Спосіб визначення ендотоксикозу

Спосіб визначення ендотоксикозу, який включає постановку, реєстрацію і оцінку реакцій клітинної тест-системи на токсичні чинники внутрішнього середовища організму, який відрізняється тим, що клітинні тест-системи інкубують із змивом поту з поверхні шкіри. (19) (21) 2000020831 (22) 15.02.2000 (24) 15.11.2001 (33) UA (46) 15.11.2001, Бюл. № 10, 2001 р. (72) Бех Микола Дмитрович, Дем'яненко Василь Васильович, Андрейчин Сергій Михайлович, Бігуняк Наталя Володимирівна 42934 приклад, 30 см 2, і знову занурюють у воду в мікропробірці, ретельно кілька разів відтискують при допомозі пінцету, після чого тампон виймають з мікропробірки, а отриманий змив використовують для дослідження на предмет вмісту токсичних субстанцій. Для цього на предметне скло вносять 0,05 мл змиву і змішують з 0,05 мл зависі ізольованих клітин, інкубують і досліджують характер реакцій клітин тест-системи за однією з обраних методик. Роблять висновок про наявність у потових виділеннях токсичних субстанцій та рівень ендотоксикозу. Приклад 1. Шкіру лобної ділянки голови пацієнта промили 40%-вим етиловим спиртом і двічі протерли марлевим тампоном, змоченим у дистильованій воді. Через 1 годину лобну ділянку голови пацієнта на площі 30 см 2 ретельно протерли стерильним тампоном, просоченим стерильною дистильованою водою, після чого тампон занурили у цей же розчин у мікропробірці та витягли його після відтискання. При постановці реакції з ізольованими лейкоцитами 0,05 мл отриманого водного змиву поту помістили на предметне скло й змішали з 0,05 мл зависі ізольованих лейкоцитів пацієнта і таким же об'ємом флюорохрому акридину оранжевого в розведенні 1:10000. Отриману суміш накрили покривним скельцем і інкубували при 37°С протягом 30 хвилин. Досліджували мікропрепарат у полі зору люмінесцентного мікроскопу: визначали процентний вміст лейкоцитів, ядра яких люмінесціювали зеленим, оранжевим і червоним світлом. Вплив токсичних чинників на клітини оцінювали за індексом токсичності, який визначали як середню кубічну показників процентного вмісту клітин з поліхромними ядрами в мікропрепараті [2]. Результат дослідного мікропрепарату порівнювали з контрольним. Останній готували без внесення до води в мікропробірці компонентів поту. При цьому "зелених" клітин в дослідному мікропрепараті було 66%, "оранжевих" і "червоних", відповідно, 23% і 11%, що відповідає індексу токсичності 25,3. Аналогічний показник при дослідженні контрольного мікропрепарату становив 11,6. Таким чином, токсичність поту в 2,2 рази перевищує токсичний вплив на ізольовані лейкоцити компонентів аутологічної сироватки крові, що є характерним для високого рівня ендотоксикозу. При постановці реакції з ізольованими парамеціями 0,05 мл отриманого водного змиву поту помістили на предметне скло й змішали з 0,05 мл культури парамецій, накрили покривним скельцем і відразу в полі зору мікроскопу визначали характер руху парамецій та середню тривалість життя в мікропрепараті. Результат порівнювали з контролем, тобто без внесення до води в мікропробірці компонентів поту. В дослідному мікропрепараті парамеції перебували в активному стані в середньому 3,4±0,4 с, тоді як у контрольному мікропрепараті цей показник склав 7,1±0,8 с. Скорочення тривалості життя парамецій під впливом токсичних чинників поту мало місце на 53,4%, тобто, як і в попередньому досліді, фактично в 2 рази. Приклад 2. Запропонованим способом провели оцінку рівня ендотоксикозу у 7 хворих на виразковий пілородуоденостеноз. В усіх випадках вищенаведені тести виявили виражений ендотоксикоз, про що свідчать наведені в таблиці усереднені показники тестових проб. З наведених даних видно, при ендотоксикозі у потових виділеннях хворих збільшується вміст токсичних субстанцій, що є свідченням, перш за все, факту формування у даної категорії хворих ендотоксикозу. Головним висновком з даного прикладу є те, що запропонований спосіб є більш інформативним, ніж спосіб-прототип, оскільки відображує не тільки факт ендотоксикозу, але й вказує на рівень функціональної здатності системи потовиділення як важливої ланки в системі механізмів природної детоксикації організму, надає можливість контролювати ефективність вжитих детоксикаційних заходів. Крім того, методика взяття матеріалу для аналізу у вигляді змиву потових виділень доступна й неінвазивна, що свідчить про більш високий рівень технологічності способу. Джерела інформації: 1. А. с. № 1476382. 1989. Бигуняк В.В., Бех Н.Д., Романюк А.Н., Мурованый И.В. Способ определения токсичности сыроватки крови. 2. Методи дослідження ендогенної інтоксикації організму (методичні рекомендації) / Андрейчин М.А., Бех М.Д., Дем'яненко В.В. та ін. - Київ, 1998. - 32 с. 3. Слоним А.Д. Водный электролитный обмен. Потоотделение и потовые железы / Экологическая физиология человека. Адаптация человека к различным климато-географическим условиям / Под ред.О.Г. Газенко.- Л., 1980. - С. 318, 412. Таблиця Серії обстежень Контроль Дослід Клітинні тест-системи Ізольовані лейкоцити (люмінесцентний аналіз) Зелені Оранжев Червоні Iт 90±3 8±2 2±1 11,3 73± 4 19±4 8±2 22,3 2 D% 197 Парамеції Тж D% 6,3±0,5 46 2,9±0,4 42934 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3