Спосіб одержання преципітуючої сироватки сибіркової

Спосіб одержання преципітуючої сироватки сибіркової, що включає пперімунізацію конейпродуцентів сибірковим антигеном з наступним відбором крові та відокремленням цільового продукту, який відрізняється тим, що пперімунізують коней за віком від 4 до 10 років вагою не менш 340-360 кг чи ослів 1,5-2 років вагою 130-150 кг, чи овець 1-2 років вагою 35-40 кг сибірковим антигеном з трьох високоімуногенних штамів № 87, № 89, № 97 вегетативну культуру вакцинного без кап сул є во го сибіркового штаму СТИ-1 Є технічні умови на сироватку сибіркову преципітуючу (Россия, ТУ 10 19 77-89) - це технічне рішення може бути прототипом За цим рішенням для імунізації використовують штами 916-1, Ш-15, 94 та матрикс 2-й вакцини Ценковського Недоліком є те, що використовуються штами не ВІТЧИЗНЯНІ В основу винаходу, що передбачається, поставлено задачу розробити спосіб одержання преципітуючої сироватки сибіркової пперімунізацією коней-продуцентів сибірковим антигеном наступним відбором крові та відокремленням цільового продукту шляхом пперімунізацм коней за віком від 4 до 10 років, вагою не менш 340360кг, чи ослів 1,5-2 років, вагою 130-150кг, чи овець 1-2 років вагою 35-40кг, сибірковим антигеном з трьох високоімуногенних штамів №87, №89, №97, щоб забезпечити одержання преципітуючої сироватки сибіркової, для діагностичних потреб Спосіб виконується таким чином Для отримання сироватки сибіркової преципітуючої застосовується спосіб пперимунізацм однокопитних (коней, ослів) І жуйних (овець) тварин Гіперімунізують коней за віком від 4 до 10 років, вагою не менш 340-360кг ослів 1,5-2 років вагою 130-150кг, овець 1-2 років вагою 35-40кг Здорових тварин спочатку вакцинують проти сибірки Потім пперімунизують сибірковим антигеном з високоімуногенних вакцинних штамів зі О го 00 ю 59830 слабкою вірулентністю та протеолітичною активністю №87, №89, №97 Пперімунізують тварин одним із способів внутрішньовенним або підшкірновнутрішньошкірним Внутрішньовенний спосіб призначений для пперімунізацм сибірковий антиген підігрівають до 36-37°С і ін'єктують штравенозно з інтервалом в три дні, поступово збільшуючи дози коням з 5 до 70см , ослам з 2 до 28см , вівцям з 0,5 до 7см3 Всього роблять 16-17 ІН'ЄКЦІЙ Підшкірне внутрішньо шкірний спосіб антиген вводиться тваринам підшкірне (у внутрішню область стегна чи бедра) і внутрішньо шкірно (у на або через 10 днів після попереднього кровозабору в КІЛЬКОСТІ від залежності виду тварин у коней 800см3 з кожної маси коня, у осла 1,5-2см3, у ВІВЦІ - 0,8-1 см 3 з кожної голови Зібрану у стерильний посуд кров для одержання сироватки цитрували, сепарували з послідуючою дефібринізацією плазми Консервували сироватку 5%-ним розчином фенолу та відстоювали у відстійниках протягом двох МІСЯЦІВ Відстояну сироватку стерилізували методом фільтрації Приклад З Визначення зовнішнього вигляду, кольору, наявності сторонніх домішок, плісняви, порушення герметичності флаконів проводили візуально в область шиї) з інтервалом між ІН'ЄКЦІЯМИ 5ДНІВ пронизуючому СВІТІ Дози антигену на 1кг маси тварини поступово збільшують від 1 106 до 810 8 спор Для запобігання появи у тварин місцевих запалень та анафілактичних реакцій, починаючи з 7 вакцинації (107спор/кг) дозу антигену ділять на 4 частини та вводять у кожну кінцівку Для перевірки ступеня наростання антитіл преципітинів, починаючи с 8-9 ін'єкції, проводять пробне титрування сироватки крові від кожної тварини окремо Титрують сироватку за допомогою реакції преципітації зі стандартним сибірковим антигеном з 2-3 екстратами шкір тварин, хворих на сибірку В цей час в крові тварин-продуцентів починають з'являються антитіла-преципітини У подальшому КІЛЬКІСТЬ антитіл-преципітинів збільшується і після 14-й ін'єкції антиген майже всі тварини 97-98% дають активну сироватку Гіперімунізація тварин вважається закінченою при умові, що позитивна реакція преципітації зі стандартним сибірковим антигеном наступає через 20-30 секунд, а з естратами сибіркових шкір через 1-2 хвилину Порівняльний аналіз з прототипом дозволяє зробити висновок про те, що заявлений спосіб відрізняється від відомого тим, що пперімунізують тварин сибірковим антигеном з трьох вітчизняних штамів № 87, №89, №97, (депоновані в Інституті експериментальної і клінічної ветеринарної медицини) Спосіб пояснюється такими прикладами Приклад 1 Приготування антигену Безкапсульні вакцинні штами для постійного використання вирощували на МЛА до спорового стану, потім змивали з агару фізіологічним розчином і зберігали в ЗО %-ному розчині гліцерину в прохолодному МІСЦІ при температурі 2-4°С Для одержання розплодки і антигену сибіркові вакцинні штами вирощували на гороховому (віковому) агарі в колбах або матрацах (четвертях) в термостаті при 36-37°С, протягом 18-20 годин Одержані культури зливали з горохового (вікового) агару фізіологічним розчином, старанно струшували, фільтрували і встановлювали концентрацію 2-3 млрд мікробних клітин в 1мл Приклад 2 Приготування сироватки сибіркової преципітуючої Кров від тварин-імунопродуцентів відбирали через 10 днів після останньої ін'єкції антиге Сироватка сибіркова приципітуюча є опалесуюча рідина світло-жовтого або слабо-рожевого кольору Наявність ЦВІЛІ, механічний домішок, які не розбиваються не допускається При довгому зберіганні на дні препарату може з'явитися білуватий осадок, що не впливає на якість препарату й не може перешкоджати його використанню При наявності дефектів окремих флаконів їх бракували Приклад 4 Стерильність сироватки визначали у ВІДПОВІДНОСТІ з ГОСТ 28085 Перевірку сироватки на активність проводили за реакцією преципітації по Асколі з наступним антигеном а) антиген сибірки (сибірковий) бактеріальний стандартний Позитивна реакція преципітації у вигляді появи чіткого кільця на границі компонентів повинна наступити не пізніше ніж через 1 хвилину б) антиген (у КІЛЬКОСТІ не менш 10 штук) із сухих шкір тварин, які загинули від сибірки та були екстраговані у співвідношенні 1г на 10см3 фізрозчину на протязі від 16 до 24 годин Позитивна реакція наступає не пізніше, чим через 2 хвилини в) антиген із висушених паренхіматозних органів тварин, павших від сибірки, екстрагований у співвідношенні 1г на 100см3 фізрозчину на протязі 16-24г Позитивна реакція наступала не пізніше, чим через 2 хвилини При одержанні негативних результатів сироватку бракували Приклад 5 На специфічність сироватку перевіряли у реакції преципітації по Асколі з наступними антигенами а) екстрактами, виготовленими з прісно-сухих шкір (у КІЛЬКОСТІ не менш 10 штук) здорових тварин у співвідношенні 1г на 10см фізрозчину, б) антигенами (екстрактами) з мікробів Вас Subhhs, Вас Meqaterum, Вас Cereus Сироватка не давала реакцію преципітації з вказаними екстрактами і антигенами на протязі 15 хвилин Перевірку випробуваної сироватки проводили одночасно з визначеної серією активної і специфічної сироватки, преципітуючої сибірковою, яку використовують на протязі 3-х років 5 59830 Сироватка преципітуюча сибіркова, що одержана запропонованим способом, вміщує специфічні антитіла - преципітини, що зв'язані з глобулі новою фракцією сироваткових білків та здатна Комп'ютерна верстка Т Чепелєва 6 вступати в специфічну реакцію з сибірковим антигеном, що знаходиться в шкіряно-хутровій сировині і паталопчному матеріалі від тварин хворих на сибірку Підписано до друку 06 10 2003 ТиражЗЭприм Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна