Спосіб кількісного визначення тимолу в лікарській рослинній сировині

Спосіб кількісного визначення тимолу в лікарській рослинній сировині шляхом його подрібнення, екстракції тимолу етиловим спиртом, очищення осаджуванням баластних речовин, фільтрування і спектрофотометрування, який відрізняється тим, що сировину подрібнюють до порошкоподібного стану, добувають тимол при температурі 1820°С шляхом екстракції в ультразвуковій установці УЗДН-1 з набором магнітострикційних випрямувачів, вимірюючи частоту при 47 кГц з інтенсивністю 25 Вт/см2, осадження баластних речовин проводять 10% розчином трихлороцтової кислоти. (19) (21) 2000074305 (22) 18.07.2000 (24) 15.05.2001 (33) UA (46) 15.05.2001, Бюл. № 4, 2001 р. (72) Мазулін Георгій Владиленович, Петренко Володимир Васильович, Мазулін Олександр Владиленович, Калошина Надія Олександрівна (73) ЗАПОРІЗЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, МАЗУЛІН ГЕОРГІЙ ВЛАДИЛЕНОВИЧ, ПЕТРЕНКО ВОЛОДИМИР ВАСИЛЬОВИЧ, МАЗУЛІН ОЛЕКСАНДР ВЛАДИЛЕНОВИЧ, КАЛОШИНА НАДІЯ ОЛЕКСАНДРІВНА 38525 2. Екстрагування тимолу 96%-ним етиловим спиртом три рази по 30 мл при нагріванні на водяний бані при 70-80°С по 6 хвилин може привести до помилок у визначенні за рахунок відсутності абсолютної герметичності апаратури і можливого порушення температурного режиму екстракції, що може відобразитись на кінцевому результаті. 3. Гарячу витяжку кожний раз фільтрують в колбу місткістю 100 мл і стежать, щоб сировина не попала на фільтр. Фільтр промивають 10 мл 96%ного етилового спирту, добавляють 4 мл, 10%розчину ацетату свинцю, нагрівають на електроплитці на протязі 3 хвилин до коагуляції, охолоджують, фільтрують в мірну колбу місткістю 100 мл, доводять 96%-ним етиловим спиртом до позначки. Операція грузька, довга, може привести до випадкових помилок. В основу винаходу поставлено задачу удосконалення способу кількісного визначення тимолу в лікарській рослинній сировині шляхом заміни етапів, що забезпечить підвищення експресності і точності способу. Поставлена задача вирішується тим, що у способі, якій полягає у подрібненні лікарської рослинної сировини, екстрагуванні тимолу етиловим спиртом, очищенні від баластних речовин осадженням, фільтруванні і спектрофотометруванні, новим є те, що сировину подрібнюють до порошкоподібного стану, добувають тимол при кімнатній температурі (18-20°С) проводячи екстракцію в ультразвуковій установці УЗДН-1 з набором магнітострикційних випрямувачів частоту вимірюють при 47 кГц, з інтенсивністю 25 Вт/см2. Осадження баластних речовин проводять 10%-ним розчином трихлороцтової кислоти. Стандартом при кількісному визначенні тимолу в лікарській рослинній сировині служать спиртові розчини тимолу. Для розчинів тимолу в 96%-му етиловому спирті виконується закон Бугера-Ламберта-Бера в межах 0,4-25 мкн/мл. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, і технічним результатом полягає в наступному: 1. Подрібнення рослинної сировини до порошкоподібного стану (0,5 мм) в способі, що заявляється, у порівнянні з прототипом, де ступінь подрібнення частин до 1 мм, забезпечує повне добування тимолу, що підтверджувалось хроматографічним аналізом в тонкому шарі сорбенту; 2. Використання у способі, що заявляється, ультразвукової установки УЗДН-1 з набором магнітострикційних випрямувачів забезпечує повну екстракцію тимолу, виключаючи витрати, можливі при нагріванні. Повнота екстракції контролювалась хроматографічним аналізом; 3. Спосіб забезпечує очищення витяжки, що містить тимол, від баластних компонентів, які заважають спектрофотометричному визначенню тимолу, трихлороцтовою кислотою, також виключаючи термічну обробку; 4. Спосіб, що заявляється, з комплексом операцій упрошує процес, підвищує експресність і точність. Спосіб здійснюють таким чином: подрібнення до розміру частин 0,5 мм, екстрагування тимолу 96%-ним етиловим спиртом в ультразвуковій уста новці при кімнатній температурі 10-20°C, фільтрування, очищення, осаджуючи баластні речовини трихлороцтовою кислотою, фільтрування і спектрофотометрування. Приклад 1. Визначення тимолу у лікарській сировині. Аналітичну пробу сировини подрібнюють на кофемолці до порошкоподібного стану, розміру часток, які проходять крізь сито з отворами діаметром 0,5 мм. Біля 1,0 г (точна наважка порошку) висипають в колбу місткістю 100 мл, заливають 50 мл 96%-ного етилового спирту, кладуть в ультразвукову установку УЗДН-1 з набором магнітострикційних випрямувачів і екстрагують на протязі 10 хвилин з використанням ультразвуку в оптимальному режимі при частоті 47 кГц і інтенсивності 25 Вт/см2. Витяжку фільтрують у колбу місткістю 100 мл, запобігаючи попаданню сировини на фільтр. Фільтр промивають 96%-ним етиловим спиртом до об'єму 50 мл, додають 2 мл 10%-го розчину трихлороцтової кислоти для очищення від баластних для тимолу речовин: дубильних, нефенольних сполук (терпеноїдів, органічних кислот і флавоноїдів) їх осадженням. Періодично збовтують на протязі 3-х хвилин. Осад відділяють фільтруванням у мірну колбу місткістю 100 мл. і доводять 96%-ним етиловим спиртом до позначки. 10 мл. одержаного розчину поміщують у мірну колбу місткістю 50 мл., доводять об'єм 96%-ним етиловим спиртом до позначки і вимірюють оптичну густину розчину при 272 нм на спектрофотометрі в кюветі з товщиною шару 10 мм. Як розчин порівняння використовують робочий стандартний зразок тимолу (PCЗ). Приготування робочого стандартного зразка тимолу (РСЗ). Точну наважку тимолу - біля 0,01 г попередньо висушену при температурі від 40°С до 60°С на протязі 1 години, поміщують у мірну колбу місткістю 100 мл, прибавляють 50 мл 96%-ного етилового спирту, 2 мл 10%-ного розчину трихлороцтової кислоти і перемішують до розчинення. Об'єм розчину доводять 96%-ним етиловим спиртом до позначки (розчин А). Термін придатності розчину А - три доби. 10 мл. розчину А переносять в мірну колбу місткістю 100 мл. доводять об'єм розчину 96%-ним етиловим спиртом до позначки і перемішують (розчин Б). Термін придатності розчину Б - дві доби. Розрахунок концентрації тимолу в сировині проводять за формулою: D m 100 ×100 X = 1 0 , де: D0m1(100 - W ) D1 - оптична густина досліджуваного розчину; D0 - оптична густина робочого стандартного зразку (РСЗ) тимолу; m1 - маса сировини (г); m0 - маса стандартного зразку тимолу (РСЗ) (г); W - втрата в масі сировини при висушуванні(%); Результати визначення тимолу в рослинній сировині наведено в таблиці № 1. 2 38525 Таблиця № 1 Результати визначення тимолу в рослинній сировині (n=6) Концентрація визнач. СпектМетрологічна Об’єкт аналізу рофотометричОб’єкт аналізу характеристика но % спосібпрототип 99,5 Х=99,83 100,0 S=2,142*10-1 Субстанція 100,1 Sr=2,146*10-3 Субстанція титимолу 99,7 Abig=0,55% молу 99,7 100,0 0,73 Х=0,725 0,72 S=8,366*10-2 Трава МатеТрава Матери0,72 Sr=1,154*10-3 ринки 0,74 Abig=2,97% нки 0,72 0,72 0,69 Х=0,686 0,68 S=7,483*10-2 Трава Чабре0,69 Sr=1,09*10-3 Трава Чабрецю цю 0,70 Abig=2,79% 0,68 0,69 0,70 Х=0,688 0,68 S=8,963*10-2 Трава Майо0,69 Sr=1,305*10-3 Трава Майорарану 0,68 Abig=3,33% ну 0,70 0,68 Примітка: X - середнє значення величини, що визначається; S - середнє квадратичне відхилення; Sr - квадратичне відхилення; А - відносна помилка; Концентрація визначен. Спектрофотометично % спосіб, що заявляється 99,9 99,8 99,8 100,1 99,0 99,9 0,73 0,72 0,73 0,73 0,72 0,73 0,68 0,68 0,67 0,68 0,68 0,67 0,69 0,68 0,68 0,69 0,68 0,69 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3 Метрологічна характеристика Х=99,75 S=1,380*10-1 Sr=1,780*10-3 Abig=0,46% Х=0,726 S=5,200*10-2 Sr=0,672*10-3 Abig=2,37% Х=0,676 S=5,230*10-2 Sr=0,671*10-3 Abig=2,55% Х=0,695 S=5,500*10-2 Sr=0,711*10-3 Abig=2,66%