Спосіб інактивації групоспецифічного антигену хламідій

Спосіб інактивації групоспецифічного антигену хламідій, що включає очищення, концентрування суспензії хламідій з наступною інактивацією, який відрізняється тим, що інактивацію проводять βпропіолактоном в мінімальній концентрації 0,02 %, при експозиції 12 годин при температурі 20 ˚С, в результаті чого антиген зберігає високу активність та специфічність. (19) (21) u200907151 (22) 09.07.2009 (24) 10.12.2009 (46) 10.12.2009, Бюл.№ 23, 2009 р. (72) НЕДОСЄКОВ ВІТАЛІЙ ВОЛОДИМИРОВИЧ, МАРТИНЮК ОЛЕКСАНДР ГРИГОРОВИЧ (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ БІОРЕСУРСІВ І ПРИРОДОКОРИСТУВАННЯ УКРАЇНИ 3 46249 4 вин після закінчення процесу інактивації, а також Приклад 1. Підбір оптимальної концентрації βзначна втрата активності антигену після заверпропіолактону шення процесу інактивації. Підбір оптимальної концентрації βВ основу корисної моделі поставлено задачу пропіолактону, яка забезпечувала б повну інактиотримати групоспецифічний антиген хламідій, підівацію, в порівнянні з іншими інактиваторами. У брати інактиватор та умови інактивації, що забездослідах по підбору інактивуючої концентрації, βпечили б швидку інактивацію, зі збереженням акпропіолактон додавали до хламідієвмісної суспентивності та специфічності антигену. зії з інфекційною активністю 7,0-7,2 lg ЕЛД50/см3 у Мета досягається приготуванням хламідієвмікінцевій концентрації 0,005%, 0,01%, 0,02% та сної суспензії шляхом очищення хламідієвмісної 0,05%, формалін у концентрації 0,1%, 0,2%, 0,4%, суспензії від клітинного детриту, жовтку та ліпідів. 0,6% та азид натрію у концентрації 0,05%, 0,1%, Для цього проводили низько швидкісне центрифу0,15%, 0,2%. гування суспензії при 6000об/хв. протягом 30хв. Інфекційний матеріал з різною концентрацією Для очистки відбирали середній шар, між ліпідами інактиватора витримували за температури 20°С та осадом. Очистку проводили в ступеневому грапротягом 48 годин, після чого проводили контроль дієнті сахарози повноти його інактивації. Для цього відбирали доКонцентрування фракцій взятих між 30 та 60% слідні аліквоти та інфікували 6 денні курячі ембрішарах сахарози використовували ПЕГ-6000. Інакони в жовтковий мішок з метою визначити повноту тивацію очищеної та сконцентрованої суспензії інактивації препаратів. Інкубацію ембріонів проводили при 39°С протягом 12 діб. хламідій проводили b-пропіолактоном, який вноДанні таблиці 1 демонструють, що найменша сили до хламідієвмісної суспензії в кінцевій концеконцентрація β-пропіолактону, при якій не спостентрації 0,02%. рігається загибель ембріонів, складає 0,01%, виb-пропіолактон - найалкілуючий агент, що легходячи з цього для інактивації збудника хламідіозу ко гідролізується з утворенням нетоксичних речоможе використовуватися подвійна його концентвин, у зв'язку з чим відпадає необхідність нейтрарація. лізації надлишку β-пропіолактона та продуктів його розкладу та одержати інактивований антиген через 12 годин від початку інактивації. Таблиця 1 Результати підбору інактивуючої концентрації β-пропіолактону Препарат 0,005 % 2/10 0,05 % 0/10 0,1 % 0/10 β-пропіолактон Азид натрію Формальдегід Відношення живих ембріонів до загальної кількості Концентрація препарату в суспензії 0,01 % 0,02 % 10/10 10/10 од 0,15 1/10 3/10 0,2 0,4 0/10 6/10 Приклад 2. Визначення оптимального часу експозиції з інактиватором. У досліді по визначенню оптимального часу інактивації, βпропіолактон у концентрації 0,01%, формалін та азид натрію, що брали в кінцевій концентрації по 0,4% та 0,1% відповідно, вносили у хламідієвмісну суспензію, з інфекційною активністю 7,0-7,2 lg ЕЛД50/см3. Інактивацію проводили за температу 0,05 % 10/10 0,2 6/10 0,6 10/10 ри 20°С, контроль повноти інактивації проводили як у прикладі 1 на 6, 12, 24, 48 та 72 годину від внесення інактиваторів. Вплив інактиватора на збереження активності антигену хламідій визначали в РЗК (реакції зв’язування комплементу). Результати представлені в табл. 2. Таблиця 2 Результаті визначення часу інактивації та активності антигенів Препарат β-пропіолактон 0,01% Азид натрію 0,1% Формальдегід 0,4% контроль Час інактивації 6 12 24 48 72 Відношення живих ембріонів до загальної кількості 5/10 10/10 10/10 9/10 0/10 0/10 3/10 5/10 9/10 0/10 1/10 4/10 7/10 10/10 10/10 10/10 10/10 10/10 10/10 Як показують результати, в хламідієвмісній суспензії, що інактивована β-пропіолактоном вже Активність антигену в РЗК 256 128-256 64-128 256 через 12 годин від початку інактивації не було життєздатних бактерійних клітин, здатних до 5 46249 6 розмноження та спроможних спричинити загималін та азид натрію знижує антигенну активність бель ембріона. Повна інактивація хламідієвмісної препарату, що само по собі небажано. суспензії азидом натрію та формаліном спостеріОдержаний в такий спосіб антиген хламідій галася набагато пізніше, через 72 та 48 годин від зберігає свою активність та специфічність, що є початку інактивації відповідно. Більш того, фороднією з найбільших переваг даного способу. Комп’ютерна верстка М. Мацело Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601