Hатрієва сіль 6-нітро-3h-хіназолон-4-іл-3-оцтової кислоти, яка має антиоксидантну та протиішемічну активності

"Натриевая соль б-нитро-3Н-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты, проявляющая антиоксидантную и противоишемическую активность". Изобретение относится к новым биологически активным соединениям. Известно биологически активное соединение по авторскому свидетельству СССР №1080417 от 26.08.82г. Натриевая соль (3,4-дигидро-4-оксохиназолил-3)уксусной кислоты, формулы: проявляющая противовоспалительное и анальгетическое действие. Данное биологическое соединение принимаем за прототип. Недостатком этого соединения является то, что оно не обладает антиоксидантным и противоишемическим действиями. В основу изобретения поставлена задача создания нового биологически активного вещества в ряду 4(3Н)-хиназолона, обладающего антиоксидантным и противоишемическим действием на ткани головного мозга. Решение этой задачи обеспечивает натриевая соль 6-нитро-3Н-хиназолои-4-ил-3-уксусной кислоты, формулы: В отличие от прототипа, новое соединение содержит в положении б хиназолонового ядра нитро-группу. Это отличие приводит к появлению специфического действия на мозговую ткань, что выгодно отличает новое соединение от прототипа. В отличии от других широкоизвестных биологических аналогов (а-токоферола ацетат, дибунол, пирацетам) соединение по изобретению оказывает антиоксидантноє действие на всех этапах развития ишемии, повышая активность ферментов антиоксидантной защиты, уровень эндогенного а-токоферола и снижая уровень накопления продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) с одновременным уменьшением расхода макроэргических фосфатов и углеводов. Получают заявленное соединение взаимодействием б-нитро-3Н-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты с гидроксидом натрия в среде этанола. Пример: 2,49г (0,01моль) 6-нитро-3,Н-дигидрохиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты растворяют в 20мл этанола при нагревании, к полученному раствору прибавляют 0,4г (0,01моль) гидроксида натрия и реакционную смесь кипятят 10 - 15 минут, последние 3 минуты с активированным углем. Уголь отфильтровывают, раствор охлаждают, образовавшийся осадок отфильтровывают и сушат. Получают целевой продукт с выходом 89%. Желтое кристаллическое вещество с Т разложения > 300°С (из спирта), растворимо в воде, спирте, диоксане, ДМФА. Найдено, %: N15,78 Вычислено, %: N15,49 C10H6N3О5Na В ИК-спектрах наблюдаются характерные полосы поглощения карбонильных групп в области 1720 - 1600 смг1, а также валентные колебания нитро-группы в области 1500см"1 (ассим.) и 1450 см-1 (сим.). Индивидуальность подтверждена методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол" в системах растворителей: бензол-уксусная кислота-вода (2 : 3 : 1), бутанол-уксусная кислота-вода (4 : 1 : 5), Значение Rf • 100 равно - 76 и 80 соответственно. Острая токсичность соединения при внутрибрюшинном введении мышам равна 860мг/кг. Антиоксидантную и противоишемическую активности синтезированного соединения исследовали на модели острого нарушения мозгового кровообращения на белых крысах-самцах линии Вистар, массой 180 - 220г. Исследуемые животные были разбиты на 7 экспериментальных групп, по 6 животных в каждой группе. Одностороннюю перевязку общей сонной артерии проводили под этаминал-натриевым наркозом (этаминалнатрий вводился в дозе 40мг/кг), путем выделения сосуда и наложения на него лигатуры. Исследуемое вещество вводили в дозе 1/100ЛД50. дибунол и пирацетам в дозах 50мг/кг и 100мг/кг соответственно внутрибрюшинно, а αтокоферол в дозе 50мг/кг подкожно, 1 раз в сутки в течение 4х дней параллельно формированию ишемии. Через 2 часа после последнего введения исследуемого вещества, животные выводились из эксперимента путем декапитации. В тканях мозга определяли содержание конечных и начальных продуктов ПОЛ, активность ферментов антиоксидантної защиты, уровень эндогенного α-токоферола, интенсивность углеводного и энергетического обмена. Использовались следующие методы исследования: определение уровня диеновых конъюгатов (ДК) методом прямой спектрофотометрии гептановой вытяжки (В.С. Коган и др. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов, — М,: Медицина, 1986); определение малонового диальдегида (МДА) по тесту с тиобар-битуровой кислотой (Л.И.Андреева и др. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой //Лаб.дело. - 1988. - №11. - С. 41 - 43); определение супероксид-дисмутазы (СОД) (Чеварин С. и др. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод ее определения //Лаб.дело. - 1985. - №11. - С. 678 - 681); определение активности глутатионпе-роксидазы (ГПР) (Гаврилова А. Р. и др. Определение активности глутатионпероксидазы эритроцитов при насыщающих концентрациях субстрата //'Лаб.дело. - 1986. - №12. С. 721 - 728); опеределение каталазы (Королюк М.А. и др. Метод определения активности каталазы //Лаб.дело, - 1988, - №1, - С. 16 - 19); определение содержания субстратов углеводного обмена (Методы биохимических исследований /Под ред. Прохоровой М.И. - Л.: Из-во ЛГУ, 1982. - 278с.); определение содержания макроэргических фосфатов хроматографически (Захарова Н.Б., Рубил В. И, Тонкослойная хроматография нуклеотидов на пластинках "Силуфол" //Лаб.дело. - 1980. - №12. - С. 735 - 738.); определение α-токоферола спектрофотометрически (Способ определения α-токоферола в биологическом материале /И. Ф. Беленичев и др, //Тез. докл. IV научного съезда специалистов по клинической лаб. диагностике респуб. Беларусь, Гродно. - 1992. - С. 132). Результаты экспериментов, приведенные в таблицах 1, 2, 3, 4 показывают, что в условиях односторонней перевязки общей сонной артерии происходит угнетение активности ферментов антиоксидантной защиты в тканях головного мозга, накопление в ней содержания продуктов ПОЛ, нарушение анаэробных и аэробных путей образования энергии, снижение содержания адениловых нуклеотидов, т.е. наблюдалось уменьшение утилизации кислорода энергопродуцирующими системами и ускорение процессов свободно-радикального окисления (СРО). Введение заявляемого соединения на фоне ишемии головного мозга приводило к активации антиоксидантных систем защиты, что проявилось в увеличении активностей СОД в 2,7 раза, каталазы в 1,7 раза, ГПР в 0,66 раза, что выгодно отличает изучаемое соединение от антиоксидантов "прямого" действия - дибунола и α-токоферола ацетата (таблица 1). Под влиянием соединения существенно снижалось содержание продуктов ПОЛ на 45 - 54% (таблица 2). Как показывают результаты исследований, соединение активирует как анаэробные, так и аэробные пути образования энергии (повышая уровень пирувата и малата на 58,3, 50,0% соответственно), при этом наблюдалась тенденция к повышению уровня адениловых нуклеотидов (АТФ и АМФ на 40,0%, 54,5% соответственно). Ингибируя процессы ПОЛ и нормализуя отдельные звенья углеводного обмена, синтезированное соединение оказывает выраженный антиоксидантный и протекторний эффекты на клетки мозга, превышая действие таких антиоксидантов, как α-токоферол ацетат и дибунол, приближаясь по силе действия к пирацетаму - противоишемическому препарату.