Спосіб очищення основи для приготування поживних середовищ

Изобретение относится к ветеринарной и медицинской микробиологии, вирусологии, биотехнологии, в которых используют плотные питательные среды и может быть применено в диагностических и научных целях. Известно, что в микробиологической практике для получения плотных питательных сред обычно используют следующие ве щества: агар, желатин, крахмал, полиакриламидный гель и другие [1-3]. Большинство этих веществ в силу различных причин (отсутствие универсальности, непрозрачность, высокая стоимость, отсутствие местной сырьевой базы и др.) не нашли широкого применения. Например, полиакриламидный гель получают путем сложного технологического процесса. К тому же, составные сложные химические компоненты необходимо завозить в Украину. Однако и запасы сырья, из которого получают агар-агар, постоянно уменьшаются, и качество агаров в зависимости от способов получения различно. Полианионные свойства агара, содержание в нем ингибиторов вирусов, а также наличие ионов (например, кальция), повышающих его зольность делают многие сорта агаров непригодными для использования в медицинской и ветеринарной вирусологии, иммунологии. Известно, что зольные фракции содержат соединения, реагирующие с другими ингредиентами среды, в результате чего образуются нежелательные преципитаты, снижающие концентрацию ростовых веществ и ухудшающие качества среды. Наиболее близким к описываемому изобретению по техническому сущности и достигаемому результату является способ очистки агар-агара, заключающийся в замачивании его в нейтральной дистиллированной воде, его расплавление и охлаждение расплава до 45-50°С с последующей обработкой хлористым кальцием и взбитым до пенообразного состояния яичным белком при нагревании смеси до образования хлопьев коагуляции с последующим осветлением путем фильтрации, причем процесс осветления повторяют до получения необходимой степени очистки агара [4]. Описанный способ имеет следующие недостатки: необходимость приготовления нейтральной дистиллированной воды, сбивание белка до пенообразного состояния, большой расход куриных яиц на единицу веса очищаемого агара, очищенный агар несмотря на высокую прозрачность пригоден только для постановки реакции диффузной преципитации, и не может быть использован в вирусологических исследованиях при изучении вирусов методом бляшек из-за наличия ингибиторов вирусов и токсических для культуры тканей веществ. При очистке агара добавление хлористого кальция повышает его зольность, оставаясь в агаре, что снижает функциональную ценность агара. Поэтому возникает необходимость удаления ионов кальция и др. Задачей настоящего изобретения является повышение качества основы для питательных сред, а также упрощение технологии ее очистки. Поставленная задача в способе получения основы питательных сред, включающем замачивание этой основы, ее расплавление, коагулирование белков, осветление и очистку достигается тем, что осветление осуществляют кипячением расплава основы питательной среды с цеолитом, а очистку от ионов кальция выполняют путем добавления углекислого газа и фильтрацией через слой сорбента. Достижение цели осуществляется за счет осаждения коагулировавши х белков цеолитом, а удаление ионов кальция происходит за счет связывания с углекислым газом, фильтрование через слой сорбента приводит к окончательной очистке основы для приготовления питательных сред за счет оседания на порах сорбента органических остатков и неорганических солей. Пример 1. В качестве основы для приготовления питательных сред брали агар-агар. 10,0 г агар-агара заливают 300 мл дистиллированной водой, расплавляют на кипящей бане и добавляют 0,1-0,5 г хлористого кальция. Расплавленный агар с хлористым кальцием выдерживают на водяной бане в течение 10 минут. Расплавленный агар охлаждают до 45-50°С. В раствор добавляют цеолит, в количестве достаточном для осаждения белка и агаропектина, выдерживают смесь на кипящей бане, периодически перемешивая, круговыми движениями колбы в течение 15-20 минут. Раствор охлаждают до 75-80°С, обрабатывают углекислым газом для очистки от ионов кальция, магния и др. в течение 5-8 минут. Для удаления мельчайшей взвеси хлопьев белка, частиц коагулянтов, карбоната кальция, магния и других примесей гарячий раствор агара фильтруют с применением слоя сорбента. Гарячий раствор агара заливают в кювету для застывания тонким слоем. Застывший гель измельчают. Для полного удаления всех водорастворимых веществ и остатков красящих пигментов заливают дистиллированной водой настаивают в течение 18-24 часов при периодической смене воды. Агаровый гель после очистки получается прозрачным, бесцветным с высокой прочностью студня, содержат следы азота и 1% золы. Кусочки застывшего геля после их отмывки можно также расплавить, расфасовать, простерилизовать или же высушить, не допуская карамелизации, и сохранять в виде пластин или порошка, используя по мере надобности. Таким образом, предлагаемый способ очистки состоит в получении высокоочищенного сырья (основы) для производства питательных сред, способных заменить импортные аналоги. При этом применение доступных и дешевы х коагулянтов исключает необходимость использования белков животного или другого происхождения. Кроме того, имеют место экономия затрат времени за счет сокращения технологического процесса и повышение качества основы для питательных сред (уменьшение зольности, удаление токсических веществ и ингибиторов вирусов и др.).