Засіб для зниження загального рівня холестерину в плазмі крові ссавця, спосіб зниження загального рівня холестерину в плазмі крові ссавця та поживний харчовий продукт

УКРАЇНА (19) (11) £ / ї О£* (13) С 2 (51) 6A61K31/72.A23L1/308 МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ ОПИС ДО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД (54) ЗАСІБ ДЛЯ ЗНИЖЕННЯ ЗАГАЛЬНОГО РІВНЯ ХОЛЕСТЕРИНУ В ПЛАЗМІ КРОВІ ССАВЦЯ, СПОСІБ ЗНИЖЕННЯ ЗАГАЛЬНОГО РІВНЯ ХОЛЕСТЕРИНУ В ПЛАЗМІ КРОВІ ССАВЦЯ ТА ПОЖИВНИЙ ХАРЧОВИЙ ПРОДУКТ (21)93004309 (22)28 02 1992 (24) 16.10.2000 (31) 07/666,392, 07/840,178 (32)08.03 1991, 24.02 1992 (33) US, US (41)30 04.1999, бюл №2 (46)16.10.2000, бюл № 5 , 2000 р. » (72) Ґеллехер Даніель Д., US, Хессел Крейг А , US, Лі Кунг-Дж, US (73) РЕГЕНТС ОФ ЗЕ ЮНІВЕРСІТІ ОФ МІНЕСОТА, US (86) PCT/US92/01511, 28 02.1992 - * (56)1. ЕР, А, 0119 479, 1984 . , 2. ЕР, А, 0 009 858, 1980 З S. Benkoetal. "A study of vascular lesions induced by cholesterol feeding and methyl cellulose administration in rabbits", COR VASA, vol 12, no 1, 1970, pages 65-74. 4. H.R. Superko et al "Effects of solid and liquid guar gum on plasma cholesterol and tngiycende concentrations in moderate hypercholesterolerrua", AM. J. CARDIOLOGY, vol. 62, no. 1, 1988, pages 51-55 5. K. Tsuji et al. "Effects of polysaccharides on cholesterol metabolism. Vli Effects of various polysaccharide derivatives, lignin, and synthetic polymers on serum and liver cholesterol levels in rats", Columbus, Ohio, US, CHEMICAL ABSTRACTS, vol 89, no. 7, 1978, pages 458, abstracts no 58752A (57) 1. Средство для понижения общего уровня холестерина в плазме крови млекопитающего, содержащее водорастворимый эфир целлюлозы и фармацевтически приемлемый носитель, отличающееся тем, что в качестве эфира целлюлозы содержит гидроксипропилметилцеллюлозу в терапевтически эффективном количестве, имеющую вязкость, измеренную для 2% мае водного раствора при 20 С, в пределах от 50 до 200000 сП. 2. Средство по п. 1, отличающееся тем, что вязкость гидроксипропилметилцеллюлозы, измеренная для 2% мае. водного раствора при 20 С, составляет 50-4000 сП, по крайней мере, 50 сП. 3. Средство по п. 1, отличающееся тем что вязкость гидроксипропилметилцеллюлозы, измеренная для 2% мае. водного раствора при 20"С, составляет 100000-200000 сП, по крайней мере, 100000 сП. 4. Средство no n 1, отличающееся тем, что в качестве фармацевтически приемлемого носителя содержит жидкость 5 Средство по п 4, отличающееся тем, что в качестве жидкости содержит воду 6 Средство по п 1, отличающееся тем, что выполнено в виде таблетки или капсулы. 7 Способ понижения общего уровня холестерина в плазме крови млекопитающего, предусматривающий введение водорастворимого эфира целлюлозы, отличающийся тем, что в качестве эфира целлюлозы используют гид рокси пропил метилцеллюлозу а терапевтически эффективном количестве, имеющую вязкость, измеренную для 2% мае водного раствора при 20°С в пределах от 50 до 200000 сП 8. Способ по п 7, отличающийся тем, что вязкость гидроксипропилметилцеллюлозы, измеренная для 2% мае. водного раствора при 20°С, составляет 50-4000 сП 9. Способ по п. 7, отличающийся тем, что вязкость гидроксипропилметилцеллюлозы, измеренная для 2% мае водного раствора при 20 С, составляет 100000-200000 сП, по крайней мере, 100000 сП. 10. Способ по п. 7, отличающийся тем, что гидроксипропилметилцеллюлозу вводят в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем 11 Способ по п. 7, отличающийся тем, что введение осуществляют орально 12 Способ по п 11, отличающийся тем, что гидроксипропилметилцеллюлоза диспергируется или растворяется в жидком носителе 13 Способ по п 11, отличающийся тем, что гидроксипропилметилцеллюлозу вводят в количестве от 1 до 30 г на 1000 килокалорий ежедневного потребления пищи 14 Способ по п 7, отличающийся тем, что гидроксипропилметилцеллюлоза представляет собой порошок 15 Способ по п 7, отличающийся тем, что гидроксипропилметилцеллюлоза, по крайней мере, частично гид рати ров а на. 16. Питательный пищевой продукт, способный вызывать понижение общего уровня холестерина в плазме крови млекопитающих, включающий водорастворимый эфир целлюлозы и, по меньшей мере, один компонент пищи, отличающийся тем, что содержит смесь 2-20 мас.% гид рокси пропил м о см 00 сч a> 27782 метилцеллюлозы в терапевтически эффективном количестве, имеющей вязкость, измеренную для 2% водного раствора при 20°С, в пределах от 50 до 200000 сП, и, по меньшей мере, один отдельно взятый метаболизирующийся компонент пищи, имеющий заранее определенную энергетическую ценность 17 Питательный продукт по п 16, отличающийся тем, что вязкость гидроксипропилметилцеллюлозы, измеренная для 2% водного раствора при 20°С, составляет 50-4000 сП 18 Питательный продукт по п 16, отличающийся тем, что вязкость гидроксипропилметллцеллюлозы, измеренная для 2% водного раствора при 20°С, составляет 100000-200000 сП, по крайней мере, 100000 сП 19 Питательный продукт по п 16, отличающийся тем, что содержит количество воды, достаточное для увлажнения и набухания гидроксипропилметил целлюлозы 20 Питательный пищевой продукт по п 16, отличающийся тем, что 2-15 мае % гидроксипропилметилцеллюлоза, имеющая вязкость, измеренную для 2% водногораствора при 20°С, в пределах от 50 до 4000 сП, получена путем смешения порошкообразной водорастворимой гидроксипропилметилцеллюлозы с количеством воды, достаточным для набухания гидроксипропилметилцеллюлозы, и, по меньшей мере, один отдельно взятый метаболизирующийся компонент пищи имеет такую энергетическую ценность, чтобы прием в пищу данного продукта обеспечивал прием от 2 до 10 грамм гидроксипропилметилцеллюлозы на каждые 1000 ккал общего ежедневного потребления Настоящее изобретение относится к способам и пищевым продуктам, используемым для снижения общего уровня холестерина а плазме крови млекопитающих, и, более конкретно, - к способам использования водорастворимых эфиров целлюлозы для снижения уровня холестерина Хорошо известно, что повышенный общий уровень холестерина а плазме крови, называемый также уровнем холестерина в сыворотке крови, является важным фактором развития коронарной болезни сердца Вследствие этого существует значительный интерес к разработке и открытию способов снижения общего уровня холестерина в плазме крови Хотя в настоящее время известны лекарственные средства, вызывающие значительное снижение уровня холестерина в сыворотке, большая их часть, или даже все эти средства, имеют нежелательные побочные эффекты в плазме крови Настоящее изобретение представляет собой терапевтический способ снижения общего уровня холестерина в плазл4е крови млекопитающих, в т ч человека, причем для значительного снижения уровня холестерина млекопитающее должно принять эффективное количество водорастворимого эфира целлюлозы Большое количество эфиров целлюлозы, эффективных в практике настоящего изобретения, производятся промышленно или могут быть легко получены по обычным методикам органического синтеза Эти материалы нетоксичны в рекомендуемых дозировках, как правило, безвкусны и весьма малокалорийны Был проведен ряд исследований роли волокон продуктов питания на состояние здоровья и заболеваемость В результате сравнения влияния волокон различного происхождения на уровень холестерина был сделан вывод, что волокна различного происхождения по-разному влияют на общий уровень холестерина в плазме крови млекопитающих В соответствии с результатами этих исследований, волокна типа целлюлозы не вызывают снижения уровня холестерина у млекопитающих Смотри об этом GRC Handbook of Dietary Fiber in Human Nutrition, "Influence of Dietary Fiber on Cholesterol Metabolism in Experimental Animals", by D Kntchevsky and J A Story et a l , Ch 4 3 (1986, G Spiller, Ed ) Что касается производных целлюлозы то Д Л Топпинг и др , J Nutr, т 59, с 21 (19В8) испытывали влияние метилцеллюлозы низкой, средней и высокой вязкости (вязкость 2%-ного раствора 25 1500 сП) на снижение уровня холестерина у крыс Они обнаружили изменения метаболизма углеводов и жирных кислот и предположили, что эти изменения связаны с замедлением процесса пищеварения и абсорбции питательных веществ в тонкой кишке Однако эти материалы не влияли на концентрацию холестерина в плазме крови и е печени Таким образом, сохраняется необходимость в агентах способных снижать уровень холестерина ПИЩИ Хотя эфиры целлюлозы использовались в различных пищевых продуктах для улучшения некоторых технологических свойств, например, эмульгируемости, текстуры или удержания влаги, используемые количества составляли обычно менее 0,5% от пищевого продукта Такие концентрации слишком малы для того, чтобы оказывать скольконибудь значительный физиологический эффект, например, привести к снижению уровня холестерина, что является основой настоящего изобретения Поэтому настоящее изобретение представляет собой также переработанные продукты питания, предназначенные для питания людей и содержащие один или более водорастворимых эфиров целлюлозы в количестве, эффективном для снижения общего уровня холестерина в плазме крови при употреблении а пнщу данного продукта питания, одного или в сочетании с другими продуктами, а количестве, необходимом для удовлетворения ежедневных энергетических потребностей субьекта В отличие от малых количеств, обычно использующихся при переработке продуктов питания, продукты питания, являющиеся предметом настоящего изобретения, содержат предпочтительно примерно 2-20% масс одного или более водорастворимых эфиров целлюлозы, предпочтительно примерно 5-15% масс эфира (эфиров) целлюлозы При таком содержании млекопитающее, например, человек, будет ежедневно употреблять с пищей примерно 1-30 г, предпочтительно примерно 2-10 г, эфира целлюлозы на 1000 ккал общего ежедневного потребления пищи 27782 Таким образом, для достижения полезного эффекта по снижению уровня холестерина (не менее 5-10%) в соответствии с настоящим способом взрослый мужчина должен употреблять с пищей примерно 2,5-10 г/день, предпочтительно примерно 4-8 г/день, а взрослая женщина должна употреблять с пищей примерно 2-8 г/день, предпочтительно примерно 3-7,5 г/день эфира целлюлозы, например, средне- или высоковязкой гидроксипролилметилцеллюлозы Однако для некоторых пациентов-людей со значительно повышенным общим уровнем холестерина в плазме крови могут бьгь прописаны дозы до 30-35 г/день На фиг 1 приведена зависимость между m vitro вязкостью целлюлозы (а) и гидроксипропилмэтилцеллюлозы и общим уровнем холестерина в плазме крови хомяков На фиг 2 приведена зависимость между вязкостью целлюлозы (а) и гидроксипропилметилцелпюлоэы (ГПМЦ) в ex-vivo содержимом КУІШЄЧника и общим уровнем холестерина в плазме крови хомяков Эфирные соединения целлюлозы по настоящему изобретению содержат предпочтительно в качестве заместителей низшие алкокси (например от Сі до Сд) или гидрокси (низшие алкокси) радикалы, особенно метокси- и гидрокеилропилоксигруппы Эфиры целлюлозы такого типа описаны в патентах США №Ns 4900573, 4734285, 4704285 и a Kirk-Othmer-Concise Encyclopedia of Chemical Technology, M Grayson ed, Wiley-lnterscience (1985), pp 231-232 К эфирам целлюлозы, используемым по настоящему изобретению, относятся метил целлюлоза, 2-гидроксипропилметилцелл голоза, 2-гидроксиэтил метил целлюлоза, 2-гидроксибутилметилцеллюлоза, 2-гидроксизтилзтилцелгюлоза, 2-гидроксипропилцеллюлоза, метилэтилцеллюлоза и 2-гидроксиэтилцеллюлоза Особенно предпочтительна водорастворимая высоковязкая 2-гидроксипролилметилцеллюлоза Приводимые е описании вязкости даются в сантипуазах (сП) и были измерены в 1 или 2% масс водных растворах эфира целлюлозы при 20°С при помощи ротационного вискозиметра Желательно, чтобы вязкость 2%-ного водного раствора эфира целлюлозы, используемого в изобретении, составляла от 50 до 200000 сП, предпочтительно от 75 до 100000 сП, наиболее предпочтительно от 100 до 10000 сП "Высоковязкие" эфиры целлюлозы имеют вязкость не менее примерно 10000 сП Под термином "водорастворимый" в данном описании подразумевается, что 2 г порошкообразного эфира целлюлозы могут быть диспергированы при перемешивании в 100 г воды при температуре от 0 до 100"С для получения практически прозрачной и устойчивой водной композиции или дисперсии при температуре дисперс/и 20°С Эфиры целлюлозы могут быть получены при взаимодействии целлюлозной пульпы с различными химическими реагентами в присутствии едкого натра Например, эфир метилцеллюлозы может быть получен при использовании в качестве химического реагента хлорметана, а ГПМЦ может быть получен при использовании в качестве реагентов пропил еноксида и хлорметана Смотри, например, С R Noller, Chemistry of Organic Com pounds, W В Saunders Co , London (2nd ed , 1957), pp 404-405 Кажущаяся вязкость водных растворов эфирных соединений целлюлозы, по настоящему изобретению, пропорциональна молекулярному весу или длине цепи соединения Среднечисловой молекулярный вес водорастворимых высоковяэких эфиров целлюлозы, используемых для снижения общего уровня холестерина в плазме млекопитающих, должен быть не менее примерно 100000, предпочтительно от 100000 до 250000 Средневзвешенный молекулярный вес будет в 3-10 раз больше среднечислового молекулярного веса К дополнительным характеристикам эфиров целлюлозы, используемых по настоящему изобретению, относятся их нетоксичность, неионогенность, малокалорийность, биологическая инертность и съедобность Способ снижения общего уровня холестерина в плазме крови млекопитающих, в соответствии с настоящим изобретением, включает введение эффективного количества водорастворимого эфира целлюлозы в пищеварительный тракт млекопитающего Может быть использован один вид водорастворимого эфира целлюлозы или смесь эфиров целлюлозы Предпочтительно, чтобы эфир или эфиры принимались в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, т е в виде одной или нескольких фармацевтических разовых дозировок, например, таблетках, желатиновых капсулах, предварительно дозированных растворах для внутреннего употребления и т п Хотя способ приема может меняться, эфиры целлюлозы принимаются желательно орально и предпочтительно употребляются человеком в пищу в качестве компонента его/ее ежедневно потребляемого набора продуктов, т е в сочетании с жидким носителем, например водой, молоком, растительным маслом, соком и т л , или в принимаемой в пищу твердой или полутвердой матрице, например, в сочетании с обычными наполнителями для таблеток или вкапсульных оболочках из полиэтиленгликолей, натуральных гелей и т п Прием эфиров целлюлозы может быть осуществлен непосредственно (предпочтительно в растворе), или в порошкообразной форме, или в сочетании с другими пищевыми продуктами Ряд пищевых продуктов, как правило, совместимых с эфирами целлюлозы, описан М К Вейбелем и др (патент США № 4923981) Например, они могут быть смешаны с такими продуктами питания, как коктейли (например, молочные коктейли), тонизирующие налитки, соки и ароматизованные напитки, йогурт, пудинги, сливочное и молочное мороженое, замороженный йогурт, начинка для ватрушек, батончики, включая "оздоровительные батончики", такие как гранола и фруктовые батончики, жевательные резинки, леденцы, начинка для пирожных, например, фруктовая начинка, каша, хлеб, готовые начинки и быстроприготавливаемый картофель Эффективные количества эфиров целлюлозы, по настоящему изобретению, могут быть использованы в качестве заменителей жиров в салатных заправках, глазурях, супах, соусах, подливах, майонезах и т д Эфиры целлюлозы также могут быть изготовлены в виде таблеток, гранул, капс/л и т п Таким образом, под терми 27782 также могут быть изготовлены в виде таблеток, гранул, капсул и т п Таким образом, под термином "компоненты продуктов питания" в данном описании подразумеваются компоненты, обычно используемые в рецептах изготовления вышеперечисленных продуктов питания включая муку, фрукты, молоко, яйца, крахмал, соевый белок, сахар, сахарные сиропы, растительные масла, животное масло, эмульгаторы, например лецитин, и т п Предпочтительно, чтобы водорастворимые эфиры целлюлозы перед оральным употреблением были частично или полностью гидратированы Например, эфиры целлюлозы могут быть диспергированы в достаточном количестве воды для получения сиропообразной жидкости, которая затем смешивается с одним или несколькими компонентами пищи, например, мукой и другими зернопродуктами для получения пасты или теста которые, в свою очередь, подвергаются таким хорошо известным способам приготовления пищи, как выпечка, экструдирование и т п для получения съедобных продуктов питания Конечно, в случае необходимости придания полученным продуктам питания привлекательности могут быть добавлены пищевые красители и ароматизаторы Компоненты пищи, с которыми могут быть смешаны эфиры целлюлозы, являются метаболизирующимися и имеют известную энергетическую ценность, и количество таких использованных компонентов пищи может быть определено по их калорийности Используется функционально эффективное количество эфира целлюлозы Это количество не меньше минимального количества, необходимого для достижения значительного снижения уровня холестерина (общего) в крови млекопитающего, например, человека В соответствии с этим, желательная дозировка или количество водорастворимых эфиров целлюлозы, которые должны быть включены в питание, будет изменяться в зависимости от веса и пола пациента, а также от общего уровня холестерина в плазме крови пациента Например, описанные выше продукты питания должны, как правило, быть приготовлены таким образом, чтобы они содержали от 2 до 20% эфиров целлюлозы (общее количество), в зависимости от вязкости использованного эфира целлюлозы и вида продукта питания Соотношение между содержанием и вязкостью должно быть определено до определенной степени опытным путем Например, в молочном коктейле или пудинге содержание может достигать 10-20% масс Однако в печеных продуктах возможно использование всего 2-5% масс без заметного ухудшения реологических характеристик продукта Конечно, количество эфира целлюлозы в составе фармацевтических разовых доз может быть намного больше, поскольку в этом случае требования вкуса и реологии не являются первоочередными и могут составлять, например, от примерно 20 до 98%, предпочтительно примерно 50-80% состава В большинстве случаев целесообразным является прием с пищей от примерно 2 грамм на 1000 килокалорий (ккал) общего ежедневного потребления пищи до примерно 30 грамм на 1000 ккал Предпочтительно ежедневное потребление должно составлять от 10 до 20 грамм на 1000 ккал Настоящее изобретение дополнительно разьясняется в следующих примерах, не ограничивающих область его применения Пример 1 Для определения способности высоко- и маловязких препаратов ГПМЦ снижать общий уровень холестерина в плазме крови хомяков сравнивали значения общего уровня холестерина в плазме крови животных, питание которых включало препараты ГПМЦ, и животных, в питание которых были включены препараты высоко- и маловязкой гуарановой смолы Был приготовлен препарат ГПМЦ, 2%-ный раствор которой при 20°С имел вязкость примерно 100000 сП, определенную при помощи ротационного вискозиметра Использовался вискозиметр Weils-Brookfieid модель LVTD по методу конуса и пластины, как описано у D D Grailaher et a l , "The Effect of Dietary Fiber Type on Glycated Hemoglobin and Renal Hypertrophy in Adult Diabetic Rat", Nutrition Research, 1990, v 10, 1311 Высоковязкзя ГПМЦ, использованная в данном примере, была получена от Dow Chemical Company (METTOCEL™ KIOOLV Premium Grade, партия № MM9004132IK, содержание хлорида натрия 0,6% масс ) Маловязкая ГПМЦ имела вязкость 2%-ного раствора при 20°С примерно 100 сП, определенную при помощи вискозиметра Wells-Brookfield по описанной выше методике Гуарановая смола является промышленно выпускаемым вязким продуктом природного происхождения Высоковязкач гуарановая смола, использованная в данном Примере, была получена от Sigma Chemical Company и имела вязкость 2% масс водного раствора примерно 100000 сП при 20°С, определенную как описано выше Маловязкая гуарановая смола, использованная в данном изобретении, была получена от Dow Chemical Company Ее вязкость (в виде 2% масс водного раствора) при 20°С составляла примерно 64 сП при скорости сдвига 6 с 1 , определенную при помощи вискозиметра Wells-Brookfield модель LVTD Маловязкая гуарановая смола была приготовлена путем снижения вязкости натуральной гуарановой смолы при ограниченном кислотном гидролизе по хорошо известным методикам кислотного гидролиза Каждым из высоко- и маловязких препаратов ГПМЦ и гуарановой смолы смешивался с различными другими компонентами питания животных, описанные ниже, в вертикальном смесителе Hobart A-I20 Корм, содержащий описанные выше препараты, скармливался четырем группам хомяков породы Golden Syrian по 16 самцов в каждой, в течение шести недель Вес хомяков составлял от 79 до 121 грамм Использованные компоненты корма перечиспены в приведенной ниже Таблице 1 27782 Таблица 1 Компонент Содержание, г/кг корма Казеин, 85% белка, имеющийся в продаже DL-метионин Кукурузный крахмал Сахароза ГПМЦ или гуарановая смола Пальмовое масло AIN минеральная смесь И/ AIN витаминная смесь /2/ Битартратхолина Витамин К 200 3 497,8 100 50 100 35 10 внт Холестерин /I/ Состав минеральной смеси, % СаНРО* 50,0; NaCI - 7,4, цитрат калия водный - 22,0, K2SCv - 5,2; MgO - 2,4; МпСОз - 0,35, цитрат железа /II/ - 0,60; 2пСО 3 - 0,16; СиСОз- 0,03, КЮ 3 0,001; Na 2 SeO 3 5H 2 O - 0,001; CrK(SOfl)2i2H2O 0,055, сахароза, порошок -11,8 Общее содержание кальция и фосфора в корме при разных источниках белка будет составлять соответственно (в мг/ЮО г корма}' неочищенный казеин - 656 и 620; очищенный казеин - 520 и 560; выделенный соевый белок - 558 и S52 121 Состав витаминной смеси, г/кг: тиамина гидрохлорид - 0,6; рибофлавин - 0,6; пиридоксина гидрохлорид - 0,7; ниацин - 3,0; пантотенат кальция - 1,6, фолиевая кислота - 0т2; биотин 0,020, витамин B i 2 - 1 мг, витамин А -400000 ME; витамин Е - 5000 ME; витамин Оъ - 2,5 мг, витамин К - 5,0 мг, сахароза, порошок - до 1000 г Каждый хомяк съедал примерно 8 г корма в день. Через шесть недель были получены образцы плазмы крови хомяков. Общий уровень холестерина в плазме определялся методом ферментативного (энзимного) анализа по модифицированной методике С A. Ailain eb al., "Enzymatic Determination of Total Serum Cholesterol", Chin. Chem,, 1974, v. 20, p 47. Кратко, методика заключалась в следующем эфиры холестерина в образце гидролизовались холестеринэстеразой до холестерина, который затем окислялся холестериноксидазой до холест-4-ен-З-она и перекиси водорода Последний продукт затем взаимодействовал с хромоген, 4-аминобенэолсульфонатом в присутствии пероксидазы с образованием хинониминового красителя с максимумом 2 1,33 (мг) 1 1,2 поглощения около 500 нм Интенсивность полученной окраски прямо пропорциональна общей концентрации холестерина в образце. Содержание свободного эфира холестерина в печени определялся следующим образом Кусочек каждой печени весом 1 г обрабатывался смесью хлороформ метанол (2.1) для экстракции липидов по хорошо известным методикам экстракции, липидов. Смесь фильтровали, одинаковые количества фильтрата высушивали разводили в растворе неионогенного поверхностно-активного вещества, высушивали и затем определяли содержание холестерина методами энзимного анализа. Для определения уровня свободного холестерина в образце описанный выше способ энзимного анализа был изменен в соответствии с методикой, описанной э Clin Chem. т. 28, с 1379 (1982), в результате чего была опущена стадия обработки образца эстеразой. В остальном методика оставалась неизменной. Интенсивность полученной окраски прямо пропорциональна концентрации свободного холестерина в образце. Для определения уровня эфира холестерина измеряли общий уровень холестерина в образце печени по описанной выше методике Концентрация эфиров холестерина в образце определялась вычитанием концентрации свободного холестерина из общей концентрации холестерина Результаты приведены ниже в Таблице 2. Таблица 2 Корм (п=16) МГ МЦ ВГ ВЦ Холестерин плазмы, мг/дл 214,5±10,2а 223,3±11,7а 170,1*7,8° 151,917,9' Приведены средние значения ± стандартная ошибка измеречий Приведенные в колонке величины, отмеченные разными индексами, различаются между собой (Р