Спосіб визначення антитоксичної здатності замінників шкіри

Спосіб визначення антитоксичної здатності замінників шкіри, який включає виконання діагностичних проб in vitro шляхом інкубації сироватки крові 36811 завису лейкоцитів крові реципієнта та 0,05 мл флюорохрому акридину оранжевого в розведенні 1:10000. Отриману суміш накривають покривним скельцем і інкубують при 37°С протягом 30 хвилин. Мікропрепарат досліджують у полі зору люмінесцентного мікроскопу, визначаючи процентний вміст лейкоцитів з поліхромним світінням ядерних субстанцій, а саме зеленим, оранжевим і червоним кольорами. Здатність дослідного зразка замінника шкіри зв'язувати токсини з сироватки крові оцінюють за індексом токсичності, який визначають як середню кубічну показників процентного вмісту поліхромних клітин в мікропрепараті [2]. Приклад 1. В стерильну пробірку з 4,0 мл сироватки крові опеченого занурили 0,20 г клаптя сухого ксенодермотрансплантату - ліофілізованого препарату шкіри свині й вмістили в термостат при 37°С на 45 хвилин. Після цього клапоть ксенодермотрансплантату витягли, а сироватку відцентрифугували. На предметне скло до 0,05 мл сироватки мікропіпеткою внесли 0,05 мл завису лейкоцитів № п/п 1 2 Серії дослідів Контроль (лейкоцитотоксичність сироватки крові опеченого хворого перед ксенотрансплантацією) Дослід (ксенодермотрансплантат шкіри свині) периферичної крові і такий же об'єм флюорохрому акридину оранжевого в розведенні 1:10000, усе змішали і накрили покривним скельцем. Після 30хвилинної інкубації при 37°С мікропрепарат досліджували у полі зору люмінесцентного мікроскопу, визначаючи процентний вміст лейкоцитів з поліхромним світінням клітинних ядер. Про рівень антитоксичної здатності клаптя ксенодермотрансплантату судили за величиною індексу токсичності, порівнюючи його відхилення (в процентах) від значення індексу контрольного препарату, тобто без інкубації в сироватці клаптя трансплантату. Результати дослідження наведені в таблиці 1, з яких видно, що дослідний препарат замінника шкіри на 37% зменшив рівень токсичності сироватки крові, що свідчить про доцільність його застосування для лікування опеченого, наприклад, як біологічної пов'язки на опечену рану. Таблиця 1 Співвідношення поліхромних лейкоцитів в мікропрепараті Зелені Оранжеві Червоні Індекс токсичності D%% 82 14 4 16,6 100 92 6 2 10,4 -37,3 Приклад 2. При допомозі запропонованого способу провели дослідження антитоксичної здатності замінників шкіри природного і штучного походження у хворого П., 34 років, який перебував на стаціонарному лікуванні в опіковому центрі з приводу термічного опіку шкіри ніг III-А,.Б ступеня (18%). Результати дослідження антитоксичної здатності замінників шкіри наведені в таблиці 2. Таблиця 2 № п/п 1 2 3 4 5 Серій дослідів Контроль Штучна шкіра "Duo Derm Е" Штучна шкіра "Duo Derm" Штучна шкіра "Соmfeel Дослід (ксенодермотрансплантат шкіри свині) Співвідношення поліхромних лейкоцитів в мікропрепараті ОранжеЗелені Червоні ві 82 14 4 88 8 4 81 13 б 73 17 10 92 6 Як видно з наведених в табл. 2 даних, різні за походженням замінники шкіри не в однаковій мірі виявляють здатність блокувати токсичні фактори сироватки крові опечених хворих, що, перш за все, засвідчує факт необхідності проведення індивідуалізованого вибору найбільш оптимального замінника шкіри для лікування опечених. Отже, за результатами наведеного контрольного дослідження можна зробити висновок, що замінники шкіри "Duo Derm Е" та "Duo Derm" не тільки не здатні зв'язувати токсини, але й ініціюють або/і посилюють цитотоксичні реакції клітин тест-системи. В той же час ксенодермотрансплантат на основі ліофілізованої шкіри свині забезпечує високу антитоксичну здатність. Обраний з використанням зазначеного способу для трансплантації у хворого П. замінник 2 Індекс токсичності D%% 16,6 14,1 18,5 232 100 -15,1 +11,4 +39,8 10,4 -37,3 шкіри забезпечив ефективне лікування опікової рани шляхом ксенотрансплантації. Таким чином, запропонований спосіб визначення антитоксичної здатності замінників шкіри виявився більш точним і значно інформативнішим, ніж спосіб-прототип, що має важливе значення для підвищення клінічної ефективності трансплантаційного лікування в цілому. Джерела інформації, які слід взяти до уваги: 1. Способ определения токсичности сыроватки крови / А. С . № 1476382, 1989 // Бигуняк В.В., Бех Н.Д., Романюк А.Н., Мурованый И.В. 2. Методи дослідження ендогенної інтоксикації організму (методичні рекомендації) / Андрейчин М.А., Бех М.Д., Дем'яненко В.В. та ін. Київ, 1998. - 32 с. 2 36811 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3