Спосіб доклінічної діагностики початкових проявів цереброваскулярної хвороби

Спосіб доклінічної діагностики початкових проявів цереброваскулярної хвороби, який полягає у дослідженні венозної крові, який відріз Винахід стосується медицини, зокрема неврологи і може бути використаний для ранньої діагностики початкових проявів цереброваскулярної хвороби з метою профілактики розвитку гострих порушень мозкового кровообігу Відомий спосіб діагностики початкових проявів цереброваскулярної хвороби мозку, як однієї з форм хронічної недостатності мозкового кровообігу шляхом визначення клініко-нейропсихолопчних критерів судинних уражень мозку хворих атеросклерозом і артеріальної гіпертензії Проводять дослідження психоемоційного стану хворих з початковими проявами судинних уражень мозку за допомогою особистісного суб'єктивного шкалювання (шкали Тейлор-) Для дослідження системи відношення особистості і особливості її порушення у хворих з атеросклерозом, використовують опитувальник на визначення негативних емоцій страху і тривоги, за допомогою тесту малюнкових асоціацій Розенцвейга і методики незакінчених речень [1] Така одностороння суб'єктивна оцінка психоемоційного стану хворих з початковими проявами цереброваскулярної хвороби є недостатньою для загальної клінічної картини і ранньої клінічної диференційної діагностики Відомий також спосіб діагностики початкових проявів цереброваскулярної хвороби, який полягає в ОЦІНЦІ ролі психічних і емоційних факторів у генезі хронічної недостатності ішемії мозку програми психологічного тестування, яка складається з адаптованого опитувальника (стандартизований няється тим, що дослідження проводять шляхом визначення активності нуклеаз сироватки крові і при рівнях кислої рибонуклеази (РНК-І) від 26,59±0,45 до 12,67±0,85 мілюдиниць на мілілітр (мО/мл ), лужної рибонуклеази (РНК-І І) від 27,23±0,58 до 13,71 ±1,06 мО/мл, кислої дезоксирибонуклеази (ДНК-І) від 27,04±0,54 до 14,39±1,66 мО/мл, лужної дезоксирибонуклеази (ДНК-ІІ) від 27,40±0,55 до 13,40±0,51 мО/мл діагностують початкові прояви цереброваскулярної хвороби метод дослідження особистості - СМДО), вивчення рівня адаптації по шкалі Шихана Програма складена виходячи з КЛІНІЧНИХ особливостей протікання хронічної недостатності ішемії мозку В тесті змінені усі психіатричні назви шкал на ПСИХОЛОГІЧНІ так як це більше підходить до структури особистісних проблем, як в нормі так і в патології і є більш універсальним і доцільним Шкала Шихана використовується з метою визначення рівня соціальної дезадаптації Проте цей спосіб не підтверджений об'єктивною КЛІНІЧНОЮ картиною захворювання і дослідженнями аналізів крові, тому не дозволяє об'єктивно оцінити психоемоційний стан хворих з початковими проявами хворих цереброваскулярної хворобою [2] Прототипом вибраний спосіб діагностики початкових проявів цереброваскулярної хвороби, який полягає у дослідженні еритроцитів крові, в динаміці дексаметазонового тесту визначають КІЛЬКІСТЬ патологічних форм еритроцитів - стоматоцитів і при їх збільшенні більше ніж на 6% від загального числа еритроцитів діагностують початкові форми судинних захворювань головного мозку [3] Однак діагностика лише одного з ранніх судинних проявів недостатності головного мозку у цьому способі, а саме рівень психоемоційних змін, тривалий по часу виконання не дозволяє на ранньому етапі виявити зміни крові виникнення судинної патології головного мозку В основу винаходу поставлене завдання за 00 (О ю 56879 безпечити в повній мірі раннє виявлення наявності у хворих початкових проявів цереброваскулярної хвороби без наявності клінічної картини хвороби Поставлене завдання досягається тим, що у способі ДОКЛІНІЧНОІ діагностики початкових проявів цереброваскулярної хвороби, який полягає у дослідженні еритроцитів венозної крові, згідно з винаходом дослідження проводять шляхом біохімічного аналізу нуклеаз сироватки крові, спектрофотометричне визначають в ній активність кислої рибонуклеази (РНК-І), лужної рибонуклеази (РНК-ІІ), кислої дезоксирибонуклеази (РНК-І), лужної дезоксирибонуклеази (РНК-ІІ) і при рівнях РНКI від 26,59 ± 0,45 до 12,67 ± 0,85мО/мл, РНК-ІІ від 27,23 ± 0,58 до 13,71 ± 1,06мО/мл, ДНК-І від 27,04 ± 0,54 до 14,39 ± 1,66мО/мл, ДНК-ІІ від 27,40 ± 0,55 до 13,40 ± 0,51мО/мл констатують падіння рівня нуклеаз у сироватці крові, це свідчить про зниження їх активності, що дозволяє зробити висновок про початкові прояви цереброваскулярної хвороби Запропонований спосіб забезпечує ранню діагностику початкових проявів цереброваскулярної хвороби згідно біохімічним змінам в сироватці крові хворих, тоді якІНШІ КЛІНІЧНІ прояви такі як вогнищева неврологічна симптоматика при обстеженні хворих з початковими проявами цереброваскулярної хвороби не виявляється, що утруднює діагностику даного захворювання Даний спосіб дозволяє об'єктивно сприяти ранній діагностиці початкових проявів цереброваскулярної хвороби, і стати в подальшому методом профілактики гострих порушень кровопостачання головного мозку Спосіб здійснюється таким чином Натще ранком до прийому ЛІКІВ З вени хворого беруть кров, в КІЛЬКОСТІ 8мл, і центрифугують при 3000об/хв , протягом 10 хвилин Далі ВІДДІЛЯЮТЬ ВІД згустку крові і зберігають при температурі 40°С в темноті та шляхом біохімічного аналізу досліджують нуклеази сироватки крові, спектрофотометрично визначають в ній активність кислої рибонуклеази (РНК-ази І), лужної рибонуклеази (РНК-ази II), кислої ДНК-ази І і лужної ДНК-ази II Експериментальні дослідження Активність лужної ДНК-ази визначали наступним чином Субстрату брали ДНК з селезінки великої рогатої худоби (Олайнинський заводу "Реахім") Робочий розчин субстрату готували безпосередньо перед дослідженням змішуванням розчину, який містить 2мг ДНК на 1мл дистильованої води з рівною КІЛЬКІСТЮ0,1 М розчину трисбуфера (РН -7,2) В якості активатора в буферний розчин додавали іони магнію (0,2035мг МдСЬ на 100мл) Ферментативну реакцію припиняли додаванням спиртовомагнієвого осаджувача (Юмл 0,2 М розчину МдСЬ + 5мл НгО + 85мл етилового спирту), який добре осаджує білки, що не прореагували Цей розчин має мінімальну оптичну густину і не вступає в реакцію з компонентами В центрифужні пробірки додавали по 0,4мл робочого розчину ДНК, потім 0 1мл сироватки Суміш шкубували при температурі +37°С протягом 4 годин Реакцію припиняли додаванням 1мл спиртово-магнієвого осаджувача Охолоджували протягом 1 години в холодильнику, потім центрифугували протягом 10 хвилин при 1500об/хв Відбирали 1мл надосадової рідини в пробірки, що містять 2мл дистильованої води, після чого визначили екстинцію добутого розчину при довжині хвилі 260нм в сантиметрових кюветках проти контролю В контрольну пробірку сироватку додавали після інкубації і осаджування спиртовомагнієвим осаджувачем Активність кислої ДНК-ази визначали аналогічно до визначення активності лужної ДНК-ази, але буфером був 0,2 М ацетатний розчин (РН-6,0) Розрахунок активності обох дезоксирибонуклеаз проводили за формулою А = Д Е х З х п х 1 , 5 / 0,1 х Т Де А - активність ДНК-ази в одиницях на 1мл сироватки (Е/мл), ДЕ - різниця екстинцію контролю і досліду, п - розбавлення сироватки, 1,5 об'єм суміші в мл (сироватка + субстрат + спиртово-магнієвий осаджувач), Т - час інкубації в хвилинах Одиниця активності (О) ДНК-ази відповідає такій КІЛЬКОСТІ ферменту, яка каталізує приріст екстинцм на 1,0 при довжині хвилі 260нм за 1 хвилину інкубації при температурі +37°С в 1мл інкубаційної суміші Для зручності результат виражали в мілюдиницях на мілілітр - мО/мл Для визначення активності лужної і кислої РНК-аз служили субстрати для лужної РНК-ази розчин попередньо очищеної дріжджової РНК ("Реахім" м Олайне) в концентрації 1мг/мл, приготований на 0,05 М трисбуфера (РН-7,8) Для кислої РНК-ази використовувався розчин того ж препарату РНК в КІЛЬКОСТІ 1мг/мл приготований на 0,2 М ацетат-буфері (РН-6,0) Суміш 0,4мл ВІДПОВІДНОГО субстрату і 0,1мл сироватки шкубували протягом ЗО хвилин в термостаті при температурі +37 С Реакцію припиняли додаванням 1мл спиртовомагнієвого осаджувача Старанно перемішували і залишали суміш на 1 годину в холодильнику Після центрифугування суміші протягом 10 хвилини при 1500об/хв відбирали 1мл надоосадової рідини, яку переносили в пробірку з 2мл дистильованої води Визначали екстинцію при довжині хвилі 260нм в сантиметрових кюветах проти контролю Контролем служила така ж проба з тією різницею, що спиртово-магнієвий осаджувач додавали перед введенням сироватки в інкубаційну суміш Активність РНК-ази розраховували за формулою А = ДЕ х п / К х 0,1 х Т Де Активність РНК-ази в О/мл, ДЕ - різниця екстенцм контролю і досліду, п - розведення сироватки, 0,1 - об'єм сироватки, Т час інкубації, К - коефіцієнт переведення величини екстенцм в мкг РНК (по каліброваній кривій від 10 до 320мкг в пробі) За одиницю активності (О) РНК-ази приймали таку її КІЛЬКІСТЬ, яка розщеплює 1мг РНК за 1 хвилину інкубації при температурі +37°С Активність РНК-ази виражали в мО/мл Сироватку розбавляли в 5 разів в зв'язку з тим, що порушується лінійна залежність и показників від рівня активності ферменту сироватки крові Приклад І Хвора Л , 35 років, службовець, скарги на виражені головні болі, слабість, погіршення працездатності, подразливість, погіршення сну При огляді у хворої легка пперрефлексія D=S, пперпдроз долоней рук і ніг, тремор пальців рук в позі Ромберга, ознак вогнищевої неврологічної симптоматики не виявлено Артеріальний тиск 56879 145/89ммртст Пульс 79 уд в хв Артеріальну гіпертензію хвора не лікувала і підйоми артеріального тиску вчасно не спостерігала (Даних в анамнезі за артеріальну гіпертензію не має) Хворій проведено визначення концентрації дезоксирибонуклеаз і рибонуклеаз в сироватці крові у день обстеження Активність кислої дезоксирибонуклеази (ДНК-аза -І) - 18,1 0/мл , лужної (ДНК-аза -II) 15,2 -0/мл, активність кислої рибонуклеази (РНКаза - І) -21,3 0/мл, лужної рибонуклеази (РНК-аза II) - 22,6 0/мл Діагноз початкові прояви цереброваскулярної хвороби Приклад 2 Хворий Я , 56 років, звернувся у неврологічне відділення після того, як лікування у ПОЛІКЛІНІЦІ не дало помітних результатів Хворий скаржився на виражені головні болі, неспання, погіршення працездатності, пам'яті, уваги, подразливість, дратівливість При огляді хворого виявлено слабість конвергенції, незначна пперрефлексія D=S, пперпдроз долоней рук і ніг, похитування в позі Ромберга, тремор пальців рук і повік Даних за вогнищеву неврологічну симптоматику не виявлено Артеріальний тиск 150/90мм рт ст, пульс 89 уд в хв Хворий періодично приймав антиппертензивну терапію Хворому проведено визначення концентрації дезоксирибонуклеаз і рибонуклеаз в сироватці крові у день звертання Активність кислої дезоксирибонуклеази (ДНК-аза -І) - 19,7 0/мл , лужної (ДНК-аза -II) - 21,2 -0/мл, активність кислої рибонуклеази (РНК-аза - І) -25,4 0/мл, лужної рибонуклеази (РНК-аза - II) - 22,3 0/мл Діагноз початкові прояви цереброваскулярної хвороби на тлі артеріальної гіпертензії Приклад 3 Хворий, 31 рік, службовець, звернувся у поліклініку з приводу скарг на виражені головні болі, важкість в голові, запаморочення, зниження уваги, пам'яті, розумової працездатності, дратівливість, розлади сну При огляді хворого виявлено незначна пперрефлексія, пперпдроз долоней рук і стоп ніг, слабість конвергенції, похитування і тремор пальців рук і повік в позі Ромберга Даних за вогнищеву неврологічну симптоматику при огляді не виявлено Артеріальний тиск 120/70мм рт ст , пульс 90 уд в хв Хворому проведено визначення концентрації дезоксирибонуклеаз і рибонуклеаз в сироватці крові у день звертання Активність кислої дезоксирибонуклеази (ДНК-аза І) -23,9 0/мл, лужної (ДНК-аза -II)- 24,25 0/мл, активність кислої рибонуклеази (РНК-аза -1) -27,65 0/мл, лужної рибонуклеази (РНК-аза - II) - 23,98 0/мл Діагноз початкові прояви цереброваскулярної хвороби Приклад 4 Хвора, 44 роки, службовець, звернулася до дільничного невропатолога зі скаргами на болі голови, важкість в голові, головокружіння, швидке стомлювання, тремор рук, зниження уваги, пам'яті, працездатності, загальну слабість Після лікування, яке не дало помітних результатів звернулася у неврологічне відділення При огляді виявлено слабість конвергенції, незначна пперрефлексія, пперпдроз долоней рук і стоп ніг, похитування і тремор пальців рук, повік в позі Ромберга Даних за вогнищеву неврологічну симптоматику при огляді не виявлено Артеріальний тиск 140/80 мм рт ст , пульс 91 уд в хв Хворій проведено визначення концентрації дезоксирибонуклеаз і рибонуклеаз в сироватці крові через день після звертання Активність кислої дезоксирибонуклеази (ДНК-аза -І) - 23,6 0/мл, лужної (ДНК-аза -II) -21,2 0/мл, активність кислої рибонуклеази (РНК-аза - І) - 21,3 0/мл, лужної рибонуклеази (РНК-аза - II) 22,6 0/мл Діагноз початкові прояви цереброваскулярної хвороби Джерела інформації 1 Клюева ВН Клинико-нейролингвинистические критерии начальных проявлений сосудистых поражений мозга больных атеросклерозом /Автореферат дис кан мед наук /14 00 13/- Москва, 1986г - 22с 2 Бабушкина Н Я Нейровизуализационные и клинико-психологические особенности ранних стадий хронической ишемии мозга при артериальной гипертензии / Автореф дис канд мед наук /14 00 13/ - Москва, 2002г - 26с 3 Патент України № UA 17739 /А, Кл А 61В10/00, публ 1993 р Підписано до друку 05 06 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24