1,3-диметил-7-n-хлоробензил-8-n-бромобензиліденгідразиноксантин, який виявляє діуретичну та антиоксидантну дії

1,3-диметил-7-n-хлоробензил-8-nбромобензиліденгідразиноксантин, формули: 2 N Br , 3 56040 Сполука, що заявляється, відрізняється від прототипу наявністю метальної групи в положенні 1 ксантинової молекули, та на відміну від прототипу сполука, що заявляється, виявляє вищу антиок-3 сидантну дію в концентрації 10 моль/л, а також виявляє діуретичну дію. В основу корисної моделі поставлена задача створення нових малотоксичних речовин діуретичної та антиоксидантної дії, які після поглиблених фармакологічних досліджень можуть бути використані в медичній практиці. Поставлена задача вирішується синтезом 1,3диметил-7-n-хлоробензил-8-nбромобензиліденгідразиноксантин, формули: O N N Cl O N N NH N Br , На відміну від прототипу та еталонів порівняння (гідрохлортіазиду, тіотриазоліну, α-токоферолу ацетату, дибунолу) сполука, що заявляється, виявляє значно сильнішу антиоксидантну та діуретичну дію та є малотоксичною. Одержують сполуку, що заявляється, взаємодією 8-бром-1,3-диметил-7-n-хлоробензилксантину (І) з гідразингідратом з подальшим нагріванням 8гідразино-1,3-диметил-7-n-хлоробензилксантину (II) з n-бромо-бензальдегідом. Приклад 1. Етап 1. Синтез 8-бром-1,3диметил-7-n-хлоробензилксантину (І). Суміш 51,8 г (0,2 моль) 8-бром-1,3-диметил-ксантину, 16,8 г (0,2 моль) гідрокарбонату натрію розчиняють у 300 мл диметилформаміду, потім додають 28 мл (0,22 моль) бензилхлориду кип'ятять 40 хвилин. В гарячому вигляді фільтрують, фільтрат охолоджують, розводять водою до 500 мл, додають 10 мл 25 % NH4OH, перемішують. Осад, що утворився, відфі 4 льтровують, промивають водою та ацетоном, сушать. Вихід 96,4 %, Ттопл. 194-5 °С. С14Н12ВrСlN4O2. Знайдено, %: С - 43,7; Н - 3,1; N - 14,8. Розраховано, %: С - 43,8; Н - 3,2; N - 14,6. ПМР спетр (δ-шкала, м.д., розчинник - ДМСО): 7,46-7,27 (кв. 4Н) - СН аром; 5,53 (с., 2Н) - N7CH2; 3,43 (с., 3Н) – N1CH3; 3,24 (с., 3Н) - N3CH3. Етап 2. Синтез 8-гідразино-1,3-диметил-7-nхлоробензилксантину (II). Суміш 3,8 г (0,01 моль) 8-бром-1,3-диметил-7n-хлоробензилксантину (І), 4 мл (0,08 моль) гідразингідрату, 20 мл води та 30 мл діоксану кип'ятять 4 години. В гарячому вигляді фільтрують, фільтрат охолоджують, розводять водою до 500 мл. Осад, що утворився, відфільтровують, промивають водою та метанолом, сушать. Вихід 96,4 %, Ттопл. 243-5 °С. С14Н15СlN6O2. Знайдено, %: С - 50,1; Н 4,4; N - 25,3. Розраховано, %: С - 50,2; Н - 4,5; N 25,1. ПМР спетр (δ-шкала, м.д., розчинник - ДМСО): 8,26 (с., 1Н) - NH; 7,28 (кв. 4Н) - СН аром; 5,3 (с., 2Н) - N7CH2; 4,11 (с., 2Н) - NH2; 3,42; 3,23 (с., 3Н) N1CH3, N3CH3. Етап 3. Синтез 1,3-диметил-7-n-хлоробензил8-n-бромобензиліденгідразиноксантин (III) - сполука, що заявляється. При нагріванні розчиняють 1,3 г (0,004 моль) 8-гідразино-1,3-диметил-7-n-хлоробензилксантину (II) у суміші 20 мл води, 20 мл діоксану та 5 крапель НСlконц. і до гарячого розчину додають 1,0 г (0,006 моль) n-бромобензальдегіду. Суміш кип'ятять 20 хвилин, охолоджують. Осад, що утворився, відфільтровують, промивають водою, ацетоном, ефіром, сушать. Вихід 87,18 %, Ттопл. 247-9 °С. C21H18BrClN6O3. Знайдено, %: С - 50,62; Н - 3,42; N - 16,5. Розраховано, %: С - 50,27; Н - 3,62; N 16,75. ПМР спетр (δ-шкала, м.д., розчинник - ДМСО): 11,59 (с., 1Н) - NH; 7,43 (кв., 4Н); 7,25 (кв., 4Н) СНаром.; 7,99 (с., 1Н) - CH-N; 5,75 (с., 2Н) - N7CH2; 3,43; 3,21 (с., 3H) – N1CH3, N3CH3. Приклад 2. Вивчення діуретичної дії отриманих сполук проводили на білих щурах за методом Берхіна Є.Б. (Берхин Е.Б. Методы изучения действия новых химических соединений на функцию почек //Хим.-фарм. журн. - 1977. - Т.П. - № 5. - С. 3-11.). В якості еталону порівняння використовували гідрохлортіазид в дозі 25 мг/кг. Таблиця 1 Біологічна активність сполуки, що заявляється, прототипу та еталону порівняння № п/п 1 2 3 Сполука 1,3-диметил-7-n-хлоробензил-8-nбромобензиліденгідразиноксантин (сполука, що заявляється) Гідрохлортіазид Контроль Як видно із наведених в таблиці 1 даних, сполука, що заявляється, виявляє значно сильнішу Доза, мг/кг Діурез, % за контроль 30,0 187,80 25,0 169,10 100,00 5 56040 діуретичну дію. За показником діуретичної дії сполука, що заявляється, активніша на 18,7 %, ніж гідрохлортіазид. Приклад 3. Антиоксидантну активність (АОА) 1,3-Диметил-7-n-хлоробензил-8-nбромобензиліденгідразиноксантину вивчали in vitro методом неферментного ініціювання вільнорадикального окиснення (Pat. 5726063 USA, G01N 33/52. Method of colorimetric analysis of malonic dialdehydes and 4-hydroxy-2-enaldehydes as indexes of lipid peroxidation, kits for use in said mathod and their preparation /D. Gerard-Monnier, I. Erdelmeir, J Chaudiere, J. Yadan. - appl. № 702197, date of patent Mar. 10, 1998.). В якості субстрату використано суспензію яєчних ліпопротеїдів (СЯЛ). СЯЛ готується шляхом гомогенізації яєчного жовтка з фосфатним буфером (рН 7,4). До суспензії додають досліджувані сполуки в концентрації 10-3, 10-5, 10-7 моль/л. Реакцію вільнорадикального окиснення ініціюють додаванням 25 мМ розчину 6 FeSO4∙7H2O. Суміш інкубують 60 хвилин при 37 °С. Реакцію зупиняють 50 % розчином трихлороцтової кислоти з трилоном Б. Після центрифугування протягом 30 хвилин до розчину тіобарбітурової кислоти (ТБК) додають надосадочну рідину і кип'ятять на водяній бані протягом 60 хвилин. Забарвлений комплекс малонового діальдегіду з ТБК вилучають додаванням н-бутанолу. Методом спектрофотометрії визначають концентрацію малонового діальдегіду, яка свідчить про інтенсивність процесів вільнорадикального окиснення. Антиоксидантну активність (у відсотках) визначають за формулою: АОА = (СК1-С0/ СК1-СК2) 100 %, де СК1, СК2 - вміст ТБК-реактантів у контрольних пробах, моль/л; С0 - вміст ТБК-реактантів у дослідній пробі, моль/л. Дані АОА сполуки, що заявляється, еталонів порівняння та аналога наведені в таблиці 2. Таблиця 2 АОА сполуки, що заявляється, еталонів порівняння та прототипу № п/п 1 2 3 4 5 Сполука М.м. 1,3-диметил-7-n-хлоробензил-8-nбромобензиліденгідразиноксантин (сполука, що заявляється) Прототип (3-метил-7-я-хлоробензил-8-гсбромобензиліденгідразино-ксантин) Тіотриазолін α-Токоферолу ацетат Дибунол Як видно із наведених в таблиці 2 даних, сполука, що заявляється має значно вищі показники АОА ніж еталони порівняння та прототип. За даним показником 1,3-диметил-7-n-хлоробензил-8-nбромобензиліденгідразино-ксантин в концентрації 10-3 моль/л перевищує тіотриазолін, α-токоферолу Комп’ютерна верстка Д. Шеверун С, моль/л АОА, % 453 10-3 62,00 439 10-3 15,79 246 472 220 -3 33,90 10,16 25,20 10 10-3 10-3 ацетат, дибунол та прототип на 46,21 %, 28,1 %, 51,84 % та 36,8 % відповідно. Таким чином, наведені вище дані свідчать про те, що після поглиблених фармакологічних досліджень сполука, що заявляється, може бути використана в якості діуретичного та антиоксидантного засобу в медичній практиці. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601