Спосіб експрес-діагностики helicobacter pylori у студентів з пептичною виразкою дванадцятипалої кишки

Корисна модель відноситься до медицини, а саме до гастроентерології і може бути використана для швидкої діагностики Helicobacter pylori (HP) у студентів з пептичною виразкою дванадцятипалої кишки (ПВ ДПК). Актуальність проблеми визначається не тільки високою частотою розповсюдження ПВ у популяції, але й розвитком на тлі ПВ, асоційованої з Helicobacter pylori (HP), деяких видів пухлин шлунка (МАЛЬТ-лімфоми, аденокарциноми). Сучасних гастроентерологів особливо турбує значна поширеність ПВ серед молоді, яка в наслідок клінічних особливостей, нерідко важко діагностується, часто рецидивує та ускладнюється, що веде до зниження працездатності та інвалідизації найбільш активної категорії населення країни. До особливої категорії молоді можна віднести студентів, що навчаються у вищих навчальних закладах. Серед осіб молодого віку, за даними дослідників, саме у студентів спостерігається найзначніша частота формування гастродуоденальної патології. На сучасному етапі при обстеженні пацієнтів з метою виявлення хелікобактерної інфекції застосовується цілий ряд методів. Більшість з них є достатньо коштовними та трудомісткими, в наслідок чого виникають труднощі їх широкого застосування, особливо при проведенні профілактичних оглядів та рутинних обстеженнях. Відомий спосіб діагностики HP, який засновується на властивості даної інфекції продукувати фермент уреазу, що розщеплює сечовину до аміаку, вуглекислого газу та води (дихальний тест). Спосіб полягає у порівняльному аналізі повітря, яке видихує пацієнт до і після прийняття розчину сечовини, яка містить ізотоп С 13, у спеціальний пристрій - мас-спектрометр [Кишкун А.А. Современные методы диагностики и оценки эффективности лечения инфекции, вызванной Helicobacter pylori (обзор литературы) //Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. №8. - С.41-46.]. Однак відомий спосіб має недоліки: дороге обладнання; достовірно позитивний результат - тільки при наявності на слизовій активних форм НР-інфекції; хибно негативний - при неактивних (коковидних) формах HP та при внутрішньоклітинному знаходженні інфекції; хибно позитивний - при наявності на слизовій ротової порожнини та глотки уреазопродукуючих стрептококів і стафілококів. Відомий уреазний тест, який потребує біоптати слизової, які легко можна здобути під час проведення езофагогастродуоденоскопії з будь-якої ділянки верхнього відділу шлунково-кишкового тракту. Для проведення тесту використовують середовище Закса, яке містить сечовину, індикатор (частіше - феноловий червоний) та дистильовану воду [Авраменко А.А., Гоженко А.И. Хеликобактериоз. - Одесса, 2004. - 324с.]. Однак відомий спосіб має свої недоліки: достовірно позитивний - тільки при наявності на слизовій активних форм HP-інфекції; хибно негативний - при неактивних (коковидних) формах HP та при внутрішньоклітинному знаходженні інфекції. Відомим є гістологічний метод візуалізації HP за допомогою світової мікроскопії після фарбування біопсійних зрізів за стандартною методикою (забарвлення за Романовським-Гімзою) Мікроскопування забарвлених за Гимзою мазків - відбитків потребує біоптати слизової, які легко отримують під час проведення езофагогастродуоденоскопії з будь-якої ділянки верхнього відділу шлунково-кишкового тракту. Подібне дослідження виконують протягом 15-60 хвилин; при цьому є можливість не тільки підрахувати кількість мікробних тіл, але й визначити наявність як активних, так і неактивних форм. Однак відомий спосіб має свої недоліки: неможливість визначити функціональну активність активних форм HP; неможливість визначити положення інфекції - поза клітини чи внутрішньоклітинне [Авраменко А.А., Гоженко А.И. Хеликобактериоз. - Одесса, 2004. - 324с.]. Точність способу залежить від правильного забору матеріалу (місце біопсії, кількість біоптатів), наявності спеціального обладнання та досвіду фахівців-гістологів, характерна тривалість дослідження та відносна коштовність. Найбільш близьким та обраним за прототип є спосіб імуноферментного дослідження сироватки крові і визначення антитіл імуноглобулінів (Ig) класу G [Исаков В.А., Доморадский И.В. Хеликобактериоз. - М.: ИД Медпрактика - М, 2003. - 412с.] Чутливість сироваточного ІФ методу, (HP IgG, Calbiotech Inc., СВІ) складає близько 93%, а специфічність біля 90% [Передерий В.Г., Ткач С.М., Скопиченко С.В. Язвенная болезнь. Прошлое. Настоящее. Будущее. - Киев, 2003. - 256с.]. За даним способом результати інтерпретують наступним чином: при титрах антитіл, що складають менш 0,9 - інфікування вважають негативним; при титрах, що складають 0,9-1,05 інфікування розцінюють, як слабко-позитивне; при титрах більш 1,1 - позитивним, а якщо титри набувають значень більш 2,0 - інфікування вважають значним, особливо це стосується осіб, що не лікувались у минулому або лікувались більш 1-1,5 роки тому. Вказана діагностика доступна, проста у виконанні. Вона дозволяє встановити як наявність інфікування у пацієнтів на даний момент, так і інфікування в минулому, в тому числі у тих, хто лікувався, оскільки інфекція залишає так званий серологічний «рубець». Недоліком способу є неможливість достовірної оцінки ерадикації HP, тому, як правило, при оцінці ефективності терапії орієнтиром може бути зниження титрів антитіл у динаміці. При цьому бажано одночасно застосовувати інші методи контролю за ерадикацією (дихальний сечовинний тест або HpSA-тест). В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу експрес-діагностики Helicobacter pylori у студентів з пептичною виразкою дванадцятипалої кишки, в якому за рахунок зміни характеру дослідження, досягається визначення антитіл до імуноглобулінів А, які з'являються внаслідок імунної відповіді на інфікування HP, що дозволяє швидко визначити HP з великою ступеню вірогідності, що може широко та успішно застосовуватися на етапах скринінгових досліджень. Поставлена задача вирішується в способі експрес-діагностики Helicobacter pylori у студентів з пептичною виразкою дванадцятипалої кишки, який здійснюють шляхом дослідження біологічного матеріалу і визначення антитіл до імуноглобулінів, згідно з корисною моделлю, проводять імунохроматографічне дослідження капілярної крові і при визначенні антитіл до Ig A HP діагностують наявність хелікобактерного інфікування. Експрес-методика діагностики HP у студентів з ПВ виявилась достатньо інформативною, оскільки за головними характеристиками (чутливість, специфічність) була цілком порівняною із серологічним, гістологічним методами та швидким уреазним тестом, які були проведені для визначення ефективності запропонованого способу діагностики. Спосіб експрес-діагностики HP здійснюють таким чином. Використовують сучасні тест-системи «Хелікоекспрес» (Vector Best), які представляють собою набір реагентів для виявлення антитіл до Ig HP у капілярній крові людини серологічним методом DOT-аналізу. Головною властивістю експрес системи є висока швидкість проведення дослідження (до 5-6 хвилин). Методика проста у виконанні, не потребує ніякого складного обладнання. їй також слід віддавати перевагу при обстеженні осіб молодого віку, оскільки за сучасними літературними даними з віком зростає відсоток хибно-позитивних результатів при ІФ дослідженні [Авраменко А.А., Боженко А.И. Хеликобактериоз. - Одесса: Фотосинтетика, 2004. - 326с.]. Виявлення у капілярній крові антитіл до імуноглобулінів А встановлює наявність хелікобактерного інфікування. Для оцінки доцільності застосування методу експрес-діагностики HP у студентів визначення хелікобактерної інфекції проводили за допомогою декількох досліджень. Кожен із методів, що застосовували, мав загальноприйняті характеристики, такі як чутливість (інфекція діагностується тоді, коли вона має місце) та специфічність (інфекція не діагностується тоді, коли її немає). Чим вище ці характеристики, тим нижче відсоток помилкових (хибно позитивних та хибно негативних) результатів. Для підтвердження ефективності проведеного дослідження було проведено комплексне обстеження 175 студентів з дуоденальною виразкою, що знаходились на стаціонарному лікуванні у гастроентерологічному відділенні Обласної студентської лікарні. Серед них було 130 юнаків (74,3%) і 45 дівчин (25,7%). Середній вік обстежених склав 20,1±2,6 років. У 61 пацієнта (34,8%) ПВ була діагностована вперше, у 88 обстежених (50,3%) тривалість виразкового анамнезу становила до 5 років, у 26 (14,9%) - від 5 до 10 років. Верифікацію діагнозу ПВ проводили за загальноприйнятими методиками на підставі збору скарг, анамнезу, оцінки об'єктивних даних, результатів лабораторних та інструментальних обстежень. Провідною методикою постановки діагнозу була ендоскопічна, яка дозволила не тільки встановити наявність виразкового дефекту, його розміри та площину, але і провести візуальний огляд слизової гастродуоденальної зони (ГДЗ), оцінити активність запального процесу, виразність гіперемії та гіпертрофії, наявність ерозивних пошкоджень, рефлюксів, отримати біопсійний матеріал з метою гістологічного дослідження. Комплексна діагностика хелікобактеріозу із використанням різних методів ідентифікації інфекції дає можливість встановити наявність HP з великою імовірністю та прийняти адекватне рішення щодо призначення ефективної антихелікобактерної терапії. Безпосередньо в ендоскопічному кабінеті застосовували швидкий уреазний тест (URE-HP test-Express, Pliva). Перевагами його були: простота виконання та відносна швидкість. Чутливість та специфічність швидкого уреазного тесту за літературними даними складає приблизно 90% [Передерий В.Г., Ткач СМ., Скопиченко С.В. Язвенная болезнь. Прошлое. Настоящее. Будущее. - Киев, 2003. - 256с.]. Тест діагностувався, як позитивний, у 146 обстежених студентів з ПВ (83,4%). Появлення малинового забарвлення протягом першої години, що свідчило про значне інфікування HP, встановлено у 91 пацієнта (62,3%). Помірним або незначним вважали інфікування, якщо появлення забарвлення виникало протягом 2-4 годин, воно встановлено у 37 обстежених (25,3%). Коли забарвлення з'являлось наприкінці доби, результат оцінювали як сумнівний, він був виявлений у 18 пацієнтів (12,3%). При обарвленні у більш пізні терміни, інфікування HP вважали негативним. Візуалізацію HP гістологічним методом проводили за допомогою світової мікроскопії після фарбування біопсійних зрізів за стандартними методиками (забарвлення за Романовським-Гімзою та гематоксиліномеозином). При цьому дослідженні оцінювали активність та виразність запального процесу, ступінь атрофії та наявність метаплазії, встановлювали ступень хелікобактерної контамінації. У гістологічному препараті виділяли три ступені контамінації слизової оболонки, що встановлювали за кількістю бактерій у полі зору та за глибиною проникнення HP в слизову, а саме в дно ямок та міжклітинні простори: слабка - до 20 мікроорганізмів у полі зору, середня - до 50 мікроорганізмів, висока - більш 50 мікроорганізмів у полі зору [Аруин Л.И., Исаков В.А. Оценка обсемененности слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori и активности хронического гастрита //Арх. патологии. - 1995. - №3. - С.75-76]. Дана методика мала деякі складності, а саме залежність від правильного забору матеріалу (місце біопсії, кількість біоптатів), визначала необхідність спеціального обладнання та досвіду фахівців-гістологів, їй була характерна тривалість дослідження та відносна коштовність. При гістологічному дослідженні біопсійних зрізів HP з високою ступеню вірогідності виявлялися у 132 обстежених (75,4%). Значне та помірне обсіменіння слизової оболонки HP при гістологічному дослідженні виявлено в біоптатах 104 обстежених (78,8%). Виявлено, що у місцях присутності HP гідрофобний шар слизу був значно ушкодженим, знижалася в'язкість муцину, відбувалося сплощення епітелію. Бактерії розташовувалися на поверхні епітеліального шару і були "обкутані" пухким слизом, іноді визначалися на вершинах валиків, бічних поверхнях клітин, у глибині ямок. Місцями вони виявлялися в міжклітинному просторі, не проникаючи в базальну мембрану. Встановлена пряма залежність між скупченням HP та рівнем запальної інфільтрації слизової оболонки. Слід вказати, що при забарвленні гематоксиліном-еозином HP, як правило, виявлялися тільки при високій ступені колонізації. Методика виявила дуже високу специфічність та чутливість, що підтверджує її застосування у якості методу «золотого стандарту» діагностики хелікобактерного інфікування. Відмічено, що у 89 пацієнтів, в уреазному тесті яких діагностовано значне інфікування, при гістологічному дослідженні наявність HP була підтверджена. Значний відсоток сумнівних результатів в уреазному тесті, у тих випадках, коли HP не були підтверджені при гістологічному дослідженні, можливо пов'язаний із контактом індикатору з іншими видами мікроорганізмів, що володіють уреазною активністю. При серологічному дослідженні хелікобактерне інфікування було встановлено у 153 обстежених (87,4%), що відобразилося у підвищенні титрів антихелікобактерних антитіл (2,43±0,93). Слід зазначити, що підвищення титрів до значень більш 2,0 діагностовано у 117 із 153 HP-позитивних пацієнтів (76,5%) з ПВ. У всіх без винятку пацієнтів з вперше встановленою ПВ, а також у тих, останній рецидив ПВ яких був більш 12±1,2 місяців тому, титри антихелікобактерних антитіл були різко позитивними. Метод експрес-діагностики HP застосовували перед проведенням ендоскопічного дослідження. Методика проста у виконанні, не потребує ніякого складного обладнання. Виявлення антитіл до Ig HP у капілярній крові встановило наявність хелікобактерного інфікування у 148 студентів (84,6%), в решти обстежених - негативною. Слід зазначити що, якщо HP діагностувались гістологічним методом, то наявність інфекції у цих обстежених була підтверджена при експрес-діагностиці. Результати виявлення HP у студентів з ПВ різними методами, показники чутливості та специфічності методів представлені у таблиці. Таблиця Результати діагностики хелікобактерного інфікування у обстежених з ПВ Кількість результатів (п) Характеристики результатів Швидкий уреазний дослідження Гістологічний метод Серологічний метод Експрес метод тест Загальна кількість 175 175 175 175 HP позитивні 146 132 153 148 Хибно позитивні 2 3 3 2 Хибно негативні 16 8 14 11 Чутливість, % 90,1 94,3 91,6 93,1 Специфічність, % 93,5 93,3 88,0 93,1 Таким чином, експрес-методика діагностики HP у студентів з ПВ виявилась достатньо інформативною, оскільки за головними характеристиками (чутливість, специфічність) була цілком порівняною із серологічним, гістологічним методами та швидким уреазним тестом. Використання даного способу дозволяє встановити HP з великою ступеню вірогідності, що може широко та успішно застосовуватися на етапах скринінгових досліджень. Враховуючи швидкість отримання результатів, простоту виконання та економічність, експрес-тест доцільно застосовувати при обстеженні студентів з пептичними скаргами, оскільки його позитивний результат є обґрунтованою підставою для призначення ендоскопічного дослідження з метою встановлення діагнозу у вказаного контингенту.