Спосіб приготування ущільнювача поживних середовищ

Спосіб приготування ущільнювача поживних середовищ, який відрізняється тим, що передбачає часткову заміну агар-агару препаратом екзополіакриламідом при введенні до розчину агарагару препарату екзополіакриламіду при температурі 80-90°С при співвідношенні, г/л агар-агар 10,0 екзополіакриламід 6,0 -18,0 Винахід відноситься до мікробіологи та бютехнологм, а саме до приготування щільних поживних середовищ для вирощування мікроорганізмів Давно відомий спосіб приготування щільних поживних середовищ з використанням, в якості ущільнювача, полісахариду червоних морських водоростей агар-агару в концентрації 15-20г/л (Методы общей бактериологии / Под ред Ф Герхардта и др — М Мир,1983 — Т 1 — С 356373) Недоліком даного методу є порівняно висока вартість агар-агару, нездатність задовольнити зростаючі потреби та скорочення його промислового добутку внаслідок зменшення природних ресурсів морських водоростей Найбільш близьким по суті є спосіб отримання щільних поживних середовищ з використанням в якості ущільнювача суміші 10г/л агар-агару та 20г/л ліхеншу, який є полісахаридом, виділеним з лишайника Cetrana islandica (Лазыкин А Г, Пименов Е В , Черкасов Н А и др Возможность использования лихенина в качестве уплотнителя питательных сред //Биотехнология —1999 — № 3 — С 67-72) Недоліком даного методу є підвищена температура застигання драглів порівняно з агаровими драглями, що унеможливлює посіви термолабільних культур мікроорганізмів в товщу середовища, яке застигає Завданням даного винаходу є створення ущільнювача для поживних середовищ більш деше вого та доступного порівняно з агар-агаром при збереженні якості отримуваних драглів Поставлене завдання досягається тим, що частина агар-агару при приготуванні щільних поживних середовищ для вирощування мікроорганізмів замінюється вітчизняним препаратом ЕПАА, який отримують полімеризацією акриламіду в водному розчині бактеріальних полісахаридів енпосану або ксампану в присутності окислювально-відновних ініціаторів (Пат UA 24856 C08F120/56 Опубл 25 12 98, Бюл №6) Препарат ЕПАА випускається промисловістю у вигляді гелеподібної в'язкої маси, що має наступні показники масова доля основної речовини 7,8-7,3%, рН водного розчину 6,5-9,5, молекулярна маса 0,05-106, в'язкість 134,7мПа-с Сутність методу що заявляється полягає в частковій заміні агар-агару препаратом ЕПАА при приготуванні щільних поживних середовищ для вирощування мікроорганізмів, що дозволяє скоротити витрати коштовної імпортної сировини агарагару і отримувати поживні середовища, які не відрізняються за якісними показниками від щільних поживних середовищ, що містять 15-20г/л агарагару Головними критеріями при дослідженні можливості використання препарату ЕПАА для часткової заміни агар-агару слугувала МІЦНІСТЬ, прозорість утворюваних драглів, температура плавлення та температура утворення драглів При проведенні ДОСЛІДІВ готували драглі агар-агару та О 00 ^со о (О 60348 рення драглів, прозорість згідно ГОСТ 26185-84 Дані по співвідношеннях агар-агару і препарату ЕПАА та фізико-хімічним показникам отриманих драглів наведено по прикладах в табл 1 Дані табл 1 свідчать про можливість використання суміші агар-агару 10,0г/л та препарату ЕПАА 6,0-18,Ог/л в якості ущільнювача при приготуванні щільних поживних середовищ Драглі, утворювані сумішшю агар-агару 10,Ог/л з препаратом ЕПАА 6,0-18,Ог/л, по МІЦНОСТІ, температурі плавлення, температурі утворення драглів, прозорості не відрізняються від драглів утворюваних агаром в концентрації 15,Ог/л При зменшенні концентрації препарату ЕПАА в суміші зменшується МІЦНІСТЬ утворюваних драглів Збільшення концентрації препарату ЕПАА в суміші призводить до зменшення прозорості утворюваних драглів, а при подальПриклад 2 Наважку агар-агару 10г заливали шому збільшенні концентрації препарату ЕПАА в холодною дистильованою водою (200мл) і лишали суміші втрачається МІЦНІСТЬ утворюваних драглів для набухання протягом 30-60хв Потім розчиняли При зменшенні концентрації агар-агару до 9,Ог/л при перемішуванні при температурі 90-100°С Пісвсі отримані драглі мали МІЦНІСТЬ меншу ніж в конля повного розчинення агар-агару вносили до розтролі, а прозорість утворених драглів зберігалась чину 4,8г препарату ЕПАА Об'єм розчину доводина рівні контролю ли до ЮООмл дистильованою водою Отриманий розчин доводили до кипіння та лишали застигати Зразки драглів, приготовлені згідно прикладу при кімнатній температурі для утворення драглів 2, піддавали стерилізації при звичайних умовах стерилізації поживних середовищ (тиск 1атм , теАналогічно готували драглі сумішей агар-агару мпература 120°С) з препаратом ЕПАА в інших їх вагових співвідношеннях В драглях, отриманих запропонованим Після стерилізації визначали МІЦНІСТЬ драглів способом, та контрольному зразку визначали МІЦзгідно ГОСТ 26185-84 Отримані дані наведені в НІСТЬ, температуру плавлення, температуру утвотаблиці 2 суміші агар-ЕПАА на дистильованій воді Винахід ілюструється наступними прикладами Приклад 1 (контрольний) Наважку агар-агару 15г заливали 200мл холодною дистильованою водою і лишали для набухання протягом 30-60хв Потім розчиняли при перемішуванні при температурі 90-100°С Об'єм розчину доводили до ЮООмл дистильованою водою Розчин доводили до кипіння та лишали застигати при кімнатній температурі для отримання драглів В отриманих драглях визначали МІЦНІСТЬ, температуру плавлення, температуру утворення драглів, прозорість Отримані дані наведені в табл 1 Надалі ці показники слугували критерієм (контролем) оцінки якості драглів, утворюваних при частковій заміні агар-агару препаратом ЕПАА Таблиця 1 № № зразп/п ка 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 контроль 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Вміст агарагару, г/л Вміст препарату ЕПАА, г/л 15,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 12,0 18,0 24,0 36,0 48,0 60,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 12,0 18,0 24,0 36,0 0 4,8 6,0 6,0 Вміст ЕПАА, сухої речовини мас % 0 МІЦНІСТЬ драглів, г 0,04 0,05 510 385 467 0,1 473,5 0,15 Температура Температура Світлопропускання, плавлення, застигання, % °С °С 468 450 0,2 0,3 0,4 0,5 0,05 0,1 0,15 0,2 0,3 91 90 92 93 92 93 94 95 95 95 92 93 94 95 386,5 350 400 413 321 350 359 345,5 36 35 34 35 35 36 34 35 35 36 33 36 35 35 83,5 84,2 84 80,8 77,5 73,8 73,5 73,3 72,3 83,3 83,2 82,3 80,2 80 Таблиця 2 № зразка контроль 2 4 Вміст агар-агару, г/л 15,0 10,0 10,0 Вміст препарату ЕПАА, г/л Дані таблиці 2 свідчать про здатність запропонованої суміші агар-агару з препаратом ЕПАА витримувати стерилізацію без зміни властивостей утворюваних драглів, що важливо при приготуван 0 6,0 18,0 МІЦНІСТЬ драглів, г 500 482 480 ні щільних поживних середовищ Якість запропонованого ущільнювача вивчали також на стандартних поживних середовищах (картопляний агар, м'ясо-пептонний агар, сусло агар) приготовлених з використанням суміші агарагару 10,0г/л з препаратом ЕПАА 6,0-18,Ог/л Вимірювали МІЦНІСТЬ приготовлених поживних 60348 середовищ Отримані результати наведені в таблиці З Таблиця З Ущільнювач, г/л агар-агар препарат ЕПАА 15,0 0 10,0 6,0 10,0 18,0 № зразка контроль 2 4 Дані таблиці 3 свідчать про незмінність МІЦНОСТІ поживних середовищ при часткові заміні агарагару препаратом ЕПАА На приготовлених щільних поживних середовищах (загусник суміш агар-агару з препаратом ЕПАА) і контрольних поживних середовищах (загусник агар-агар) проводили вирощування культур МІЦНІСТЬ, Г картопляний агар 435 425 425 м'ясо-пептонний агар 470 410 420 бактерій, дріжджів та грибів Культури вирощували протягом 24-72 год при температурі 28°С та визначали морфологічні, культуральні, антигенні характеристики Отримані дані наведені в таблиці 4 Таблиця 4 Загущувач, г/л Культура агар-агар Е carotovora 8982 Р syryngae 8511 Р fluorescens 8573 С michiganense 13а A tumefaciens 8682 X campestns 8003 Sacch cerevisiae 1981 препарат ЕПАА 15,0 10,0 15,0 10,0 15,0 10,0 15,0 10,0 15,0 10,0 15,0 10,0 15,0 10,0 КІЛЬКІСТЬ КОЛОНІЙ, ЩО виросла при ПОСІВІ 100 колонійутворю 0 6,0 0 6,0 0 6,0 0 6,0 0 6,0 0 6,0 0 6,0 На поживних середовищах, де в якості ущільнювача використовується запропонована суміш, типовість морфологічних, культуральних, біохіміч Комп'ютерна верстка А Крулевський ючих одиниць, шт 90 89 99 80 79 85 92 96 95 96 74 78 70 69 Діаметр колоній при ПОСІВІ 100 колонійу творюючих одиниць, MM 2-3 2-3 1-2 1-2 1-2 1-2 1-2 1-2 2-3 1-2 2-3 2-3 4-5 4-5 них і антигенних властивостей досліджених мікроорганізмів зберігається Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119