних власти востей («STAPHYtest 16», S. sciuri 1:1280 Lachema, Чехія) і характеризувалися різним S. simulans 1:640 ступенем резистентності до оксациліну, S. saprophyticus 1:1280 ципрофлоксацину, тетрацикліну, еритроміцину, кліндаміцину і гентаміцину. У ряду тест-шмамів ідентифіковано детермінанти антибіотикоМетодом двократних серійних розведень в бульйоні вивчено вплив біологічно активних резистентності - наявність пеніцилін-зв'язуючого речовин 90% водно-етанольного екстракту білка РВР2’, що є продуктом гена mecА і визначає бруньок берези бородавчастої в метіцилінорезистентність (методом латекссуббактеріостатичних концентраціях на рівень аглютинації, SlidexÒ MRSA Detection, bioMerieux, чутливості до антибіотиків клінічних штамів Франція), і функціонування протонної ефлюксної стафілококів із встановленим фенотипом помпи NorA, котра забезпечує резистентність до резистентності MecA+NorA+ (табл. 3). Реєстрацію природних та синтетичних катіонних сполук, в росту культур за зміною оптичної щільності тому числі фторхінолонів (за зміною чутливості середовища здійснювали після 20-24 і 60-70 год. штамів до ципрофлоксацину в присутності інкубації. 30мкг/мл специфічного інгібітора помпи NorA резерпіну). і ; Мінімальні бактерицидні концентрації (МБцК) екстракту встановлено методом двократних Вплив 90% водно-етанольного екстракту серійних розведень в агарі (табл. 1). Мінімальні берези бородавчастої на рівень чутливості до антибіотиків клінічни бактеріостатичні концентрації (МБсК) екстракту встановлено методом двократних серійних МБсК після 20-24 год. інкубації розведень в бульйоні за зміною оптичної щільності середовища (табл. 2). 1 1:640 (46,88 1:1280 (23,44 Штами стафілококів Ан Антибіотик мкг/мл) мкг/мл) § § Таблиця 1 * ** ** Оксацилін : Розподіл клінічних штамів стафілококів за чутливістю S. aureus ICA-5 25 -*** 0,8 32 до 90% водно-етанольного екстракту бруньок берези бородавчастої 50 S. aureus «Кунда» 256 S. haemolyticus 5-03 >400 100 >4 50 >8 МБцК екстракту S. haemolyticus «Сопуляк» >400 50 >8 25 >16 Кількість Види стафілококів 1:8* 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 8 штамів S. haemolyticus «Баб'як» 200 25 6,25 32 3750** 1875 937,5 468,75 234,38 117,19 58,59 Тетрациклін S. aureus 99 0 5/5,1 67/67,7 10/10,1 8/8,1 6§/6,1§§ S. aureus ICA-5 50 - 3/3,0 50 1 Коагулазо-негативні S. aureus «Кунда» 100 100 1 стафілококи: S. haemolyticus 5-03 1,56 8 8 S. epidermidis 17 0 1/5,9 2/11,8 12/70,6 2/11,8 0 0 S. haemolyticus «Сопуляк» 1,56 8 8 S. haemolyticus 20 1/5,0 1/5,0 3/15,0 13/65,0 2/10,0 0 0 S. haemolyticus «Баб'як» 0,8 4 4 5 S. aureus ICA-5 . S. aureus «Кунда» S. haemolyticus 5-03 S. haemolyticus «Сопуляк» S. haemolyticus «Баб'як» >400 >400 25 25 0,4