Експрес спосіб підготовки біологічних об’єктів для електронної мікроскопії

A7/7/C ft 01 Д/ у QQ СШС1Б ДІДГОТОВД БІОЛОГІЧНИХ ОБ'ЄКТІВ ДДЯ ШЖГРОЧНОЇ МІКРОСКОПІЇ В инах ід ві д нос ить с я до о бл ас ті мед ииини, з о кр е ма д о гі ст о шогі ч н о ї т е ші к и, т а пр из на ч е н и й д л я пі д го т о в ки б і о л о гі ч н их о б ' є к т і в д л я е л е кт р о нно ї мі кр о с ко пі ї . Ві до мий с по сі б швид кої пі д гот о вки клі т ин дл я е ле ктр о нно- мі крос ко пі ч но го д осл ід же ння /Я .Н .Ф ил ипе нко . Бы стр ая под гото вка кл е ток бро нх иоа ль веол яр но го ла ва жа дл я эле ктр онно -микр ос ко пиче с кого ис с л е д о ва ния / / Л а бо р ат о р но е д ел о .- 1 98 8 ,- 0 8 .- с .40 - 4 2/ . С у т ь ме т од у по л я га в в т о м у , що пі с л я з а бо р у і це нт р и фу гу ва н ня ма т е р і а л у , кл і т инний о с а д пр о мива л и ка ко д ила т ним б у фер о м , р Н - 7 ,2- 7 ,4 , і фі ксу вал и на пр от я зі 40 -5 0 х вил ин о с мі євим фі кса то ро м / 2 % OjO ^ 5 ,0 мл ; 0 ,2 М ка ко д ил а т но го б у фе р у - 4 ,5 мл ; 0 ,2 ^ ^c t n l o - 0 , 5 мл л о і 4 0 0 ,0 мг с а х а р о з и/ . П і с л я пр о ми ва нн я в 5 0 с пир т і / 2 р а з и по 5 - 1 0 х в./ ма т е р і а л з не во д ню ва л и в с пир т а х в ис х і дно ї ко т і е нт р а иі ї і о ки с у пр о пі л е ну по с х е мі : 7 0 ° с п ир т - 2 р а з и п о 1 0 х в , 9 6 ° с п ипт - 2 р а з и по 1 0 х в, 1 0 0 ° с п ир т - 2 р а з и по 1 5 х в, с у мі ш 1 0 0 ° с п ир т у з о к ис о м пр о пі л е ну /1 : 1 / - 1 0 х в, о кис пр о пі л е ну 1 0 х в. П і с л я иь о го ч а ст ину о са д у пас те л і вс ь ко ю пі пе т ко ю на нос ил и ч а ч ист е по кр ивне с кл о /2 - 3 кр а пл і / і пі дс у шу ва л и пр и 3 7 °С на пр о т я зі 1 5 - Я ) х в. Шт ер іа л на пил ял и зо ло то м і пр о гл од ал и в ра ст ро вому е ле ктр о нно му мі кро с ко пі Л ЬМ- 35G . Част ину о са ду що з ал ишила сь про ся кал и в сумі ші с мо л и т а о кис у пр о пі л е ну / 1 :1 / і з а кл ю ча л и в е по н- а р а л д і т . А л е да ний с по с і б швид ко ї пі д гот о вки кл і т ки д л я ел е ктр о нномі кпос ко піч но го д о сл ід же ння пот р еб у є пе вних на викі в, на явно ст і пр ил а д і в / ие нт пи фу ги , р Ч - ме гр у, т е р мо с т а т у т а і н./ , ве л и ко ї к і л ько с т і р і зно ма ні т них д о р о г их х і мі ч них р е а кт иві в / о с мі ю , з о л о т а , ка ко д ил а т но го б у фер у , р оз ч ину х ло р ист о го ка л ь иі ю , са х ар о з и, с пирт і в різної концентрації, окису пропілен у, епон-арал діту та ін/ цього потребуй б агато час у /до 3- х діб/. Спосіб не з абезпеч ує ви сокої! якості електронно-мікроскопічного зображення і не дозволяє підвищити розріжаючу властивість об'єктів, що не дозволяз використовувати дану методику для швидкої підготовки тканин для еяектрон но-мгкпосколічного дослідження. Завданням винаходу є скорочення часу підготовки тканин до електтюнно-мікроскопічного дослідження і спрощення методики підготовки біологічних об"ектів до дослідження. Спосіб здійснюється слідуючим чином: Фіксовану тканину органу занутжшть в 2,5% глютар-альдегіду на 15 хв. Потім її одноразово відмивають в фізіологічному -оозчині 3-5 хвилин і для кінцевої фіксації переносять в 1,0$ розчин осмієвої кислоти на 15-30 хвилин. Потім біологічну тканину зан урюють в 70° аиетоя /2 рази по б хв./, а потім в 100° аиетон / 2 пази п о 5 хв./, і далі в сумі ш / 1: 1/ аиетону і заливного середовища /2 шзи по 5 хв./. Потім, як звичайно, заливка в капсули і полімеризація при температурі 95-120° на протязі 60 хвилин. Приклад: Призначений для дослідження фрагмент тканини фіксу вали в Z,b% розчині глютарового альдегіду на фосфатному буфері при температурі 4°С 15 хв. Потім її одноразово відмивали фізіологічним розчином на ппотязі 3-5 хв. і для остаточної йіксаиії перено сили в 1% розчин осмієвої кислоти на 20 хв. Фіксовану тканину зан урювали в 70° аиет он / 2 ра зи п о 6 хв./ , п отім в 100° ацет он / 2 раз и п о 5 хв./ і далі в с умі ш / 1: 1/ аие тон у і за ли вн ого се ре довища /епон/ на 10 хв. Після цього тканину переносили в чисте заливне середовище /епон/ 2 рази по 5 хв. Потім ггооводилась звичайна заливка в калсули і полімеризація пщ температурі 95-120°С на протязі 60 хв. Всього витрачено біля 2- х годин. Позитивним ефектом запропонованого способу є те, що значно -з скорочується час підготовки об'єкту для дослідження /всього біля 1,5-2 години/, підвищується якість наступного електионно-мікроско' пічного зображення, пов"язане з умовами полімеризаиії. Спосіб доз^ воляз прискорити електтюнно-мїкросколічре дослідження в екстрених випадках. Спосіб рекомендований для практичного використання.