Спосіб культивування калусної тканини фатсхедери лізе (fatshedera lizei)

Спосіб культивування калусної тканини фатсхедери лізе (Fatshedera lizei), що включає виділення експланту, стерилізацію і культивування його на живильному середовищі, що містить мінеральні солі, мікроелементи, інозит, тіамін, піродоксин, нікотинову кислоту, аскорбінову кислоту, сахарозу, 3 Fatshedera - це міжродовий гібрид, що з'явився в результаті схрещування двох видів, які належать до різних родів - Fatsia L. і Hedera L. У ній поєднуються унікальні біологічно активні властивості фатсії і плюща, які відносяться до сімейства аралієвих. Представники сімейства аралієвих є джерелом цінних біологічно активних речовинглікозидів, які виявляють яскраво виражене адаптогенну, антибактеріальну, протигрибкову, протикашльову дію (женьшень, аралія маньчжурська, заманиха висока, елеутерокок колючий, лимонник китайський, плющ звичайний). Використання замість інтактних рослин клітинних культур, отриманих біотехнологічним методом, має ряд переваг: зменшення антропогенного впливу на дику природу (фатсхедера культивується тільки як кімнатна й оранжерейна рослина), можливість одержання фітомаси, цілком вільної від поллютантів (гербіцидів, пестицидів, важких металів і ін.) і керування процесом біосинтезу цільових продуктів. Приклад 1. Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу і інозит за прописом Мурасіге і Скуга (Murashige Т., Skoog F. // Phisiol.Plant.-1962. Bd.15. - № 13. - P.473-497), агар - 6000, тіамін - 1,0; піродоксин - 0,5; нікотинова кислота - 0,8; аскорбінова кислота - 0,8-1,2; кінетин - 0,5;6бензиламінопурин -0,2 і 2,4-дихлорфеноксіоцтова кислота - 1,0, розливають в культиваційні судини ємкістю 50 мл кожен. Закупорені ватяномарлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118 С протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У застигле живильне середовище в стерильних умовах вводять експланти (сегменти листя фатсхедери лізе) заздалегідь стерилізовані 70 %-ним розчином етилового спирту протягом 1 хвилини, культивують при температурі 18° С протягом 30 діб, після чого калус витягують з судини, відокремлюють від експланту і зважують. Вихід сухої біомасі при п'ятикратній повторності досліду склав 420 мг. Приклад 2. Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу і інозит за прописом Мурасіге і Скуга, агар - 6500, тіамін - 1,5, піродоксин - 0,75; нікотинова кислота - 1,0; аскорбінова кислота - 0,8-1,2; кінетин - 0,7;6-бензиламінопурин - 0,5 і 2,4дихлорфеноксіоцтова кислота - 2,0, розливають в культиваційні судини, ємкістю 50 мл кожен. Закупорені ватяно-марлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118 С протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У застигле живильне середовище в стерильних умовах вводять експланти (сегменти листових черешків фатсхедери лізе), заздалегідь простерилізовані 50 %-ним розчином брадофена 10 Н протягом 10 61952 4 хвилин, культивують при температурі 20° С протягом 35 діб, після чого калус витягують з судин, відокремлюють від експланту і зважують. Вихід сухої біомаси при п'ятикратній повторності досліду склав 375 мг. Приклад 3. Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу і інозит за прописом Мурасіге і Скуга, агар - 6500, тіамін - 1,5; піродоксин - 0,75; нікотинова кислота - 1,0; аскорбінова кислота - 0,8-1,2; кінетин - 1,0;6-бензиламінопурин - 0,7 і 2,4дихлорфеноксиоцтова кислота - 1,5, розливають в культиваційні судини ємкістю 50 мл кожен. Закупорені ватяно-марлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118° С протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У застигле живильне середовище в стерильних умовах вводять експланти (сегменти листя фатсхедери лізе), заздалегідь простерилізовані 50 %-ним розчином брадофена 10 Н протягом 10 хвилин, культивують в темноті при температурі 18° С протягом 40 діб, після чого калус витягують з судин, відокремлюють від експланту і зважують. Вихід сухої біомаси при п'ятикратній повторності досліду склав 400 мг. Приклад 4. Готують живильне середовище Мурасіге і Скуга, що містить, мг/л: мінеральні солі, мікроелементи, сахарозу і інозит за прописом Мурасіге і Скуга, агар - 6500, тіамін - 1,5; піродоксин - 0,75; нікотинова кислота - 1,0; аскорбінова кислота - 0,8-1,2; кінетин - 0,5;6-бензіламинопурин - 0,5 і 2,4дихлорфеноксиоцтова кислота - 2,0, розливають в культиваційні судини ємкістю 50 мл кожен. Закупорені ватяно-марлевими пробками судини стерилізують в автоклаві при 118° С протягом 30 хвилин, рН середовища до автоклавування 5,5-5,8. У застигле живильне середовище в стерильних умовахвводять експланти (сегменти листових черешків фатсхедери лізе), заздалегідь простерилізовані 50 %-ним розчином брадофена 10 Н протягом 10 хвилин, культивують в темноті при температурі 20° С протягом 25 діб, після чого калус витягують з судин, відокремлюють від експланту і зважують. Вихід сухої біомаси при п'ятикратній повторності досліду склав 410 мг. Пропонований спосіб культивування калусної тканини фатсхедери лізе (Fatshedera lizei), може бути використаний для біотехнологічного виробництва його біомаси з метою отримання біологічно активних речовин - тритерпенових глікозидів, що є основою для цінних лікарських препаратів. Перевагою даного способу є зниження антропогенної дії на навколишнє середовище і отримання екологічно чистої сировини не залежно від періоду вегетації. 5 Комп’ютерна верстка Л. Купенко 61952 6 Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601