Спосіб одержання екзополісахариду

Спосіб одержання екзополісахариду, що включає культивування Acinetobacter sp. IMB В7005 на поживному середовищі, що містить суміш ростових субстратів, мінеральні солі і ростові фактори, який відрізняється тим, що як джерело вуглецевого живлення використовують суміш двох енергетично дефіцитних субстратів (ацетату натрію і глюкози масовою часткою 1,1 і 0,75 % відповідно). (19) (21) u200811449 (22) 23.09.2008 (24) 25.02.2009 (46) 25.02.2009, Бюл.№ 4, 2009 р. (72) ПИРОГ ТЕТЯНА ПАВЛІВН А, UA, ІВАНУШКІНА ГАННА ОЛЕКСАНДРІВН А, UA (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ХАРЧОВИХ ТЕХНОЛОГІЙ, UA 3 39398 4 ка) і глюкози (0,75%, масова частка). Як посівний експоненційної фази росту (20-24 год), вирощену матеріал використовують культур у з експоненційна мінеральному середовищі наведеного вище ної фази росту (20-24 год), вирощену на мінеральскладу, що містять як джерело вуглецевого живному середовищі наведеного вище складу, що лення етанол (0,5%, об'ємна частка). Кількість помістить 0,5% (об'ємна частка) етанолу як джерело сівного матеріалу становить 10% від об'єму серевуглецевого живлення. Кількість посівного матерідовища. алу становить 10%. Культивування здійснюють у Концентрацію біомаси визначають за оптичколбах об'ємом 750мл з 100мл середовища на ною густиною клітинної суспензії з наступним перерахунком на абсолютно суху біомасу клітин качалці (220об/хв) при 30°С, рН 6,8-7,0 упродовж (АСБ) у відповідності з калібрувальним графіком. 120 год. Ефективність трансформації вуглецю субстратів в Використання нового способу дає змогу підЕПС оцінюють за наступними показниками: кільвищити у 2,5 раза ЕПС- синтезувальну здатність Acinetobacter sp. IMB В-7005 кість синтезованих ЕПС, вихід ЕПС від субстрату, ЕПС- синтезувальна здатність. Кількість синтезоПриклад 1. Синтез екзополісахариду за умов ваного екзополісахариду встановлюють ваговим росту Acinetobacter sp. IMB В-7005 на суміші ацеметодом. ЕПС- синтезувальну здатність розрахотату калію і глюкози вують як відношення кількості синтезованого ЕПС Культивування бактерій здійснюють на середовищі такого складу (г/л) : КН 2РО4 - 6,8; КОН - 1,8; до біомаси та виражають у г ЕПС/ г АСБ. З даних, наведених у табл. 1, видно, що ЕПСNH4NO3 - 0,3; MgSO4 ´7Н2О - 0,4; СаСl2´2Н2О - 0,1; синтезувальна здатність за умов росту продуцента FeSO4´7Н2 О - 0,001. У середовища додатково на суміші ацетату калію і глюкози становить 7,8вносять 0,5% (об'ємна частка) дріжджового автолі7,9г ЕПС/ г АСБ, що ви ще, ніж згідно прототипу зату та 0,0006% (масова частка) пантотенату (6,2г ЕПС/ г АСБ). Проте кількість синтезованого кальцію. Як джерело вуглецю і енергії використоЕПС є недостатньо високою - залежно від конценвують суміш ацетату калію (0,65; 1,0 і 1,3%, масотрації ацетату калію глюкози у середовищі культива частка) і глюкози (0,38; 0,57 і 0,75%, масова вування становить 3,2-4,5г/л, у той час як згідно частка) відповідно, а також суміш етанолу (0,75%, прототипу цей показник є 2-3 раза вищим (9,2г/л). об'ємна частка) і глюкози (0,75%, масова частка). Як посівний матеріал використовують культур у з Таблиця 1 Синтез екзополісахариду Acinetobacter sp. IMB В-7005 на суміші ацетату калію і глюкози Джерело вуглецю і енергії Ацетат калію (0,65%) + Глюкоза (0,38%) Ацетат калію (1,0%) + Глюкоза (0,57%) Ацетат калію (1,3%) + Глюкоза (0,75%) Етанол (0,75%) + Глюкоза (0,75%) (прототип) ЕПС, г/л 3,2 4,0 4,5 9,2 ЕПС-синтезувальна здатність, г ЕПС/ г АСБ 7,8 7,8 7,9 6,2 Примітка. Концентрація ацетату калію 1,3% еквімолярна за вуглецем концентрації етанолу 0,75%. Приклад 2. Синтез екзополісахариду за умов росту Acinetobacter sp. IMB В-7005 на суміші ацетату натрію і глюкози Культивування бактерій здійснюють на середовищі такого складу (г/л) : КН 2РО4 - 6,8; КОН - 1,8; NH4NO3 - 0,3; MgSO4 ´7Н2О - 0,4; СаСl2´2Н2О - 0,1; FeSO4´7H2 O - 0,001. У середовища додатково вносять 0,5% (об'ємна частка) дріжджового автолізату та 0,0006% (масова частка) пантотенату кальцію. Як джерело вуглецю і енергії використовують суміш ацетату натрію (0,55 і 1,1%, масова частка) і глюкози (0,38 і 0,75%, масова частка) відповідно, а також суміш етанолу (0,75%, об'ємна частка) і глюкози (0,75%, масова частка). Як посівний матеріал використовують культуру з експоненційної фази росту (20-24 год), вирощену на мінеральному середовищі наведеного вище складу, що містять як джерело вуглецевого живлення етанол (0,5%, об'ємна частка). Кількість посівного матеріалу становить 10% від об'єму середовища. Результати культивування продуцента на суміші ацетату натрію і глюкози наведено у табл. 2 Таблиця 2 Синтез екзополісахариду Acinetobacter sp. IMB В-7005 на суміші ацетату натрію і глюкози Джерело вуглецю і енергії Ацетат натрію (0,55%) + Глюкоза (0,38%) Ацетат натрію (1,1%) + Глюкоза (0,75%) Етанол (0,75%) + Глюкоза (0,75%) (прототип) ЕПС, г/л 5,2 8,9 9,2 ЕПС - синтезувальна здатність, г ЕПС/ г АСБ 8,8 12,0 6,2 Примітка. Концентрація ацетату натрію 1,1% еквімолярна за вуглецем концентрації етанолу 0,75%. 5 39398 Отже, за заміни у змішаному субстраті ацетату калію на ацетат натрію показники синтезу екзополісахариду підвищуються. Так, ЕПС- синтезувальна здатність у 1,5-1,7 і майже 2 раза вища, ніж на суміші ацетату калію і глюкози і згідно прототипу відповідно. Проте кількість ЕПС, синтезованого на суміші ацетату натрію і глюкози є дещо нижчою порівняно з культивуванням бактерій згідно прототипу (8,9 і 9,2г/л відповідно). Приклад 3. Вплив природи джерела азоту на синтез ЕПС за умов росту Acinetobacter sp. IMB В7005 на суміші ацетату натрію і глюкози Культивування бактерій здійснюють на середовищах такого складу (г/л): середовище 1: КН2РО4 - 6,8; КОН - 1,8; NH4NO3 - 0,3; MgSO4 ´7Н2О - 0,4; СаСl2´2Н2О - 0,1; FeSO 4´7H2O - 0,001; середовище 2: аналогічне за складом середовищу 1, за винятком джерела азоту. Середовище 2 містить NH4Cl у концентрації 0,4г/л. Така 6 концентрація хлориду натрію є еквімолярною за азотом 0,3г/л NH4NO3. У середовища додатково вносять 0,5% (об'ємна частка) дріжджового автолізату та 0,0006% (масова частка) пантотенату кальцію. Як джерело вуглецю і енергії використовують суміш ацетату натрію (1,1%, масова частка) і глюкози (0,75%, масова частка). Як посівний матеріал використовують культур у з експоненційної фази росту (2024год), вирощену на мінеральному середовищі наведеного вище складу, що містять як джерело вуглецевого живлення етанол (0,5%, об'ємна частка). Кількість посівного матеріалу становить 10% від об'єму середовища. Як видно з даних, наведених у табл. 3, заміна джерела азоту у середовищі культивування штаму В-7005 дає змогу підвищити кількість синтезованого ЕПС до рівня, одержуваного згідно прототипу, при цьому ЕПС- синтезувальна здатність є майже у 2,5 раза вищою. Таблиця 3 Синтез екзополісахариду на суміші ацетату натрію і глюкози залежно від природи джерела азоту у середовищі культивування Acinetobacter sp. IMB В-7005 Джерело азоту у середовищі ЕПС, г/л NH4NO3 (середовище 1) NH4Cl (середовище 2) 8,9 9,3 Таким чином, порівняно з прототипом використання запропонованого способу дає змогу Комп’ютерна в ерстка А. Крижанівський ЕПС- синтезувальна здатність, г ЕПС/ г АСБ 12,0 15,5 підвищити ЕПС- синтезувальну здатність штаму В-7005 у 2,5 раза (з 6,2 до 15,5г ЕПС/ г біомаси). Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601