Спосіб стандартизації рідких екстрактів бруньок та листя берези бородавчастої

1. Спосіб стандартизації рідких екстрактів бруньок та листя берези бородавчастої, що включає визначення кількісного вмісту діючих речовин, який відрізняється тим, що визначають кількісний вміст суми флавоноїдів як діючих речовин. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що визначення кількісного вмісту флавоноїдів проводять спектрофотометричним методом. 3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що визначення кількісного вмісту суми флавоноїдів проводять в перерахунку на гіперозид. (19) (21) u200607843 (22) 13.07.2006 (24) 15.12.2006 (46) 15.12.2006, Бюл. № 12, 2006 р. (72) Рехлецька Олена Володимирівна, Калинюк Тимофій Григорович, Ващенко Катерина Фролівна, Бензель Леонід Васильович, Процик Леся Володимирівна (73) ЛЬВІВСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ ДАНИЛА ГАЛИЦЬКОГО 3 19612 З рідких екстрактів бруньок та листя берези бородавчастої готують розчини у такому розведенні, щоб їх оптична густина знаходилась в достовірному інтервалі для спектрофотометричного визначення (0,2-0,7). Як розчинник використовують спирт етиловий відповідної концентрації. Оптичну густину приготованих розчинів вимірюють на спектрофотометрі в інтервалі довжин хвиль від 200 до 450нм з кроком 1-2нм (як розчин порівняння використовують спирт етиловий відповідної концентрації). Паралельно вимірюють оптичну густину розчину стандартного зразка гіперозиду. Для розрахунку кількісного вмісту флавоноїдів оптичну густину розчину досліджуваного рідкого екстракту та розчину гіперозиду визначають при максимумі світлопоглинання =270нм. Спектри поглинання досліджуваних об’єктів зображені на графіках, де у наведеній системі координат по осі абсцис представлені значення довжини хвилі, нм, по осі ординат - значення оптичної густини. Спектри поглинання розчинів рідкого екстракту бруньок берези зображені на Фіг. 1 (І розчин 1:1000, II - розчин 1:2500), спектри поглинання розчинів рідкого екстракту листя берези - на Фіг.2 (III - розчин 1:1000, IV - розчин 1:2500), спектр поглинання розчину стандартного зразка гіперозиду - на Фіг.3. Кількісний вміст суми флавоноїдів у досліджуваному рідкому екстракті обраховують за формулою: A x Cc X W, Ac де Х - кількісний вміст суми флавоноїдів в перерахунку на гіперозид, %; Ах - оптична густина розчину досліджуваного рідкого екстракту; Сс - концентрація розчину стандартного зразка гіперозиду, %; Ас - оптична густина розчину стандартного зразка гіперозиду; W - розведення досліджуваного рідкого екстракту. Сумарний вміст флавоноїдів в перерахунку на гіперозид у рідкому екстракті бруньок берези становить (1,94%±0,12%)-(2,00%±0,12%), у рідкому екстракті листя берези (3,28%±0,16%) 4 (3,47%±0,18%). Відносне стандартне відхилення не перевищує 4,90%, відносне стандартне відхилення середнього результату не перевищує 2,19%. Спосіб ілюструється наступними прикладами. Приклад 1. 1мл досліджуваного рідкого екстракту бруньок берези бородавчастої вносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки (розчин А). 2,5мл розчину А вносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки. Приготовленим розчином заповнюють кювету спектрофотометра і вимірюють оптичну густину при довжині хвилі 270нм, як розчин порівняння використовують спирт етиловий 70%. Готують розчин стандартного зразка гіперозиду у концентрації 0,001%: 0,05г стандартного зразка гіперозиду, попередньо висушеного до постійної маси, кількісно переносять у мірну колбу об’ємом 100мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки. 1мл приготованого розчину переносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки. Мірну колбу закривають і перемішують розчин. Оптичну густину приготованого розчину стандартного зразка гіперозиду вимірюють при довжині хвилі 270нм, як розчин порівняння використовують спирт етиловий 70%. Кількісний вміст суми флавоноїдів у досліджуваному рідкому екстракті обраховують за формулою: A x Cc X 1000 Ac де X - кількісний вміст суми флавоноїдів в перерахунку на гіперозид, %; Ах - оптична густина розчину досліджуваного рідкого екстракту; Сс - концентрація розчину стандартного зразка гіперозиду, %; Ac - оптична густина розчину стандартного зразка гіперозиду; 1000 - розведення досліджуваного рідкого екстракту. Результати визначення кількісного вмісту суми флавоноїдів у рідкому екстракті бруньок берези бородавчастої наведені у таблиці 1. Таблиця 1 Визначення кількісного вмісту суми флавоноїдів у рідкому екстраюбруньок берези бородавчастої (n=5, P2=95%) № визначення 1 1 2 3 4 5 Х, % 2 1,82 2,02 1,97 1,86 2,03 Метрологічні характеристики 3 X =l,94 S2=0,0091 S=0,0951 Sr=0,0490 RSD=4,90% 5 19612 6 Продовження табл.1 1 2 3S X =0,0475 S X,r =0,0219 RCDX =2,19% X =0,26 X =0,12 =13,40% =6,19% Кількісний вміст суми флавоноїдів у рідкому екстракті бруньок берези становить 1,94%±0,12%, відносне стандартне відхилення - 4,90%, відносне стандартне відхилення середнього результату 2,19%. Приклад 2. 1мл досліджуваного рідкого екстракту бруньок берези бородавчастої вносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки (розчин А). 1мл розчину А вносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки. Приготовленим розчином заповнюють кювету спектрофотометра і вимірюють оптичну густину при довжині хвилі 270нм, як розчин порівняння використовують спирт етиловий 70%. Готують розчин стандартного зразка гіперозиду у концентрації 0,001%: 0,05г стандартного зразка гіперозиду, попередньо висушеного до постійної маси, кількісно переносять у мірну колбу об’ємом 100мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки. 1мл приготованого розчину переносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки. Мірну колбу закривають і перемішують розчин. Оптичну густину приготованого розчину стандартного зразка гіперозиду вимірюють при довжині хвилі 270нм, як розчин порівняння використовують спирт етиловий 70%. Кількісний вміст суми флавоноїдів у досліджуваному рідкому екстракті обраховують за формулою: A x Cc X 2500 Ac , де Х - кількісний вміст суми флавоноїдів в перерахунку на гіперозид, %; Ах - оптична густина розчину досліджуваного рідкого екстракту; Сс - концентрація розчину стандартного зразка гіперозиду, %; Ac - оптична густина розчину стандартного зразка гіперозиду; 2500 - розведення досліджуваного рідкого екстракту. Результати визначення кількісного вмісту суми флавоноїдів у рідкому екстракті бруньок берези бородавчастої наведені у таблиці 2. Таблиця 2 Визначення кількісного вмісту суми флавоноїдів у рідкому екстраю бруньок берези бородавчастої (n=5, Р2=95%) № визначення 1 2 3 4 5 Х, % 1,94 2,16 2,01 1,91 1,99 Метрологічні характеристики X =2,00 S2=0,0094 S=0,0970 Sr=0,0485 RSD=4,85% S X =0,0434 S X,r =0,0217 RCD X =2,17% X =0,12 X =0,12 =13,5% =6,00% 7 19612 Кількісний вміст суми флавоноїдів у рідкому екстракті бруньок берези становить 2,00%±0,12%, відносне стандартне відхилення - 4,85%, відносне стандартне відхилення середнього результату 2,17%. Приклад 3. 1мл досліджуваного рідкого екстракту листя берези бородавчастої вносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 60% до мітки (розчин А). 2,5мл розчину А вносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 60% до мітки. Приготовленим розчином заповнюють кювету спектрофотометра і вимірюють оптичну густину при довжині хвилі 270нм, як розчин порівняння використовують спирт етиловий 60%. Готують розчин стандартного зразка гіперозиду у концентрації 0,001%: 0,05г стандартного зразка гіперозиду, попередньо висушеного до постійної маси, кількісно переносять у мірну колбу об’ємом 100мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки. 1мл приготованого розчину переносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки. Мірну колбу закривають і перемішують розчин. 8 Оптичну густину приготованого розчину стандартного зразка гіперозиду вимірюють при довжині хвилі 270нм, як розчин порівняння використовують спирт етиловий 70%. Кількісний вміст суми флавоноїдів у досліджуваному рідкому екстракті обраховують за формулою: A x Cc X 1000 , Ac де Х - кількісний вміст суми флавоноїдів в перерахунку на гіперозид, %; Ах - оптична густина розчину досліджуваного рідкого екстракту; Сc- концентрація розчину стандартного зразка гіперозиду, %; Ас - оптична густина розчину стандартного зразка гіперозиду; 1000 - розведення досліджуваного рідкого екстракту. Результати визначення кількісного вмісту суми флавоноїдів у рідкому екстракті листя берези бородавчастої наведені у таблиці 3. Таблиця 3 Визначення кількісного вмісту суми флавоноїдів у рідкому екстракті листя берези бородавчастої (n=5, Р2=95%) № визначення 1 2 3 4 5 Х, % 3,09 3,44 3,31 3,30 3,26 Метрологічні характеристики X =3,28 S2=0,0159 S=0,1261 Sr=0,0384 RSD=3,84% S X =0,0564 S X,r =0,0172 RCD X =1,72% X =0,35 X =0,16 =10,67% =4,88% Кількісний вміст суми флавоноїдів у рідкому екстракті листя берези становить 3,28% 0,16%, відносне стандартне відхилення - 3,84%, відносне стандартне відхилення середнього результату 1,72%. Приклад 4. 1мл досліджуваного рідкого екстракту листя берези бородавчастої вносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 60% до мітки (розчин А). 1мл розчину А вносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 60% до мітки. Приготовленим розчином заповнюють кювету спектрофотометра і вимірюють оптичну густину при довжині хвилі 270нм, як розчин порівняння використовують спирт етиловий 60%. Готують розчин стандартного зразка гіперозиду у концентрації 0,001%: 0,05г стандартного зразка гіперозиду, попередньо висушеного до постійної маси, кількісно переносять у мірну колбу об’ємом 100мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки. 1мл приготованого розчину переносять у мірну колбу об’ємом 50мл і доводять спиртом етиловим 70% до мітки. Мірну колбу закривають і перемішують розчин. Оптичну густину приготованого розчину стандартного зразка гіперозиду вимірюють при довжині хвилі 270нм, як розчин порівняння використовують спирт етиловий 70%. Кількісний вміст суми флавоноїдів у досліджуваному рідкому екстракті обраховують за формулою: 9 X A x Cc Ac 19612 2500 , де Х - кількісний вміст суми флавоноїдів в перерахунку на гіперозид, %; Ах - оптична густина розчину досліджуваного рідкого екстракту; Сc - концентрація розчину стандартного зразка гіперозиду, %; 10 Ac - оптична густина розчину стандартного зразка гіперозиду; 2500 - розведення досліджуваного рідкого екстракту. Результати визначення кількісного вмісту суми флавоноїдів у рідкому екстракті листя берези бородавчастої наведені у таблиці 4. Таблиця 4 Визначення кількісного вмісту суми флавоноїдів у рідкому екстра листя берези бородавчастої (n=5, Р2=95%) № визначення 1 2 3 4 5 Х, % 3,31 3,69 3,42 3,38 3,53 Метрологічні характеристики X =3,47 S2=0,0221 S=0,1487 Sr=0,0429 RSD=4,29% S X =0,0665 S X,r =0,0192 RCD X =1,92% X =0,41 X =0,18 =11,82% =5,19% Кількісний вміст суми флавоноїдів у рідкому екстракті листя берези становить 3,47%±0,18%, відносне стандартне відхилення - 4,29%, відносне стандартне відхилення середнього результату 1,92%. Таким чином, запропонований спосіб стандартизації рідких екстрактів бруньок та листя берези бородавчастої за вмістом флавоноїдів дозволяє одержати достовірні (відносне стандартне відхилення не перевищує 4,90%, відносне стандартне відхилення середнього результату не перевищує 2,19%), легко відтворювані результати. Спосіб є доступним, його застосування дозволяє значно скоротити тривалість аналізу. Малий об’єм зразків, що використовуються для аналізу, дозволяє зменшити витрати готового продукту на стадії контролю якості рідкого екстракту. Джерела інформації: 1. Государственная Фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. -М: Медицина, 1990. - С.298-299. 2. Ростопора О.В. Підбір оптимальної лікарської форми та опрацювання методу одержання галенового препарату з бруньок та листя берези бородавчастої. //Матеріали II міжвузівської наукової конференції студентів та молодих вчених. - Вінниця, 2005. - С.258-259. 3. Куцик Р.В., Зузук Б.М. Береза бородавчатая (Береза повислая). Аналитический обзор. //Провизор. - 2001, №10. - С.17-20. 11 Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 19612 Підписне 12 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601